含甜茶提取物的牙膏

摘要

本发明提供一种含甜茶提取物的牙膏，包括甜味剂，所述甜味剂为甜茶提取物，它占该牙膏重量的0.01～0.1%；所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～40%，甜茶多酚的重量含量为2～21%。本发明所述含甜茶提取物的牙膏的甜味成分为甜茶提取物，当甜茶提取物中甜茶甙的含量在5～40%以及甜茶多酚在2～21%的范围内，甜茶甙和甜茶多酚相互作用，能达到较好的预防龋齿以及改善口腔健康的效果。当牙膏中甜茶提取物含量一定时，其预防龋齿效果随着甜茶甙含量的减少、甜茶多酚含量的增加而升高。

权利要求

1.含甜茶提取物的牙膏，包括甜味剂，其特征在于：所述甜味剂为甜茶提取物，它占该牙膏重量的2％；所述的甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5％，甜茶多酚的重量含量为

21％。

2.含甜茶提取物的牙膏，包括甜味剂，其特征在于：所述甜味剂为甜茶提取物，它占该牙膏重量的2％；所述的甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为10％，甜茶多酚的重量含量为

18％。

说明书

含甜茶提取物的牙膏

技术领域

[0001] 本发明的属于日用化工技术领域，具体涉及一种含甜茶提取物的牙膏。

背景技术

[0002] 牙膏是由摩擦剂、湿润剂、表面活性剂、粘合剂、香料、甜味剂以及水构成的。甜味剂可以改善牙膏的口感，一般选择糖精或木糖醇，糖精的甜度高，是蔗糖的300～500倍，但长期摄入或大量摄入对人体健康有害。木糖醇具有甜度高、热量低等优点，但过量摄入木糖醇，会造成人体血液中甘油三酯升高，引起冠状动脉粥样硬化，还有可能引起腹部不适、胀气、腹泻等疾病。

[0003] 甜茶（Rubus Suavissmus S Lee）是广西特有的天然甜味植物，也是世界上最好的高甜、低热、安全无毒性且具有保健功能的甜味植物。甜茶中约含有3.2%以上的的黄酮类化合物、9%左右的甜茶多酚和5～8%的甜茶甙（Rubusoside），除此之外，还富含多种氨基酸和人体所必须的微量元素，具有较高的营养价值和保健价值。甜茶甙为甜茶呈现甜味口感的甜味因子，它是斯替维醇（Steviol）和葡萄糖结合而成的二萜甙的低热量高甜味物质，其分子式为C32H50O12。从甜茶中提取的甜茶甙是甜味植物中口感最佳的，甜味的纯正程度接近白糖，它的甜度相当于蔗糖的300倍，是大自然中最佳的糖代品。甜茶甙还能抑制口腔中产生龋齿的变形链球菌（S.mutans）生长以及合成葡聚糖的葡萄糖基转移酶（GTF）的活性，从而抑制强黏附性的水不溶性葡聚糖（WIG）以及酸的产生，防止牙菌斑的产生，达到预防龋齿的效果。甜茶多酚是甜茶中重要的活性成分，包括特有的GOD型鞣花单宁，还包括没食子酸、鞣花酸、2-吡喃酮-4,6-二羧酸，云实酸、地榆皂酸二内酯、咖啡酸等，具有明显抗氧化、抗突变、降低胆固醇、降低血液中低密度脂蛋白、抑制血压上升、抑制血糖上升、抑制血小板凝集、抗菌、抗食物过敏、改善肠胃微生物环境、消臭的作用，是目前发现最理想的纯天然抗氧化剂。因此，甜茶提取物是一种理想的甜味剂，可将其应用于牙膏生产领域。

