给用口服活性1,2,4-噁二唑进行无义突变抑制治疗的方法

摘要

本发明涉及在治疗或预防与无义突变相关的疾病中使用1,2,4-噁二唑苯甲酸化合物的特定药物组合物和给药方案。具体而言，本发明涉及在患有与无义突变相关的疾病的哺乳动物中使用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的特定药物组合物和给药方案。

权利要求

1.用于治疗方法的口服药物组合物，其包含有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、悬浮剂精制聚葡糖、粘合剂甘露醇、选自聚乙二醇3350和泊洛沙姆407粉的表面活性剂、崩解剂交聚维酮以及选自羟乙基纤维素、香草风味剂、硬脂酸镁和硅胶的其它赋形剂，其中所述方法包括在24小时的期间内参照公式1X、

1X、2X施用三个剂量的有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐，其中X介于18和22mg/kg。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其包含25.0%的3-[5-(2-氟苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸、25.7%的精制聚葡糖、25.0%的甘露醇、12.8%的聚乙二醇3350和3.7%的泊洛沙姆407粉、5.0%的交聚维酮以及各自少于2%的羟乙基纤维素、香草风味剂、硬脂酸镁和硅胶。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其包含呈单位剂型的35mg至1400mg的

3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐。

4.如权利要求3所述的药物组合物，其中该单位剂型中3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐的量选自35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、

140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其可被包装在塑料瓶中。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其可以袋剂或粉末提供。

7.如权利要求1所述的药物组合物，其可被重配为悬浮液以达到25mg/mL的浓度。

8.如权利要求1所述的药物组合物，可被重配为悬浮液以达到50mg/mL的浓度。

9.如权利要求1所述的药物组合物，其可用水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方进行重配。

10.如权利要求1所述的药物组合物，其中X是20mg/kg。

说明书

给用口服活性1,2,4-噁二唑进行无义突变抑制治疗的方

法

[0001] 本申请是申请日为2007年10月11日、申请号为200780045655.9、名称为“给用口服活性1,2,4-噁二唑进行无义突变抑制治疗的方法”的发明申请的分案。

[0002] 本申请主张2006年10月12日提交的美国临时申请号60/851,450的权利，其内容通过引用完整并入本文。1.技术领域

[0003] 本发明涉及在治疗或预防与无义突变相关的疾病中使用1,2,4-噁二唑苯甲酸化合物的特定剂量和给药方案。具体而言，本发明涉及在患有与无义突变相关的疾病的哺乳动物中使用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的特定剂量和给药方案。2.背景技术

[0004] 2006年1月31日公告的题为“1,2,4-Oxadiazole Benzoic Acid Compounds and Their Use For Nonsense Suppression and the Treatment of Disease(1,2,4-噁二唑苯甲酸化合物及其在无义抑制和疾病治疗中的用途)”的美国专利号6,992,096B1(其内容通过引用完整并入本文)中描述了新的一类1,2,4-噁二唑化合物及其在治疗、预防或控制可通过对翻译提前终止或无义介导的mRNA降解的调节而改善的疾病中的用途。一种这样的化合物是3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。与所有的药物一样，对于患有囊性纤维化和杜兴氏肌营养不良症等疾病的患者进行治疗的正确剂量和给药方案对实现所需的或最佳的治疗效果而不带来不良的或是不希望的作用而言是关键的。

[0005] 因此，存在对安全、有效和无毒剂量和给药方案的需要，所述剂量和给药方案或者能防止或减少任何不良的或不希望的作用，或者能提供最佳治疗效果，或者能同时实现两者，即，提供所需的治疗特性(therapeutic profile)。

[0006] 3.发明综述

[0007] 本发明包括了给药方案，其中特定剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物以特定的时间间隔被施用，从而调节翻译提前终止或无义介导的mRNA降解，或改善与之相关的一种或多种症状，而同时减少或避免不良的或不希望的作用。本发明进一步包括了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的特定剂量和单位剂型。

[0008] 在一个实施方案中，本发明涉及在24小时的期间内一次、两次或三次向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法。本发明还涉及在24小时的期间内一次、两次或三次向有此需要的患者施用包含有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的药物组合物的方法。在24小时期间内每次施用的剂量可以相同或不同。在一个实施方案中，当在24小时期间内施用三次时，前两次施用的剂量相同，而第三次剂量是第一次剂量的两倍。在另一实施方案中，所有三次剂量相同。

[0009] 在另一实施方案中，本发明涉及治疗、预防或控制可通过对翻译提前终止或无义介导的mRNA降解的调节而改善的疾病的方法，所述方法包括在24小时的期间内一次、两次或三次向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。优选地，该施用可以每天三次连续施用，或者伴有数天、数周或数年的停用期。

[0010] 本发明还涉及治疗、预防或控制可通过对翻译提前终止或无义介导的mRNA衰变的调节而改善的疾病的方法，所述方法包括在24小时的期间内一次、两次或三次向有此需要的患者施用包含有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的药物组合物。优选地，该施用每天三次连续施用，或者伴有数天、数周或数年的停用期。

[0011] 在一个实施方案中，本发明涉及治疗、预防或减少咳嗽的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0012] 在一个实施方案中，本发明涉及增加肌肉中抗肌萎缩蛋白表达的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0013] 在一个实施方案中，本发明涉及3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的施用方法，其中该活性剂在24小时的期间内被一次、两次或三次施用至有此需要的患者，其中每次施用优选间隔约4-14小时。在具体实施方案中，活性剂的剂量从第一次剂量至第三次剂量逐步上升。

[0014] 在另一实施方案中，本发明涉及连续疗法，其中在特定时间期间内(例如，5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更长时间)向有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0015] 在另一实施方案中，本发明涉及以0.1mg/kg至500mg/kg、1mg/kg至250mg/kg、1mg/kg至150mg/kg、1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至25mg/kg、1mg/kg至
10mg/kg或2mg/kg至10mg/kg的单次或分次(例如，每天三次)剂量向有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，以约4mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约10mg/kg、约14mg/kg或约20mg/kg的剂量施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在另一实施方案中，在24小时的期间内一次、两次或三次施用前述实施方案中所述的任意剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0016] 在另一实施方案中，本发明涉及包含约35mg至约1400mg、约125mg至约1000mg、约250mg至约1000mg、或约500mg至约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂量制型。

[0017] 在另一实施方案中，本发明涉及包含35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg 或 1400mg 的
3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂量制剂。在优选的实施方案中，本发明涉及包含125mg、250mg或1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂量剂型。在另一实施方案中，本发明涉及在至少约1、1.5、2、2.5、3、3.5、
4、4.5、5、6、8、12或24小时或者更长的时间内保持3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物在患者体内的血浆浓度大于约
0.1μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、约5μg/mL、约10μg/mL、约20μg/mL、约25μg/mL、约40μg/mL、约50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、或500μg/mL的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0018] 4.发明详述4.1附图说明

[0019] 图1提供了来自38位II期杜兴氏肌营养不良症研究患者中的37位的血浆3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的浓度-时间曲线和PK参数，所述研究的剂量水平为4-、4-和8-mg/kg；10-、10-和20-mg/kg；以及20-、20-和40-mg/kg。来自一位患者的数据由于数据不充分被排除。

[0020] 图2提供了通过向个体施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸，在24小时中对平均咳嗽频率的作用。该数据显示了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的施用提供了对平均咳嗽频率的初始改善，随后出现暂时的平均咳嗽频率的上升，然后是对平均咳嗽频率的总体改善。

[0021] 4.2定义

[0022] 本文所用的“翻译提前终止”指将氨基酸对应的密码子改变为终止密码子的突变所造成的结果。

[0023] 本文所用的“无义介导的mRNA降解”指介导包含翻译提前终止密码子的mRNA降解的任意机制。在具体实施方案中，该无义介导的mRNA降解源于DNA的无义突变。

[0024] 本文所用的“提前终止密码子”指在应当存在氨基酸对应的密码子处出现了终止密码子。

[0025] 本文所用的“无义突变”指将氨基酸对应的密码子改变为终止密码子的点突变。在具体实施方案中，该无义突变为发生在DNA中并随后转录成mRNA的突变。

[0026] 本文所用的“无义抑制”指对翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的抑制或阻抑。在具体实施方案中，该mRNA降解源于DNA的无义突变。

[0027] 本文所用的“对翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的调节”指通过改变无义抑制水平对基因表达的调节。例如，如果希望提高由具有提前终止密码子的基因编码的缺陷蛋白的生成，即，允许疾病基因的提前终止密码子的通读从而可以翻译该基因，则翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的调节需要上调无义抑制。

[0028] 本文所用的术语“不良作用”或“副作用”包括但不限于，反胃、呕吐、腹泻、头痛、血清丙氨酸转氨酶(ALT)升高、血清天冬氨酸转氨酶(AST)升高、头晕、血清肌酸激酶(CK)升高、腹部疼痛、腹部胀气、眼部疼痛、眼肿胀、眼灼痛、乳头敏感、乳房压痛、肌肉与骨骼性胸痛、皮疹、痒、下颚淋巴结疼痛、血清乳酸脱氢酶(LDH)升高、血清醛缩酶升高和血清甘油三酯升高。

[0029] 本文所用的术语“活性剂”、“药物”和“药物物质”指3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0030] 本文所用的术语“剂量”指一次施用的活性剂的量。

[0031] 本文所用的术语“单位剂型”包括片剂；囊片；胶囊(如软弹性明胶胶囊)；袋剂；扁囊剂(cachet)；锭剂；糖锭；分散剂；粉末；溶液；凝胶；适于向患者进行口服或黏膜施用的液体剂型，包括悬浮剂(例如，水性或非水性液体悬浮剂)、乳剂(例如，水包油乳剂或油包水液体乳剂)、溶液和酏剂；以及可以被重配以生成适于口服或肠胃外施用至患者的液体剂型的无菌固体(例如，结晶或无定型固体)。单位剂型不一定要作为单一剂量施用。

[0032] 本文所用的术语“给药方案”和“剂量”指每个时间单元给用的活性剂的数量以及施用的持续时间。

[0033] 本文所用的术语“患者”指动物(例如，牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠等)，优选例如非灵长动物和灵长动物(例如，猴和人)的哺乳动物，最优选人。在某些实施方案中，患者为胎儿、胚胎、婴儿、儿童、青少年或成人。在一个实施方案中，通过预筛选已确定该患者具有无义突变。在另一实施方案中，通过预筛选确定该患者具有何种无义突变(即，UAA、UGA或UAG)。

[0034] 本文所用的“有效量”指足以在疾病的治疗或控制中提供治疗效益或者足以延缓或最小化与该疾病相关的症状的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的量。在一个实施方案中，术语“有效量”指足以在特定时间期限内实现所需血浆水平的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的量。本文特别描述了优选的有效量。

[0035] 本文所用的术语“控制”指患者由于施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物而获得的有益效果，该效果未导致疾病的治愈。

[0036] 本文所用的术语“预防”指由于施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物而造成的对患者体内疾病或其症状的发作、复发、扩散或恶化的预防。由于与无义突变相关的疾病可能是遗传性的，因此可对患者进行存在无义突变的筛选。当通过筛选确定患者具有无义突变时，可向患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物以防止疾病或其症状的发作、复发、扩散或恶化。

[0037] 本文所用的术语“治疗”指对疾病或与该疾病相关的症状的消除或缓解。在某些实施方案中，该术语指由于向患有该种疾病的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物而使该疾病的扩散或恶化的最小化。

