一种测定三聚氰胺的方法

摘要

本发明公开了一种测定三聚氰胺的方法。于10mL比色管中依次加入0.05～5.0mL0.1～0.5g/L的三聚氰胺溶液、1.0～2.5mL4.0×10-6mol/L的曙红Y溶液、0.5～1.0mL2.0×10-4mol/L的中性红溶液和0.3～1.0mLpH3.5的伯瑞坦-罗比森缓冲溶液,以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白,用超纯水定容至刻度,在30℃水浴反应30min后,于荧光光度计上,用1cm石英比色皿,以520nm为激发波长,在538nm处分别测定含三聚氰胺溶液的荧光值F538nm和试剂空白的荧光值F0,计算差值ΔF538nm=F538nm–F0值。取牛奶30mL,加入20.0mL1%的三氯乙酸溶液和8.0mL2%的乙酸铅溶液,超声20min;取部分溶液离心10min,取上清液1mL,依上述方法测定荧光值,计算牛奶中三聚氰胺的含量。本发明方法简便、快捷。

权利要求

1.一种测定三聚氰胺的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）于6支10mL比色管中依次加入0.0、0.07、1.0、2.0、3.0、5.0 mL 0.1～0.5g/L的-6三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分别加入1.0～2.5 mL 4.0×10 mol/L的曙红Y即EY溶-4液、0.5～1.0mL 2.0×10 mol/L的中性红即NR溶液和0.3～1.0mL pH3.5的伯瑞坦-罗比森即B-R缓冲溶液，以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白，然后用超纯水将6支比色管定容至刻度，摇匀，在30℃的恒温水浴中反应30 min后，于荧光光度计上，用1cm石英比色皿，以

520nm为激发波长，在538nm处分别测定含三聚氰胺溶液的荧光值F538nm和试剂空白的荧光值F0，计算荧光值差值ΔF538nm = F538nm–F0值, 其荧光值差值ΔF538nm与三聚氰胺质量浓度ρ在1.4～100mg/L范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔF538nm=0.7736ρ+ 17.33，相关系数r=0.9992，检出限为1.1mg/L；

（2）取牛奶30 mL，加入20.0 mL 质量百分比浓度为1%的三氯乙酸溶液，和8.0 mL质量百分比浓度为2%的乙酸铅溶液，超声20 min；然后取部分溶液于离心管中，离心10 min，取上清液作为待测液；

（3）取步骤（2）处理后的牛奶待测液1mL，依步骤（1）的方法测定荧光值，计算出牛奶中三聚氰胺的含量。

说明书

一种测定三聚氰胺的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种测定三聚氰胺的方法，特别是能量转移荧光光谱法测定三聚氰胺的方法。

背景技术

[0002] 三聚氰胺是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化合物，常用作化工原料，不可用于食品加工或食品添加物。中国自2008年三鹿奶粉事件发生后，国家规定：液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。因此研究建立一种快速、准确、成本低廉的测定牛奶中三聚氰胺含量的新方法具有重要的意义。目前，三聚氰胺的测定方法主要是高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等。但是这些方法所用仪器昂贵，不易推广。荧光光谱法具有分析速度快、操作简便、分析精度高等优点，在实际分析中应用广泛。曙红Y-中性红作为能量转移体系，已应用于蛋白质的测定，但利用该能量转移体系采用荧光光谱法测定三聚氰胺，尚未见报道。

发明内容

[0003] 本发明的目的是提供一种基于曙红Y-中性红能量转移的测定三聚氰胺的荧光光谱法。

[0004] 具体步骤为：

[0005] （1）于6支10mL比色管中依次加入0.0、0.07、1.0、2.0、3.0、5.0 mL 0.1～0.5g/-6L的三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分别加入1.0～2.5 mL 4.0×10 mol/L的曙红-4
Y(EY)溶液、0.5～1.0mL 2.0×10 mol/L的中性红(NR)溶液和0.3～1.0mL pH3.5的伯瑞坦-罗比森（Britton-Robinson，B-R）缓冲溶液，以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白，然后用超纯水将6支比色管定容至刻度，摇匀，在30℃的恒温水浴中反应30 min后，于荧光光度计上，用1cm石英比色皿，以520nm为激发波长，在538nm处分别测定含三聚氰胺溶液的荧光值F538nm和试剂空白的荧光值F0，计算荧光值差值ΔF538nm = F538nm–F0值, 其荧光值差值ΔF538nm与三聚氰胺质量浓度ρ在1.4～100mg/L范围内成线性关系，线性回归方程为：
ΔF538nm=0.7736ρ+ 17.33，相关系数r=0.9992，检出限为1.1mg/L。

[0006] （2）取牛奶30 mL，加入20.0 mL 质量百分比浓度为1%的三氯乙酸溶液和8.0 mL质量百分比浓度为2%的乙酸铅溶液，超声20 min。然后取部分溶液于离心管中，离心10 min，取上清液作为待测液。

[0007] （3）取步骤（2）处理后的牛奶待测液1mL，依步骤（1）的方法测定荧光值，计算出牛奶中三聚氰胺的含量。

[0008] 本发明方法简便、快捷。

附图说明

[0009] 图1为本发明实施例空白与20 mg/L三聚氰胺(MEL)的荧光光谱图。

[0010] 图中标记a：试剂空白；b：4.0×10-6 mol/L EY - 2.0×10-4 mol/L NR - pH3.5 B-R - 20 mg/L MEL。

具体实施方式

[0011] 实施例：

[0012] （1）于6支10mL比色管中依次加入0.0、0.07、1.0、2.0、3.0、5.0 mL 0.2g/L的三-6聚氰胺溶液，再在每支比色管中分别加入2.0 mL 4.0×10 mol/L的曙红Y(EY)溶液、0.5mL -4
2.0×10 mol/L的中性红(NR)溶液和0.5mL pH3.5的伯瑞坦-罗比森（Britton-Robinson，B-R）缓冲溶液，以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白，然后用超纯水将6支比色管定容至刻度，摇匀，在30℃的恒温水浴中反应30 min后，于荧光光度计上，用1cm石英比色皿，以
520nm为激发波长，在波长538nm处分别测定含三聚氰胺溶液的荧光值F538nm和试剂空白的荧光值F0，计算荧光值差值ΔF538nm = F538nm – F0值, 其荧光值差值ΔF538nm与三聚氰胺质量浓度ρ在1.4～100mg/L范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔF538nm = 0.7736ρ+
17.33，相关系数r=0.9992，检出限为1.1mg/L。

[0013] （2）分别量取蒙牛和伊利纯牛奶各30 mL，分别加入20.0 mL质量百分比浓度为1%的三氯乙酸溶液和8.0 mL质量百分比浓度为2%的乙酸铅溶液，超声20 min；然后取部分溶液于离心管中，离心10 min，取上清液作为待测液。

[0014] （3）取步骤（2）处理后的蒙牛和伊利纯牛奶待测液各1mL，依步骤（1）方法测定荧光值，计算出蒙牛、伊利纯牛奶中三聚氰胺的含量；同时做了加标回收实验，结果见表1：

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