[0004] 出版于《广西医学》2010年3月第32卷第3期的文献《甜茶甙和木糖醇对变形链球菌合成水不溶性胞外多糖的对比研究》是以甜茶甙为原料，用含0.5%蔗糖的胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物培养基（TTY），采用二倍稀释法配成5种不同浓度的甜茶甙溶液，依次为5g/100ml、2.5g/100ml、0.125g/100ml、0.625g/100ml、0.313g/100ml，上述浓度的甜茶甙溶液均对变形链球菌合成水不溶性胞外多糖产生了一定抑制作用，在上述浓度范围内，随着甜茶甙浓度的降低，抑制效果下降。出版于《广西医学》2012年6月第34卷第6期的文献《甜茶护齿片对葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的影响》是以桂林集琦实力天然有限公司生产的甜茶护齿含片为原料，用含1%蔗糖的胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物培养基（TTY），采用二倍稀释法配成5种不同浓度的溶液，依次为5g/50ml、2.5g/50ml、1.250g/50ml、0.625g/50ml、0.313g/50ml，由于该甜茶护齿含片中甜茶甙的含量为5.5%，换算成甜茶甙的浓度，依次为0.275g/50ml、0.138g/50ml、0.068g/50ml、0.034g/50ml、
0.017g/50ml,上述浓度的甜茶护齿含片对变形链球菌GTF酶活力有明显抑制作用，也能抑制WIG的合成，在上述浓度范围内，随着甜茶甙浓度的降低，抑制效果下降。综合上述两篇文献，我们可以得出一个结论，即甜茶甙浓度越高，对变形链球菌的抑制效果越强，反之，则越弱。

发明内容

[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种含甜茶提取物的牙膏，该牙膏以甜茶提取物为甜味成分，当甜茶提取物中含有较低剂量的甜茶甙和较高剂量甜茶多酚时，可达到较好的预防龋齿以及改善口腔健康的效果。

[0006] 本发明提供的技术方案是一种含甜茶提取物的牙膏，包括甜味剂，所述甜味剂为甜茶提取物，它占该牙膏重量的0.2～2.5%；所述的甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～40%，甜茶多酚的重量含量为2～21%。

[0007] 本发明所述甜茶提取物占该牙膏重量的2～2.5%。

[0008] 本发明所述甜茶提取物占该牙膏重量的2.5%。

[0009] 本发明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～40%，甜茶多酚的重量含量为7～21%。

[0010] 本发明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～40%，甜茶多酚的重量含量为15～21%。

[0011] 本发明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～35%，甜茶多酚的重量含量为16～21%。

[0012] 本发明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～30%，甜茶多酚的重量含量为17～21%。

[0013] 本发明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～20%，甜茶多酚的重量含量为18～21%。

[0014] 本发明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5～10%，甜茶多酚的重量含量为18～21%。

[0015] 本发明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5%，甜茶多酚的重量含量为21%。

[0016] 本发明所述的牙膏还包括摩擦剂、湿润剂、表面活性剂、粘合剂、香料和水。摩擦剂可以是碳酸钙、二水磷酸氢钙、无水磷酸氢钙、焦磷酸钙、水合硅酸或氢氧化铝。湿润剂可以是甘油、丙二醇或山梨醇。表面活性剂一般采用中性洗涤剂--月桂醇磺酸钠，能发泡，又能清洗口腔中的污垢，无异味。粘合剂可使牙膏中配料分散均匀，一般采用羧甲基纤维素钠盐及其衍生物或海藻酸钠。香料一般为薄荷类香料，具体是薄荷油、薄荷脑，可以赋予牙膏清爽感，也可以是水果类香精，如柑橘类香精等。

[0017] 申请人发现，当采用甜茶甙含量在5～40%、甜茶多酚含量在2～21%的范围内的甜茶提取物作为牙膏的甜味剂时，一方面使牙膏具有合适甜味，以适应部分人群的口感需要，另一方面，甜茶提取物中甜茶甙和甜茶多酚在与口腔的接触过程中，能够起到协同作用，充分发挥抑制变性链球菌生长以及降低合成葡聚糖的葡萄糖基转移酶（GTF）的活性的作用，从而达到抑制强黏附性的水不溶性葡聚糖（WIG）以及酸的产生效果，防止牙菌斑产生，进而达到预防龋齿的效果。申请人还发现，当牙膏中甜茶提取物的含量一定时，预防龋齿效果随着甜茶提取物中甜茶甙含量的升高、甜茶多酚含量的减小而降低。

具体实施方式

[0018] 以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。

[0019] 以下百分数均为重量百分数。

[0020] 实施例1

[0021] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物0.2份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水27.8份。

[0022] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚为21%。

[0023] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0024] 1）取甜茶叶粉碎至40目，放入30%（v/v）的乙醇中，在超声波40KHz、温度为40℃下回流提取2次，每次提取20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0025] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为9，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0026] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用70%（v/v）的乙醇洗脱，取洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚的重量含量为21%。