[0038] 本文所用的术语“药学可接受的盐”指由药学可接受的无毒的酸或碱(包括无机酸和碱以及有机酸和碱)制备的盐。对于3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸适用的药学可接受的碱加成盐包括但不限于，由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制备的金属盐；或由赖氨酸、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺(N-甲葡糖胺)和普鲁卡因制备的有机盐。适用的无毒性酸包括但不限于，无机和有机酸，例如醋酸、褐藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲基磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸、以及对甲苯磺酸。具体的无毒性酸包括盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。具体盐的例子包括盐酸盐和甲磺酸盐。盐的其它例子是本领域公知的。例如，参见，Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing,Easton PA(1990)。

[0039] 本文所用的术语“水合物”指3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐，其进一步包括通过非共价分子间力结合的化学计量量或非化学计量量的水。

[0040] 本文所用的术语“溶剂化物”指3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐，其进一步包括通过非共价分子间力结合的化学计量量或非化学计量量的溶剂。

[0041] 4.3与翻译提前终止相关的疾病

[0042] 本发明包括了治疗、预防或控制患者体内可通过抑制翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解而改善的疾病或紊乱的方法，所述方法包括根据本文所述的剂量和/或给药方案向有此需要的患者施用有效量的口服生物可用的化合物(即，3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物)。

[0043] 在一个实施方案中，本发明包括了对与呈现翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的基因相关的任意疾病的治疗、预防或控制。在一个实施方案中，该疾病部分源于由提前终止密码子导致的基因表达的缺乏。呈现翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的基因以及与翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解相关的疾病的具体例子可参见2002年6月21日提交的题为“Methods For Identifying Small Molecules That Modulate Premature Translation Termination And Nonsense Mediated mRNA Decay(调节翻译提前终止和无义介导的mRNA降解的小分子的鉴定方法)”的美国专利申请号60/390,747，其内容通过引用全文并入本文。

[0044] 在具体实施方案中，本文提供的方法、组合物、剂量、单位剂型和给药方案可用于治疗、预防或控制患有或易感染或易患有与基因无义突变相关的疾病(例如本文所述的疾病)的胚胎或胎儿中与基因无义突变相关的疾病。根据该实施方案，向怀孕妇女施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，其通过胎盘传递至胚胎或胎儿。在具体实施方案中，有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物被口服施用至怀孕妇女。

[0045] 可通过抑制翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解而改善或与之相关的疾病或紊乱包括但不限于：遗传疾病、癌症、自身免疫疾病、血液疾病、胶原病、糖尿病、神经退行性疾病、增生性疾病、心血管疾病、肺病、炎症疾病或中枢神经系统疾病。

[0046] 在本发明的方法的范围内的具体遗传疾病包括但不限于，多发性内分泌瘤(1、2和3型)、淀粉样变性病、粘多糖代谢病(I和III型)、先天性肾上腺发育不良、腺瘤性多发性息肉病、Von Hippel Landau(VHL)病、Menkes综合征、甲型血友病、乙型血友病、胶原蛋白VII型、Alagille综合征、Townes-Brocks综合征、杆状肿瘤、大疱型表皮松解症、Hurler’s综合征、Coffin-Lowry综合征、虹膜缺失、腓骨肌萎缩症、肌小管肌病、X-连锁的肌小管肌病、X-连锁的软骨发育不良、X-连锁的血中丙球蛋白贫乏、多囊性肾病、脊髓性肌萎缩、家族性多发性腺癌、丙酮酸脱氢酶缺乏症、苯丙酮尿症、1型神经纤维瘤病、2型神经纤维瘤病、阿尔茨海默病、Tay Sachs病、Rett综合征、Hermansky-Pudlak综合征、外胚层发育不良/皮肤脆性综合征、Leri-Weill软骨骨生成障碍、软骨病、低磷酸血性佝偻病、脑白质肾上腺萎缩症、回旋形萎缩、动脉硬化症、感觉神经性耳聋、张力障碍、Dent病、急性间歇性血紫质病、Cowden病、Herlitz大疱型表皮松解症、Wilson病、Treacher-Collins综合征、丙酮酸激酶缺乏症、巨人症、侏儒症、甲状腺机能减退、甲状腺功能亢进、老化、肥胖、帕金森病、C型Niemann Pick病、囊性纤维化、肌营养不良、心脏病、肾结石、共济失调毛细管扩张、家族性高胆甾醇血症、色素性视网膜炎、溶酶体沉积病、结节性硬化、杜兴氏肌营养不良症、以及马凡综合征。

[0047] 在另一实施方案中，遗传疾病为自身免疫疾病。在优选的实施方案中，该自身免疫疾病为风湿性关节炎或移植物抗宿主病。

[0048] 在另一实施方案中，遗传疾病为血液疾病。在优选的实施方案中，该血液疾病为甲型血友病、Von Willebrand病(3型)、共济失调毛细管扩张、β-地中海贫血或肾结石。

[0049] 在另一实施方案中，遗传疾病为胶原病。在一个实施方案中，该胶原病为成骨不全或肝硬化。

[0050] 在另一实施方案中，遗传疾病为糖尿病。

[0051] 在另一实施方案中，遗传疾病为炎症疾病。在优选的实施方案中，该炎症疾病为关节炎。

[0052] 在另一实施方案中，遗传疾病为中枢神经系统疾病。在一个实施方案中，该中枢神经系统疾病为神经退行性疾病。在优选的实施方案中，该中枢神经系统疾病为多发性硬化症、肌营养不良、杜兴氏肌营养不良症、阿尔茨海默病、Tay Sachs病、晚发婴儿型神经元蜡样脂褐质沉着病(LINCL)或帕金森病。

[0053] 在另一实施方案中，遗传疾病为癌症。在优选的实施方案中，该癌症为头颈部、眼部、皮肤、口腔、咽喉、食道、胸部、骨、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳腺、卵巢、肾、肝、胰、脑、肠、心脏或肾上腺的癌症。该癌症可以是原发或转移癌症。癌症包括实体肿瘤、血液癌症和其它肿瘤。

[0054] 在另一优选的实施方案中，癌症与肿瘤抑制基因相关(例如，参见Garinis等 人，2002，Hum Gen 111:115-117；Meyers 等 人，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95:15587-15591；Kung等人，2000，Nature Medicine6(12):1335-1340。这样的肿瘤抑制基因包括但不限于，APC、ATM、BRAC1、BRAC2、MSH1、pTEN、Rb、CDKN2、NF1、NF2、WT1以及p53。

[0055] 在特别优选的实施方案中，肿瘤抑制基因为p53基因。已经识别了p53基因中的无义突变，且这些无义突变与癌症相关联。已经识别了p53基因中的多个无义突变(例如，参见Masuda等人，2000，Tokai J Exp Clin Med.25(2):69-77；Oh等人，2000，Mol Cells10(3):275-80；Li 等 人，2000，Lab Invest.80(4):493-9；Yang 等人，1999,Zhonghua Zhong Liu Za Zhi21(2):114-8；Finkelstein 等 人，1998,Mol Diagn.3(1):37-41；Kajiyama 等 人，1998,DisEsophagus.11(4):279-83;Kawamura 等人，1999,Leuk Res.23(2):115-26；Radig 等 人，1998，Hum Pathol.29(11):1310-6；
Schuyer 等 人，1998，Int J Cancer76(3):299-303；Wang-Gohrke 等 人，1998，Oncol Rep.5(1):65-8；Fulop等人，1998，J Reprod Med.43(2):119-27；Ninomiya等人，1997，J Dermatol Sci.14(3):173-8；Hsieh等人，1996，Cancer Lett.100(1-2):107-13；Rall等人，1996，Pancreas.12(1):10-7；Fukutomi 等 人，1995，Nippon Rinsho.53(11):2764-8；
Frebourg 等 人，1995，Am J Hum Genet.56(3):608-15；Dove 等 人，1995，Cancer Surv.25:335-55；Adamson 等 人，1995，Br J Haematol.89(1):61-6；Grayson 等人，1994，Am J Pediatr Hematol Oncol.16(4):341-7；Lepelley 等 人，1994，Leukemia.8(8):1342-9；McIntyre等人，1994，J Clin Oncol.12(5):925-30；Horio等人，
1994，Oncogene.9(4):1231-5；Nakamura等人，1992，Jpn J Cancer Res.83(12):1293-8；
Davidoff等人，1992，Oncogene.7(1):127-33；和Ishioka等人，1991，Biochem Biophys Res Commun.177(3):901-6；其披露的内容通过引用全文并入本文)。

[0056] 在其它实施方案中，可通过向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物而被治疗、预防或控制的疾病包括但不限于，实体肿瘤、肉瘤、癌、纤维肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、Wilm肿瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形胶质细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、Kaposi肉瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、血源性肿瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞B-细胞白血病、急性淋巴细胞T-细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、急性成巨核细胞白血病、急性粒细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性未分化型白血病、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、或多发性骨髓瘤。例如，参见Harrison's Principles of Internal Medicine,Eugene Braunwald等人编，第491-762页(第15版，2001)。

[0057] 在一个实施方案中，本发明涉及治疗、预防或减少咳嗽的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，该患者患有囊性纤维化。在另一实施方案中，咳嗽为慢性咳嗽。在另一实施方案中，以本文所述的剂型或参照本文提供的给药方案施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0058] 在一实施方案中，本发明涉及增加肌肉中抗肌萎缩蛋白表达的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，本发明涉及增加肌肉细胞中抗肌萎缩蛋白表达的方法，其包括将该肌肉细胞与有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物相接触。在一实施方案中，该肌肉细胞在体外接触。在具体实施方案中，该患者患有杜兴氏肌营养不良症。在另一实施方案中，以本文所述的剂型或参照本文提供的给药方案施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0059] 4.4剂量和给药方案

[0060] 不希望受限于理论，本发明部分包括3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的特定剂量和给药方案，其优化了对翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的抑制。在优选的实施方案中，该无义介导的mRNA降解源于DNA的无义突变。

[0061] 本发明的新型方法包括治疗、预防和控制可通过抑制翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解而得以治疗或预防的疾病，同时减少或避免不良或不希望的作用(例如，毒性或副作用)。本文所述的剂量和给药方案的优选施用途径为口服(即，摄入超过活性剂饱和浓度的溶液、胶体溶液或具有附加活性剂的溶液)。

[0062] 本文所述的剂量和给药方案由于能够实现和维持活性剂的期望血浆浓度而被认为是有用的。不希望受限于理论，认为在例如24小时或更长的时间期间内实现和维持活性剂(例如，描述于4.4节的活性剂)的相对恒定血浆浓度会对患者产生有益的治疗效果。本文所述的剂量和给药方案可用于实现和维持活性剂的治疗血浆浓度。

[0063] 在一实施方案中，本发明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，其中该活性剂在12或
24小时的期间内向有此需要的患者施用一次。

[0064] 在另一实施方案中，本发明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的施用方法，其中该活性剂在
12或24小时的期间内向有此需要的患者施用两次，其中每次施用优选间隔约4-14小时，在一实施方案中间隔12小时。在这些实施方案中，活性剂可在例如就餐时(例如早餐和晚餐)施用。

[0065] 在另一实施方案中，本发明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，其中该活性剂在12或
24小时的期间内向有此需要的患者施用三次，其中每次施用优选间隔约4-14小时。在具体实施方案中，活性剂在早晨施用一次，下午施用一次和晚上施用一次。剂量之间的优选间隔包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14小时。

[0066] 在一实施方案中，活性剂的剂量在24小时的期间内逐步升高。在另一实施方案中，施用的第二剂量升高(例如，两倍)。在另一实施方案中，所施用的第一和第二剂量保持恒定，而施用的第三剂量升高(例如，两倍)。在具体实施方案中，参照公式1X、1X、2X在24小时期间内施用三个剂量，其中X为特定起始剂量(例如，4mg/kg、7mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg或50mg/kg)。在另一实施方案中，活性剂在患者进食(即，之前或之后)约10、15、30、45或60分钟内被施用。在一实施方案中，有效量的活性剂被撒在食物上或混合于食物中。在另一实施方案中，活性剂不随食物施用。

