一种仔猪用抗腹泻中草药微生态饲料添加剂

摘要

一种仔猪用抗腹泻中草药微生态饲料添加剂，按质量计，30～50g百蕊草粉、20～30g枯草芽孢杆菌BRC039菌粉、5～10g谷氨酰胺，加载体沸石粉至100g，混合均匀，即得中草药微生态制剂；每100kg配合饲料中添加中草药微生态制剂1kg。降低仔猪的腹泻率，提高仔猪成活率，增加经济效益，不影响食品安全，无环境污染。？

权利要求

1.一种仔猪用抗腹泻中草药微生态饲料添加剂，其特征在于，所用材料为：

60～100目的百蕊草粉；

有效成分含量大于98%谷氨酰胺；

菌粉为一株枯草芽孢杆菌制得，该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039，已于2013年 3 月25 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 7369；

100目含水量5%以下的沸石粉；

将上述原料按质量计，取60～100目的百蕊草粉30～50 g、枯草芽孢杆菌BRC039菌粉20～30 g、谷氨酰胺5～10 g，剩余加100目含水量5%以下的沸石粉至总量100g，混合均匀20分钟，即得中草药微生态制剂。

2.一种仔猪用抗腹泻中草药微生态饲料添加剂，其特征在于，所用材料为：

60～100目的百蕊草粉；

有效成分含量大于98%谷氨酰胺；

菌粉为一株枯草芽孢杆菌制得，该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039，已于2013年 3 月25 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 7369；

100目含水量5%以下的沸石粉；

按质量分别取60～100目的百蕊草粉30 kg、枯草芽孢杆菌BRC039菌粉20 kg、谷氨酰胺5 kg，100目含水量5%以下的沸石粉45 kg；在混合机中先加入沸石粉用量的60%，即

27 kg，再加入60～100目的百蕊草粉30 kg、枯草芽孢杆菌BRC039菌粉20 kg、谷氨酰胺

5 kg，最后再将剩余的沸石粉18 kg加入混合机中，混合20分钟，即得中草药微生态制剂。

3.一种仔猪用抗腹泻中草药微生态饲料添加剂，其特征在于，所用材料为：

60～100目的百蕊草粉；

有效成分含量大于98%谷氨酰胺；

菌粉为一株枯草芽孢杆菌制得，该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039，已于2013年 3 月25 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 7369；

100目含水量5%以下的沸石粉；

按质量分别取60～100目的百蕊草粉50 kg、枯草芽孢杆菌BRC039菌粉20 kg、谷氨酰胺5 kg、100目含水量5%以下的沸石粉25 kg；在混合机中先加入沸石粉用量的60%，即

15 kg，再加入60～100目的百蕊草粉50 kg、枯草芽孢杆菌BRC039菌粉20 kg，谷氨酰胺

5 kg，最后再将剩余的10 kg沸石粉加入混合机中，混合20分钟，即得中草药微生态制剂。

说明书

一种仔猪用抗腹泻中草药微生态饲料添加剂

技术领域

[0001] 本发明为一种抗仔猪腹泻的中草药微生态饲料添加剂。技术背景

[0002] 近年来，我国仔猪腹泻十分普遍，导致饲料报酬率较低、仔猪成活率下降、生长缓慢、生长发育停滞，甚至死亡，给养猪业带来巨大的经济损失。因此，如何采取有效的措施预防和控制仔猪腹泻、提高仔猪成活率已成为养猪业生产的一项重要课题。

[0003] 目前，在养猪生产中通常采用的方法是使用饲用抗生素或抗菌中草药添加剂进行预防和控制，但是无论是饲用抗生素还是抗菌中草药添加剂在使用后都会破坏仔猪肠道微生态区系平衡，降低免疫力，仔猪需要很长一段时间重新建立肠道微生态区系，修复受损肠粘膜，这严重影响了仔猪生产性能的发挥。

发明内容

[0004] 本发明的目的就是针对仔猪腹泻，导致肠道微生态区系紊乱，恢复期长，影响仔猪生产性能发挥这一问题，提供一种仔猪用抗腹泻中草药微生态饲料添加剂。

[0005] 本发明的另一个目的在于提供一株枯草芽孢杆菌菌株；该菌株可以与抗菌中草药百蕊草配伍使用，而且具有优良的益生效果。

[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的：

[0007] 本发明提供一种中草药微生态饲料添加剂，该添加剂包含芽孢杆菌、中草药、谷氨酰胺和沸石粉。

[0008] 中草药为60～100目百蕊草粉。

[0009] 谷氨酰胺为市售品，有效成分含量大于98%。

[0010] 芽孢杆菌为一株枯草芽孢杆菌，该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039，已于2013年 3 月25 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 7369。该菌株从长期存放百蕊草的土壤中分离获得，经测定其可以与百蕊草配伍使用，具有优良的益生效果。该菌株在应用时，以菌粉形式添加到复合微生态8
制剂中，菌粉中的活菌数为2.0×10cfu/g。

