具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸及其脂肪酸甲酯有效部位

摘要

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位及其番荔枝脂肪酸甲酯有效部位，本发明以番荔枝种子为原料，采用有机溶剂提取，柱层析法分离及有机溶剂萃取分离等方法，并且结合药理实验筛选，优化制备得到具有很好抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸及其番荔枝脂肪酸甲酯有效部位。本发明变废为宝，以现有资源开发出番荔枝种子中脂肪酸有效部位或脂肪酸甲酯有效部位的抗肿瘤新用途，为番荔枝种子中的脂肪油提供了新的临床用途，且番荔枝资源广泛，可形成产业化，具有重要的社会效益和经济效应。

权利要求

1.具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸甲酯有效部位在制备治疗肾癌或人黑色素癌药物中的应用，所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，是由下列方法制备得到：(1)取番荔枝种子，打粉后用正己烷或石油醚回流提取2至3次，合并提取液，浓缩后得到提取物；

(2)取步骤(1)得到的提取物，上硅胶柱层析，采用正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂，极性从低到高依次洗脱，得到重量含量为81％至85％的脂肪酸有效部位，其中不饱和脂肪酸的重量含量为51％至55％；

(3)取步骤(2)制备得到的脂肪酸有效部位与浓度为1.0mol/L氢氧化钠水溶液回流提取30至60分钟，然后用乙醚萃取，取水相，然后用浓度为1.0mol/L盐酸溶液酸化,然后用乙醚萃取，取乙醚层，浓缩乙醚溶剂后用正己烷溶解，然后用体积比为2：98的硫酸：甲醇溶液回流提取1至3小时，然后用正已烷萃取，浓缩正已烷后得到重量含量为93％至95％的脂肪酸甲酯有效部位；

所述的脂肪酸甲酯有效部位包括棕榈酸甲酯，硬脂酸甲酯，油酸甲酯，亚油酸甲酯，肉豆蔻酸甲酯，亚麻酸甲酯。

2.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，其特征在于：脂肪酸甲酯有效部位中含有重量含量为71％至75％的不饱和脂肪酸甲酯。

说明书

具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸及其脂肪酸甲酯有效部位

技术领域

[0001] 本发明涉及一种植物提取物，具体是涉及一种具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

[0002] 番荔枝内酯是一类从番荔枝科植物中提取分离得到的天然化合物，番荔枝中的番荔枝内酯类化合物具有广泛的生物活性，最典型的是杀虫和抗肿瘤细胞活性，研究显示番荔枝内酯在体内外具有强大的肿瘤细胞毒性，而且对多种肿瘤细胞都显示较好的生物活性，研究表明番荔枝内酯抗肿瘤活性的作用机理是通过阻断线立体NADH氧化还原酶，从而阻止呼吸链电子的传递，抑制肿瘤细胞ATP的生成，使肿瘤细胞因饥饿而死亡,其作用机制独特,不同于一般抗肿瘤药物的作用机制,被喻为“明日抗癌之星”。但关于番荔枝种子中的脂肪酸目前还未报道有抗肿瘤活性。

发明内容

[0003] 发明目的：本发明的目的是在番荔枝现有活性成分的基础之上，开发新的抗肿瘤活性部位，扩大药源，提供一种成分清楚，质量可控，抗肿瘤活性强的番荔枝脂肪酸有效部位。

[0004] 技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

[0005] 一种具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，其特征在于：它由下列方法制备得到：

[0006] （1）取番荔枝种子，打粉后用正己烷或石油醚回流提取2至3次，合并提取液，浓缩后得到提取物；

[0007] （2）取步骤（1）得到的提取物，上硅胶柱层析，采用正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂，极性从低到高依次洗脱，得到重量含量为81%至85%的脂肪酸有效部位，其中不饱和脂肪酸的重量含量为51%至55%；

[0008] 所述的脂肪酸有效部位包括棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、肉豆蔻酸和亚麻酸。

[0009] 以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，脂肪酸有效部位中含有重量含量为51%至55%的不饱和脂肪酸。

[0010] 本发明提供的具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，其由下列方法制备得到：

[0011] （1）取番荔枝种子，打粉后用正己烷或石油醚回流提取2至3次，合并提取液，浓缩后得到提取物；

[0012] （2）取步骤（1）得到的提取物，上硅胶柱层析，采用正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂，极性从低到高依次洗脱，得到重量含量为81至85%的脂肪酸有效部位，其中不饱和脂肪酸的重量含量为51%至55%；

[0013] （3）取步骤（2）制备得到的脂肪酸有效部位与浓度为1.0 mol/L氢氧化钠水溶液回流提取30至60分钟，然后用乙醚萃取，取水相，然后用浓度为1.0 mol / L盐酸溶液酸化, 然后用乙醚萃取，取乙醚层，浓缩乙醚溶剂后用正己烷溶解，然后用体积比为2：98的硫酸：甲醇溶液回流提取1至3小时，然后用正已烷萃取，浓缩正已烷后得到重量含量为93至95%的脂肪酸甲酯有效部位；

[0014] 所述的脂肪酸甲酯有效部位包括棕榈酸甲酯，硬脂酸甲酯，油酸甲酯，亚油酸甲酯，肉豆蔻酸甲酯，亚麻酸甲酯。

[0015] 以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，脂肪酸甲酯有效部位中含有重量含量为71%至75%的不饱和脂肪酸甲酯。

