治疗奶牛乳房炎的中药方剂及其提取物和制剂

摘要

本发明公开了一种治疗奶牛乳房炎的中药方剂及其提取物和制剂，中药方剂按重量份计包括蒲公英100～200份、赤芍100～200份和连翘100～200份，配方合理，遵循了中医对奶牛乳房炎的治则，并符合中药“九畏和十八反”的配伍原则，各成份配伍后具有协同效应，能够在体外抑制奶牛乳房炎的主要致病菌，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌；将中药方剂制成提取物，并与中药透皮促进剂配伍制成搽剂，制成的搽剂透皮性好，透皮速率达到1.6599～1.9303，对临床型奶牛乳房炎和奶牛隐性乳房炎的治疗效果好，对临床型奶牛乳房炎治愈率达到80%，并且还具有稳定性好、安全性高、无神经系统毒性和无皮肤毒性等特点。

权利要求

1.治疗奶牛乳房炎的制剂，其特征在于：所述制剂为搽剂，每100mL所述搽剂由如下组分组成，100~200g蒲公英的水提物、100~200g连翘的水提物、100~200g赤芍的水提物、冰片

2~4g、丙二醇2~10mL、薄荷醇0~8g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.1~0.3mL，余量为体积分数50%的乙醇；

所述蒲公英水提物的制备方法如下：准确称取配方量的蒲公英，切碎，然后加入水煎煮，过滤，收集滤液，再用体积分数为60~70%的乙醇沉淀，收集滤液，滤液回收乙醇，最后用体积分数为80~85%的乙醇沉淀，过滤，滤液回收乙醇，得蒲公英水提物；

所述赤芍水提物的制备方法如下：准确称取配方量的赤芍，加水煎煮，收集煎煮液，得赤芍水提物；

所述连翘水提物的制备方法如下：准确称取配方量的连翘，加入水煎煮，收集煎煮液，得连翘水提物。

2.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于：每100mL所述搽剂由如下组分组成，100g蒲公英的水提物、200g赤芍的水提物、200g连翘的水提物、冰片4g、丙二醇6mL、薄荷醇4g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.2mL，余量为体积分数50%的乙醇。

3.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于：每100mL所述搽剂由如下组分组成，150 g蒲公英的水提物、100 g赤芍的水提物、100 g连翘的水提物、冰片4 g、丙二醇9 mL、薄荷醇5 g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.3mL，余量为体积分数50%的乙醇。

4.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于：每100mL所述搽剂由如下组分组成， 100 g蒲公英的水提物、150 g赤芍的水提物、100 g连翘的水提物、冰片4 g、丙二醇6 mL、薄荷醇4g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.1mL，余量为体积分数50%的乙醇。

说明书

治疗奶牛乳房炎的中药方剂及其提取物和制剂

技术领域

[0001] 本发明属于兽用中药领域，涉及治疗奶牛乳房炎的中药方剂，还涉及中药方剂的提取物和由提取物制成的制剂。

背景技术

[0002] 中医药是中华民族在与疾病长期斗争的过程中积累的宝贵财富。在继承发扬中医药优势特色的基础上，充分利用现代科学技术，推动中医药现代化和国际化，以满足时代发展和民众日益增长的医疗保健需求，是历史赋予中国科研工作者们的责任。中国国务院16个部门联合发布《中医药创新发展规划纲要（2006～2020年）》中指出，以中药为基础的相关产品如保健品、日用品、化妆品、食品添加剂、农药、兽药、饲料添加剂等的开发研究是中医药创新发展的优先领域之一。

[0003] 奶牛乳房炎是其乳腺组织受到物理、化学、微生物等致病因子刺激所发生的一种炎性变化，引起乳房局部血液循环障碍、乳腺组织病理损伤，导致奶牛泌乳机能受损，生殖机能失调。奶牛乳房炎在奶牛养殖生产中的发病率高、造成损失大，是奶牛最常见多发的顽疾，被列为奶牛的四大疾病之一。奶牛乳房炎的危害表现在：（1）感染率、发病率高（资料报道，全球约有2.2亿头奶牛，其中l/3的奶牛患有各种类型的乳腺炎；国内的发病率在20～70%之间，国外的发病率约为25～60%）；（2）乳房炎降低奶产量（可降低奶量10%～15%），并降低牛奶品质和营养价值；（3）乳房炎严重影响奶牛的利用年限，一些牛无法治愈而被淘汰；同时，还会造成奶牛延长产后发情和妊娠时间；（4）对病牛的治疗费用，以及增加护理所需额外的劳动力开支等；（5）影响人体健康：乳房炎病牛乳汁含大量病原微生物及其产生的毒素，以及经治疗后造成药物残留，危害人类健康。