[0067] 特别优选的给药方案为：以大约6-、6-和12-小时的间隔(例如，早餐后的～7:00AM、午餐后的～1:00PM以及晚餐后的～7:00PM)在就餐后30分钟内向患者施用该活性剂。

[0068] 在另一实施方案中，本发明涉及以0.1mg/kg至500mg/kg、1mg/kg至250mg/kg、1mg/kg至150mg/kg、1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至 25mg/kg、1mg/kg至10mg/kg或2mg/kg至10mg/kg的单次或分次(例如，在24小时期间内三次)剂量向有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，以约2-6mg/kg、约5-9mg/kg、约6-10mg/kg、约8-12mg/kg、约12-16mg/kg或约18-22mg/kg的剂量施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，以约4mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约10mg/kg、约14mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg或约50mg/kg的剂量施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在另一实施方案中，在24小时的期间内三次施用前述实施方案中所述的任意剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0069] 在另一实施方案中，本发明涉及连续疗法，其中在特定的时间段内(例如，5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更长时间)向有此需要的患者每日施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一个实施方案中，活性剂在每24小时的期间内连续施用三次。在另一实施方案中，每天、每周、每月或每年连续施用活性剂。在具体实施方案中，数天、数周、数月或数年中以约4mg/kg、约
4mg/kg和约8mg/kg的剂量每24小时期间内连续施用三次活性剂。在具体实施方案中，数天、数周、数月或数年中以约7mg/kg、约7mg/kg和约14mg/kg的剂量每24小时期间内连续施用三次活性剂。在具体实施方案中，数天、数周、数月或数年中以约10mg/kg、约10mg/kg和约20mg/kg的剂量每24小时期间内连续施用三次活性剂。在具体实施方案中，数天、数周、数月或数年中以约30mg/kg、约30mg/kg和约60mg/kg的剂量每24小时期间内连续施用三次活性剂。在具体实施方案中，数天、数周、数月或数年中以约10mg/kg、约10mg/kg和约
20mg/kg的剂量每24小时期间内连续施用三次活性剂。在具体的实施方案中，数天、数周、数月或数年中以约40mg/kg、约40mg/kg和约80mg/kg的剂量每24小时期间内连续施用三次活性剂。在施用活性剂的每24小时期间内，优选以大约6-、6和12-小时的间隔(例如，早餐后的～7:00AM、午餐后的～1:00PM以及晚餐后的～7:00PM)施用三次。在囊性纤维化和杜兴氏肌营养不良症的治疗、预防或控制中优选使用连续疗法。

[0070] 一个疗程的治疗期间可持续一周、两周、三周、四周、五周、六周、七周、八周、九周、十周、十一周、十二周、十三周、十四周、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、一年、两年、三年、四年、五年或更长。该治疗期间可被持续一天、一周、两周、三周、四周、五周、六周、七周、八周、九周、十周、十一周、十二周、十三周、十四周、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、一年、两年、三年、四年、五年或更长的停用期所中断。本领域的技术人员(例如医师)可作出此类判断。

[0071] 在具体实施方案中，连续治疗14天，然后停止治疗14天，然后再连续治疗14天。在一个实施方案中，在第二个14天治疗中给用的剂量大于第一个14天治疗中给用的量。
作为非限制性例子，持续14天在24小时期间内向有此需要的患者施用三个剂量(例如，
4mg/kg、4mg/kg和8mg/kg)的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，然后为14天的无治疗期，然后在另外的连续14天中于24小时期间内向有此需要的患者施用三个剂量(例如，10mg/kg、10mg/kg和20mg/kg)的
3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0072] 在另一实施方案中，治疗持续28天。连续治疗可被一天或更多天、数月、数周或数年所中断。连续治疗后还可跟随持续一天或更多天、数月、数周或数年的停用期，在停用期后重新开始连续治疗。

[0073] 在某些实施方案中，根据本文所述的剂量或给药方案，将3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物与第二活性剂联合施用(例如，同时或先后)。在具体实施方案中，根据本文所述的剂量或给药方案将3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物与氨基糖苷、皮质类固醇、胰腺酶、抗生素、胰岛素、降血糖剂、ω-3脂肪酸、化疗剂或酶替代疗法联合施用。第二活性剂的施用可以是局部施用、肠内施用(例如，口服、十二指肠、直肠)、肠胃外施用(例如，静脉内、动脉内、肌肉内、皮下、皮内或腹膜内)或鞘内施用。在某些实施方案中，根据本文所述的剂量或给药方案，将3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物与放射疗法联合施用。

[0074] 可以理解向有此需要的患者施用的活性剂的量是根据或可以根据所涉及患者的实际体重或所涉及患者群(例如，白人男性、白人女性、非裔美国男性、非裔美国女性、亚裔男性或亚裔女性，包括成年人和儿童)的平均体重计算。

[0075] 4.5血浆浓度

[0076] 在一实施方案中，本发明涉及在至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或者更长的时间内将3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物在患者体内的血浆浓度维持在大于：约0.1μg/mL、约
0.5μg/mL、约2μg/mL、约5μg/mL、约10μg/mL、约20μg/mL、约25μg/mL、约40μg/mL、约50μg/mL、约100μg/mL、约150μg/mL、约200μg/mL、约250μg/mL或约500μg/mL的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，该施用为口服。血浆中的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的水平可通过例如高效液相色谱(HPLC)进行测定。

[0077] 在另一实施方案中，本发明涉及在至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长的时间内将3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物在患者体内的血浆浓度维持在约0.1μg/mL至约500μg/mL或约2μg/mL至约10μg/mL的方法，所述方法包括向有此需要的患者每天一次、两次或三次以相同或递增的剂量(例如，本文所述的1X、1X、2X)施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在具体实施方案中，该施用为口服。

[0078] 在具体实施方案中，通过向有此需要的患者每天一次、两次或三次施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，在至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长的时间内将该活性剂在患者体内的血浆浓度维持在约2μg/mL以上。在另一实施方案中，通过向有此需要的患者每天一次、两次或三次施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，在至少约2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长的时间内将该活性剂在患者体内的血浆浓度维持在约2μg/mL至约10μg/mL之间。在具体实施方案中，通过向有此需要的患者每天一次、两次或三次施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，在至少约2、2.5、3、3.5、
4、4.5、5、6、8、12或24小时或更长的时间内将该活性剂在患者体内的血浆浓度维持在约
10μg/mL以上。在具体实施方案中，该施用为口服。

[0079] 在具体实施方案中，本文提供了在患者体内使3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的Cmax达到1μg/mL至1000μg/mL、1μg/mL至750μg/mL、1μg/mL至500μg/mL、1μg/mL至400μg/mL、1μg/mL至300μg/mL、1μg/mL至250μg/mL、1μg/mL至200μg/mL、1μg/mL至150μg/mL、1μg/mL至100μg/mL、1μg/mL至50μg/mL、1μg/mL至40μg/mL、1μg/mL至30μg/mL、1μg/mL至20μg/mL、1μg/mL至10μg/mL或10μg/mL至30μg/mL的方法，所述方法包括向有此需要的患者每天一次、两次或三次施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0080] 在具体实施方案中，本文提供了在患者体内使3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的AUC0-24达到50μg·小时/mL至1000μg·小时/mL、50μg·小时/mL至750μg·小时/mL、50μg·小时/mL至500μg·小时/mL、50μg·小时/mL至400μg·小时/mL、50μg·小时/mL至300μg·小时/mL、50μg·小时/mL至250μg·小时/mL、50μg·小时/mL至200μg·小时/mL、50μg·小时/mL至150μg·小时/mL或50μg·小时/mL至100μg·小时/mL的方法，所述方法包
括向有此需要的患者每天一次、两次或三次施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。

[0081] 在另一实施方案中，本发明涉及向有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，该方法提供了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的体内血浆分布，其自然对数转换率的90%置信区间(CI)在至少一种如下生物利用度参数的80%至125%、90%至115%或95%至110%范围内：

[0082] (a)在施用的第1天，平均AUC0-24为87μg·小时/mL，或在施用的第28天，平均AUC0-24为91μg·小时/mL；

[0083] (b)在施用的第1天，平均Cmax为10μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmax为11μg/mL；以及

[0084] (c)在施用的第1天，平均Cmin为0.5μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmin为0.6μg/mL。

[0085] 在另一实施方案中，本发明涉及向有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，该方法提供了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的体内血浆分布，其自然对数转换率的90%置信区间(CI)在至少一种如下生物利用度参数的80%至125%、90%至115%或95%至110%范围内：

[0086] (a)在施用的第1天，平均AUC0-24为291μg·小时/mL，或在施用的第28天，平均AUC0-24为235μg·小时/mL；

[0087] (b)在施用的第1天，平均Cmax为27μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmax为22μg/mL；以及

[0088] (c)在施用的第1天，平均Cmin为3.8μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmin为3.4μg/mL。

[0089] 在另一实施方案中，本发明向有此需要的患者涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的方法，该方法提供了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的体内血浆分布，其自然对数转换率的90%置信区间(CI)在至少一种如下生物利用度参数的80%至125%、90%至115%或95%至110%范围内：

[0090] (a)在施用的第1天，平均AUC0-24为866μg·小时/mL，或在施用的第28天，平均AUC0-24为490μg·小时/mL；

[0091] (b)在施用的第1天，平均Cmax为76μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmax为46μg/mL；以及

[0092] (c)在施用的第1天，平均Cmin为9.6μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmin为6.7μg/mL。

[0093] 4.6患者群

[0094] 可使用本发明的方法和组合物的具体患者群包括患有或易患有(例如，由于环境或遗传因素)与无义突变相关的疾病(例如本文所述的疾病)的成人和儿童。

[0095] 在一实施方案中，已经通过预筛选确定该患者或该患者的亲属具有无义突变(即，UAA、UGA或UAG)。

[0096] 4.7药物组合物和单位剂型

[0097] 本发明还包括了包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的药物组合物和单一单位剂型。本发明的单个剂型可适于口服、粘膜(包括舌下、口腔、直肠、鼻部、或阴道)或肠胃外(包括皮下、肌肉内、弹丸注射、动脉内或静脉内)施用。优选的药物组合物和单一单位剂型适于口服施用。

[0098] 在一实施方案中，该药物组合物为固体口服剂型。在一实施方案中，该药物组合物为液体口服剂型。在具体实施方案中，本发明提供了剂量，单位剂型和药物组合物，其中3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物为口服生物可利用的。口服施用的优势可包括便于施用、对给药方案更高的患者适应性、临床功效、并发症更少、住院期更短以及总体的成本节省。

[0099] 在另一实施方案中，本发明涉及包含约35mg至约1400mg、约125mg至约1000mg、约250mg至约1000mg、或约500mg至约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂型。在一实施方案中，该单位剂型在瓶中包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，以及适于悬浮于药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)中的一种或多种载体或赋形剂。

[0100] 在另一实施方案中，本发明涉及包含35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg 或 1400mg 的
3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂型。优选的单位剂型包含约125mg、约250mg或约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一实施方案中，单位剂型在瓶中包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，以及适于悬浮于药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)中的一种或多种载体或赋形剂。优选的单位剂型为粉末和袋剂。

[0101] 在一实施方案中，本发明涉及包含250mg、500mg、750mg或约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的固体剂型，在分别以4mg/kg、4mg/kg和8mg/kg的三个日剂量向有此需要的患者施用时，所述剂型提供了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的体内血浆分布，其自然对数转换率的90%置信区间(CI)在至少一种如下生物利用度参数的80%至125%、90%至115%或95%至110%范围内：

