蛹虫草菌株、蛋化虫草及其培养方法与应用

摘要

本发明涉及一种保藏编号为CGMCC？NO.6808的蛹虫草菌株（Cordycepsmilitaris）沁虫1号、蛋化虫草及其培养方法与应用。以所述蛹虫草菌株沁虫1号感染寄主禽蛋，经人工培育转化可形成蛋与草的复合体—蛋化虫草。本发明筛选培育出了育性稳定、适应性好的蛹虫草菌株沁虫1号，以其感染寄主禽蛋（成功率达98%以上），人工培育出了一种新式的虫草品种，所培养出的蛋化虫草色泽金黄，与天然蛹虫草完全相同，且其菌核形态保持禽蛋原状，具有良好的观赏价值，其所含医用成分及营养成分大都高于人工培育的现有其它形式的虫草与天然虫草，且产量品质一致性好；本发明蛋花虫草的培养方法简单，筛选出了成本低廉的工业大规模培养用培养基，大大降低了生产成本。

权利要求

1.一种蛹虫草菌株(Cordyceps militaris)'?心虫I号,其保藏编号为CGMCC N0.6808。

2.权利要求1所述蛹虫草菌株沁虫I号在培育虫草菌丝体、虫草子实体或蛹虫草复合体中的应用。

3.—种蛋化虫草母种的制备方法，包括以下步骤: 取蛋黄粉0.3~0.7g、蛋清粉0.3~0.7g、蔗糖25~35g、蛋白胨8~12g、酵母膏I~2g、磷酸二氢钾1.0~1.5g、硫酸镁0.4~0.6g、氯化钾0.4~0.6g、硝酸钾0.3~0.5g、琼脂18~22g、水800~1200mL制成斜面培养基，再向该培养基斜面上接种保藏编号为CGMCCN0.6808的蛹虫草菌株沁虫I号，置18~25°C、黑暗环境中活化培养8~10天，当菌丝发满斜面培养基表面，即成蛋化虫草母种。

4.一种蛋化虫草液体菌种的制备方法，包括以下步骤: 取葡萄糖15~25g、蛋白胨5~15g、酵母粉5~15g、磷酸二氢钾0.1~0.5g、硫酸镁0.1~0.5g、食盐I~5g、蛋黄粉0.5~1.5g、蛋清粉0.5~1.5g、水800~1200mL制成菌种培养液，在无菌环境下，取权利要求3所述的蛋化虫草母种接种至菌种培养液，于18~25°C环境中静止培养65~75h，再通灭菌后的空气或氧气培养70~80h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通空气或氧气，经检验无杂菌、细菌感染后，即成蛋化虫草液体菌种。

5.一种蛋化虫草的培育方法，包括以下步骤: (1)禽蛋处理:选择符合食用标准的禽蛋，进行清洗，除去表面污溃后，从蛋壳中将取出蛋清、蛋黄，收集取出的蛋清、蛋黄，搅拌混合均匀后，放入锅中进行加热至凝固，对凝固的蛋清、蛋黄混合物进行挤压脱水至其含水量60~70% ;再将脱水后的蛋清、蛋黄混合物切剁成小米粒状后，重新装入蛋`壳，将经上述处理的禽蛋装入合适的瓶中进行常规灭菌处理； (2)接种:在无菌条件下，以点种式或注射式向处理后的禽蛋中接种权利要求4所述的蛋化虫草液体菌种，接种量为禽蛋:菌种=80~120g =ImL ； (3)染菌期培养:接种后置18~25°C、空气湿度50~55%的黑暗环境中培养8~12天，待菌丝发满即完成染菌期； (4)转色期培养:光照150~2501ux、温度20~23°C、空气湿度60~65%下培养7~8天，待菌丝由白色转为橘黄色时转色完成； (5)出草期培养 ①从原基形成到草长至2cm为第一阶段，时间为14~16天，培养条件为自然光照、温度19~21 °C、空气湿度65~75% ； ②草长至2cm以上直到蛋化虫草完全成熟为第二阶段，时间为24~26天，培养条件为自然光照、温度20~23°C、空气湿度75~85%，当子座顶端膨大、色泽变暗、表面出现粉末状物时采收，即为蛋化虫草。