[0016] 作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位，所述的洗脱剂的梯度洗脱程序为：先用正己烷和二氯甲烷体积比为100：0至0：100洗脱；然后再用二氯甲烷和乙酸乙酯体积比为，100：0至0：100；最后用乙酸乙酯和甲醇体积比100：0至0：100。洗脱过程中，采用硅胶薄层色谱跟踪，相同斑点洗脱部位合并。

[0017] 作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位在制备防治肺癌、肝癌、宫颈癌或乳腺癌药物中的应用。

[0018] 作为优选方案，以上所述具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位在制备防治肺癌、肝癌、宫颈癌或乳腺癌药物中的应用，把番荔枝脂肪酸有效部位和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、脂肪乳剂、栓剂、微囊、滴丸、软膏剂剂型的药物。

[0019] 本发明提供的具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位制成胶囊剂时把番荔枝脂肪酸有效部位和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

[0020] 将本发明提供的番荔枝脂肪酸有效部位制成片剂时，把番荔枝脂肪酸有效部位和乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

[0021] 本发明提供的番荔枝脂肪酸有效部位制成颗粒剂时，把番荔枝脂肪酸有效部位和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

[0022] 本发明提供的具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸甲酯有效部位在制备防治乳腺癌、肾癌或人黑色素癌药物中的应用。

[0023] 以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸甲酯有效部位在制备防治乳腺癌、肾癌或人黑色素癌药物中的应用时，把番荔枝脂肪酸有效部位和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、脂肪乳剂、栓剂、微囊、滴丸、软膏剂剂型的药物。

[0024] 有益效果：本发明提供的具有抗肿瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位或脂肪酸甲酯有效部位与现有技术相比的优点有：

[0025] 现有技术中番荔枝脂肪油作为废物扔弃，不仅浪费资源，污染环境，本发明通过大量实验筛选，变废为宝，以现有资源开出番荔枝种子中脂肪酸有效部位或脂肪酸甲酯有效部位的抗肿瘤新活性，为番荔枝种子中的脂肪油提供了新的临床用途，番荔枝资源广泛，可形成产业化，具有重要的社会效益和经济效应。

具体实施方式

[0026] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

[0027] 实施例1

[0028] 一种具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，它由下列方法制备得到：

[0029] （1）取番荔枝种子1000g，打粉后用正己烷回流提取2次，合并提取液，浓缩后得到提取物94g；

[0030] （2）取步骤（1）得到的提取物94g，上硅胶柱层析，先用正己烷和二氯甲烷体积比为100：0至0：100洗脱；然后再用二氯甲烷和乙酸乙酯体积比为，100：0至0：100；最后用乙酸乙酯和甲醇体积比100：0至0：100。洗脱过程中，采用硅胶薄层色谱跟踪，脂肪酸相同斑点洗脱部位合并，浓缩得到得到脂肪酸有效部位63 g；

[0031] 经GC分析，所述的脂肪酸有效部位包括棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、肉豆蔻酸和亚麻酸。脂肪酸有效部位中含有81 %的重量百分比的脂肪酸，并且不饱和脂肪酸占脂肪酸的重量百分含量为51%。

[0032] 实施例2

[0033] 本发明提供的具有抗肿瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，其由下列方法制备得到：

[0034] （1）取番荔枝种子1000g，打粉后用正己烷回流提取3次，合并提取液，浓缩后得到提取物94g；

[0035] （2）取步骤（1）得到的提取物，上硅胶柱层析，先用正己烷和二氯甲烷体积比为100：0至0：100洗脱；然后再用二氯甲烷和乙酸乙酯体积比为，100：0至0：100；最后用乙酸乙酯和甲醇体积比100：0至0：100。洗脱过程中，采用硅胶薄层色谱跟踪，脂肪酸相同斑点洗脱部位合并，浓缩得到脂肪酸有效部位63g;

[0036] （3）取步骤（2）制备得到的脂肪酸有效部位与浓度为1.0 mol/L氢氧化钠水溶液回流提取30分钟，然后用乙醚萃取，取水相，然后用浓度为1.0 mol /L盐酸溶液酸化, 然后用乙醚萃取，取乙醚层，浓缩乙醚溶剂后用正己烷溶解，然后用体积比为2：98的硫酸：甲醇溶液回流提取1小时，然后用正已烷萃取，浓缩正已烷后得到重量含量为93至95%的脂肪酸甲酯有效部位；

[0037] 经化学成分分析，所述的脂肪酸甲酯有效部位包括棕榈酸甲酯，硬脂酸甲酯，油酸甲酯，亚油酸甲酯，肉豆蔻酸甲酯，亚麻酸甲酯。并且脂肪酸甲酯有效部位中含有重量含量为71%至75%的不饱和脂肪酸甲酯。

[0038] 实施例3 番荔枝脂肪酸有效部位体外对人肿瘤细胞的抑制作用

[0039] 以人肝癌（SMMC-7721），人肝癌（HepG2），人宫颈癌 (Hela)，肺癌（A-549），人乳腺癌（MCF-7），采用噻唑蓝还原法（MTT）进行体外抗肿瘤实验, 取实施例1制备得到的番荔枝脂肪酸有效部位各设5个浓度, 以样品的溶剂即二甲亚砜为阴性对照组。所用小鼠为清洁级昆明小鼠。由表1的半数抑制浓度（IC50）实验结果表明，本发明制备得到的番荔枝脂肪酸有效部位对5株人肿瘤细胞的显示很好的抑制作用；

[0040] 表1番荔枝脂肪酸有效部位对5株肿瘤细胞的抑制作用 (IC50半数抑制率)