本发明公开了一种河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗的方法，包括亲本选择、培育和生殖调控、人工授精和孵化、仔稚幼鱼培育。杂交鱼具有父本和母本的优良特性，可实现杂交鱼苗规模化生产，有望杂交培育出沙塘鳢新品系（种），从而有效提高我国塘鳢鱼养殖经济效益。
1.河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗方法，其特征在于包括以下步骤：一)亲本选择；二)亲鱼培育和生殖调控；三)人工授精和孵化；四)仔稚幼鱼培育；
一)亲本选择：挑选出个体健壮，无病害、无伤残、体表无寄生生物、营养状况良好，1龄以上的河川沙塘鳢作为母本，规格为45g～120g；同样条件筛选符合要求的鸭绿沙塘鳢作为父本，规格为60g～150g；
二)亲鱼培育和生殖调控：将亲鱼个体按照雌雄比例分别放入室内的玻璃缸中培育，3
培育密度每缸15～25尾/m，溶氧维持在5mg/L以上，光照600～800Lux，循环微水流刺激，日换水1～2次；亲本培育期间以投喂无病害的活饵料小虾为主；河川沙塘鳢雌鱼水温控制在20℃～24℃，鸭绿沙塘鳢雄鱼水温控制在18℃～20℃；
三)人工授精和孵化：包括：1)授精准备；2)人工授精；3)洗卵；4)受精卵孵化
1)授精准备：观察亲鱼性腺发育状况，挑选雌鱼成熟度好，手感松软而有弹性，生殖突前段较饱满，轻压卵巢，取少量卵子于解剖镜下观察卵子成熟情况待用；挑选性腺成熟的雄鱼，通过腹部挤压法收集精巢内的精液，并用显微镜检查精子活力；整个挤卵过程在10min内完成；采精过程不能有水分或尿液掺入，时间控制在10min内；
2)人工授精：采用干法授精，向盛有精液的小瓷碗中挤入卵子，混匀完毕后加入精子激活液，倒于网盘上，授精过程要求在5min内完成，小瓷碗的碗口内径9cm，深度3.5cm；
3)洗卵：受精卵附着网盘10min后，用24±1℃的新鲜淡水洗卵2遍，把洗好的有受精卵的网盘浸泡于2ppm的亚甲基蓝溶液中消毒，同时挑去死卵，时间控制在10min；
4)受精卵孵化：河川沙塘鳢雌鱼×鸭绿沙塘鳢雄鱼受精卵为黏性卵，有油球，透明、纺锤形，卵黄分布在球体中央位置，受精卵盘在60×50×40cm的水缸中进行孵化，水温从23℃逐渐升至26℃，每24h上升1℃，溶解氧≥6mg/L，pH值6.5～7.5，光照在600～
2000Lux的孵化条件下，受精卵经336h左右孵化，仔鱼脱膜孵出；
四)仔、稚和幼鱼培育：仔鱼出膜平游后的12～24h之间开口喂食已消毒的60～80目大小过滤的枝角类，上午8点和晚上7点各投喂一次，投喂密度为1～3个/mL，仔鱼出膜后的14～25天之间投喂以40～60目过滤的枝角类或小型桡足类为主，投喂密度0.5～
2个/mL，60～80目的枝角类或丰年虫幼体为辅，投喂密度1个/mL；鱼苗孵化后，先在
60×50×40cm的水缸中培育20～25天，14天时分苗一次；当鱼苗生长至2cm，体表鳞片发3
育完成，特征斑纹清晰，转入10m 大池中投喂水蚯蚓，经15～20天培育成3cm左右规格鱼3
苗时投喂摇蚊幼虫或水蚯蚓，其投喂情况视吃食情况而定，苗种密度为300～400尾/m ；培育时水温25±1℃，溶氧维持在5mg/L以上，光强控制在1000～2000Lux之间。
2.根据权利要求1所述的河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗方法，其特征在于所述亲本选择的对象，河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)作为母本，鸭绿沙塘鳢(Odontobutis yaluensis)作为父本。
3.根据权利要求1所述的河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗方法，其特征在于鱼卵受精时，精子激活液配方如下：NaCl 2.6g/L，KCl 0.04g/L，Tris-HCl 0.24g/L，pH＝