[0027] 实施例2

[0028] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物2.5份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水25.5份。

[0029] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5%、甜茶多酚的含量为2%。

[0030] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0031] 取甜茶叶粉碎至5目，放入80℃水中浸提2次，每次浸提20min，合并提取液，过滤，浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为5%、甜茶多酚的重量含量为2%。

[0032] 实施例3

[0033] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物2份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26份。

[0034] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5%、甜茶多酚为21%。

[0035] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0036] 1）取甜茶叶粉碎至20目，放入10%（v/v）的乙醇中，常温浸提2次，每次浸提20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0037] 2）用D101大孔吸附树脂对甜茶粗提物进行吸附分离，用50%（v/v）乙醇洗脱，取洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为5%、甜茶多酚的重量含量为21%。

[0038] 实施例4

[0039] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物2份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26份。

[0040] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为10%、甜茶多酚为18%。

[0041] 所述甜茶提取物的制备方法:

[0042] 1）取甜茶叶粉碎至30目，放入30%（v/v）的乙醇中，常温浸提2次，每次浸提20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0043] 2）用D101大孔吸附树脂对甜茶粗提物进行吸附分离，用50%（v/v）乙醇洗脱，将洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为10%、甜茶多酚的重量含量为18%。

[0044] 实施例5

[0045] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物2份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26份。

[0046] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚为15%。

[0047] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0048] 1）取甜茶叶粉碎至40目，放入30%（v/v）的乙醇中，在超声波40KHz、温度为40℃下浸提2次，每次浸提20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0049] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为11，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0050] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用70%（v/v）的乙醇洗脱，将洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚的重量含量为15%。

[0051] 对照实施例1

[0052] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物2份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26份。

[0053] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为70%、甜茶多酚为7%。

[0054] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0055] 1）取甜茶叶粉碎至40目，加水混合，加入甜茶叶重量0.3%的纤维素酶，在温度40℃、pH4.5条件下酶解2小时，灭酶，过滤，得滤液；

[0056] 2）将滤液通过孔径为1万分子量的高分子过滤膜进行分离，得到分离液；

[0057] 3）将分离液用阴离子交换树脂进行吸附分离，得到第二次分离液，再将第二次分离液通过ADS-7型大孔吸附树脂进行吸附分离，然后用50%（v/v）的乙醇洗脱，取洗脱液浓缩、干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为70%、甜茶多酚的重量含量为7%。

[0058] 对照实施例2

[0059] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物2份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26份。

[0060] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为95%、甜茶多酚为2%。

[0061] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0062] 1）取甜茶叶粉碎至40目，加水混合，加入甜茶叶重量0.5%的纤维素酶、半纤维素酶的复合酶，在温度40℃、pH4.5条件下酶解3小时，灭酶，过滤，得滤液；

[0063] 2）将滤液通过孔径为可截留1万分子量的中空陶瓷膜设备进行超滤分离，得截留液和分离液；

[0064] 3）将分离液通过阴离子交换树脂进行吸附分离，得到第二次分离液，再将第二次分离液通过ADS-7型大孔吸附树脂进行吸附分离，然后用70%（v/v）的乙醇洗脱，将洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为95%、甜茶多酚的重量含量为2%。

[0065] 实施例6

[0066] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物1.5份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26.5份。

[0067] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为35%、甜茶多酚为16%。

[0068] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0069] 1）取甜茶叶粉碎至30目，放入20%（v/v）的乙醇中，在超声波30KHz、温度为40℃下浸提2次，每次20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0070] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为10.5，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0071] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用60%（v/v）的乙醇洗脱，取洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为35%、甜茶多酚的重量含量为16%。

[0072] 实施例7

[0073] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物0.5份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水27.5份。

[0074] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为20%、甜茶多酚为20%。

[0075] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0076] 1）取甜茶叶粉碎至20目，放入30%（v/v）的乙醇中，在温度为40℃条件下浸提20min，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0077] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为10，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0078] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用50%（v/v）的乙醇洗脱，取洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为20%、甜茶多酚的重量含量为20%。

[0079] 实施例8

[0080] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物1.8份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26.2份。