[0102] (a)在施用的第1天，平均AUC0-24为87μg·小时/mL，或在施用的第28天，平均AUC0-24为91μg·小时/mL；

[0103] (b)在施用的第1天，平均Cmax为10μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmax为11μg/mL；以及

[0104] (c)在施用的第1天，平均Cmin为0.5μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmin为0.6μg/mL。

[0105] 在一实施方案中，本发明涉及包含250mg、500mg、750mg或约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的固体剂型，在分别以10mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的三个日剂量向有此需要的患者施用时，所述剂型提供了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的体内血浆分布，其自然对数转换率的90%置信区间(CI)在至少一种如下生物利用度参数的80%至125%、90%至115%或95%至110%范围内：

[0106] (a)在施用的第1天，平均AUC0-24为291μg·小时/mL，或在施用的第28天，平均AUC0-24为235μg·小时/mL；

[0107] (b)在施用的第1天，平均Cmax为27μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmax为22μg/mL；以及

[0108] (c)在施用的第1天，平均Cmin为3.8μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmin为3.4μg/mL。

[0109] 在一实施方案中，本发明涉及包含250mg、500mg、750mg或约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的固体剂型，在分别以20mg/kg、20mg/kg和40mg/kg的三个日剂量向有此需要的患者施用时，所述剂型提供了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的体内血浆分布，其自然对数转换率的90%置信区间(CI)在至少一种如下生物利用度参数的80%至125%、90%至115%或95%至110%范围内：

[0110] (a)在施用的第1天，平均AUC0-24为866μg·小时/mL，或在施用的第28天，平均AUC0-24为490μg·小时/mL；

[0111] (b)在施用的第1天，平均Cmax为76μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmax为46μg/mL；以及

[0112] (c)在施用的第1天，平均Cmin为9.6μg/mL，或在施用的第28天，平均Cmin为6.7μg/mL。

[0113] 尽管本文所述的单位剂型被建议贮存于约2℃至约8℃，但该单位剂型可在重配前在室温下贮存48小时。在一实施方案中，可通过直接向包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的瓶中添加约10mL的水形成浓度约为25mg/mL的总悬浮液，对250mg3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂型进行重配。对于1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的单位剂型，直接向含有3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的瓶中添加约20mL的水形成浓度约为50mg/mL的总悬浮液。在加入水后，立即盖上瓶盖，并用手轻摇至少30秒以实现均匀悬浮。尽管该重配的悬浮液可在摄入前于最初的塑料瓶中保存达24小时，但建议在重配后的短时间内摄入该药物。如果在重配和给药之间有超过大约15分钟的延迟，则建议用手轻摇该瓶至少30秒。建议由瓶中直接施用该悬浮液。如果要施用整个单位剂型，进一步建议用水洗涤该瓶一次，并摄入该洗涤水以确保没有粉末遗留在瓶中。如果要施用单位剂型的一部分量，可使用匙或注射器获得合适的剂量。

[0114] 适于向患者口服施用的本发明的单一单位剂型包括但不限于：袋剂；扁囊剂；片剂；囊片；胶囊，如弹性明胶胶囊；锭剂；糖锭；分散剂；粉末；溶液；液体剂型，包括悬浮液(例如，水性或非水性液体悬浮液)；乳剂(例如，水包油乳剂或油包水液体乳剂)；以及酏剂。在一实施方案中，本发明涉及在饱和浓度以上的具有附加活性剂的胶体溶液或溶液。本发明包含的具体剂型彼此转换的各种方法对本领域的技术人员而言是显而易见的。例如，参见Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing,Easton PA(1990)。

[0115] 本发明进一步包括了包含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的无水药物组合物和剂型。本发明的无水药物组合物和剂型可采用无水或低含水量的成分并在低水汽或低湿度的条件下制备。

[0116] 本发明的典型口服剂型可通过将活性成分与至少一种载体或赋形剂根据传统药物配制技术充分混合进行制备。赋形剂可根据待施用的制剂的形式采取多种形式。例如，适用于口服液体或气雾剂剂型的赋形剂包括但不限于，水、乙二醇、油、醇、增味剂(例如，香草精)、防腐剂以及着色剂。适用于固体口服剂型(例如，粉末、片剂、袋剂、胶囊和囊片)的赋形剂的例子包括但不限于，淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂以及崩解剂。

[0117] 特别优选的单位剂型为包含有效量的活性剂的粉末剂，其适于在药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)中重配并随后口服施用。在具体实施方案中，该粉末可任选地包含与活性剂组合的一种或多种载体或赋形剂。在另一实施方案中，该粉末可在施用或重配前贮存于密封容器中。在另一实施方案中，该粉末可被装入胶囊中(例如，装入明胶胶囊)。5.实施例

[0118] 以下提供了实施例进行阐述，而非进行限制。

[0119] 5.1实施例1：3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的制备

[0120]

[0121] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的制备方法描述于2006年1月31日公告的美国专利号6,992,096B2和2007年9月9日提交的美国专利申请号11/899,813中，两者的内容均通过引用全文并入本文。下文提供了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的制备方法的代表性例子。

[0122] 向3-氰基苯甲酸(44.14g，300mmol)的DMF(0.6L)溶液添加K2CO3(62.19g，450mmol)，并在室温下搅拌30分钟。在20分钟内向该悬浮液添加碘代甲烷(28mL，
450mmol)，将反应混合物在室温下继续搅拌4小时。将反应混合物注入1.2L冰水，搅拌30分钟，并滤出沉淀物。将白色滤饼溶于甲醇(70mL)中，并在冷水中重新沉淀。以79％的产率获得白色粉末状的目标产物(38g，LC/UV测定纯度为99%)。1H-NMR(CDC13)δ8.85(2H),8.28(IH),8.02(IH),4.17(3H)。

[0123] 向3-氰基苯甲酸甲酯(50g,310mmol)的乙醇(500mL)溶液在室温下添加50%羟胺水溶液(41mL,620mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌1小时，并减压去除溶剂。将油状残留物溶于20/80乙醇/甲苯(50mL×2)，然后再次浓缩。获得98％纯度(LC/UV)的白色粉末状的目标酯(61g，定量产率)。1H-NMR(CDC13)δ9.76(IH)，8.24(IH)，7.82(2H)，7.51(1H)，5.92(2H)，3.82(3H)。

[0124] 在5℃下向3-(N-羟基甲脒基)-苯甲酸甲酯(60g,310mmol)的无水THF(200mL)溶液添加二异丙基乙胺(75mL,434mmol)，然后在20分钟内向该混合物添加2-氟苯甲酰氯(48.1mL,403mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌1小时。滤出沉淀物并减压浓缩滤液。将残留物溶于乙酸乙酯(400mL)，然后用水洗涤(200mL×2)。减压去除溶剂，在含有60％乙酸乙酯的己烷中将目标产物结晶，以得到白色固体状的目标产物(81g,83%产率)。
1H-NMR(CDC13)δ8.18(1H)，8.03(3H)，7.48(2H)，7.18(2H)，5.61(2H)，3.82(3H)。

[0125] 使用Dean-Stark装置将含有44g的3-(N-2-氟苯甲酰甲脒基)-苯甲酸甲酯的甲苯(500mL)在130℃下回流4小时。将反应混合物在5℃下搅拌18小时。滤出白色沉淀物并浓缩滤液，再次在甲苯中结晶。获得99％纯度(1C/UV)的白色固体状的目标噁二唑(38g，92%产率)。1H-NMR(CDC13)δ8.91(1H)，8.38(1H)，8.15(2H)，7.62(2H)，7.35(2H)，3.95(3H)。

[0126] 向3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸甲酯(3.3g，11mmol)的THF(40mL)溶液中添加1.5M NaOH水溶液(10mL，14mmol)。将反应混合物在100℃下回流2小时。去除有机溶剂，并用水(50mL)稀释该水溶液。然后用HCl水溶液酸化。滤出白色沉淀物，用冷水洗涤白色滤饼，然后用冻干机干燥。获得98％纯度(LC/UV)的白色粉末状的目1
标酸(3.0g，96%产率)。熔点242℃;IR 3000(芳香族C-H),1710(C=O);H-NMR(D6-DMSO)
13
δ8.31(1H),8.18(2H),8.08(1H),7.88(2H),7.51(2H); C-NMR(D6-DMSO)δ172.71,167.38,166.48,161.25,135.80,132.24,131.79,131.79,131.08,130.91,129.81,127.76,125.48
19
,117.38,111.70; F-NMR(D6-DMSO)δ109.7。

[0127] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的药学可接受的盐可通过本领域技术人员已知的方法进行制备。可如下制备钠盐。向3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸甲酯(33g，111mmol)的THF(400mL)溶液中添加1.5M NaOH水溶液(100mL，144mmol)。将反应混合物在100℃下回流2小时。减压去除有机溶剂，并在5℃下搅拌该水溶液2小时。滤出白色沉淀物并浓缩滤液，再次在水中沉淀。用冷水洗涤白色滤饼，然后用冻干机干燥。获得98.6％纯度(LC/UV)的白色粉末状的目标盐(33g，96%产率)。

[0128] 5.2实施例2：无义突变介导的囊性纤维化的口服治疗

[0129] 本实施例提供了可用于治疗无义突变介导的囊性纤维化的示例性给药方案。

[0130] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物作为香草味的粉末提供以进行悬浮。该药物在现行良好生产规范(cGMP)条件下生产。该制剂可包括粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、以及各种在生产过程中提供辅助的少量赋形剂。混合物可被包装于40mL塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，该瓶以铝箔封口和白色塑料的、对儿童安全的盖子进行密封。每个瓶子可包含125、250或1000mg的药物物质，其为总制剂重量的25.0％。或者，混合物可以以如实施例6所述的袋剂剂型提供。赋形剂(及其相对总剂型重量的比例)包括悬浮剂( Ultra[精制聚葡糖]-25.7%)、可掩味的粘合剂(甘露醇-25.0%)、表面活性剂(聚乙二醇3350-12.8%和 micro
F127[泊洛沙姆407粉]-3.7%)、崩解剂(交聚维酮-5.0%)、以及其它赋形剂，每种赋形剂可以少于2％的量存在(羟乙基纤维素、香草风味剂、硬脂酸镁[非牛]、以及硅胶)。瓶标签上注明药物物质的名称、批次号、药物物质的量、以及储藏条件(例如，室温或5℃至8℃冷藏)。

[0131] 药物物质的剂量是基于每公斤患者体重的药物毫克数。药物物质的剂量可大概与现有瓶子的大小相一致。给药方案确保总的实际给用剂量绝不会比目标剂量低<50mg或高>250mg(即，始终在指定剂量水平的5mg/kg之内)。例如，以4mg/kg剂量进行治疗的体重为40kg的患者将具有160mg的计算剂量。该患者将接受一个250mg瓶(总计250mg)或6.25mg/kg/剂。该相同患者在晚上以8mg/kg的剂量治疗时，将具有320mg的计算剂量，并将接受两个250mg瓶(总计500mg)或12.5mg/kg的剂量。以10mg/kg剂量进行治疗的该相同患者将具有400mg的计算剂量，并将接受两个250mg瓶(总计500mg)或12.5mg/kg的剂量。该相同患者在晚上以20mg/kg的剂量治疗时，将具有800mg的计算剂量，并将接受一个1000mg瓶(总计1000mg)或25mg/kg的剂量。