4.根据权利要求1所述的河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗方法，其特征在于整个培育过程中所投喂的枝角类、小型桡足类用2ppm的土霉素、1％的NaCl溶液消毒10min。
5.根据权利要求1所述的河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗方法，其特征在于孵化条件水温从23℃逐渐升至26℃，每24h上升1℃，溶氧≥6mg/L，pH值6.5～7.5，光照
河川沙塘鳢与鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种鱼类远缘杂交方法，尤其涉及到河川沙塘鳢与鸭绿沙塘鳢不同种间鱼类杂交育种育苗方法，属于水产动物杂交育种技术领域。
背景技术
[0002] 河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)，隶属于鲈形目(Perciformes)、虾虎鱼亚目(Gobioidei)、沙塘鳢科(Odontobutidae)、沙塘鳢属(Odontobutis)，俗名蒲鱼、虎头鲨、虎头呆子、草婆鱼、土布鱼、乌草包等，是一种较为名贵的小型经济鱼类。常见个体50g左右，最大个体为175g。其主要分布于长江中、下游及沿江各支流，闽江水系，钱塘江水系，偶见黄河水系。河川沙塘鳢因其肉质细嫩、味道鲜美、肌间刺少，深受江、浙、沪、闽等地人们的喜爱。
[0003] 鸭绿沙塘鳢(Odontobutis yaluensis)，隶属于鲈形目(Perciformes)、虾虎鱼亚目(Gobioidei)、沙塘鳢科(Odontobutidae)、沙塘鳢属(Odontobutis)，主要分布在辽宁的辽河上游、鸭绿江、大洋河等流域。俗名瞎嘎子或瞎胖鱼，该鱼属于辽宁省特有的中小型溪流经济鱼类，常见个体在75g～150g，最大者达到250g以上。其肉质鲜美，深受北方市场的欢迎而供不应求。目前市场上主要是以捕捞野生资源为主，这导致自然资源量急剧下降，种质资源受到严重破坏。最终该鱼出现供不应求的局面，价格也逐年攀升。一般100g左右市场价格可达30～60元/kg，250g以上可达100～200元/kg。
[0004] 河川沙塘鳢分布广泛，野生资源较为丰富，且耐高温，但生长速度慢，个体较小；而鸭绿沙塘鳢在2004年已被列入中国物种红色名录，野生资源极其有限。自20世纪90年代初，江苏、浙江和上海等地先后开展了关于河川沙塘鳢人工繁育的尝试，并相继取得一定的成功。至今，河川沙塘鳢的人工繁殖已相对较为成熟，但是由于河川沙塘鳢不耐低温的生态习性，难以在北方推广。鸭绿沙塘鳢却因其独特的生态繁殖习性使得当前大规模人工繁殖技术难度较高，如该鱼产卵所需水温低、孵化时间长、鱼卵对环境条件要求较高等因素制约了鸭绿沙塘鳢人工繁殖技术的突破。若将河川沙塘鳢与鸭绿沙塘鳢这两种鱼杂交，从理论上不仅得到父母本的优良性状即个体大、生长快，还可在养殖地域范围上得到扩展，从而使得该杂交鱼在全国推广成为可能，因此，市场前景巨大。目前，在虾虎鱼亚目中，仅有塘鳢科的云斑尖塘鳢(♀)×线纹尖塘鳢(♂)杂交的报道。有关河川沙塘鳢与鸭绿沙塘鳢杂交育种尚未见报道。本发明的目的是提供一种河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢的杂交育种育苗方法，它能满足现有技术的上述要求。
发明内容
[0005] 本发明通过调控养殖环境水温、光照和激素刺激，加快亲鱼性腺在自然环境中的发育，人为刺激和控制鱼类中枢神经系统及内分泌系统，促使河川沙塘鳢雌鱼和鸭绿沙塘鳢雄鱼性腺发育同步，通过种间人工授精和孵化，培育杂交苗种。
[0006] 本发明的杂交育种方法，内容包括以下步骤：一）亲本选择；二）亲鱼培育和生殖调控；三）人工授精和孵化；四）仔稚幼鱼培育。