[0011] 该菌株的16 S rDNA 序列全长共 1455 bp,经Genbank比对相似性达到99.8%；确定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039。

[0012] 沸石粉粒度为100目，含水量5%以下，为市售品。

[0013] 将上述材料按质量计，60～100目百蕊草粉30～50 g、枯草芽孢杆菌BRC039菌粉20～30 g、谷氨酰胺5～10 g，剩余为加载体100目含水量5%以下沸石粉至总量100 g，混合均匀，即得中草药微生态制剂。

[0014] 该中草药微生态制剂的使用方法为中草药微生态制剂与仔猪配合饲料的混合比例按重量计为1:100，即每100 kg 配合饲料中添加中草药微生态制剂1 kg。

[0015] 本发明所用材料性能及使用后所产生的效果：

[0016] 1.所用材料

[0017] 本发明所选用的中草药为百蕊草。百蕊草中含有黄酮、有机酸、生物碱、甾醇、酚类、挥发油等多种化学组分。百蕊草本身性味平缓、素有“植物抗生素”之美称，具有广谱抗菌作用，对多种致病菌有抑制作用；安全无毒且适口性好，易被吸收。可以防治仔猪腹泻，改善仔猪生产性能。同时，中草药在作用完成后，残留少，不易导致病原菌产生耐药性。

[0018] 本发明所选用的益生菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039，该菌株是从辽宁省锦州市长期存放中草药百蕊草的土壤中分离筛选出来，经耐酸、耐胆盐等益生性能检测，表明枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039益生性能优良，且可以与中草药百蕊草配伍使用，有益于仔猪肠道微生物区系的快速恢复与建立。

[0019] 本发明所选用的谷氨酰胺具有重要的免疫调节和肠粘膜修复作用。谷氨酰胺可促使淋巴细胞、巨噬细胞的有丝分裂和分化增殖，增强机体的免疫功能。同时谷氨酰胺是肠道粘膜细胞代谢必需的营养物质，对维持肠道粘膜上皮结构的完整性起着十分重要的作用。谷氨酰胺可有效地防止肠道粘膜萎缩，增强肠道细胞活性，改善肠道免疫功能，减少肠道细菌及内毒素的易位。

[0020] 上述3种成分组合在一起，共同发挥作用。我们在组方及配比上进行了大量的筛选试验，并对其作用机制进行了一定的研究，发现了本发明中所涉及到的3种成分具有相当好的协同性和互补性，是单一原料所不能替代的（表1）。从试验数据反映出，本发明使用后1周仔猪腹泻率降低了80%以上，健康状况得到了明显改善。

[0021]

[0022] 2. 本发明的有益效果：

[0023] 降低仔猪的腹泻率。仔猪腹泻率降低80%以上，健康状况得到明显改善。

[0024] 提高仔猪成活率，提高日增重。由于仔猪腹泻得到控制，而且迅速恢复了肠道微生态区系平衡，加之谷氨酰胺具有一定的诱食作用，仔猪采食量增加，免疫力提高，使仔猪日增重显著提高，缩短了出栏时间，增加经济效益。

[0025] 不影响食品安全，无环境污染。本发明所用产品包括益生菌、中草药和广泛应用于食品生产的谷氨酰胺，因此本产品不会影响生猪食品安全，也不会带来环境污染，是安全、高效、环保的饲料添加剂。

具体实施方式

[0026] 实施例1枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039菌株的获得

[0027] 1、培养基及百蕊草提取物

[0028] 富集培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，蒸馏水1000mL，调节pH至6.5～7.0；

[0029] 分离培养基：百蕊草提取物40g， Na2HPO4 1g，KH2PO4 1g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，调节pH至6.5～7.0；

[0030] 固体斜面培养基：葡萄糖10g，蛋白胨5g，酵母膏5g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.2g，Na2CO310g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，调节pH至6.5～7.0。

[0031] 百蕊草提取物：百蕊草粉碎全部过60目筛，其粉碎品在70%的乙醇中浸泡4h，料液比为1:10，将浸泡后的百蕊草混合液置于超声波提取仪中，在46℃、超声波频率为40 kHz的条件下提取60min，过滤，将残渣再次按上述方法提取，合并滤液，将滤液置于喷雾干燥机中干燥，即得含水量10%以下的百蕊草提取物。