[0081] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为30%、甜茶多酚为19%。

[0082] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0083] 1）取甜茶叶粉碎至30目，放入10%（v/v）的乙醇中，在超声波20KHz、温度为30℃条件下浸提2次，每次20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0084] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为10.8，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0085] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用50%（v/v）的乙醇洗脱，取洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为30%、甜茶多酚的重量含量为19%。

[0086] 实施例9

[0087] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物1份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水27份。

[0088] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为8.9%、甜茶多酚为20.2%。

[0089] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0090] 1）取甜茶叶粉碎至30目，放入20%（v/v）的乙醇中，常温浸提2次，每次20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0091] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为9.5，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0092] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用60%（v/v）的乙醇洗脱，取洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为8.9%、甜茶多酚的重量含量为20.2%。

[0093] 实施例10

[0094] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物0.3份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水27.7份。

[0095] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为5%、甜茶多酚为5%。

[0096] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0097] 取甜茶叶粉碎至5目，放入80℃水中浸提30min，合并提取液，过滤，浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为5%、甜茶多酚的重量含量为5%。

[0098] 实施例11

[0099] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物1.2份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水26.8份。

[0100] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚为7%。

[0101] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0102] 1）取甜茶叶粉碎至40目，放入30%（v/v）的乙醇中，在超声波40KHz、温度为70℃下浸提2次，每次浸提20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0103] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为12.5，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0104] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用50%（v/v）的乙醇洗脱，将洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚的重量含量为7%。

[0105] 实施例12

[0106] 含甜茶提取物的牙膏的配方：甜茶提取物0.4份、二水磷酸氢钙45份、甘油10份、山梨醇10份、羧甲基纤维素1份、月桂醇硫酸钠5份、薄荷脑1份、水27.6份。

[0107] 所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚为10%。

[0108] 所述甜茶提取物的制备方法：

[0109] 1）取甜茶叶粉碎至40目，放入30%（v/v）的乙醇中，在超声波40KHz、温度为60℃下浸提2次，每次浸提20min，合并提取液，过滤，取滤液回收溶剂，得甜茶粗提物。

[0110] 2）在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值为11，待杂质沉淀后，滤去沉淀，取上清液备用。

[0111] 3）调节上清液pH至中性后，用D101大孔吸附树脂对其进行吸附分离，用50%（v/v）的乙醇洗脱，将洗脱液浓缩，干燥，即为甜茶提取物，其中，甜茶甙的重量含量为40%、甜茶多酚的重量含量为10%。

[0112] 实施例1～12及对照实施例1～2所述的牙膏均按常规方法制备得到。

[0113] 实验例

[0114] 为表明本发明的含甜茶提取物的牙膏对龋齿的预防效果，申请人针对该牙膏对口腔致龋菌(变形链球菌)的作用机制进行了体外实验研究，具体报告如下：

[0115] 1、实验方法

[0116] 1.1牙膏溶液和菌悬液的制备

[0117] 实验组：分别取本发明实施例3～5以及对照实施例1～2的牙膏125g，将其粉碎，置于试管中，再分别添加100ml含1%的蔗糖的TTY液体培养基（胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物培养基）配成牙膏溶液。

[0118] 阴性对照组：采用不含该牙膏的TTY液体培养基。

[0119] 将变形链球菌（S.mutans）于TSB培养基（胰蛋白酶消化大豆液体培养基）活化3h后，接种于MSB固体培养基（轻唾选择培养基）37℃下厌氧培养48小时，挑取典型菌落于5ml无菌生理盐水内制成混悬液，调波长为540nm处，光密度值(Optical Density，OD)为1.0的菌悬液。

[0120] 1.2、牙膏溶液对致龋菌生长的影响

[0121] 分别取0.3ml菌悬液接种于3ml不同浓度的牙膏溶液中，37℃下厌氧培养48小时，并分别离心收集各试管细菌，置于2ml生理盐水中，混匀，紫外可见光分光光度计测波长为540nm处的OD值。