[0004] 但由于奶牛乳房炎病原的复杂性，给此病的预防和治疗带来了很大的困难。长期以来，对奶牛乳房炎的治疗主要采用抗生素或化学合成药物，给药方式采用肌肉、静脉注射、局部给药、乳房灌注或乳房封闭疗法。随着药物的长期使用、以及耐药性增加，一些治疗药物的疗效降低愈来愈明现，而且药物残留已引发了的食品公共卫生问题。

[0005] 由于中药的药理功能不仅对病原和病状具有干扰、抑制作用，更重要的是中药还具有调节动物机体的免疫、内分泌和代谢机能等。如中药具有促进血液循环、刺激泌乳的药理作用，能提高奶牛的奶产量。而且，大部分中药系植物源性天然药物，不会影响乳成分，更不存在因药物残留带来的公共卫生问题。因此，推广应用中草药治奶牛乳房炎不但是畜牧业可持续发展的要求，也足发展绿色食品和提高人民生活质量的需要。

[0006] 目前，兽医临床上用于治疗奶牛乳房炎的药物，无论是抗生素、化药，还是中药，在其使用中都存在不同程度的弊端。乳室注射操作不方便，并对乳头、乳管也有刺激；静脉注射对药物的剂型、操作要求较高；肌肉注射会产生强烈的应激反应；中药内服受动物依从性的限制，并且药物的生物利用度低。在我国，虽然一些中药被用来治疗奶牛乳房炎，但传统的治疗奶牛乳房炎的中药方剂多数是口服煎剂或散剂，或外用制剂，其剂型落后，生产工艺落后，科技含量不高，其治疗效果起伏不定、也不甚理想。因此，在兽医临床上亟需一种疗效确切、安全低毒、无残留、勿需口服、注射途径给药，且使用方便的治疗奶牛乳房炎的药物。

[0007] 经皮给药是指经皮肤给药而起全身治疗作用的控释制剂，无肝脏的首过效应和不受胃肠道消化酶的破坏对药物降解等作用，有维持较长作用时间、降低药物毒副作用和不良反应、维持稳定而持久的血药浓度从而提高疗效的优点。可见经皮给药是一种极有前途的剂型，尤其是高效、安全的中药渗透促进剂，已成为第3代药物制剂开发研究的中心内容之一。

[0008] 因此，把传统的中医中药优势与现代药物制剂技术结合，研制新制剂——搽剂，将在奶牛乳房炎防治方面发挥更大的作用。

发明内容

[0009] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种安全、不影响牛乳品质的治疗奶牛乳房炎的中药方剂；本发明的目的之二在于提供中药方剂的提取物；本发明的目的之三在于提供提取物的制备方法；本发明之四在于提供含有提取物的制剂，制成的制剂可用于兽医临床的治疗奶牛乳房炎。

[0010] 为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0011] 1．治疗奶牛乳房炎的中药方剂，按重量份计包括蒲公英100～200份、赤芍100～200份和连翘100～200份。

[0012] 优选的，按重量份计包括蒲公英200份、赤芍200份和连翘100份。

[0013] 本发明使用的中药具有如下功效：

[0014] 蒲公英为菊科多年生草本植物蒲公英（Taraxacum mongolicum Hand.Mazz）、碱地蒲公英（Taraxacum sinicum Kitag.）和异苞蒲公英（Taraxacum heterolepis Nakai et H.Koidz.）等多种同属植物的带根全草。味甘、微苦，性寒；入肝、胃经；具有清热解毒，消肿散结的功能。现代药物学研究表明，蒲公英具有抗菌抗病毒活性成分，对金色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌、流感病毒等具有抑制作用。

