一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基制备方法

摘要

本发明公开了一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基制备方法。其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；蒸馏水加至1000ml。最佳优化配方制备方法为：取麦芽浸粉、鸡蛋蛋白液、氯化血红素、琼脂、枸橼酸镁、四水柠檬酸钙、共杀素、大蒜榨出汁、L-半胱氨酸溶于黄精水煮液中，混匀，定容，灭菌后分装。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、牙龈卟啉菌分离率高的特点。

权利要求

1.一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基制备方法，其特征在，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉15~30g；鸡蛋蛋白液150~200ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液

2.5 ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.1~0.4g；琼脂15~20g；

共杀素15~20mg；泰利霉素8~12mg；利奈唑胺5~10mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙

0.01~0.2g；大蒜榨出汁0.05~0.5g；L-半胱氨酸0.01~0.1g；浓度200g/L的黄精水煮液

200~300ml；蒸馏水加至1000ml；其制备方案中包括以下步骤：（1）取黄精加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得黄精水煮液；

（2）取去皮新鲜大蒜洗净后，粉碎机榨汁并过滤，得大蒜榨出汁；

（3）取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；

共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步骤1所得黄精水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

说明书

一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基制备方法

技术领域

[0001] 本发明为一项分案申请，母案为2012年7月4日申请的发明《一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基》，申请号为2012102277749。具体涉及一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基制备方法。

背景技术

[0002] 牙周炎是口腔中的常见病和多发病，属于细菌感染性疾病。流行病学研究表明，牙龈卟啉菌（Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis）与牙周炎的发生、发展显著相关，是牙周炎的优势致病菌。牙周炎发病后期引起的牙龈萎缩、牙槽骨丧失一般难以再生，因此，牙周炎的早期诊断、P.gingivalis的早期检出至关重要。目前的P.gingivalis检验手段主要是龈下菌斑采样进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR），该种方法需要对样本进行DNA提取和PCR引物设计，且需要配备PCR相关仪器设备，成本昂贵，操作复杂。微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体（如细胞或细菌等）而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。人类口腔中寄居着500多种细菌，其中定植在龈下的就有300多种，正是由于这种复杂的样本环境，使得牙垢标本P.gingivalis的培养分离率低，口腔主流菌群中的链球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟氏菌、乳杆菌、螺旋体、假丝酵母在目前的培养基中比牙龈卟啉菌生长更快，很快覆盖了培养基，牙龈卟啉菌无法生长。

发明内容

[0003] 本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种能够用于牙垢标本的，对牙龈卟啉菌分离率高的培养基。

[0004] 本发明解决其技术问题的技术方案是：一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基，其特征在，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉15~30g；鸡蛋蛋白液150~200ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5 ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.1~0.4g；琼脂15~20g；共杀素15~20mg；泰利霉素8~12mg；利奈唑胺5~10mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.01~0.2g；大蒜榨出汁0.05~0.5g；L-半胱氨酸0.01~0.1g；浓度200g/L的黄精水煮液200~300ml；蒸馏水加至1000ml。

[0005] 一种用于牙垢标本的牙龈卟啉菌培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

[0006] （1）取黄精加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得黄精水煮液；

[0007] （2）取去皮新鲜大蒜洗净后，粉碎机榨汁并过滤，得大蒜榨出汁；

[0008] （3）取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步骤1所得黄精水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

[0009] 其中所述的麦芽浸粉提供碳氮源和能量；枸橼酸镁和四水柠檬酸钙为缓冲剂，并可以抑制杂菌生长；氯化血红素和维生素K1为营养剂；琼脂是培养基的凝固剂；共杀素可以抑制革兰氏阳性菌蛋白质的合成，对于广泛耐药的革兰氏阳性菌也有效；泰利霉素对于奈瑟氏菌、乳杆菌、假丝酵母具有一定的抑菌作用；利奈唑胺对耐药性金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌和肠球菌属等均具有良好活性；天门冬素、L-半胱氨酸属氨基酸类，为营养剂；鸡蛋蛋白液含有各种多肽、脂肪、生长因子、激素等，这些物质对促进牙龈卟啉菌的繁殖和生长都是很重要的因素，此外鸡蛋蛋白液还具有维持培养基pH 值恒定的作用。大蒜榨出汁所含的蒜酶、过氧化酶、磷酸酯酶及水解酶等，有氧化和水解作用，可以致使牙垢标本中的核梭杆菌、脆弱类杆菌胞壁消失或变薄，核糖体聚集成团块，最终导致细菌变形及破裂，达到抑制核梭杆菌、脆弱类杆菌的作用。黄精为百合科植物黄精、多花黄精和滇黄精的根茎，含有蔗糖、葡萄糖、叶酸、多种氨基酸等成分，可以提供能量代谢、细胞发育、新陈代谢因子，且水煮液对堇色毛癣菌、红色表皮癣菌、石膏样毛癣菌、考夫曼-沃尔夫氏表皮癣菌、螺旋体、疱疹病毒均有抑制作用。

