香豆素类与上转换稀土纳米复合物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了香豆素类与上转换稀土纳米复合物及其制备方法与应用。其制备方法是先将质量浓度为1～5％稀土盐水溶液按1∶3～10倍体积加入到含有0.5～2％质量的香豆素类化合物的分散体系中，在搅拌下逐渐加入总体积0.5～2倍的含1～5％质量的氟化钠或氟化铵的水溶液，然后转移至高压反应釜，在氮气或氩气保护下加热至150～300℃，保温8～24h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗3～5次后，真空干燥，形成纳米复合物。本发明的香豆素类与上转换稀土纳米复合物，可在近红外光下激发，组织穿透力深，抗肿瘤活性高。可作为一种新型光敏剂，用于光动力治疗。

权利要求

1.香豆素类与上转换稀土纳米复合物的制备方法，其特征在于：将质量浓度为1～5％稀土盐水溶液按1：3～10倍体积加入到含有0.5～2％香豆素类化合物的分散体系中，在搅拌下逐渐加入总体积0.5～2倍的含1～5％氟化钠或氟化铵的水溶液，然后转移至高压反应釜，在氮气或氩气保护下加热至150～300℃，保温8～24h；离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗3～5次后，真空干燥，形成纳米复合物；所述的香豆素类化合物是具有苯骈α吡喃酮母核结构的化合物；所述的具有苯骈α吡喃酮母核结构的化合物为茵陈素、补骨脂素或花椒内酯；所述的分散体系为含1～3％聚醚亚胺、聚乙烯吡咯烷酮或乙二胺四乙酸的乙醇、油酸或亚油酸溶液；

所述的稀土盐为镧系金属的钇、镱、铒、铥或钬的氟酸盐、盐酸盐和硝酸盐中的一种或多种。

2.一种香豆素类与上转换稀土纳米复合物，其特征在于其由权利要求1所述制备方法制得。

3.权利要求2所述香豆素类与上转换稀土纳米复合物的应用，其特征在于：该复合物与药学上接受的载体或药用赋形剂结合制成用于光动力治疗的药物制剂。

4.根据权利要求3所述香豆素类与上转换稀土纳米复合物的应用，其特征在于：所述药学上接受的载体或药用赋形剂为淀粉、纤维素、环状糊精、糖粉、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、硅胶、甘露醇、氧化镁、磷酸氢钙、碳酸钠或硫酸钙。

5.根据权利要求3所述香豆素类与上转换稀土纳米复合物的应用，其特征在于：所述光动力治疗的药物制剂为口服或注射用药剂型的任何一种。

6.根据权利要求3所述香豆素类与上转换稀土纳米复合物的应用，其特征在于：所述光动力治疗的药物制剂为该复合物的单方或复方制剂；所述复方制剂为该复合物与至少一种光敏剂的复配，该复合物占复方制剂质量的50-99％。

说明书

香豆素类与上转换稀土纳米复合物及其制备方法与应用

技术领域

[0001] 本发明稀土纳米复合材料，特别是涉及香豆素类与上转换稀土纳米复合物及其制备方法与应用，属于医药领域。

背景技术

[0002] 上转换发光材料是指材料吸收能量较低的光子时却能够发出较高能量的光子的材料。La系稀土金属离子具有独特的上转换性质，其激发光980nm为近红外光，具有很强的组织穿透力，并具有发光稳定、毒性低等优点，可将近红外光转换为红光。上转换稀土纳米颗粒可作为荧光探针，用于生物荧光呈像、荧光检测等医药领域。但稀土金属没有光敏化作用，不会产生光敏化杀肿瘤的效果。

[0003] 光动力治疗是利用光敏剂在特定波长的光激发下，产生单线态氧，破坏肿瘤的治疗方法。该疗法治疗的特异性高，对正常细胞的损伤小，不会产生化学治疗和放射治疗的毒副作用，因而前途广阔。

[0004] 光敏剂是光动力治疗的关键。早期的光敏剂是血卟啉衍生物，但它具有过敏反应，且光毒反应严重。近来虽然有多种光敏剂研究，但是多为化学合成品，存在一定安全隐患。

[0005] 天然产物中具有光敏成分，因其毒副作用小，有望开发成新型光敏剂。香豆素类化合物是广泛存在于自然界的一类芳香族化合物，分布于许多植物和香料中，包括芸香科、伞形科、菊科、豆科、瑞香科、茄科等植物，在动物及微生物代谢产物中也有存在，是一种重要的香味增强剂。根据环上取代基及其位置的不同，香豆素可分为简单香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素和其他香豆素等。其光敏激发波长为300～400nm，组织穿透力弱，激光照射深度浅。

[0006] 将上转换稀土与香豆素类化合物采用一定方法结合，可利用相互优势，实现近红外光激发香豆素类化合物，达到深度诊断和治疗肿瘤的目的。目前尚无将香豆素与上转换稀土形成纳米复合物，利用上转换作用实现其光敏激活的报道。

发明内容

[0007] 本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种稳定的具上转化性质的香豆素类与上转换稀土纳米复合物。