[0015] 赤芍为毛茛科植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）或川赤芍（Paeonia veitchii Lynch）的干燥根。赤芍味苦、性微寒，归肝经；具清热凉血、活血祛瘀、止痛功能。主治温毒发斑，吐血衄血，症瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡等。赤芍的现代药物学研究表明，赤芍具有提高网状内皮系统的吞噬功能和增强调理素活性，清除氧自由基，保护线粒体结构和功能正常，抗血小板聚集及抗血栓形成，显著镇静和一定的镇痛，并且在体外对痢疾杆菌、伤寒杆菌和溶血性链球菌有较强抑制等药理作用。

[0016] 连翘为木犀科植物连翘（Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl.）的干燥果实。味苦，性凉；入心、肺、肝、胆经；具有清热解毒、散结消肿的功能。用于温热、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬、风热感冒、温热初起、温热入营、高热烦渴、神昏发斑、热淋尿闭。现代药物学研究表明，连翘具有一定的抗菌活性，对葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、肺炎球菌、流感病毒等具有抑制作用。

[0017] 2.所述中药方剂的提取物。

[0018] 所述中药方剂的提取物可以用现有技术中制备蒲公英、赤芍和连翘水提取物的方法进行提取，最佳使用本发明提供的制备方法。

[0019] 3．所述提取物的制备方法，具体步骤如下：

[0020] a．蒲公英水提物的制备：准确称取配方量的蒲公英，切碎，然后加入水煎煮，过滤，收集滤液，再用体积分数为60～70%的乙醇沉淀，收集滤液，滤液回收乙醇，最后用体积分数为80～85%的乙醇沉淀，过滤，滤液回收乙醇，得蒲公英水提物；

[0021] b．赤芍水提物的制备：准确称取配方量的赤芍，加水煎煮，收集煎煮液，得赤芍水提物；

[0022] c．连翘水提物的制备：准确称取配方量的连翘，加入水煎煮，收集煎煮液，得连翘水提物；

[0023] d．合并制得的蒲公英水提物、赤芍水提物和连翘水提物，得中药方剂的提取物。

[0024] 4.含有所述提取物的制剂。

[0025] 本发明中可以将中药方剂或其提取物与药学上可接受的中药透皮促进剂制成直接喷雾的中药透皮制剂，如搽剂。

[0026] 使用透皮给药的透皮制剂既避免了胃肠道及肝的“首过效应”，提高了药物在体内的可预见性，又避免了药物直接注入乳池的弊端，最大限度的降低了药物在乳汁中的残留，使用方便，副作用小，而且符合“绿色、环保”的要求。与内服、注射等剂型相比，有投药安全、给药次数少，不受胃肠因素的影响、可产生预期的吸收作用与血药浓度等特点。

[0027] 优选的，所述制剂为搽剂。

[0028] 优选的，每100mL所述搽剂由如下组分组成，100～200g蒲公英的水提物、100～200g连翘的水提物、100～200g赤芍的水提物、冰片2～4g、丙二醇2～10mL、薄荷醇0～
8g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.1～0.3mL，余量为体积分数50%的乙醇。

[0029] 更优选的，每100mL所述搽剂由如下组分组成，100g蒲公英的水提物、200g赤芍的水提物、200g连翘的水提物、冰片4g、丙二醇6mL、薄荷醇4g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.2mL，余量为体积分数50%的乙醇。

[0030] 更优选的，每100mL所述搽剂由如下组分组成，150g蒲公英的水提物、100g赤芍的水提物、100g连翘的水提物、冰片4g、丙二醇9mL、薄荷醇5g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.3mL，余量为体积分数50%的乙醇。

[0031] 更优选的，每100mL所述搽剂由如下组分组成，100g蒲公英的水提物、150g赤芍的水提物、100g连翘的水提物、冰片4g、丙二醇6mL、薄荷醇4g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.1mL，余量为体积分数50%的乙醇。

