甘珀酸或其盐在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用

摘要

本发明涉及甘珀酸或其盐在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用。具体地，公开了甘珀酸或其药学上可接受的盐在制备治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病，尤其是败血症和脓毒血症的药物中的新用途。此外，本发明还公开了甘珀酸或其药学上可接受的盐在制备抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的抑制剂和/或治疗由双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶介导的疾病的药物中的用途。本发明的方法和药物可有效地治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病，特别败血症和脓毒血症，具有广泛的临床应用和市场开发前景。

权利要求

1.一种甘珀酸或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备(a)抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的抑制剂；和/或(b)治疗由双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶介导的疾病的药物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抑制剂或药物还用于治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述全身性的感染或全身性的炎症性疾病针对选自下组的疾病或症状：败血症、脓毒血症、由细菌或细菌成分引起的炎症性疾病。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物为组合物。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述组合物中甘珀酸或其药学上可接受的盐的含量为0.001－99.9wt％，按组合物的总重量计。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物的剂型选自：口服剂型、注射剂或冻干剂。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物包括：(i)甘珀酸或其药学上可接受的盐；

(ii)药学上可接受的载体；

(iii)任选的一种或多种其他治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的活性物质。

8.如权利要求7所述的用途，所述活性物质选自下组的一种或多种：抗生素、抑制感染的药物、抑制炎症反应的药物。

说明书

甘珀酸或其盐在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体地涉及甘珀酸或其药学上可接受的盐在制备治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的药物中的应用。

背景技术

[0002] 败血症或脓毒血症是一种对重度感染的全身性的高强度的炎症反应。它与内毒素血症的区别在于患者血液中不仅有大量的内毒素,而且有病源微生物。内毒素血症的动物模型一般是通过直接注射细菌内毒素来形成，由于这个模型并不引起动物感染,因此不能有效复制败血症的各种体征而不被认为是理想的败血症模型。所以,目前最常用的并被广泛接受的败血症或脓毒血症动物模型是通过结扎阑尾并造成穿孔而引起严重腹腔感染来建立。

[0003] 败血症或脓毒血症至今仍是医院内重症病房病人的主要致死原因。例如:败血症在台湾每年致死约1000人.在美国有750,000人患败血症,其中20%的败血症病人死亡。在中国医院内感染的患者中败血症发病率高达10%左右。目前败血症或脓毒血症的治疗方法主要是支持性的,并且经常无效。因此,继续寻找有效的治疗办法十分必要。

[0004] 数个世纪以来，甘草在传统医学中被用于治疗类似胃溃疡，肝炎和支气管炎的炎症性疾病。甘草的抗炎作用归功于其主要成分甘草酸。有证据表明甘草酸在流感，肝炎，毒血症，肺部感染和肠炎的动物模型中有益。用琥珀酸替代甘草酸中的葡糖醛酸产生新的分子称为甘珀酸（carbenoxolone,CBX)。甘珀酸盐是一种用于治疗食道溃疡和炎症的处方药。甘珀酸与甘草酸的生物效应有所不同。比如，甘草酸不能阻断缝隙连接通道，对缺血动物没有保护作用，而甘珀酸可以有效地抑制缝隙连接通道并保护新生鼠脑部缺血损伤。而到目前为止，还没有报道甘珀酸（盐）是否对患致死性的败血症的动物有保护作用。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种已知化合物－甘珀酸或其药学上可接受的盐在制备治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的药物中的新用途。

[0006] 本发明的第一方面提供了一种甘珀酸或其药学上可接受的盐的用途，其用于制备治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的药物。

[0007] 在另一优选例中，所述全身性的感染或全身性的炎症性疾病针对选自下组的疾病或症状：败血症、脓毒血症、由细菌或细菌成分引起的炎症性疾病。

[0008] 在另一优选例中，所述全身性的感染或全身性的炎症性疾病为败血症和/或脓毒血症。

[0009] 在另一优选例中，所述药物还用于抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的活性。

[0010] 在另一优选例中，所述药物为组合物。

[0011] 在另一优选例中，所述组合物中甘珀酸或其药学上可接受的盐的含量为0.001－99.9wt％，按组合物的总重量计。

[0012] 在另一优选例中，所述组合物中甘珀酸或其药学上可接受的盐的含量优选为0.01－95wt％，更优选0.1－90wt％，按组合物的总重量计。

[0013] 在另一优选例中，所述甘珀酸或其药学上可接受的盐是天然分离的或化学合成的。

[0014] 在另一优选例中，在使用所述药物之前、同时或之后，配合使用其他治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的活性物质。