[0132] 该药物产品的重配和给药均在室温下进行。在重配前无需对药物产品进行特别的加温。药物产品可以用任何药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)进行重配。对于提供的每个250mg瓶，加入～10mL的水或其它药学可接受的溶剂以在总悬浮液中达到约25mg/mL的浓度。对于提供的每个1000mg瓶，加入～20mL的水或其它药学可接受的溶剂以在总悬浮液中达到约50mg/mL的浓度。在向干燥研究药剂中加入水或其它药学可接受的溶剂后，立即盖上瓶盖并用手剧烈振荡约60秒，以形成均匀的悬浮液。尽管该悬浮液可在摄入前于最初的塑料瓶中保存达24小时，但建议在重配后的短时间内摄入该药物。如果在重配和给药之间有超过15分钟的延迟，则应用手剧烈振荡该瓶约60秒。

[0133] 可对患有或易患有囊性纤维化的患者以需要的时间长度持续施用治疗。表1列出了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的示例性每日给药方案，其中以6-、6-和12-小时(例如，～7:00AM、～1:00PM和～7:00PM)的间隔随食物进行三次施用。在具体实施方案中，如表1所示对患者连续14天施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，随后为14天的无治疗期，再继以另外14天的施用，随后为另一个14天的无治疗期。在另一具体实施方案中，如表1所示对患者连续14天以4mg/kg、4mg/kg和8mg/kg的三个日剂量施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物，随后为14天的无治疗期，随后以10mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的三个日剂量进行另外14天的施用，随后为另一个14天的无治疗期。在具体实施方案中，每天进行如表1所示的单个每日给药方案。在其它实施方案中，可在不同日进行表1所示的不同给药方案。

[0134] 表1.给药方案

[0135]

[0136] 缩写：TID＝每日三次

[0137] 优选患者在进餐后30分钟内摄入药物；理想地，药物以约6-、6-和12-小时的间隔(例如，早餐后～7:00AM、午餐后～1:00PM以及晚餐后～7:00PM)摄入。患者通过如下方式摄入药物：将所需量的水或其它药学可接受的溶剂装入每个瓶中，盖上瓶盖并将每个瓶摇晃约60秒，然后摄入每个剂量所需数量和大小的瓶子中的内含物。一次摄入完整剂量的重配药物。摄入后，以水或其它药学可接受的溶剂将给药瓶加至半满，加盖并振荡，然后由患者摄入该瓶中的这些水或其它药学可接受的溶剂。该洗涤步骤进行一次。在某些实施方案中，药物作为袋剂提供。在这些实施方案中，称取或量取合适量的药物，并在施用前与适当的药学可接受的溶剂混合。

[0138] 5.3实施例3：无义突变介导的杜兴氏肌营养不良症的口服治疗

[0139] 本实施例提供了可用于治疗无义突变介导的杜兴氏肌营养不良症的示例性给药方案。

[0140] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物作为香草风味的粉末提供以进行悬浮。药物在现行良好生产规范(cGMP)条件下生产。制剂可包括粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、以及各种在生产过程中提供辅助的少量赋形剂。混合物可被包装于40mL塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，该瓶以铝箔封口和白色塑料的、对儿童安全的盖子进行密封。每个瓶中可包含125、250或1000mg的药物物质，其为总制剂重量的25.0％。或者，混合物可作为如实施例6所述的袋剂剂型提供。赋形剂(及其相对总剂型重量的比例)包括悬浮剂( Ultra[精制聚葡糖]-25.7%)、可掩味的粘合剂(甘露醇-25.0%)、表面活性剂(聚乙二醇3350-12.8%和 micro
F127[泊洛沙姆407粉]-3.7%)、崩解剂(交聚维酮-5.0%)、以及其它赋形剂，每种赋形剂可以少于2％的量存在(羟乙基纤维素、香草风味剂、硬脂酸镁[非牛]、以及硅胶)。瓶标签上注明药物物质的名称、批次号、药物物质的量、以及储藏条件(例如，室温或5℃至8℃冷藏)。

[0141] 药物的剂量是基于每公斤患者体重的药物毫克数。应当计算将向患者施用的药物总毫克数相对应的总体积。例如，如果30kg的患者需要4mg/kg，则待递送的剂量为30×4=120mg。应使用250mg剂量瓶对该患者进行给药。由于在250mg剂量瓶中的每mL悬浮液包含250/10=25mg的药物，因此该患者对于每个4mg/kg剂量应取用120/25=～5mL的悬浮液。同一患者在晚上以8mg/kg剂量治疗时，其计算剂量将为240mg，并将接受一个250mg瓶(10mL悬浮液)。应使用塑料口服给药注射器从药物瓶中取出对应于各剂量的这些体积的悬浮液。在转移<10mL(对于250mg瓶)或<20mL(对于1000mg瓶)的部分体积时，应当从研究药物瓶中取出所需量至适当类型和大小的给药注射器内(例如，Baxa、Exacta-Med、校准的无乳胶的塑料口服给药注射器)并使用同一注射器给药。在重配后的同一24小时内，可从相同瓶的悬浮液取出>1剂量；但是，不应为了向同一患者多次给药而使用相同物质的意图而将重配药物储存超过24小时。如果在1天内需要摄取的药物总量超过10mL(对于250mg瓶)或20mL(对于1000mg瓶)重配药物，则应为每次给药使用新的一瓶药物。

[0142] 在室温下进行药物产品的重配和给药。在重配前无需对药物产品进行特别的加温。该药物可以任何药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)进行重配。对于每个250mg瓶，加入～10mL的水或其它药学可接受的溶剂以在总悬浮液中形成约25mg/mL的浓度。对于每个1000mg瓶，加入～20mL的水或其它药学可接受的溶剂以在总悬浮液中形成约50mg/mL的浓度。当水或其它药学可接受的溶剂被加入干燥研究药剂后，立即盖上该瓶并用手剧烈振荡约60秒，以形成均匀的悬浮液。尽管该悬浮液可在摄取前于最初的塑料瓶中保存达24小时，建议在重配后的短时间内摄取该药物。如果在重配和给药之间有超过15分钟的延迟，则应用手再次剧烈振荡该瓶约60秒。

[0143] 对患有或易患有杜兴氏肌营养不良症的患者以需要的时间长度持续施用治疗。表2列出了3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的示例性每日给药方案，其中每天以6-、6-和12-小时的间隔(例如，～
7:00AM、～1:00PM和～7:00PM)随食物进行三次施用。在具体实施方案中，连续28天以表
2列出的给药方案之一向患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。在某些实施方案中，每天采用表2所列举的单个每日给药方案。在其它实施方案中，可在不同日采用表2列举的不同给药方案。在某些实施方案中，药物作为袋剂提供。在这些实施方案中，称取或量取合适量的药物，并在施用前与适当的药学可接受的溶剂混合。

[0144] 表2.给药方案

[0145]

[0146] 缩写：TID＝每日三次

[0147] 患者在进餐后30分钟内摄入药物；理想地，药物将以约6-、6-和12-小时的间隔(例如，早餐后～7:00AM、午餐后～1:00PM以及晚餐后～7:00PM)摄取。患者通过如下方式摄入药物：将所需量的水或其它药学可接受的溶剂装入每个瓶中，加盖并将每个瓶子振荡约60秒，使用口服给药注射器从瓶中取出适当体积量并直接从给药注射器中摄入内含物。一次应当摄入对应该剂量的重配药物的整个计算体积。在药物摄入后，应当将与剂量体积相同体积的水或其它药学可接受的溶剂注入该给药注射器，并应由患者摄入。该洗涤步骤应进行一次。

[0148] 可通过测量足部肌肉趾短伸肌(EDB)活检中抗肌萎缩蛋白水平从基线测量值的变化来确定治疗的功效。

[0149] 5.4实施例4：3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的无味制剂的制备

[0150] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物作为粉末提供以进行悬浮。药物在现行良好生产规范(cGMP)条件下生产。药物可与粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、以及各种在生产过程中提供辅助的少量赋形剂充分混合。混合物被包装于40mL塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，该瓶以铝箔封口和白色塑料的、对儿童安全的盖子进行密封。每个瓶子包含约35mg、约70mg、约125mg、约140mg、约175mg、约250mg、约280mg、约350mg、约560mg、约700mg、约1000mg或约1400mg的
3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。赋形剂(及其相对总剂型重量的比例)任选地包括悬浮剂( Ultra[精制
聚葡糖]-25.7%)、可掩味的粘合剂(甘露醇-25.0%)、表面活性剂(聚乙二醇3350-12.8%和micro F127[泊洛沙姆407粉]-3.7%)、崩解剂(交聚维酮-5.0%)、以及其它赋形
剂，每种赋形剂可以少于2％的量存在(cab-o-sil、羟乙基纤维素、硬脂酸镁[非牛]、以及硅胶)。瓶标签上注明药物物质的名称、批次号、药物物质的量、以及储藏条件(例如，室温或5℃至8℃冷藏)。在施用前，该药物产品可在适当体积的药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)中重配。

[0151] 5.5实施例5：3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的风味制剂的制备

[0152] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物可作为香草风味(例如，通过添加香草精)的粉末提供以进行悬浮。药物在现行良好生产规范(cGMP)条件下生产。药物可与粘合剂和悬浮剂、表面活性剂、以及各种在生产过程中提供辅助的少量赋形剂充分混合。混合物被包装于40mL塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，该瓶以铝箔封口和白色塑料的、对儿童安全的盖子进行密封。每个瓶子包含约35mg、约70mg、约125mg、约140mg、约175mg、约250mg、约280mg、约350mg、约560mg、约700mg、约1000mg或约1400mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。赋形剂(及其相对总剂型重量的比例)任选地包括悬浮剂( Ultra[精制聚葡糖]-25.7%)、可掩味的粘合剂(甘露醇-25.0%)、表
面活性剂(聚乙二醇3350-12.8%和 microF127[泊洛沙姆407粉]-3.7%)、崩解
剂(交聚维酮-5.0%)、以及其它赋形剂，每种赋形剂可以少于2％的量存在(cab-o-sil、羟乙基纤维素、香草风味剂、硬脂酸镁[非牛]、以及硅胶)。瓶标签上注明药物物质的名称、批次号、药物物质的量、以及储藏条件(例如，室温或5℃至8℃冷藏)。在施用前，该药物产品可在适当体积的药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)中重配。该药物产品可在重配前在室温下贮存长达48小时。

[0153] 若干参考文献已被引用，各文献的全部内容通过引用完整并入本文。

[0154] 5.6实施例6：3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物的袋剂剂型

[0155] 使用小包或小袋包装该混合物，该小包或小袋由多重叠层组成，该叠层可包括纸层、铝箔层和沙林(surlyn)层。每个小袋可包含125mg、约250mg、约500mg或约1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物。赋形剂(及其相对总剂型重量的比例)任选地包括以下表3和表4所列之一。

[0156] 表3.配方

[0157]

[0158]

[0159] 表4.配方

[0160]

[0161] 然后在小袋上添加标签以注明药物物质的名称、批次号、药物物质的量、以及储藏条件(例如，2℃至8℃冷藏)。在施用前，适当数量的药物产品可在适当体积的药学可接受的溶剂(例如，水、牛奶、碳酸饮料、果汁、苹果酱、婴儿食品或婴儿配方)中重配。该药物产品可在重配前在室温下贮存长达48小时。