[0122] 1.3、牙膏溶液对S.mutans产酸作用的影响

[0123] 分别取3ml菌悬液接种于等量的各浓度的牙膏溶液中，37℃下厌氧培养48小时，并计算出培养前后的△pH值，并与阴性对照组的△pH值对比。

[0124] 1.4、牙膏溶液对S.mutans粘附作用的影响

[0125] 按牙膏溶液与菌悬液为10:1的比例，分别将菌悬液接种于各浓度的牙膏溶液中，所有试管30°水平角厌氧培养48h后，将粘附到试管壁的细菌用NaOH溶液洗脱，测定波长在540nm处的OD值，并计算粘附抑制率，与阴性对照组的粘附抑制率对比。

[0126] 1.5、葡萄糖基转移酶(Glucosyltransferase，GTF)的提取和水不溶性胞外多糖(WIG)的检测

[0127] 取不同浓度的牙膏溶液各3ml，加入S.mutans菌悬液0.3ml，厌氧培养后将细菌培养液离心，收集上清液，加入固体硫酸铵，使饱和度达到60%，离心后，将沉淀溶于磷酸盐缓冲液中透析，离心，上清液即为GTF粗酶。取0.1mlGTF粗酶，加入4ml蒸馏水，采用考马斯亮蓝法(Bradford法)测定总蛋白含量。另取100μl0.5mmol/L蔗糖溶液、GTF粗酶0.1ml，加入0.1mmol/L磷酸钠缓冲液，使混合液的总体积达500μl，37℃孵育60min，加热至100℃持续10min后终止反应，加入2.5ml双蒸水混匀，离心，收集上清液采用Smogyi法测定酶一底物反应液中还原糖量。GTF活力单位(IU)定义为标准条件下(37℃反应1h每分钟从蔗糖释放1μmol还原糖所需的酶量)，并计算酶的比活力。

[0128] 取细菌培养液离心，弃上清液，取沉淀物加入0.5mol/L的NaOH5ml，离心，取上清液，加入其3倍体积的无水乙醇，离心，沉淀即为反应生成的水不溶性胞外多糖，用蒽酮法测定水不溶性胞外多糖的含量。与阴性对照组中S.mutans的酶活性和不溶性胞外多糖对比。

[0129] 2、实验结果：

[0130] 2.1、在上述实验中，牙膏溶液中均有变形链球菌生长，且随着甜茶提取物中甜茶甙含量的升高以及甜茶多酚含量的降低，溶液中变形链球菌的浓度增加。实验组S.mutans的OD值总体均数低于阴性对照组(P<0.01)，即当甜茶提取物中甜茶甙含量在5～95%以及甜茶多酚在2～21%的范围内时，对变形链球菌的生长有抑制性，且其抑制性随甜茶甙含量的降低和甜茶多酚含量的增加而增加。具体结果见表1。

[0131] 表1牙膏溶液对变形链球菌的抑制作用的OD值(X±s)

[0132]

[0133] 2.2、牙膏溶液实验前后△pH(pH变化量)总体均数间均具有差异，在甜茶提取物中甜茶甙含量为5%、甜茶多酚含量为21%时，S.mutans的△pH值变化量是最小的；实验组△pH值的总体均数间显著低于阴性对照组△pH(P<0.001)。具体见表2。

[0134] 表2牙膏溶液对变形链球菌产酸的影响(X±s)

[0135]

[0136] 2.3、随着甜茶提取物中甜茶甙含量的升高、甜茶多酚含量的降低，粘附抑制率也随之降低。实验组粘附菌液的OD值的总体均数显著低于阴性对照组组(p<0.01)，具体结果见表3。

[0137] 表3牙膏溶液对变形链球菌粘附的影响(X±s)

[0138]

[0139] 2.4、实验组对S.mutans酶液中总蛋白、GTF酶活力、水不溶性胞外多糖的影响[0140] 2.4.1随着甜茶提取物中甜茶甙含量升高、甜茶多酚含量的降低，S.mutans酶液中总蛋白的含量反而减少。实验组不同浓度的牙膏溶液中总蛋白含量反而高于阴性对照组组。具体见表4。

[0141] 表4牙膏溶液对S.mutans酶液中总蛋白含量的影响(X±s)

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[0143]

[0144] 2.4.2随着甜茶提取物中甜茶甙含量升高、甜茶多酚含量的降低，S.mutans的GTF活性逐渐升高。阴性对照组的还原糖量、酶活力、比活力均明显高于实验组(p<0.001)。具体见表5。

[0145] 表5牙膏溶液对S.mutans中GTF的影响(X±s)

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