[0015] 在另一优选例中，所述药物的施用对象为哺乳动物，优选人类。

[0016] 在另一优选例中，所述药物的剂型选自：口服剂型、注射剂或冻干剂。

[0017] 在另一优选例中，所述药物的剂型为注射剂。

[0018] 在另一优选例中，注射给药方式包括：静脉注射，肌肉注射，皮下注射，腔内注射。

[0019] 在另一优选例中，所述药物包括：

[0020] (i)甘珀酸或其药学上可接受的盐；

[0021] (ii)药学上可接受的载体。

[0022] (iii)任选的一种或多种其他治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的活性物质。

[0023] 在另一优选例中，所述活性物质选自下组的一种或多种：抗生素、抑制感染的药物、抑制炎症反应的药物。

[0024] 在另一优选例中，所述的抑制感染的药物是激素类药物。

[0025] 在另一优选例中，所述的抑制炎症反应的药物是激素类药物。

[0026] 本发明的第二方面提供了另一种甘珀酸或其药学上可接受的盐的用途，其用于制备

[0027] (a)抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的抑制剂；和/或

[0028] (b)治疗由双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶介导的疾病的药物。

[0029] 在另一优选例中，所述抑制剂或药物还用于治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病。

[0030] 本发明的第三方面提供了一种治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的方法，所述方法包括步骤：给予需要的对象施用安全有效量的甘珀酸或其药学上可接受的盐。

[0031] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

[0032] 图1显示了甘珀酸钠的施用量分别为1.2和3.0毫克/公斤体重时败血症动物的存活率。

[0033] 图2显示了甘珀酸钠的施用量为6.0毫克/公斤体重时败血症动物的存活率。

[0034] 图3显示了细菌脂多糖对巨噬细胞内双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的表达和磷酸化的刺激作用。

具体实施方式

[0035] 发明人经过广泛深入的研究，意外地发现已知化合物甘珀酸或其药学上可接受的盐对全身性的感染或全身性的炎症性疾病，特别是对败血症和脓毒血症具有明显的治疗作用，且几乎没有毒副作用，可安全有效地治愈上述疾病，由此发明人开发了可用于制备治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病特别是败血症和脓毒血症的药物。在此基础上完成了本发明。

[0036] 甘珀酸或其药学上可接受的盐对全身性的感染或全身性的炎症性疾病的治疗活性及应用

[0037] 本发明提供了甘珀酸或其药学上可接受的盐在治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病，特别是在治疗败血症和脓毒血症中的新用途，本发明中甘珀酸或其药学上可接受的盐，或者含有此类化合物作为活性成分的组合物，能有效地起到治疗败血症和脓毒血症的效果。

[0038] 不限于理论，本发明甘珀酸或其药学上可接受的盐可通过如下机理治疗败血症和脓毒血症：

[0039] 通过抑制细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的活性。细菌内毒素引起的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的活性增加是重度炎症反应的关键环节，细菌脂多糖可以刺激炎症细胞（巨噬细胞）内双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的表达（PKR）和磷酸化（P-PKR），甘珀酸或其药学上可接受的盐可以抑制由细菌脂多糖激发的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的表达和磷酸化，从而抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的活性。

[0040] 因此，甘珀酸或其药学上可接受的盐，以及含有甘珀酸或其药学上可接受的盐作为活性成分的组合物可用于制备抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的抑制剂或治疗由双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶介导的疾病的药物。此外也可以用于制备治疗败血症和脓毒血症的药物，以有效治疗目前支持性治疗方法所无法治愈的败血症和脓毒血症。

[0041] 药物及施用方法

[0042] 本发明所述的药物可以是组合物（药品），其含有有效量的甘珀酸或其药学上可接受的盐，药学上可接受的载体或赋性剂，以及任选的其他治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的活性物质。

[0043] 如本文所用，术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。如本文所用，术语“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。

[0044] 如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。

[0045] 本文所述的甘珀酸或其药学上可接受的盐可以经天然分离得到或通过化学合成得到。

[0046] 本发明的组合物中，甘珀酸或其药学上可接受的盐的有效成分占组合物总重量的0.001-99.9wt％；优选为组合物总重量的0.01-95wt％，较优选为0.1-90wt％，余量为药学上可接受的载体以及其它添加剂等物质。

[0047] 在本发明的一个优选实施方式中，所述药物除可以是适宜口服给药的各种剂型（例如包括片剂、胶囊、丸剂等）外，还可以是各种外用给药制剂或其它胃肠道外给药制剂，如注射剂。