[0007] 一）亲本选择：挑选出个体健壮，无病害，无伤残、体表无寄生生物、营养状况良好，1龄以上的河川沙塘鳢作为母本，规格为45g～120g；同样条件筛选符合要求的鸭绿沙塘鳢作为父本，规格为60g～150g。
[0008] 二）亲鱼培育和生殖调控：将亲鱼个体按照雌雄比例分别放入室内60×50×40cm3
规格的玻璃缸中培育，培育密度每缸15～25尾/m，溶氧维持在5mg/L以上，光照600～
800Lux，循环微水流刺激，日换水1～2次；亲本培育期间以投喂无病害的活饵料小虾为主。
河川沙塘鳢雌鱼水温控制在20℃～24℃，鸭绿沙塘鳢雄鱼水温控制在18℃～20℃。
[0009] 三）人工授精和孵化：包括：1）授精准备；2）人工授精；3）洗卵；4）受精卵孵化[0010] 1）授精准备：观察亲鱼性腺发育状况，挑选雌鱼成熟度好，（标准为腹部外观膨大）手感松软而有弹性，生殖突前段较饱满，轻压卵巢，取少量卵子于解剖镜下观察卵子成熟情况待用；挑选性腺成熟的雄鱼（标准为生殖突微红），通过腹部挤压法收集精巢内的精液，并用显微镜检查精子活力；整个挤卵过程在10min内完成；采精过程不能有水分或尿液掺入，时间控制在10min内；
[0011] 2）人工授精：采用干法授精，向盛有精液的小瓷碗中挤入卵子，混匀完毕后加入精子激活液，倒于网盘上，受精过程要求在5min内完成，小瓷碗的碗口内径9cm，深度3.5cm；
[0012] 3）洗卵：受精卵附着网盘10min.后，用24±1℃的新鲜淡水洗卵2遍，把洗好的有受精卵的网盘浸泡于2ppm的亚甲基蓝溶液中消毒，同时挑去死卵，时间控制在10min内；
[0013] 4）受精卵孵化：河川沙塘鳢雌鱼×鸭绿沙塘鳢雄鱼受精卵为黏性卵，有油球，透明、呈纺锤形，卵黄分布在球体中央位置，受精卵网盘在60×50×40cm的水缸中进行孵化，水温从23℃逐渐升至26℃，每24h上升1℃，溶氧≥6mg/L，pH值6.5～7.5，光照在600～2000Lux的孵化条件下，受精卵经336h左右孵化，仔鱼脱膜孵出。
[0014] 四）仔、稚和幼鱼培育：苗种密度为2万尾/m3出膜平游后的12～24h内开口，喂食已消毒的60～80目大小的枝角类，上午8点和晚上7点各投喂一次，投喂密度为1～3个/mL，至出膜后的14～25天内投喂以40～60目的枝角类或小型桡足类为主，投喂密度0.5～2个/mL，60～80目的枝角类或丰年虫幼体为辅，投喂密度1个/mL；鱼苗孵化后先在60×50×40cm的水缸中培育20～25天，14天时分苗一次。当鱼苗生长至2cm，体表鳞
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片发育完成，特征斑纹清晰，转入10m 大池中投喂水蚯蚓，经15～20天培育成3cm左右规格鱼苗时投喂摇蚊幼虫或水蚯蚓，其投喂情况视吃食情况而定，苗种密度为300～400尾/
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m ；培育时水温25±1℃，溶氧维持在5mg/L以上，光强控制在1000～2000Lux之间；
[0015] 上述方法中，所述鱼卵受精时，精子激活液配方如下：NaCl2.6g/L，KCl0.04g/L，Tris-HCl0.24g/L，pH=8.0；
[0016] 在整个培育过程中所投喂的枝角类、小型桡足类用2ppm的土霉素、1%的NaCl溶液消毒10min。
[0017] 孵化条件水温从23℃逐渐升至26℃，每24h上升1℃，溶氧≥6mg/L，pH值6.5～7.5，光照600～2000Lux。
[0018] 本方法雌雄亲鱼成熟基本同步，杂交操作简便，受精率平均为80%以上；孵化率平均为60%以上；可实现杂交苗种规模化培育。同时杂交鱼苗的多项生物学指标优势明显大于同批的河川沙塘鳢自繁苗，如杂交苗口裂较大、生长快、适温范围广等优点，具有杂种优