[0010] 本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、牙龈卟啉菌分离率高的特点。

具体实施方式

[0011] 以下结合实际情况，对本发明的具体实施方式作详细说明。

[0012] 实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉15g；鸡蛋蛋白液150ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.1g；琼脂15g；共杀素15mg；泰利霉素8mg；利奈唑胺10mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.2g；蒸馏水加至1000ml。制备方法：取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

[0013] 实施例2，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉30g；鸡蛋蛋白液200ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.4g；琼脂20g；共杀素20mg；泰利霉素12mg；利奈唑胺5mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.01g；蒸馏水加至1000ml。制备方法：取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

[0014] 实施例3，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉15g；鸡蛋蛋白液150ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.1g；琼脂15g；共杀素15mg；泰利霉素8mg；利奈唑胺10mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.2g；大蒜榨出汁0.05g，L-半胱氨酸0.1g；蒸馏水加至1000ml。制备方法：取去皮新鲜大蒜洗净后，粉碎机榨汁并过滤，得大蒜榨出汁；取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

[0015] 实施例4，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉30g；鸡蛋蛋白液200ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.4g；琼脂20g；共杀素20mg；泰利霉素12mg；利奈唑胺5mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.01g，大蒜榨出汁0.5g，L-半胱氨酸0.01g；蒸馏水加至1000ml。制备方法：取去皮新鲜大蒜洗净后，粉碎机榨汁并过滤，得大蒜榨出汁；取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

[0016] 实施例5，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉25g；鸡蛋蛋白液170ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5 ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.3g；琼脂18g；共杀素18mg；泰利霉素10mg；利奈唑胺8mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.1g，大蒜榨出汁0.3g，L-半胱氨酸0.05g；蒸馏水加至1000ml。制备方法：取去皮新鲜大蒜洗净后，粉碎机榨汁并过滤，得大蒜榨出汁；取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

[0017] 实施例6，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉15g；鸡蛋蛋白液150ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5 ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.1g；琼脂15g；共杀素15mg；泰利霉素8mg；利奈唑胺10mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.2g，大蒜榨出汁0.05g，L-半胱氨酸0.1g，浓度200g/L的黄精水煮液200ml；蒸馏水加至1000ml。制备方法：

[0018] （1）取黄精加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得黄精水煮液；

[0019] （2）取去皮新鲜大蒜洗净后，粉碎机榨汁并过滤，得大蒜榨出汁；

[0020] （3）取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步骤1所得黄精水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

[0021] 实施例7，配制1000ml培养基的配方中含有：麦芽浸粉30g；鸡蛋蛋白液200ml；浓度为5 mg/ml的氯化血红素溶液2.5 ml；浓度为10mg/ml的维生素K1乙醇溶液0.5ml；枸橼酸镁0.4g；琼脂20g；共杀素20mg；泰利霉素12mg；利奈唑胺5mg；天门冬素 3.6 g；四水柠檬酸钙0.01g，大蒜榨出汁0.5g，L-半胱氨酸0.01g，浓度200g/L的黄精水煮液300ml；蒸馏水加至1000ml。制备方法：

[0022] （1）取黄精加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得黄精水煮液；

[0023] （2）取去皮新鲜大蒜洗净后，粉碎机榨汁并过滤，得大蒜榨出汁；

[0024] （3）取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化血红素溶液；维生素K1乙醇溶液；枸橼酸镁；琼脂；共杀素；泰利霉素；利奈唑胺；天门冬素；四水柠檬酸钙；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步骤1所得黄精水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，85℃间歇灭菌2次，每次45 min，