测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法

摘要

本发明公开了一种测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法，包括制备供试样品、将供试样品进行超高效液相色谱测定，采用BEH C18（2.1x50mm，1.7μm）色谱柱；柱温：35-45℃;乙腈和水作为流动相，梯度洗脱；恒流速0.3-0.4mL/min；Waters PDA作为检测器，检测波长230-240nm。采用本发明的方法检测生发育发产品中丙酸氯倍他索含量，检测限低，准确度高，前处理简单，非常适合生发育发产品中丙酸氯倍他索的快速、批量检测；为化妆品产品的质量控制和安全监测提供重要技术支持，具有良好的经济与社会效益。

权利要求

1.一种测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法进行测定，包括以下步骤：(1)制备供试样品

精确称取样品，依次加入乙腈、饱和氯化钠溶液和正己烷后，分散提取2-3次，抽取中间层澄清液；再往原样品中加入乙腈，提取1-2次，抽取中间层澄清液；合并澄清液，加沉淀剂，用水定容，冷冻离心，上清液过滤膜，即为供试样品；

(2)超高效液相色谱测定

将供试样品进行超高效液相色谱测定，条件如下：

色谱柱：BEH C18柱；所述BEH C18柱的规格为：2.1×50mm，1.7μm；

柱温：35-45℃；

流动相：乙腈和水，梯度洗脱；所述梯度洗脱程序为：0-1.5min，维持50％乙腈，

1.5-1.8min，乙腈体积由50％升至70％；1.8-2.5min，乙腈体积由70％降至50％；

流速：0.3-0.4mL/min；

洗脱时间：2.0-3.0分钟；

检测波长：230-240nm。

2.根据权利要求1所述的测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步骤(2)中所述色谱柱的柱温为40℃。

3.根据权利要求1所述的测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步骤(2)中所述流速为0.3mL/min，所述梯度洗脱的时间为2.5min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，所述步骤(1)为：准确称取0.5～1.0g样品，置于比色管中，依次准确加入乙腈、饱和氯化钠溶液和正己烷各3mL，充分均质，冷冻离心，用针抽取中间层澄清液，转移至离心管中；再加3mL乙腈于原比色管中，重复以上步骤；将两次提取的澄清液合并，加入10％亚铁氰化钾溶液0.2mL，再加入20％醋酸锌溶液0.2mL，用水稀释至10mL，混匀，离心，取上清液用0.45μm的滤膜过滤，即为供试样品。

说明书

测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法

技术领域

[0001] 本发明属于化妆品分析领域，具体地说，本发明涉及一种测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法。

背景技术

[0002] 随着社会和经济的发展，人们生活、工作和学习节奏不断加快，人们承受的心理压力日益加重，人群中脱发的发病率也越来越高，先天性脱发、雄激素性脱发、斑秃等病状越来越普遍发生。脱发现象的愈发普遍，市场上针对脱发而产生的生发、育发产品层出不穷。在市场上、电视上、网络上关于该类产品的广告到处可见。

[0003] 然而，由于育发化妆品行业生产技术含量不高，行业准入门槛较低，加上企业对于品牌的知识产权及产品的质量与安全意识缺乏，导致目前育发化妆品行业秩序混乱，主要存在以下问题：1、产品质量良莠不齐，大量的伪劣产品充斥市场。2、虚假、过分的广告宣传严重。3、禁用药物的非法添加。部分企业为了突出产品的功效性，虚假宣传，往往打着中药治脱发的名号，而事实上在产品中添加西药作为主要功效成分。2010年所曝出的新加坡、香港的某产品查出含有违禁物“米诺地尔”成分事件就是一个典型的例子。

[0004] 丙酸氯倍他索为人工合成的高效局部外用糖皮质激素类药物，具有较强的抗炎、抗瘙痒和毛细血管收缩作用，其抗炎作用为氢化可的松的112.5倍，倍他米松磷酸钠的2.3倍，氟轻松的18.7倍。因此，丙酸氯倍他索常常作为首选药物应用于慢性湿疹、神经性皮炎、银屑病、掌跖脓疱病、扁平苔藓、盘状红斑狼疮等糖皮质激素外用治疗有效的瘙痒性及非感染性炎症性皮肤病。