说明书

蛹虫草菌株、蛋化虫草及其培养方法与应用

技术领域

[0001] 本发明涉及虫草领域,具体涉及一种蛹虫草菌株(Cordyceps militaris)泌虫I号、蛋化虫草及其培养方法与应用。

背景技术

[0002] 蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目、虫草属的模式种。学名为Cordyceps militaris,又名北冬虫夏草、北蛹虫草、虫草等。世界性分布天然资源数量很少，是由子座(即草部分)与菌核(即虫的尸体部分)两部分组成的复合体。蛹虫草菌生在鳞翅目昆虫的子座与虫体上，其药用价值与冬虫夏草相似，是我国极具开发价值的药用滋补真菌，可以作为冬虫夏草的代用品。中医认为，虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。

[0003]目前，国内外人工培育虫草的技术主要有以下几种:

[0004] (I)采用生物质发酵(液体发酵或固体发酵)工程培育虫草菌丝体；

[0005] (2)采用农作物果实加生化试剂组成的混合培养基培育虫草子实体；

[0006] (3)采用桑蚕蛹、柞蚕蛹培育蛹草复合体。

[0007] 利用以上几种方法培育的虫草菌丝体、子实体、蛹草复合体存在以下不足之处:

[0008] ①只能作为生产`、加工药品的原材料，不能作为食材推向餐饮界，虽然近几年来一些大城市的宾馆、酒店不断将虫草子实体推向餐桌，但较牵强，原因是口感欠佳；②缺乏观感，商品价值不高；③生化试剂用量大，成本高，其有效成分含量也远不如天然虫草。

[0009] 因而，培育出既能作为生产、加工药品、保健品的原材料，又能作为餐饮界上乘的食用材料，其观感美、商品价值高、培育成本低、营养成分含量高且符合市场要求的蛋化虫草势在必行。

发明内容

[0010] 本发明要解决的技术问题是提供一种能转染禽蛋的蛹虫草沁虫I号，并公开了一种利用蛹虫草沁虫I号培育出蛋化虫草的方法，其所培育出的蛋化虫草不但极具观赏价值，而且其所含医用成分及营养成分高，是集医疗、保健、食用与观赏于一体的特殊虫草品种。

[0011] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是:

[0012] 筛选、培养驯化出了一种子座健壮、产量高、生产周期短、环境适应性强的蛹虫草菌株沁虫I号，其保藏编号为CGMCC N0.6808。

[0013] 上述蛹虫草菌株沁虫I号可用于培育虫草菌丝体、虫草子实体或蛹草复合体。

[0014] 以上述蛹虫草菌株沁虫I号感染寄主禽蛋，经人工培育转化可形成蛋与草的复合体一蛋化虫草。

[0015] 一种蛋化虫草的培育方法，包括以下步骤:[0016] (I)蛋化虫草母种制备:取蛋黄粉0.3~0.7g、蛋清粉0.3~0.7g、蔗糖25~35g、蛋白胨8~12g、酵母膏I~2g、磷酸二氢钾L O~L 5g、硫酸镁0.4~0.6g、氯化钾0.4~0.6g、硝酸钾0.3~0.5g、琼脂18~22g、水800~1200mL制成斜面培养基，再向该培养基斜面上接种保藏编号为CGMCC N0.6808的蛹虫草菌株沁虫I号，置18~25°C、黑暗环境中活化培养8~10天，当菌丝发满斜面培养基表面，即成蛋化虫草母种；

[0017] (2)蛋化虫草液体菌种制备:取葡萄糖15~25g、蛋白胨5~15g、酵母粉5~15g、磷酸二氢钾0.1~0.5g、硫酸镁0.1~0.5g、食盐I~5g、蛋黄粉0.5~1.5g、蛋清粉0.5~1.5g、水800~1200mL制成菌种培养液，在无菌环境下，将上述蛋化虫草母种接种至菌种培养液，于18~25°C环境中静止培养65~75h，再通灭菌后的空气或氧气培养70~80h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通空气或氧气，经检验无杂菌、细菌感染后，即成蛋化虫草液体菌种；