[0162] 5.7实施例7：跨上皮电位差(TEPD)测定

[0163] 跨上皮电位差(TEPD)(也称为鼻部电位差)的测量通过评估跨上皮生物电性质提供了对分泌上皮细胞中直接的钠和氯运输的灵敏评价(Knowles等人,1981,N.Engl.J.Med.305(25):1489-95;Knowles等人,1995,Hum.Gene Ther.6:445)。TEPD可通过标准化技术在每个鼻孔中进行(Standaert等人,2004,PedPulm.57:385-92)。在该方法中，采用小塑料导管来评估跨越鼻孔中鼻粘膜细胞的外部细胞膜的电性差异。TEPD值以毫伏或mV表示。电负性等于或低于-5.0mV的氯电导通常认为在正常范围内。TEPD评估在沿下鼻甲排列的鼻上皮细胞上进行，因为这些细胞比沿下气道排列的呼吸道上皮细胞更容易接近，且已显示具有相同的离子运输特征(Knowles等人,1981,Am.Rev.Respir.Dis.124(4):484-90)。TEPD评估还可在直肠上皮细胞和下呼吸道上皮细胞上进行。由于CFTR蛋白在跨细胞膜运输氯离子中的作用，且由于该种蛋白的缺失，囊性纤维化患者具有异常的TEPD氯电导。作为终点，TEPD的优势在于它可以检测氯的运输变化，该变化是对CFTR在气道细胞中的存在、功能活性和顶端位置的量化整合。此外，这是对CFTR活性的直接测量，该测量不太可能受到CF支持或姑息治疗的影响(全身施用氨基糖苷抗生素可能是例外)。重要的是，TEPD值可与肺功能障碍和放射学异常的程度相关联(Ho等人,1997,Eur.Respir.J.10(9):2018-22;Fajac等人,1998,Eur.Respir.J.12(6):1295-300;Sermet-Gaude1us 等 人 ,2005,Am.J.Respit.Crit.Care Med.171(9):1026-1031)。特别地，对异丙肾上腺素诱导的CFTR氯活性的TEPD评估在确定FEV1和放射性评分上已显示出比基因型更好的预测值(Ho等人,1997,Eur Respir J.10(9):2018-22)。在基线条件下，TEPD评估的氯离子通道活性极不可能在患有CF的患者中自发归一化；TEPD评估的氯离子通道活性中的任何观察到的改善被预期为特别地表示CFTR纠正疗法的药理活性。因此，它已经成为以纠正CFTR功能障碍为目的的1-2期药理和基因替代研究的基本终点(Peckham等人,1995,AJ.Clin Sci(London).89(3):277-84;Wilschanski等人,2003,N.Engl.J.Med.349(1):1433-41)。

[0164] 5.8实施例8：CFTR免疫荧光

[0165] 可通过标准化技术从患者的各个鼻孔采集和处理鼻粘膜刮取物，从而通过免疫荧光和CFTR mRNA的定量来测量CFTR蛋白(Clancy等人,2001,Am.J.Respir.Crit.Care Med.163(7):1683-92;Amaral等人,2004,J.Cyst.Fibros.3Suppl2:17-23)。正常上皮细胞(例如，来自于鼻粘膜刮取物)的免疫荧光染色显示大多数CFTR蛋白存在于顶端表面。在无义突变介导的CF的动物模型或在患有无义突变介导的CF的患者中，CFTR染色缺失(例如，在对提前终止突变纯合的患者中)或主要在核周区域观察到染色(例如，在具有阻止正常CFTR胞内运输的ΔF508突变的患者中)。根据免疫荧光评估，在动物模型和患者中的功能野生型或非野生型CFTR蛋白的成功生成与顶端表皮CFTR蛋白的重新出现相关联(Clancy等人,2001,Am.J.Respir.Crit.Care Med.163(7):1683-92;Wilschanski等人,2003,N.Engl.J.Med.349(15):1433-41)。

[0166] 5.9实施例9：肺功能测试

[0167] 肺功能测试(包括FEV1、FVC和MEF25-75)以标准的肺活量测定法进行测量。对肺功能(包括MEF25-75、FVC、以及特别是FEV1)的评估已被认为是患有CF的患者的确定的临床终点(Food and Drug Administration,62nd Anti-Infective Drugs Advisory Committee.Discussion of NDA for tobramycin solution for inhalation( )for the management of cystic fibrosis patients.1997年11月；Tiddens，2002，Pediatr.Pulmonol.34(3):228-31)。FEV1和其它肺功能测试测量值已被证明与疾病严重性相关，从医疗保健的利用和IV抗生素的使用情况预测疾病发病率，并表明与CF有关的死亡率的风险(Food and Drug Administration,62nd Anti-Infective Drugs Advisory Committee.Discussion of NDA for tobramycin solution for inhalation( )for themanagement of cystic fibrosis patients.1997年11月)。肺功能测试易于实施(即使对于仅7岁大的患者)，并采用了被广泛使用的标准设备和技术。可通过已经建立的考量了患者年龄、身高和性别的规范性方程进行解释。FEV1的改善被认为定量显示了CF中有意义的临床益处，并被作为阿法链道酶和吸入妥布霉素的管理审批的基础(Food and Drug Administration,62nd Anti-Infective Drugs Advisory Committee.Discussion of NDA for tobramycin solution for inhalation( )for the management of cystic
fibrosis patients.1997年11月)。

[0168] 5.10实施例10：以3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸作为无义介导的囊性纤维化的口服治疗的2期研究

[0169] 患者必须满足以下所有条件，方可有资格被招募进入本研究：

[0170] 1.根据结论性异常出汗实验的记录证据诊断为CF(通过毛果芸香碱离子导入法得到汗水氯化物>60mEq/升(LeGrys,Sweat testing:Sample collection and quantitative analysis:Approved guidelines- 第 二 版 National Committee for Clinical Laboratory Standards2000;Vol20:14))；

[0171] 2.通过TEPD测得异常氯分泌(在使用无氯阿米洛利和异丙基肾上腺素的氯分泌TEPD评估中具有比-5mV更电正性)；

[0172] 3.在cftr基因的等位基因之一存在无义突变；

[0173] 4.有已进行cftr基因测序的记录；

[0174] 5.年龄≥18岁；

[0175] 6.体重≥40kg；

[0176] 7.FEV1≥ 根 据年 龄、性别 和 身高 的 预测 值 的40％ (Knudson标准 )(Knudson,1983,Am.Rev.Respir.Dis.127:725-734)；

[0177] 8.血氧饱和度(通过脉搏血氧测定法测定)≥室内空气92％；

[0178] 9.在研究药物施用和随访期中，男性和女性患者(如未经手术绝育)愿意放弃性交或者采用避孕屏障或医疗避孕方法；

[0179] 10.怀孕测试为阴性(对于具有生育可能的女性)；

[0180] 11.愿意并有能力遵守定期访问、药品施用计划、研究步骤(包括TEPD测量、临床实验室试验以及PK取样)、以及研究限制；

[0181] 12.能够提供书面知情同意书；以及

[0182] 13.亲自签署并注明日期的知情同意的文件证据，表明患者已被告知该试验的所有相关方面。

[0183] 出现下列任一情况时不得将患者招募进入本研究：

[0184] 1.根据研究者的观点，可能对患者安全产生不利影响、可能使治疗期或随访期不能完成或可能影响研究结果的评估的以前或持续的医学病症(例如，伴发病、精神病症、酒精中毒、药物滥用)、病史、身体检查结果、ECG检查结果或化验异常；

[0185] 2.在研究治疗开始前的两周内持续的急性疾病，包括急性上或下呼吸道感染；

[0186] 3.在研究治疗开始前的2个月内的肺病主要并发症的病史(包括近期大量咯血或气胸)；

[0187] 4.胸部X-光筛选异常，显示除CF以外的临床显著活跃的肺病，或者新的显著异常例如肺不张或胸腔积液，其可能表示CF后继发的临床显著活跃的肺病；

[0188] 5.乙肝表面抗原、丙肝抗体检测阳性，或人类免疫缺陷病毒(HIV)检验阳性；

[0189] 6.血色素<10g/dL；

[0190] 7.血清白蛋白<2.5g/dL；

[0191] 8.肝功能异常(血清总胆红素>正常的上限，或血清ALT、AST或GGT>正常上限的2.0倍)；

[0192] 9.肾功能异常(血清肌氨酸酐>正常上限的1.5倍)；

[0193] 10.怀孕或哺乳；

[0194] 11.固体器官或血液移植史；

[0195] 12.在研究治疗开始前的14天内接触另一研究药物；

[0196] 13.正在参与任何其它的治疗性临床试验；

[0197] 14.正在使用噻唑烷二酮过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂，例如，罗格列酮( 或等同物)或吡格列酮( 或等同物)；

[0198] 15.在研究治疗开始前的14天内鼻内药物改变(包括皮质类固醇、色甘酸、异丙托溴铵、苯肾上腺素或羟甲唑啉的使用)；

[0199] 16.在研究治疗开始前的14天内全身性或吸入皮质类固醇的治疗改变；

[0200] 17.在研究治疗开始前的14天内或在研究治疗期间，使用或需要吸入阿米卡星或庆大霉素；或者

[0201] 18.在研究治疗开始前的14天内需要全身性氨基糖甙类抗生素。

[0202] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸以本文所述的剂型提供。参照下文的56日计划向15名患者(12名来自于在以色列进行的2期试验，3名来自在美国进行的2期试验；7名患者为男性，8名为女性；患者的年龄中值为22岁；且所有的患者具有囊肿性纤维化的多种迹象和症状，包括一定程度的肺功能障碍)口服施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸：以4mg/kg、4mg/kg和8mg/kg每天三次(TID)施用
3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸14天，然后是14天的无治疗期(循环
1，由28天组成)，然后以10mg/kg、10mg/kg和20mg/kg每天三次(TID)施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸14天，然后是14天的无治疗期(循环2，由28天组成)。

[0203] 临床终点可通过以上所述步骤进行评估。在治疗前以及循环1和循环2的第14日和第28日进行TEPD检测。在治疗前以及循环1和循环2的第14日和第28日从各名患者的各鼻孔采集鼻粘膜刮取物。在以色列所进行的研究中，在治疗前、循环2的第-1日、循环1的第13或14日以及循环2的第13日或14日进行肺部检测，包括测定FEV1、FVC和MEF25-75；在美国进行的研究中，在治疗前以及循环2的第13或14日测量相同的参数。

[0204] TEPD氯电导的平均变化。这是每个研究参与者在治疗期开始至结束的TEPD氯电导变化的平均值。例如，如果三名参与者中的各参与者的TEPD氯电导的变化分别为-7.0mV、-2.0mV和-9.0mV，则这三个参与者的TEPD氯电导的平均变化为-6.0mV。

[0205] 具有氯电导响应的患者百分比。这是在使用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的治疗结束时显示了TEPD氯电导响应的患者百分比。为了试验的目的，氯电导响应被定义为至少-5mV的TEPD氯电导改善。例如，对于基线TEPD氯电导值为+1.0mV且治疗结束时的TEPD氯电导值为-6.0mV的患者，其TEPD氯电导的改善为-7.0mV，表示具有氯电导响应。

[0206] TEPD氯电导值改善至正常范围内的患者百分比。如上文指出，电负性等于或低于-5.0mV的氯电导通常认为在正常范围内。因此，基线TEPD氯电导值为+1.0mV的患者将被认为具有异常值，因为该值比-5.0mV更具电正性。如果在治疗结束时，该患者的TEPD氯电导值改善为-6.0mV，这将表示该值被改善至正常范围，因为改善后的值比-5.0mV更具电负性。

[0207] 根据患者性别、年龄和身高，在研究开始时的平均FEV1为正常值的66%，而在研究开始时的平均FVC为正常值的80%。本分析中15名患者中的14人具有铜绿假单胞菌(囊性纤维化患者中常见的细菌感染，其能导致严重肺炎)的气道定殖。15名患者中的14人还患有胰腺功能不全并需要慢性胰酶替代疗法。患者具有较低的体重，在研究开始时的平均体重为58.3kg。

[0208] 表5显示了5名患者的TEPD结果。对于每个测量，结果分别显示为鼻孔最佳值和两个鼻孔平均值。过去TEPD测验的结果通常显示为鼻孔最佳值。然而，由囊性纤维化治疗剂开发网络(Cystic Fibrosis Therapeutics Development Network)最近制定的指南推荐同时显示两种TEPD结果。注意到具有不同类型的CFTR基因无义突变的患者中TEPD氯电导的改善。