[0005] 然而，由于丙酸氯倍他索具有突出的消炎效果，其经常与酮康唑、米诺地尔及其他药物复配，被非法添加于生发育发产品中。这类药物长时间停留在皮肤、面部、毛发等部位上，可能造成过敏反应或毒害性，对消费者的健康和安全带来严重隐患，《化妆品卫生规范》（2007版）将糖皮质类激素西药成分列为禁用物质。因此，为了规范育发化妆品行业的市场秩序，维护企业及消费者的合法权益，我们迫切需要建立一种育发化妆品中丙酸氯倍他索的高通量检测方法，并完善相关国家及行业标准，能对其进行准确、快速的测定。

发明内容

[0006] 基于此，本发明提供了一种高效的测定生发育发产品中丙酸氯倍他索含量的方法。

[0007] 一种测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的方法，采用超高效液相色谱法进行测定，包括以下步骤：

[0008] (1)制备供试样品

[0009] 精确称取样品，依次加入乙腈、饱和氯化钠溶液和正己烷后，分散提取2-3次，抽取中间层澄清液；再往原样品中加入乙腈，提取1-2次，抽取中间层澄清液；合并澄清液，加沉淀剂，用水定容，冷冻离心，上清液过滤膜，即为供试样品；

[0010] (2)超高效液相色谱测定

[0011] 将供试样品进行超高效液相色谱测定，条件如下：

[0012] 色谱柱：BEH C18（2.1x50mm，1.7μm）柱；

[0013] 柱温：35-45℃;

[0014] 流动相：乙腈和水，梯度洗脱；

[0015] 流速：0.3-0.4mL/min；

[0016] 洗脱时间：2.0-3.0分钟；

[0017] 检测波长：230-240nm。

[0018] 在其中一个实施例中，步骤(2)中所述色谱柱的柱温为40℃。

[0019] 在其中一个实施例中，步骤(2)中所述梯度洗脱程序为：0-1.5min，维持50%乙腈，1.5-1.8min，乙腈体积由50%升至70%；1.8-2.5min，乙腈体积由70%降至50%。

[0020] 在其中一个实施例中，步骤(2)中所述流速为0.3mL/min，所述梯度洗脱的时间为2.5min。

[0021] 在其中一个实施例中，所述步骤(1)为：准确称取0.5～1.0g样品，置于比色管中，依次准确加入乙腈、饱和氯化钠溶液和正己烷各3mL，充分均质，冷冻离心，用针抽取中间层澄清液，转移至离心管中；再加3mL乙腈于原比色管中，重复以上步骤；将两次提取的澄清液合并，加入10%亚铁氰化钾溶液（v/v）0.2mL，再加入20%醋酸锌溶液（v/v）0.2mL，用水稀释至10mL，混匀，离心，取上清液用0.45μm的滤膜过滤，即为供试样品。

[0022] 本发明发明人经过大量的实验摸索出了超高效液相色谱法测定生发育发产品中丙酸氯倍他索的含量的最佳测得条件。采用超高效液相色谱法对丙酸氯倍他索含量的仪器检测限（S/N=3）为0.1mg/L，平均回收率为90.4%～95.8%，相对标准偏差为5.3%～10.2%。采用本发明的方法检测生发育发产品中丙酸氯倍他索含量，检测限低，准确度高，前处理简单，非常适合生发育发产品中丙酸氯倍他索的快速、批量检测；为化妆品产品的质量控制和安全监测提供重要技术支持，具有良好的经济与社会效益。

附图说明

[0023] 图1为实施例1中丙酸氯倍他索浓度为2.0mg/L的标准溶液的色谱图；

[0024] 图2为实施例1中丙酸氯倍他索浓度－峰面积标准曲线图；

[0025] 图3为实施例2中生发液样品的色谱图；

[0026] 图4为实施例3中添加浓度为4.0mg/kg的生发液样品的色谱图。

具体实施方式

[0027] 下面结合附图和具体实施例来详细说明本发明。

[0028] 以下实施例中所使用的原料均来源于市售。

[0029] 实施例1 丙酸氯倍他索对照品色谱图的建立

[0030] 包括以下步骤：

[0031] (1)丙酸氯倍他索标准溶液的配制

[0032] 以流动相溶液(乙腈/水=1:1)为溶剂，分别配制浓度为0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的丙酸氯倍他索标准溶液。