[0018] (3)禽蛋处理:选择符合食用标准的禽蛋，进行清洗，除去表面污溃后，从蛋壳中将取出蛋清、蛋黄，收集取出的蛋清、蛋黄，搅拌混合均匀后，放入锅中进行加热至凝固，对凝固的蛋清、蛋黄混合物进行挤压脱水至其含水量60~70% ;再将脱水后的蛋清、蛋黄混合物切剁成小米粒状后，重新装入蛋壳，将经上述处理的禽蛋装入合适的瓶中进行常规灭菌处理；[0019] (4)接种:在无菌条件下，以点种式或注射式向处理后的禽蛋中接种所述蛋化虫草液体菌种，接种量为禽蛋:菌种=80~120g =ImL ；

[0020] (5)染菌期培养:接种后置18~25°C、空气湿度50~55%的黑暗环境中培养8~12天，待菌丝发满即完成染菌期；

[0021] (6)转色期培养:光照150~2501ux、温度20~23°C、空气湿度60~65%下培养7~8天，待菌丝由白色转为橘黄色时转色完成；

[0022] (7)出草期培养

[0023] ①从原基形成到草长至2cm为第一阶段，时间为14~16天，培养条件为自然光照、温度19~21°C、空气湿度65~75% ；

[0024] ②草长至2cm以上直到蛋化虫草完全成熟为第二阶段，时间为24~26天，培养条件为自然光照、温度20~23°C、空气湿度75~85%，当子座顶端膨大、色泽变暗、表面出现粉末状物时采收，即为蛋化虫草。

[0025] 本发明具有积极有益的效果:

[0026] 1.筛选培育出的蛹虫草菌株沁虫I号育性稳定、子座健壮、产量高、生产周期短、环境适应性强；

[0027] 2.以蛹虫草菌株沁虫I号感染寄主禽蛋(成功率达98%以上)，人工培育出了一种新式的虫草品种，所培养出的蛋化虫草色泽金黄，与天然蛹虫草完全相同，且其菌核形态保持禽蛋原状，具有良好的观赏价值，其所含医用成分及营养成分大多都高于人工培育的现有其它形式的虫草与天然虫草，且产量及品质稳定性、一致性好。

[0028] 3.本发明蛋花虫草的培养方法简单、既能节省劳动力成本、降低工作量，也更加利于操作管理，并且筛选出了成本低廉的工业大规模栽培用培养基，大大降低了生产成本。

[0029] 本发明所述蛹虫草(Cordyceps militaris) 心虫I号，已于2012年11月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCCjia:北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，该蛹虫草沁虫I号保藏编号为CGMCCN0.6808。

附图说明

[0030] 图1为一种以为蛋(鹌鹑蛋)化虫草的图片。

具体实施方式

[0031] 以下结合具体实施例进一步阐述本发明。

[0032] 实施例1菌种分离、鉴定

[0033] 菌株的采集:2006年9月，发明人李国军于吉林省长白山哈达岭南延部野生蛹虫草产区采集到虫草菌株，经在培养基培养出蛹虫草，经生物学特性观察、检测鉴定，无毒、含虫草素高，确定为蛹虫草拟青霉菌株，并经多代传代培养驯化成为能感染禽蛋的蛹虫草菌株沁虫I号，其保藏编号为CGMCC N0.6808。

[0034] 实施例2蛋化虫草的培育方法

[0035] ( I)蛋化虫草母种制备

[0036] 取蛋黄粉0.5g、蛋清粉0.5g、鹿糖30g、蛋白胨10g、酵母膏1.5g、磷酸二氢钾1.2g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硝酸钾0.4g、琼脂20g、水1000ml制成斜面培养基(先取蛋黄粉、蛋清粉溶于水中煮汁过滤，取汁液与其余原料试剂混合后同煮溶化，趁热装管、封口、灭菌、摆斜面，冷却后凝固即成)，再向该培养基斜面上接种蛹虫草菌株沁虫I号(保藏编号CGMCC N0.6808)，置18~2`5°C环境中暗光活化培养8~10天，当菌丝发满斜面培养基表面，即成蛋化虫草母种。