[0032] 本发明的有益效果在于：本发明公开了治疗奶牛乳房炎的中药方剂，药用成分由连翘、赤芍和蒲公英组成，各成分配伍后具有协同效应，配伍遵循中医对奶牛乳房炎的治则，并符合中药“九畏和十八反”的配伍原则；组合后能够在体外抑制奶牛乳房炎的主要致病性病原菌——金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌；本发明还公开了中药方剂的提取物，含有中药组合物中的全部有效成分，并且药用成分含量高，将提取物利用现代中药制剂技术制成搽剂，使用冰片和薄荷醇中药透皮剂为促透剂，其安全性好，单次给药和多次给药对实验动物未见中毒或异常症状，也未出现死亡情况、无神经系统毒性和无皮肤毒性；并且所得搽剂质量稳定，在常温（25℃）、高温（40℃）、低温（4℃）下放置3个月后，制剂的外观性状、pH值、连翘苷的含量等均无明显变化，且微生物限度检查合格；该中药透皮剂的透皮性好，最大透皮速率达到1.9303；搽剂使用方便，通过皮肤给药，剂量可控；生物利用度高，给药次数少；吸收迅速，见效快；可以避免诸如胃肠道刺激、肝脏“首过效应”及半衰期短、必须多次给药等缺点；同时，最大限度的降低了药物在乳汁中的残留，副作用小，适用于不宜或不便口服、注射等方法投药的临床治疗，在防治奶牛乳房炎领域具有良好的应用前景。

[0033] 本发明的公开的搽剂制备方法简单，成本低廉，而且符合“绿色、环保”的要求，适于工业化大规模化生产。

具体实施方式

[0034] 下面将结合具体实施例，对本发明的优选方式进行详细的描述。

[0035] 实施例1

[0036] 治疗奶牛乳房炎的中药方剂，按重量份计由连翘100～200份、蒲公英100～200份和赤芍100～200份组成，方剂中连翘、蒲公英和赤芍均具有防治奶牛乳房炎的效果。

[0037] 为了提高有效药用成分的浓度及提高药物的利用效率，将中药制备成相应的提取物，具体如下：

[0038] 蒲公英水提物的制备方法：准确称取配方量的蒲公英，切碎，然后加入相当于蒲公英重量10倍的水，文火煎煮1小时，过滤；重复煎煮2次，合并3次滤液，然后加入乙醇至乙醇的体积分数为60～70%，冷藏4～8小时（2～6℃），过滤，收集滤液，滤液回收乙醇，然后再向滤液中加入乙醇至乙醇的体积分数为80～85%，冷藏过夜（2～6℃），过滤，滤液回收乙醇，然后制备成10g生药/mL，得蒲公英水提物，4℃保存，备用。

[0039] 赤芍水提物的制备方法：准确称取配方量的赤芍，加入相当于赤芍重量4倍的蒸馏水煮沸30分钟，过滤除渣，重复煎煮2次，合并3次煎煮液，然后隔水浓缩至10g生药/mL，得赤芍水提物，4℃保存，备用。

[0040] 连翘水提物的制备方法：准确称取配方量的连翘，加入相当于连翘重量12倍的蒸馏水煎煮1.5分钟，过滤，重复煎煮3次，合并煎煮液，减压浓缩至浓度为10g生药/mL，得连翘水提物，4℃保存，备用。

[0041] 将制备的蒲公英水提物、赤芍水提物和连翘水提物混合后获得中药方剂的提取物。

[0042] 实施例2

[0043] 为了方便给药，将实施例1中的方剂或中药方剂的提取物与药剂学上可接受的中药透皮促进剂制成透皮剂。本实施例以搽剂为例，制备治疗奶牛乳房炎的中药制剂，其配方和制备方法如下：

[0044] 配方Ⅰ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘100g的水提物，蒲公英100g的水提物，赤芍100g的水提物，冰片2.0g，1，2-丙二醇8.0mL，薄荷醇8.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.1mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0045] 搽剂的制备方法：取处方量的连翘水提物、蒲公英水提物和赤芍水提物，加入80mL体积分数为50%乙醇，充分搅拌使其完全溶解（如室温不能完全溶解，置37℃水浴超声波助溶），完全溶解后，4℃冷藏静置24小时以上，过滤，滤液加入0.03g颗粒活性炭，在温度为4℃条件下吸附24小时除去中药提取物中的致热源，过滤去掉活性炭；然后向除去热源的中药提取物中加入处方量的冰片、1，2-丙二醇、薄荷醇、对羟基苯甲酸乙脂，充分搅拌均匀，补加体积分数为50%的乙醇至总体积为95mL，再用乙醇胺调节pH至7.2～7.4，再补加体积分数为50%的乙醇至总体积为100mL，混匀，4℃静置24小时，分装，最后100℃流通蒸气灭菌30分钟，即得防治奶牛隐性乳房炎的搽剂。