[0032] 2、菌株的分离

[0033] 取辽宁省锦州市长期存放中草药百蕊草的土壤10 g，置于装有90mL无菌生理盐水的三角瓶中，漩涡混合仪上震荡2min，静止30min， 80℃水浴加热20min，杀死微生物营养细胞，所得液为原液I;取10mL原液I加入到100mL富集培养基中，39℃，160r/min摇床-4 -2 -3 -4增殖培养24h；用无菌生理盐水对增殖培养后的菌液进行梯度稀释至10 ，取10 、10 、10稀释液各0.1mL分别涂布于分离培养基平板上，39℃培养24h，挑选出革兰氏阳性菌接入固体斜面培养基中，置于39℃培养箱中培养24h，放入4℃冰箱中保藏，待筛选。

[0034] 3、筛选益生性能优良的菌株

[0035] 3.1模拟胃消化环境，评价耐酸性

[0036] 配置人工胃液：取质量分数为10%的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为2.0、6.5（对照组），每100mL溶液中加1g胃蛋白酶，充分溶解后用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌；

[0037] 将初筛得到的菌株经斜面活化后，接种于种子培养基中，39℃条件下160 r/min振荡培养12h，按体积比为5%的接种量转接至人工胃液中，放入39℃恒温水浴锅内，120 r/min振荡培养，放入5min后开始计时，3h后取培养菌液0.1ml，进行平板菌落计数，计算存活率；

[0038] 存活率计算公式：A1/A0×100%

[0039] A1:pH为2的处理组的活菌数，A0:pH 为6.5的对照组的活菌数；

[0040] 筛选出存活率大于80%的菌株。

[0041] 3.2模拟肠道消化环境，评价耐胆盐性

[0042] 配制人工肠液：取KH2PO4 6.8g，加蒸馏水500mL溶解，用浓度为0.4%的NaOH溶液调节pH值至6.8，加水至1000mL，每100mL溶液中添加0.3g猪胆盐，以不加猪胆盐的为对照组，充分溶解后用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌；

[0043] 将耐酸性筛选出的菌株经斜面活化后，接种于种子培养基中，39℃条件下160r/min振荡培养12h，按体积比为5%的接种量转接至人工肠液，放入39℃恒温水浴锅内，120r/min振荡培养；放入5min后开始计时，4h后取培养菌液0.1ml，进行平板菌落计数，计算存活率；

[0044] 存活率计算公式：A1/A0×100%

[0045] A1:添加猪胆盐处理组的活菌数，A0:未添加猪胆盐对照组的活菌数；

[0046] 筛选出存活率大于80%的菌株。

[0047] 经上述筛选得到一株芽孢杆菌。

[0048] 4、菌种鉴定

[0049] 通过菌体的群体形态观察、个体形态观察、生理生化试验结果，该菌株的16 S rDNA 序列全长共 1455 bp,经Genbank比对相似性达到99.8%；确定该菌株为芽孢杆菌科芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039；已于2013年 3月25 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所，邮编100101），保藏编号为CGMCC No. 7369。

[0050] 5、菌粉的制备

[0051] 菌粉采用喷雾干燥法制得，其具体步骤如下：

[0052] 5.1 斜面培养：将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BRC039接种于固体斜面培养基上，33℃～43℃培养24h；

[0053] 5.2 一级种子培养：将培养好的斜面，接种于100mL种子培养基中，33℃～43℃条件下160 r/min振荡培养12h，制得一级种子液；

[0054] 5.3 扩大培养：以5%的接种量将一级种子液接种于1000mL种子培养基中，33℃～43℃条件下160 r/min振荡培养12h，制得二级种子液；

[0055] 5.4 发酵罐培养：以5%的接种量将二级种子液接种于富集培养基中，33℃～43℃条件下160 r/min振荡培养24h；

[0056] 5.5 收集发酵产物：待发酵罐中发酵液粘度达到15000cP时，收集发酵液，立即喷雾干燥，即得菌粉成品；

[0057] 上述喷雾干燥中的培养基配方为：

[0058] 富集培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，蒸馏水1000mL，调节pH至6.5～7.0；

[0059] 种子培养基：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，酵母膏5g，KH2PO4 1 g，MgSO4 0.2g，Na2CO310 g，蒸馏水1000mL，调节pH至6.5～7.0；

[0060] 固体斜面培养基：葡萄糖10g，蛋白胨5g，酵母膏5g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.2g，Na2CO310 g，琼脂20 g，蒸馏水1000mL，调节pH至6.5～7.0；

[0061] 所得菌粉活菌数为2.0×108cfu/g。

[0062] 实施例2