[0037] (2)蛋化虫草液体菌种制备

[0038] 取葡萄糖20g、蛋白胨10g、酵母粉10g、磷酸二氢钾0.2g、硫酸镁0.2g、食盐4g、蛋黄粉lg、蛋清粉lg、水1000mL制成菌种培养液，在无菌环境下，将上述蛋化虫草母种接入1000m烧瓶中(每瓶培养液填充量为800ml)，在18~25°C环境中静止培养70h，再通气培养70~80h，当小米粒状菌球充满培养液时停止通气，经检验无杂菌、细菌感染后，即成蛋化虫草液体菌种。

[0039] (3)禽蛋处理

[0040] 选择符合食用标准的禽蛋(分别以符合食用标准的鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋、鸽子蛋各取50个为寄主禽蛋)，进行如下处理:

[0041] ①除污垢:清洗，除去表面污溃；

[0042] ②出壳:从蛋壳(尽量保持蛋壳的完整性)中将取出蛋清、蛋黄；

[0043] ③均质:收集取出的蛋清、蛋黄，搅拌混合均匀；

[0044] ④固化:放入锅中进行加热至凝固；

[0045] ⑤脱水:对凝固的蛋清、蛋黄混合物进行挤压脱水至其含水量达60~65%，去除多余水分；

[0046] ⑥粉碎:再将脱水后的蛋清、蛋黄混合物切剁成小米粒状；

[0047] ⑦入壳:剁碎后的蛋清、蛋黄混合物重新装入蛋壳；

[0048] ⑧消毒灭菌，将经上述处理的禽蛋装入合适的瓶中进行常规灭菌处理；[0049] (4)接种

[0050] 在无菌条件下，以点种式或注射式向处理后的禽蛋中接种上述蛋化虫草液体菌种，接种量为禽蛋:囷种=100g:1ml。

[0051] (5)染菌期培养

[0052] 接种后置18~25°C、空气湿度50%的黑暗条件下培养10天左右，待菌丝发满即完成染菌期；蛹虫草菌株沁虫I号的菌丝发菌速度较快，菌丝较厚、洁白、致密，且正常子实体原基萌发早、萌发率高。

[0053] (6)转色期培养

[0054] 光照2001ux、温度20~23°C、空气湿度60~65%下培养7~8天，待菌丝由白色转为橘黄色时转色完成；

[0055] (7)出草期培养[0056] 分为两个阶段进行管理:

[0057] ①从原基形成到草长至2cm左右为第一阶段，时间约为15天左右，培养条件为自然光照、温度20°C左右、空气湿度70%左右；

[0058] ②草长至2cm以上直到蛋化虫草完全成熟为第二阶段，时间约为25天左右，本阶段培养条件为自然光照、温度22°C、空气湿度80%，当子座(草)顶端膨大、色泽变暗、表面出现粉末状物时采收，采收时须保持蛋与草复合体的完整性。

[0059] 分别以上述符合食用标准的鸡蛋、鸭蛋、鶴蛋、鹤蛋、鴻子蛋为寄王禽蛋，成功率达98%以上，且培养出的蛋化虫草色泽金黄，与天然蛹虫草完全相同，且其菌核形态保持禽蛋原状，具有良好的观赏价值，参见图1。

[0060] 申请人于2010年8月委托中国科学院沈阳应用生态研究所农产品安全与环境质量检测中心对由上述方法培育出的蛋化虫草进行了主要有效成分的检测，依据的标准主要有 GB/T5009.93，GB/T5009.5-2003, GB/T5009.171-2003，STZS-BZ005 等，检测结果如表 I 所/Jn ο

[0061] 表1蛋化虫草中主要成分含量检验报告(编号:中科生测字2010-14-117)

[0062]

[0063] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于`本发明要求保护的范围。