[0046] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为0.8052。

[0047] 配方Ⅱ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘150g的水提物，蒲公英150g的水提物，赤芍150g的水提物，冰片3.0g，1，2-丙二醇5.0mL，薄荷醇7.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.2mL，余量是体积分数为50%的乙醇。

[0048] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0049] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为0.8873。

[0050] 配方Ⅲ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘200g的水提物，蒲公英200g的水提物，赤芍200g的水提物，冰片4.0g，1，2-丙二醇2.0mL，薄荷醇6.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.3mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0051] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0052] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为0.9149。

[0053] 配方Ⅳ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘150g的水提物，蒲公英100g的水提物，赤芍100g的水提物，冰片4.0g，1，2-丙二醇9.0mL，薄荷醇5.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.3mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0054] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0055] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为0.9389。

[0056] 配方Ⅴ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘100g的水提物，蒲公英150g的水提物，赤芍100g的水提物，冰片4.0g，1，2-丙二醇6.0mL，薄荷醇4.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.1mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0057] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0058] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为1.6861。

[0059] 配方Ⅵ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘100g的水提物，蒲公英100g的水提物，赤芍150g的水提物，冰片4.0g，1，2-丙二醇3.0mL，薄荷醇3.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.2mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0060] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0061] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为1.6599。

[0062] 配方Ⅶ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘200g的水提物，蒲公英100g的水提物，赤芍100g的水提物，冰片4.0g，1，2-丙二醇10.0mL，薄荷醇2.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.2mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0063] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0064] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为0.4954。

[0065] 配方Ⅷ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘100g的水提物、蒲公英200g的水提物、赤芍100g的水提物；冰片4.0g、1，2-丙二醇7.0mL、薄荷醇1.0g、对羟基苯甲酸乙脂1.0g、乙醇胺0.1mL、余量为体积分数为50%的乙醇。

[0066] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0067] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为0.6381。

[0068] 配方Ⅸ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘100g的水提物，蒲公英100g的水提物，赤芍200g的水提物，冰片4.0g，1，2-丙二醇4.0mL，薄荷醇0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.3mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0069] 的制备方法与实施例1相同。

[0070] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为0.5152。

[0071] 配方Ⅹ：制备100mL的搽剂，组分如下：连翘100g的水提物，蒲公英200g的水提物，赤芍200g的水提物，冰片4.0g，1，2-丙二醇6.0mL，薄荷醇4.0g，对羟基苯甲酸乙脂1.0g，乙醇胺0.2mL，余量为体积分数为50%的乙醇。

[0072] 搽剂的制备方法与实施例1相同。

[0073] 利用本配方制得的搽剂为棕黑色、有芳香气味、分散均匀的液状溶液；微生物限度检查合格，透皮速率为1.9303。

[0074] 将上述配方Ⅰ～Ⅹ制成的搽剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌进行体外抑菌活性试验，结果如表1-4所示。

[0075] 表1．配方Ⅰ～Ⅹ的中药制剂对金黄色葡萄球菌的抑菌作用

[0076]

[0077] 注：“+”表示有细菌生成，“—”表示无细菌生长。

[0078] 表2．配方Ⅰ～Ⅹ的中药制剂对大肠杆菌的抑菌作用

[0079]

[0080] 注：“+”表示有细菌生成，“—”表示无细菌生长。

[0081] 表3．配方Ⅰ～Ⅹ的中药制剂对无乳链球菌抑菌作用

[0082]

[0083]

[0084] 注：“+”表示有细菌生成，“—”表示无细菌生长。

[0085] 表4．中药方剂Ⅰ～Ⅹ对三种试验菌的MBC值

[0086]

[0087] 由表1-4可知，以配方Ⅹ、Ⅴ和Ⅳ的抑菌效果最好，对三种致病菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为125mg/mL、250mg/mL和125mg/mL，最低杀菌浓度（MBC）分别为125mg/mL、500mg/mL和250mg/mL。