[0048] 本发明的药物还可以做成冻干制剂。在使用前可对其进行稀释，按稀释物的总重量计，甘珀酸或其药学上可接受的盐的含量为0.01-99.9％。

[0049] 在本发明的另一个优选例中，每天一次或多次施用本发明的药物，例如1、2、3、4、5或6次。其中给药途径包括但并不限于：口服给药，注射给药，腔内给药，透皮给药；优选的注射给药包括：静脉注射，肌肉注射，皮下注射，腔内注射。

[0050] 在施用本发明的药物时，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是在熟练医师技能范围之内的。甘珀酸或其药学上可接受的盐的安全有效量通常至少约0.5mg/千克体重/天，而且在大多数情况下不超过约30毫克/千克体重/天。较佳地的剂量是约2-10mg/千克体重/天。

[0051] 在使用本发明的药物之前、同时或之后，还可以配合使用其他治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的活性物质。只要能达到治疗的目的，其他活性物质可选自常用的治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病的抗生素、抑制感染的药物或抑制炎症反应的药物。其中，抑制感染的药物为激素类药物。抑制炎症反应的药物为激素类药物。

[0052] 与现有技术相比，本发明的主要优点包括：

[0053] (i)本发明首次发现甘珀酸或其药学上可接受的盐能有效治疗全身性的感染或全身性的炎症性疾病，特别是治疗败血症和脓毒血症，从而为败血症和脓毒血症的治疗提供了新的途径。

[0054] (ii)本发明提供了含有甘珀酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的组合物，该组合物对于治疗败血症和脓毒血症非常有效，能治愈目前支持性治疗方法所无法治愈的败血症和脓毒血症。

[0055] (iii)本发明运用细胞生物学方法，揭示了甘珀酸或其药学上可接受的盐治疗败血症和脓毒血症的机理：通过抑制由细菌脂多糖激发的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的表达和磷酸化，从而抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的活性，从而有效治疗败血症和脓毒血症。

[0056] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何被提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

[0057] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

[0058] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

[0059] 实施例1甘珀酸钠剂量依赖性的提高患败血症小鼠的存活率

[0060] 试剂：甘珀酸钠购自Sigma-Aldrich公司（甘珀酸钠商品号：C4790）。

[0061] Balb/C小鼠 败血 症模 型：根据 阑尾 被结 扎并 穿孔（cecal ligation and puncture,CLP）方 法来 建 立，建 立方 法 详见 文献 J.Vis.Exp.(62),e3926,doi:10.3791/3926(2012)。动物存活时间从手术完成开始计算。

[0062] 给药方法：将甘珀酸钠溶于生理盐水，并按以下所描述的剂量通过腹腔注射。第一次给药是CLP后24小时。然后每隔24小时给药一次。总共3次。剂量分别是每公斤体重1.2、3.0、和6.0毫克。容积是0.2毫升。

[0063] 对照组只注射相同容积的生理盐水。

[0064] 图1和图2为不同的实验组。图1显示1.2和3.0毫克/公斤体重的甘珀酸钠分别将败血症动物在第八天的存活率从21%提高到50%和57%。图2显示6.0毫克/公斤体重的甘珀酸钠将败血症动物的存活率从42%提高到85%。这些结果表明甘珀酸钠可以治愈患严重败血症小鼠。

[0065] 实施例2甘珀酸钠抑制细菌内毒素引起的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的活性

[0066] 小鼠腹腔巨噬细胞收集和培养的方法参照以下文献：((a)Biochemical Pharmacology,81,9,1152-1163，(b)Nature488,670-674。(c)PLoS One.2011Feb8;6(2):e16945.doi:10.1371/journal.pone.0016945。(d)J.Vis.Exp.(62),e3926,doi:10.3791/3926(2012))。

[0067] 对细胞的干预是在杜尔伯科极限必需培养基中进行并持续16小时。细菌脂多糖的浓度是0.5微克/毫升（细菌脂多糖商品号：L2630,Sigma-Aldrich,U.S.A.)。甘珀酸钠的浓度是10微摩。细胞内双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的表达和磷酸化是通过蛋白印迹法来确定。双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的总量是用一种抗双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的抗体(商品名：鼠抗鼠蛋白激酶R单克隆抗体。商品号:SC-6282,生产商：Santa Cruz Biotechnology)来检测。磷酸化的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶是用一种抗磷酸化的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的抗体(商品名：兔抗人磷酸化的蛋白激酶R抗体。商品号:07-886。生产商：Millipore,U.S.A.)来检测。图3显示细菌脂多糖可以刺激巨噬细胞内双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的表达（PKR）和磷酸化（P-PKR）。而甘珀酸钠可以显著抑制由细菌脂多糖激发的双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的表达和磷酸化。这些结果表明甘珀酸可以抑制双链核糖核酸依赖的蛋白质激酶的活性。

[0068] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。