[0008] 本发明的另一目的在于提供上述香豆素类与上转换稀土纳米复合物的制备方法。

[0009] 本发明的再一目的在于提供上述香豆素类与上转换稀土纳米复合物的应用。

[0010] 本发明将香豆素类化合物与上转换稀土形成一种稳定的具上转化性质的复合物。香豆素类化合物苯环上多有羟基，可与金属离子直接配位形成复合物，但这种配合物不稳定，易解离。如将香豆类化合物直接与稀土金属混配，不能实现上转换作用。本发明将稀土金属与香豆素类化合物在一定介质中反应，形成稳定的复合物，且具有上转换性质。本发明的复合物，克服了一般光敏剂的激发波长(在紫外光区或可见光区)对人体组织有损伤和穿透力不深的缺点，而采用组织无损伤和穿透力强的近红外光激发，利用稀土金属的上转换作用，将近红外光转换为香豆素类化合物的激发波长，可以实现深部肿瘤的光动力治疗。

[0011] 本发明的目的通过下述技术方案实现：

[0012] 香豆素类与上转换稀土纳米复合物的制备方法：将质量浓度为1～5％稀土盐水溶液按1∶3～10倍体积加入到含有0.5～2％香豆素类化合物的分散体系中，在搅拌下逐渐加入总体积0.5～2倍的含1～5％氟化钠或氟化铵的水溶液，然后转移至高压反应釜，在氮气或氩气保护下加热至150～300℃，保温8～24h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗3～5次后，真空干燥，形成纳米复合物；所述的香豆素类化合物是具有苯骈α吡喃酮母核结构的化合物；所述的分散体系为含1～3％聚醚亚胺(PEI)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或乙二胺四乙酸(EDTA)的乙醇、油酸或亚油酸溶液。

[0013] 进一步地，所述的具有苯骈α吡喃酮母核结构的化合物为茵陈素、补骨脂素、花椒内酯。所述的稀土盐为镧系金属的钇(Y)、镱(Yb)、铒(Er)、铥(Tm)或钬(Ho)的氟酸盐、盐酸盐和硝酸盐中的一种或多种。

[0014] 一种香豆素类与上转换稀土纳米复合物，由上述制备方法制得。

[0015] 该复合物与药学上接受的载体或药用赋形剂结合制成用于光动力治疗的药物制剂。所述药学上接受的载体或药用赋形剂为淀粉、纤维素、环状糊精、糖粉、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、硅胶、甘露醇、氧化镁、磷酸氢钙、碳酸钠或硫酸钙。所述光动力治疗的药物制剂为口服或注射用药剂型的任何一种。所述光动力治疗的药物制剂为该复合物的单方或复方制剂；所述复方制剂为该复合物与至少一种光敏剂的复配，该复合物占复方制剂质量的50-99％。

[0016] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

[0017] (1)本发明的香豆素类与上转换稀土纳米复合物，可在近红外光下激发，组织穿透力深，抗肿瘤活性高。可作为一种新型光敏剂，用于光动力治疗。

[0018] (2)本发明制备方法工艺简单，反应条件易于控制，适于工业化生产。

具体实施方式

[0019] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。下面实施例中的％为质量百分比。香豆素类化合物茵陈素、补骨脂素、花椒内酯均为市售产品。

[0020] 实施例1

[0021] 取1％YCl3、2％YbCl3和1％HoCl3水溶液混合物50mL，加入到150mL含1％茵陈素和2％PEI的乙醇中，在搅拌下逐渐加入200mL的含3％氟化钠水溶液，然后转移至高压反应釜，在氮气保护下加热至150℃，保温24h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗3次后，真空干燥，形成纳米复合物1.5g。

[0022] 实施例2

[0023] 取0.5％YF3、1％YbF3、1％ErF3和2％TmF3水溶液混合物50mL，加入到500mL含0.5％补茵陈素和2％EDTA的亚油酸中，在搅拌下逐渐加入250mL的含3％氟化钠水溶液，然后转移至高压反应釜，在氮气保护下加热至300℃，保温16h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗5次后，真空干燥，形成纳米复合物3.0g。

[0024] 实施例3

[0025] 取2％Y(NO3)3、1％Yb(NO3)3和2％Er(NO3)3水溶液混合物50mL，加入到250mL含2％补骨脂素和3％PVP的油酸中，在搅拌下逐渐加入600mL的含1％氟化铵水溶液，然后转移至高压反应釜，在氩气保护下加热至200℃，保温24h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗
4次后，真空干燥，形成纳米复合物8.5g。

[0026] 实施例4

[0027] 取2％YbF3和3％HoF3水溶液混合物50mL，加入到250mL含1％补骨脂素和2％PEI的乙醇中，在搅拌下逐渐加入150mL的含5％氟化钠水溶液，然后转移至高压反应釜，在氩气保护下加热至300℃，保温8h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗3次后，真空干燥，形成纳米复合物3.2g。