[0088] 实施例3

[0089] 治疗奶牛乳房炎的搽剂的稳定性实验：将实施例2中配方Ⅰ～Ⅹ制备的搽剂进行常温留样和加速试验。结果表明，在常温（25℃）、高温（40℃）、低温（4℃）下放置3个月后，制剂的外观性状、pH值、连翘苷的含量等检查结果与制备初期相比均无明显变化，且微生物限度检查合格。

[0090] 实施例4

[0091] 治疗奶牛乳房炎中药搽剂的安全性实验

[0092] 1．家兔皮肤刺激性试验

[0093] 取体重体重为1.5±0.2Kg的成年健康家兔8只，随机分为4组，每组雌雄各半，即分别为完整皮肤组Ⅰ、完整皮肤组Ⅱ、破损皮肤组Ⅲ和破损皮肤组Ⅳ。完整皮肤组Ⅰ和完整皮肤组Ⅱ是将家兔背部两侧毛剪短后，用质量分数为5%的Na2S脱毛约50cm2左右，选脱毛24h后无破损皮肤家兔；破损皮肤组Ⅲ和破损皮肤组Ⅳ是在家兔在消毒皮肤后，用砂纸磨擦皮肤，以渗血为度，作为破损皮肤试验区。

[0094] 对涂抹部位有无红斑和水肿等情况进行评分，根据下列公式计算平均积分值，并进行刺激强度评价。多次给药的皮肤刺激性试验，还需观察涂抹部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况，并观察试验兔的活动、饮食、精神状态等，连续观察一周。

[0095] 公式：每组动物平均积分=Σ红斑积分+水肿积分/受试动物数

[0096] （1）单次给药的皮肤刺激性试验

[0097] 在家兔脱毛和破皮损皮肤后第2d，分别在完整皮肤组第Ⅰ和破损皮肤组第Ⅲ组的家兔左侧脱毛区涂抹配方Ⅹ制得的搽剂，每次涂搽2.0mL，同时在右侧涂2.0mL中药组合物的水提物的作为阴性对照，盖上一层纱布，用无刺激性胶布固定。每只动物分笼饲养，涂药后24小时用无菌温水清洗残留药物，清洗后分别在l小时、24小时、48小时和72小时时肉眼观察记录涂药部位有无红斑和水肿等情况（表5）。

[0098] （2）多次给药的皮肤刺激性试验

[0099] 分别在完整皮肤组第Ⅱ和破损皮肤组第Ⅳ组的家兔左侧脱毛区涂抹配方Ⅹ制得的搽剂，右侧涂抹中药组合物的水提物，每天涂药2次，每次2.0mL，涂药后用灭菌纱布固定，连续用药7天。在末次用药4小时后取下纱布，用无菌温水洗去残留药物，观察并记录涂抹部位有无红斑和水肿等情况（表5）。

[0100] 表5．本发明搽剂对家兔皮肤刺激性试验结果

[0101]组别 家兔（只） 红斑积分 水肿积分 平均积分 刺激强度
Ⅰ组 2 0 0 0 无刺激性
Ⅱ组 2 0 0 0 无刺激性
Ⅲ组 2 0 0 0 无刺激性
Ⅳ组 2 1 0 0.5 无刺激性

[0102] 结果表明，完整皮肤组Ⅰ和完整皮肤组Ⅱ家兔皮肤均未发现红斑和水肿现象，记0分；破损皮肤组Ⅲ破损皮肤组Ⅳ组家兔皮肤均未出现水肿，第Ⅲ组家兔皮肤未出现红斑现象，第Ⅳ组有1只家兔皮肤出现轻微红斑现象，但12小时内很快消退，记分为1，组内平均积分为（0+0+1+0）/2=0.5，说明本发明中药搽剂对皮肤无刺激性。

[0103] 2．家兔的安全性试验

[0104] 取体重体重为1.5±0.2Kg的成年健康家兔10只，随机分为5组，雌雄各半，即分别为低剂量完整皮肤组Ⅰ、高剂量完整皮肤组Ⅱ、低剂量破损皮肤组Ⅲ、高剂量破损皮肤组Ⅳ和对照组。完整皮肤组是在给药前24小时，将家兔背部两侧毛剪短后，用质量分数为5%的Na2S脱毛约50cm2左右；破损皮肤组是在家兔在消毒皮肤后，用砂纸磨擦皮肤，以渗血为度，作为破损皮肤实验兔。