[0033] (2)超高效液相色谱检测

[0034] 将标准溶液按浓度由低到高精密吸取5μL，依次进行超高效液相色谱检测，条件如下：

[0035] 色谱柱：BEH C18（2.1x50mm，1.7μm）柱(Waters)；

[0036] 柱温：40℃;

[0037] 流动相：乙腈和水，梯度洗脱，程序为：0-1.5min，维持50%乙腈，1.5-1.8min，乙腈体积由50%升至70%；1.8-2.5min，乙腈体积由70%降至50%；

[0038] 流速：0.3mL/min；

[0039] 洗脱时间：2.5分钟；

[0040] 检测波长：240nm。

[0041] (3)绘制标准曲线

[0042] 以色谱峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线(如图2所示)，获得R2值。丙酸氯倍他索浓度在0.1～20.0mg/L范围内，浓度与其对应的峰面积值呈良好线性关2
系，相关系数R ＝0.999。所得的线性方程为y=39018x-339.64。

[0043] (4)丙酸氯倍他索对照品色谱图的建立

[0044] 准确称取丙酸氯倍他索对照品(德国Dr公司)，配制2.0mg/L的丙酸氯倍他索标准溶液，精密吸取5μL注入超高效液相色谱仪，按照步骤(2)的超高效液相色谱条件进行测定，得到丙酸氯倍他索对照品的色谱图，如图1所示，丙酸氯倍他索的保留时间为1.763min。

[0045] 实施例2 生发液样品中丙酸氯倍他索含量的测定

[0046] 包括以下步骤：

[0047] (1)制备供试样品

[0048] 准确称取0.5～1.0g（精确至0.001g）样品，置于10mL比色管中，依次准确加入乙腈、饱和氯化钠溶液和正己烷各3mL，再于均质器上充分均质，冷冻离心，用针抽取中间层澄清液，转移至10mL离心管中。再加3mL乙腈于原比色管中，重复以上步骤。将两次提取的澄清液合并，加入10%亚铁氰化钾溶液（v/v）0.2mL，再加入20%醋酸锌溶液（v/v）0.2mL，用水稀释至10mL，混匀，离心，取上清液用0.45μm的滤膜过滤，供UPLC测定。

[0049] (2)超高效液相色谱测定

[0050] 精密吸取供试样品5μL注入超高效液相色谱仪，进行超高效液相色谱测定测定，条件如下：

[0051] 色谱柱：BEH C18（2.1x50mm，1.7μm）柱；

[0052] 柱温：40℃;

[0053] 流动相：乙腈和水，梯度洗脱，程序为：0-1.5min，维持50%乙腈，1.5-1.8min，乙腈体积由50%升至70%；1.8-2.5min，乙腈体积由70%降至50%；

[0054] 流速：0.3mL/min；

[0055] 洗脱时间：2.5分钟；

[0056] 检测波长：240nm。

[0057] (3)测定

[0058] 得到的色谱图如图3所示。图3表明生发液样品中未检测到丙酸氯倍他索。

[0059] 实施例3 添加浓度为4.0mg/kg的丙酸氯倍他索的生发液样品中丙酸氯倍他索含量的测定

[0060] 包括以下步骤：

[0061] (1)制备供试样品

[0062] 准确称取实施例2中生发液样品0.5g，在该样品中加入浓度为20.0mg/L的丙酸氯倍他索标准溶液100μL，则该生发液样品中丙酸氯倍他索的浓度为4.0mg/kg。后续处理同实施例2，得到供试样品。

[0063] (2)超高效液相色谱测定

[0064] 同实施例2。

[0065] (3)测定

[0066] 得到的色谱图如图4所示。根据供试样品所代表的样品质量，从实施例1的标准曲线计算得到供试样品中丙酸氯倍他索的含量。计算得到生发液样品中的丙酸氯倍他索含量为3.82mg/kg，回收率为95.5%。丙酸氯倍他索峰出现时间为1.765min。

[0067] 实施例4 回收率和精密度试验

[0068] 根据方法的检测限，对实施例2中的生发液样品按照表1中的添加量，在每个样品中添加标准溶液，进行6次实验。平均回收率和精密度结果见于表1。

[0069] 表1 丙酸氯倍他索在三个生发液样品中的平均添加回收率和相对标准偏差[0070]

[0071] 表1结果显示，三个生发液样品基质加标回收率良好，相对标准偏差小，采用该方法检测生发育发产品中丙酸氯倍他索，检测结果准确、可靠、重复性好。

[0072] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。