[0209] 表5

[0210]

[0211] 较低和较高3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸剂量水平下的治疗效果并非统计学显著的，这表明没有必要进一步提升剂量，且表明即使较低剂量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸也能有效改善TEPD氯电导。也观察到对第二终点的统计学显著的结果和正向趋势。特别地，尽管试验未被设计以检测第二终点的统计学显著变化，观察到从研究开始至高剂量治疗循环结束时患者的平均FEV1、FVC和体重的统计显著性提高。表6显示了该结果。对于肺功能的变化，没有包括一名患者，因为该患者在高剂量治疗循环结束时没有测量肺功能。

[0212] 表6

[0213]

[0214] 此外，尽管未通过生活质量问卷正式测量患者症状的变化，但试验研究者被要求询问患者囊性纤维化症状的变化。在中期分析包括的15名患者中，6名报告了健康的总体改善，6名报告了咳嗽的减少，10名报告了粘液厚度的减少和更容易清除粘液。

[0215] 5.11实施例11：通过免疫荧光和Western印迹检测抗肌萎缩蛋白、肌聚糖和肌营养不良蛋白聚糖的表达

[0216] 在治疗前，从局部麻醉和清醒镇静(在某些情况下可能需要全身麻醉)的条件下对一只脚的EDB肌肉和上覆皮肤进行活检，并在治疗的最后一天进行另一只脚的活检。采用标准技术进行活检步骤(Stedman, 2000, Human Gene Therapy 11: 777-90)。在该步骤中(一旦可能的话)去除整个肌腹。在治疗前采集活检样本时，将肌肉样本分为至少3个片段，并将治疗的最后一天将采集的活检样本分为至少2个片段。将活检样本置于用Ringer’s盐溶液润湿的telfa纱布海绵上。在立体解剖显微镜下以低倍数观察活检样本以确定纤维取向。在可能时以锋利的手术刀以横截的方式(与纤维取向垂直)横切肌肉，并放置2分钟以停止痉挛。然后在液氮冷却的异戊烷中冷冻样本，将样本转移至液氮容器，并在液/气界面以上1英寸处保留2分钟，从而在浸入液氮之前缓慢冷却并蒸发异戊烷，并包入预冷却(在液氮中预冷却并储存在干冰上)的箔片内，所述箔片标记了研究编号、位置编号、患者编号、日期、患者姓名首字母以及脚的位置(右脚或左脚)。

[0217] 所有的样本容器均清晰标明个体和采集日期。标记应当以能够防止脱落的方式固定至样本容器上。进行该操作后立即运送样本以供分析/培养/主要检查。为检测抗肌萎缩蛋白，使用3种市售的识别该蛋白C末端、N末端和杆状结构域的抗体。为检测肌聚糖复合物和肌营养不良蛋白聚糖复合物，当可能时，使用市售的针对α-、β-、γ-和δ-肌聚糖以及β-肌营养不良蛋白聚糖的抗体。分析中使用了表面荧光显微术；在对正常肌肉样本进行荧光强度的校正后，用CCD相机捕获图像。将图像数字化储存和留存以供将来回顾以及在研究完成时的最终评估。还可对组织进行处理以使用相同抗体通过Western印迹检测抗肌萎缩蛋白、肌聚糖和β-肌营养不良蛋白聚糖。捕捉并留存显微镜图像以供将来回顾和在研究完成时的最终评估。保留剩余肌肉组织样本以进行DMD中涉及的mRNA和蛋白的确认试验。使用免疫染色和Western印迹进行蛋白检测。

[0218] 肌肉活检通常作为研究过程中诊断的一部分和对疗效的测定在DMD个体上进行。选择EDB是由于它不是日常活动的必需肌肉，因此该肌肉的取样不会对个体产生不利的功能后果。由于其极少被使用，EDB肌肉不太可能显示大量的肌肉纤维更换，因此提供了用于检测抗肌萎缩蛋白生成的合适组织。由于EDB肌肉易于辨别、可在局部麻醉状态下解剖、并提供了足够进行所需分析的足量的组织，EDB肌肉的取样提供了额外的实际优势。免疫荧光和Western印迹是在肌肉活检样本上进行以确认全长抗肌萎缩蛋白存在或缺失的常规测试。抗肌萎缩蛋白的缺失被看作是DMD的确诊。定位在肌肉膜的抗肌萎缩蛋白的恢复被认为是对临床前和临床药效活性的直接测量(Barton-Davis,1999,J.Clin.Invest.104(4):375-81;Politano,2003,Acta Myol.22(1):15-21)。

[0219] 5.12实施例12：上肢和下肢肌力法

[0220] 上下肢肌力法可通过手持式肌力计根据标准方法进行(Beenakker,2001,Disord11(5):441-6；Hyde，2001，Neuromuscul.Disord.11(2):165-10)。(根据个体的基线功能状态)建议评估的肌肉组包括髋外展肌、膝伸肌、肘屈肌和肘伸肌、以及手抓力。可进行双侧评估，可从每侧的每个肌肉组记录三个测量值。这些参数可在治疗前、治疗的倒数第二天、以及治疗后的随访期内进行监测。在治疗前和治疗期间，可在肌肉活检之前进行肌力法。

[0221] 通过手持肌力计进行的肌力法评估是对可走动的和不可走动的个体的肌肉力量的灵敏且可重复的检测(Beenakker,2001,Neuromuscul.Disord.11(5):441-6;Hyde,2001,Neuromuscul.Disord.11(2):165-70)。患有肌营养不良症的个体的评分之间 信 度 较 高(Stuberg,1988,Phys.Ther.198868(6):977-82;Hyde,2001,Neuromuscu1.Disord.11(2):165-70)。与徒手肌力测定相比，肌力法是对肌肉功能更为灵敏且复杂性更低的测量(McDonald,1995,Am.J.Phys.Med.Rehabi1.(5Suppl):S70-92)。该测试可由评估者(例如，医生或物理治疗师)简单地实施。

[0222] 5.13实施例13：计时功能测试

[0223] 计时功能测试包括从仰卧姿势站起所需的时间、行走10米所需的时间、以及爬上4级标准大小的阶梯所需的时间(Mendell,1989,N.Engl.J.Med.320(24):1592-7;Griggs,
1991,Arch.Neurol.48(4):383-8)。这些参数可在治疗前、治疗的倒数第二天，以及治疗后的随访期内进行监测。在治疗前和治疗期间，可在肌肉活检之前进行该计时功能测试。

[0224] 这些测试(仰卧姿势站起所需的时间、行走10米所需的时间、以及爬上4级标准大小的阶梯所需的时间)提供了对可走动个体的功能能力的额外检测。这些测试具有可重现性、较为常用、易于实施，并能记录对类固醇治疗介入的响应(Mendell,1989,N.Engl.J.Med.320(24):1592-7;Griggs,1991,Arch.Neurol.48(4);383-8)。

[0225] 5.14实施例14：血清CK水平

[0226] 血清CK活性采用市售的NADH连接的动力学测定(Diagnostic ChemicalsLtd.,Oxford,CT)进行评估。血清CK水平可在治疗前、治疗期的第1天(第一剂量前)、第
7天、第14天、第21天和第27天，以及治疗后的第42天和第56天进行测量。在杜兴氏肌营养不良症中血清CK上升，因此它是该疾病的简易可测的诊断标记，并可作为该药物药理活性的潜在生物标记(Mendell等人,1989,New Eng.J.Med.320(24):1592-1597)。

[0227] 血清CK提供了对全身肌肉完整性的测量。在患有DMD的个体中该酶在血清中的浓度会上升50至100倍，且对其水平的测量可用于对该疾病的早期诊
断 (Worton,The muscular dystrophies, 于 Scriver CR.Beaudet A.L.，Sly W.S.，Valle D，编The metabolic and molecular basis of inherited disease. 第8版，Vol.4.New York:McGraw-Hill,2001:5493-523中)。测量血清CK水平以监测该疾病的进展，并作为肌肉损伤的标记。尽管练习诱导的变化带来波动性(Politano,2003,Acta.Myol.22(1):15-21)，该标记仍具有一定优势，因为它可通过普遍且可靠的测定法被容易地、反复地和频繁地评估。此前的临床研究已显示血清CK的下降与类固醇治疗中肌肉力量的改善相一致(Reitter,1995,Brain Dev.17Suppl.39-43)。

[0228] 5.15实施例15：真皮纤维原细胞及肌肉细胞培养

[0229] 对来自患者的肌肉组织和皮肤进行研究以确定来自患者的原代肌肉培养中的抗肌萎缩蛋白生成是否与体内的抗肌萎缩蛋白生成相对应。这些实验评估来自患者的真皮纤维原细胞在以Myo-D-生成表达构建体转染后体外分化成为肌肉细胞时(Wang,2001,Development128:4623-33)，是否响应治疗而显示抗肌萎缩蛋白的生成。皮肤细胞应答与临床活性的相关性可为选择未来进行治疗的患者、或为筛选用于治疗DMD的新药剂提供易于获得的预测试验。可如下培养细胞。在运输过程中将活检材料储存于人扩增培养基(或PBS)中，如有需要在冰上放置更长时间。如果该组织不在24小时内制备，则可将该材料冷冻在含有10% DMSO的人扩增培养基中并在液氮(或干冰)中储存。在为建立成肌细胞培养而制备组织时，用PBS洗涤活检材料。向培养皿中添加足以保持组织润湿的PBS。用刀片将活检材料彻底切碎成几乎均质的悬浮液。添加每克组织约2mL胶原酶/分散酶/CaCl2溶液，并继续破碎数分钟(例如，对于5×5×5mm的肌肉活检样本使用1mL的酶溶液)。将悬浮液转移至无菌试管中，并在37℃水浴中孵育，直至该混合物成为细浆(例如，约20至30分钟)。在孵育过程中通过多次上下吹吸使该悬浮液进一步匀浆化。如有需要，可使用注射器上下吹吸进行附加的重悬浮循环。向悬浮液中添加8mL的人扩增培养基并混合。将混合物在1200rpm下离心10分钟。将细胞沉淀重悬浮于3mL人扩增培养基。将细胞涂布于胶原涂覆的6孔平板的一个孔中，或者，根据材料的量，涂布于T25胶原涂覆的瓶中。在37℃和5%CO2下培养细胞48小时。移除未贴壁细胞，并将其转移至另一胶原涂覆的孔中(作为备份)。向第一个孔添加新鲜的扩增培养基(3mL)。将第一孔的细胞培养至汇合，并直至获得两个汇合的T75瓶。为进行储存，将细胞从一个T75瓶中移入4个具有1mL冷冻培养基的低温保存管中冷冻。培养物的肌原性细胞成分可通过结蛋白染色进行检测。如果结蛋白阳性细胞的百分比过低，则需要预涂布该培养物。

[0230] 5.16实施例16：以3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸进行杜兴氏肌营养不良症的口服治疗的2期研究

[0231] 个体必须满足以下所有条件，方可有资格被招募进入本研究：

[0232] 1.基于5期(age5)所呈现的临床表型被诊断为杜兴氏肌营养不良症(DMD)，具有提高的血清CK和肌肉活检样本中抗肌萎缩蛋白缺失(以针对抗肌萎缩蛋白的C末端部分的抗体进行的肌纤维膜染色呈阴性)。