[0105] 脱毛及破损皮肤后第2天，分别在家兔脱毛区涂抹配方Ⅹ制得的搽剂，第Ⅰ和第Ⅲ组每次涂抹2.0mL，第Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组每次涂抹5.0mL，涂药后盖上一层纱布，用无刺激性胶布固定。每只动物分笼饲养。给受试物24小时后，用温水或无刺激溶剂除去残留的受试物，去除受试物后1小时，24小时，48小时，72小时和第7天观察并记录动物的体温、皮肤毛发、眼和粘膜的变化、呼吸、中枢神经系统、四肢活动等及其他中毒表现，若有死亡动物，应及时进行尸检和肉眼观察，当有肉眼可见病变时，应进行病理组织学检查。

[0106] 结果显示，防治奶牛隐性乳房炎的搽剂单次给药和多次给药后，对家兔的皮肤均未出现红斑和水肿现象；不同给药剂量的皮肤急性毒性试验结果显示，各组的家兔的采食、体温、皮肤毛发、眼、粘膜、呼吸、中枢神经系统、及四肢活动等状况均正常，未见中毒或异常症状，更未出现死亡情况；表明无急性皮肤毒性，安全性良好。

[0107] 实施例5

[0108] 治疗奶牛乳房炎的搽剂的临床治疗试验

[0109] 1．对奶牛临床型乳房炎的治疗结果

[0110] 试验动物选自重庆市某奶牛场的临床型乳房炎患病奶牛，症状为乳腺患病区红、肿，表面温度升高，触之敏感，体积增大，泌乳量显著减少或停止，乳汁质量异常，呈浅黄或浅红色，乳汁稀薄或粘稠，或出现絮状物。选择出现此类症状的牛作为本试验治疗对象，但伴有严重全身感染症状的、超急性或复发的病牛除外。选出符合上述标准的45例病牛、66个乳区，随机分为3组，第1组采用中药透皮剂，共15头，选22个乳区，直接喷雾，平均每个乳区2mL，每天2次；第2组抗生素乳头灌注，共15头22个乳区，患病乳区灌注青霉素钠160万单位、链霉素100万单位，每天2次；第3组不用药对照，共15头22个乳区，不作任何治疗处理。

[0111] 三组试验牛用药前用温水清洗病牛乳区，用干毛巾擦干后，按组分别处理。

[0112] 根据临床症状和乳汁质量的改变综合判断药物的疗效，并计算各组乳房炎奶牛45天内的治愈率、有效率和无效率（表6）。

[0113] 临床痊愈：乳房红、肿、热、痛、硬结消失，乳汁肉眼观察乳汁均匀，无结块，奶产量回升；食欲、体温、精神等均恢复正常。

[0114] 有效：乳房红肿热痛明显好转，乳房肿块显著减少，发热症状消失，乳汁性状基本正常，乳汁无凝块或少量奶块，奶产量回升但没有达到发病前水平。

[0115] 无效：乳房红、肿、热、痛、硬结无明显改善或更严重，乳汁异常，奶产量下降；在治疗过程中病程未减。

[0116] 表6、中药透皮剂治疗临床型奶牛乳房炎的效果

[0117]

[0118] 由表6可知，中药透皮剂对临床型奶牛乳房炎的治愈率达到80%，与青霉素与链霉素乳头灌注治疗效果相当，表现出了较好的治疗效果。

[0119] 2．对奶牛隐性乳房炎的治疗结果（牛乳中体细胞数）

[0120] 自重庆市某奶牛场经兰州乳房炎检测试剂（LMT）检测，筛选出LMT阳性的隐性乳房炎奶牛60头作为试验动物，随机分为3组，每组20头，即：中药透皮剂试验组、抗生素乳头灌注组和对照组，药物使用同奶牛临床型乳房炎治疗，结果如表7所示。-1

[0121] 表7、中药透皮剂对牛乳中体细胞数（SCC）的影响（单位：10 万）[0122]