[0028] 实施例5

[0029] 取5％TmCl3水溶液50mL，加入到500mL含0.5％花椒内脂和1％EDTA的亚油酸中，在搅拌下逐渐加入500mL的含3％氟化铵水溶液，然后转移至高压反应釜，在氮气保护下加热至160℃，保温16h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗5次后，真空干燥，形成纳米复合物2.8g。

[0030] 实施例6

[0031] 取0.5％Y(NO3)3、0.5％Er(NO3)3、2％Tm(NO3)3和1％Ho(NO3)3水溶液混合物50mL，加入到250mL含2％花椒内酯和3％PVP的油酸中，在搅拌下逐渐加入600mL的含1％氟化钠水溶液，然后转移至高压反应釜，在氩气保护下加热至250℃，保温24h。离心收集沉淀，乙醇和水交替清洗4次后，真空干燥，形成纳米复合物5.6g。

[0032] 实施例7

[0033] 实施例1-6制得的产物的荧光性质实验

[0034] 方法：将实施例1-6制得的产物分别于光度仪上检测其在980nm激发下的发射波长的峰值。

[0035] 结果：实施例1-6产物最大发射波长见表一。

[0036] 表一、实施例1-6产物在980nm激发光下的最大发射波长

[0037]产品来源 波长(nm)
实施例1 350，375
实施例2 340，382
实施例3 360，396
实施例4 353，410
实施例5 352，386
实施例6 363，405

[0038] 制得的产物在980nm处激发，在340～410nm存在发射峰。其中第一列波长340～363nm为香豆素类化合物的激发波长，第二列波长375～410nm为香豆素类化合物的发射峰波长，这表明近红外光具有激发复合物中香豆素类化合物产生荧光的能力。

[0039] 实施例8

[0040] 实施例1-6制得的产物对肿瘤细胞的生长抑制实验

[0041] 方法：将肿瘤细胞(胃癌RF细胞株和直肠癌LS174T细胞株，浓度为2×106/mL)，放入无菌的96孔培养平板，每孔加肿瘤细胞悬液50μl，加含15％小牛血清的1640培养液50μl，加实施例1-6制得的产物的1mg/ml的DMF溶液10μl，每组3孔，孔内加等量的生理盐水振荡混匀，然后980nm激光(300mW)照射20min，放入5％的CO2培养箱(37℃)培养
24h，加入四唑盐(MTT)磷酸缓冲液，每孔10μl(每ml含MTT5mg)继续培养4h，然后加二甲基亚砜100μl，终止反应。以不进行激光照射的孔为对照，用酶联免疫检测仪，分别于波长
570nm，630nm处测定光密度OD值，计算结果。

[0042] 计算公式：

[0043]

[0044] 结果：实验结果见表二。

[0045] 表二实施例1-6制得的产物对胃癌和直肠癌细胞的抑制实验

[0046]

[0047] 胃癌RF细胞株和直肠癌LS174T细胞株为常用的消化道肿瘤细胞株。实验中发现，实施例1-6制得的产物对二种肿瘤抑制作用与单种香豆素类化合物相比均显著提高，抑制率由41.7～53.7％提高到84.5～94.1％，表明香豆素类化合物与上转换稀土金属形成的复合物在980nm激光照射复合物时产生了光敏化杀伤肿瘤细胞的作用，产生了更好的抑制效果。

[0048] 实施例9

[0049] 实施例1-6制得的产物对小鼠体内肿瘤的生长抑制实验

[0050] 方法：取小鼠S180瘤块，匀浆后稀释并调整细胞数至1×107/ml，以0.2ml注入小鼠右腋皮下，24h后随机分组给药，尾静脉注射给药，给药剂量5mg/kg，每天1次，30min后采用980nm激光(300mW)照射肿瘤部位30min。于第8天称重处死小鼠取瘤块，称瘤重和测瘤体积，计算抑瘤率。

[0051] 抑瘤率＝(重量抑瘤率+体积抑瘤率)/2

[0052] 重量抑瘤率＝(生理盐水组瘤重-给药组瘤重)/生理盐水组瘤重×100[0053] 体积抑瘤率＝(生理盐水组瘤体积-给药组瘤体积)/生理盐水组瘤体积×100[0054] 结果：实验结果见表三。

[0055] 表三实施例1-6制得的产物对S180肉瘤的抑制动物实验

[0056]

[0057] 实施例1-6制得的产物对S180抑瘤率显著高于单种香豆素类化合物药物组，抑瘤率由39.9～44.5％提高到61.2～68.3％，表明香豆素类化合物与上转换稀土金属复合物在980nm激光照射时对动物体内肿瘤产生了光敏化抑制作用，产生了更好的抑瘤效果。

[0058] 实施例10

[0059] 取实施例1-6制得的香豆素类与上转换稀土纳米复合物各2g，与8g混合物以及0.2g硬脂酸镁混合均匀，混合物为淀粉、乳糖、结晶纤维素按质量比7∶2∶1配置，混合制得；经压片机制成6种片剂。每个药片(0.5g)含香豆素类与上转换稀土纳米复合物100mg，