[0233] 2.抗肌萎缩蛋白基因中存在无义突变；

[0234] 3.有已进行过抗肌萎缩蛋白基因测序的记录，或如果未进行该测序，有已送血液样本进行验证性抗肌萎缩蛋白基因测序的记录；

[0235] 4.双足上均有EDB肌肉的物理检查或放射成像证据；

[0236] 5.能够走动；

[0237] 6.男性；

[0238] 7.年龄≥5岁；

[0239] 8.在研究药物施用和随访期中，已知的性活跃的个体愿意放弃性交或者采用避孕屏障或医疗避孕方法；

[0240] 9.愿意并有能力遵守定期访问、药品施用计划、实验室试验、研究限制、以及研究程序(包括肌肉活检、肌力法、以及PK取样)；

[0241] 10.如果年龄≥18岁，能够提供书面知情同意书，或如果年龄≥7岁，能够提供书面知情赞成(经父母亲/监护人同意)。如果该个体年龄<7岁，可仅获取父母/法定监护人的同意；以及

[0242] 11.亲自签署并注明日期的知情同意的文件证据(对于年龄≥7岁的儿童同样需要赞成)，表明该个体/父母/法定监护人已被告知应当遵守的试验的所有相关方面。

[0243] 下列任一情况的出现将使该个体从研究招募中被排除：

[0244] 1.根据研究者的观点，可能对个体安全产生不利影响、可能使治疗期或随访期不能完成或可能影响研究结果的评估的以前或持续的医学病症(例如，伴发病、精神病症、酒精中毒、药物滥用)、病史、身体检查结果、ECG检查结果或化验异常；

[0245] 2.充血性心力衰竭的临床症状和表现(American College of Cardiology/American Heart Association Stage C or Stage D(美国心脏病学院/美国心脏病协会C阶段或D阶段))(Hunt,2001,J.Am.Coll.Cardiol.38:2101-13)。

[0246] 3.乙肝表面抗原、丙肝抗体检测、或人类免疫缺陷病毒(HIV)检验阳性；

[0247] 4.血色素<10g/dL；

[0248] 5.血清白蛋白<2.5g/dL；

[0249] 6.GST或总胆红素异常(>正常的实验室上限)；

[0250] 7.肾功能异常(血清肌氨酸酐>正常的实验室上限的1.5倍)；

[0251] 8.固体器官或血液移植史；

[0252] 9.正在进行的免疫抑制疗法(非皮质类固醇类)；

[0253] 10.在研究治疗开始前的28天内接触另一考察药物；

[0254] 11.正在参与任何其它的治疗性临床试验；

[0255] 12.正在使用噻唑烷二酮过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂，例如，罗格列酮( 或等同物)或吡格列酮( 或等同物)；

[0256] 13.在研究治疗开始前的3个月内全身性皮质类固醇疗法改变(例如，治疗的启动；治疗的中止；类固醇的剂量、方案或类型的改变)；或者

[0257] 14.在研究治疗开始前的3个月内用全身性氨基糖甙类抗生素治疗。

[0258] 3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸以本文所述的剂型提供。对每个治疗组施用治疗28天。对患者的初始群组(n=6)每日三次以4-、4-和8-mg/kg的
3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸治疗28天。在考察临床安全性
结果后，对患者的第二群组(n=20)每日三次以10-、10-和20-mg/kg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸治疗28天。这样，每位患者接受了总计84剂的
3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。

[0259] 在第28天，相对于基线，两种剂量水平下的部分患者均显示了趾短伸肌膜抗肌萎缩蛋白的蛋白C末端结构域染色的部分恢复和提高。从该研究获得的平均药代动力学参数列于下文表7中，并显示在图1中。

[0260] 表7

[0261]

[0262] a由之前的1期多剂量研究结果得到的基于房室模型的预测值。

[0263] b患者002-010由于数据不足而从分析中排除。

[0264] 缩写：AUC=浓度-时间曲线下的面积；Cmax=最大浓度；Cmin=最小浓度。

[0265] 每次访问的第二天在给药前即刻和施用该研究药物的第一日剂量后3小时采集血液获取3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸浓度。

[0266] 记录研究药物的给药和采样时间。如果使用肝素化静脉导管进行样本采集以避免重复针刺，则在每次采样前移除并丢弃至少2mL的血液以避免样本的肝素污染。尽可能在预定时间或±5分钟的范围内采集血液样本。抽取血液的时间与研究药物的给药时间相关联。

[0267] 每个样本包含2mL的静脉血，抽取进5-mL 或等同的管中，以K3-EDTA作为抗凝血剂。在采集后立即将管子轻柔倒置8至10次，以将该抗凝血剂和血液样本相混合。在离心前将管子竖直立在冰中；在样本采集1小时内进行离心和样本处理。
将采样管放入冷冻离心机(4至8℃)的水平转子(具有摆动头(swing-out head))中以
1500至1800的相对离心力(RCF)离心至少15分钟以分离血浆组分。通过吸液管取出血浆组分，并分入2个聚丙烯冷冻管中(每个管得到大概相同的等分)。所有的样本采集和冷冻管均清晰标明个体、研究期间以及采集日期和时间。将标签固定在冷冻管上的方式应能防止标签在冷冻后脱落。处理后，将样本放入约-20℃(或更低)的冰箱中。

[0268] 为了防止样本损失，将样本分两次装运，每次含有每个时间点的1等分的血浆(1个给药前等分和1个给药后等分)。样本的第一等分在采集后的28至30天内进行装运。多个个体的样本可作为单个运送包装的一部分进行发送。在运送前，将样本装入具有足够干冰的隔热容器中，以确保它们在运送过程中保持冷冻并防止破损。样本通过急件连夜运送。

[0269] 储存样本，用于在研究结束时采用经验证的高压液相色谱串联质谱(HPLC/MS-MS)法分析3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。其后，保留样本以供以后可能进行的分析。

[0270] 该试验的主要终点是在以3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸进行的28天治疗中一定比例的患者的肌肉中抗肌萎缩蛋白表达有所上升。从所有38位患者获得治疗前和治疗后的EDB肌肉免疫荧光数据。如表8所示，数据表明，在两种剂量水平下，患者呈现出抗肌萎缩蛋白的定性改善。总体而言，以4-、4-、8-mg/kg的剂量水平治疗的6位患者中的4位(67%)(90% CI 27-94%)，以10-、10-、20-mg/kg的剂量水平治疗的20位患者中的10位(50%)(90% CI 30-70%)，以20-、20-、40-mg/kg的剂量水平治疗的12位患者中的6位(50%)(90% CI 50-75%)显示了治疗后抗肌萎缩蛋白的表达的上升。应答似乎不依赖于治疗前的抗肌萎缩蛋白表达(缺失vs最小量)、年龄、类固醇使用或无义突变的位置和类型。

[0271] 对前2组的26名男孩中的24位的治疗前原代肌肉细胞进行体外肌管培养。当在3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的存在下培养时，肌管培养显示了抗肌萎缩蛋白表达对3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸治疗进行响应的剂量依赖性增加的证据。在10μg/mL的浓度下，24人中的24人(100%)显示了全长抗肌萎缩蛋白的生成，这表明了(如果具有足够的浓度)在所有个体中的无义突变抑制潜力。大部分接受4-、4-、8-mg/kg，10-、10-、20-mg/kg或20-、20-、40-mg/kg剂量水平的个体在将治疗结束时的数值与治疗前数值相比时出现CK的下降。这些变化具有统计学显著性(对于低、中和高剂量分别为p=0.03、p=0.002、p=0.001)。在治疗停止时平均数值向基线的回归为药理学活性提供了进一步的支持。

[0272] 表8

[0273]

[0274]

[0275] a早晨4mg/kg，中午4mg/kg，晚上8mg/kg

[0276] b在运输中生物切片遗失

[0277] c早晨10mg/kg，中午10mg/kg，晚上20mg/kg

[0278] d早晨20mg/kg，中午20mg/kg，晚上40mg/kg

[0279] e生物切片尚未分析

[0280] f生物切片未被正确保藏，由此无法培养细胞

[0281] 缩写：ND=未进行

[0282] 对于本方案的变化，在每个剂量水平下，推荐以6、6和12小时(±～30分钟)的间隔每天三次摄取3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。理想情况下，每个剂量在就餐后～30分钟内(例如，早餐后～7:00AM、午餐后～1:00PM、晚餐后～7:00PM)被摄取。尽管可以理解在门诊情境中可能出现给药方案的变化，建议在PK样本采集的日子严格遵照处方方案(包括给药间隔和给药和就餐的关系)。临床终点可通过上述方法进行评估。

[0283] 5.17实施例17：定量咳嗽评估

[0284] 普遍认同的是，过度咳嗽可破坏人的感觉和机能。在美国，患者寻求初级护理性治疗最经常的原因之一是咳嗽(Hing等人，2006，Adv.Data574:1-33)。患有慢性咳嗽的患者描述了咳嗽的破坏性质带来的沮丧、烦躁、愤怒以及咳嗽对睡眠和社会交往的负面作用(Kuzniar等人，2007，Mayo Clin.Proc.82(1):56-60)。在患有囊性纤维化(CF)的患者中，咳嗽是最主要的与该疾病相关的症状，而日间和晚间的咳嗽增加以及痰液生成的增加是寻求不定期医疗护理的最常见原因(Sawicki等人，2006，Ped.Pulm.，Suppl.29:344(#388))。CF的咳嗽可能与伴有粘液脓性分泌的气道阻塞以及慢性气道炎症有关；显著增加的咳嗽通常意味着肺病的恶化，并伴随着FEV1的减少和炎症标记物的增加(Smith等人，2006，Thorax61(5):425-9)。在刚完成肺病恶化的治疗后的CF患者中记录了每小时2至5次咳嗽的慢性日间咳嗽(同上)，但在门诊组中可能有更高的频率；正常的个体在一整天内通常具有更少的咳嗽(Hsu等人，1994，Eur.Respir.J.7(7)；1246-53)。由于患者对事件的长期适应且由此无法回忆发生了多少咳嗽，常常无法进行主观咳嗽评估；患者容易少报咳嗽事件，且在客观和主观咳嗽评估之间仅有很小的关联度，同上；Coyle等人，2005，Cough 1:3；
Smith等人，2006，Thorax61(5):425-9)。

[0285] VivoMetrics公司的 将运动传感器、电极、咽喉麦克风、刻度袋和3轴加速计整合进入质量轻的、可洗涤的背心中，其可供5岁以上的患者使用(参见Monitoring System QuickStart Guide( 监测系统快速入门指
南)，其内容通过引用全文并入)。通过运动传感器和麦克风的完整输入，可测量咳嗽的频率和强度。带有时间标签的数据被储存在装在该记录器中的小型闪存卡上，并上载给生产商VivoMetrics公司，以使用专门的软件进行分析。数据可被转移至Excel、Oracle或SAS。

[0286] 与对患有慢性阻塞性肺病的患者的影像/声音评估相比，该仪器已证明了在评估咳嗽方面更高的准确性(Coyle等人，2005，Cough 1:3)。该仪器被用于获取图2中所示的数据，并将被用于提供有关3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸在CF的3期测试中的临床益处的实质性补充数据。现有的从3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的2期研究中非正式采集的症状数据支持该想法。特别地，多位患者描述了在研究进行中咳嗽的减少。不希望受限于理论，基于3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸-介导的CFTR功能的诱导将减少气道阻塞和炎症的假设，咳嗽频率的下降可作为这些药理学作用的症状组合，并可比口头患者报告提供更为准确和定量的评估。

[0287] 应当理解，尽管为阐述目的在本文中描述了本发明的具体实施方案，本文所述的本发明不限于本文披露的具体实施方案的范围。这些实施方案目的在于阐述本发明的多个方面。任何同等的实施方案应落入本发明的范围之内。事实上，除了本文显示和描述的内容以外对本发明所进行的各种修改对本领域的技术人员而言是显而易见的。