(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法

摘要

本发明公开了一种(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法，包括提取、分离纯化，以日本倒津公司LC-8A为制备色谱仪，以串联紫外-荧光检测器作为同时监测装置，与95%的甲醇作为流动相，对上述样品进行分离、纯化；紫外检测器的波长条件λ=350nm，荧光检测器的波长条件λex=390nm，λem=470nm。本发明得到的(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮具有优异的荧光性能，可以用于制作化学传感器材料和装饰材料，制成的化学传感器荧光性能优异。

权利要求

1.一种(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法，其特征是：包括下列步骤：(1)提取：取虎杖药材、粉碎，按1：5w/v，加入95％乙醇，浸泡12h；回流提取2次，每次1h，合并提取液，减压浓缩干燥，干浸膏研磨至粉末，加入石油醚-乙酸乙酯混合溶剂，混合溶剂中石油醚：乙酸乙酯＝1：1v/v，超声助溶、过滤、滤液干燥，得干燥物(Ⅰ)；干燥物(Ⅰ)按1：1.5w/w加入硅胶,减压浓缩干燥，得样品；

(2)分离纯化：将样品按干燥物(Ⅰ)：硅胶＝1：30w/w的比例干法上样，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱溶剂，石油醚：乙酸乙酯＝8：2v/v，收集含(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮洗脱液，减压浓缩至干，得干燥物(Ⅱ)，加入100％乙醇溶解，供制备HPLC分离用；

以日本倒津公司LC-8A为制备色谱仪，以串联紫外-荧光检测器作为同时监测装置，与

95％的甲醇作为流动相，对上述样品进行分离、纯化；紫外检测器的波长条件λ＝350nm，荧光检测器的波长条件λex＝390nm，λem＝470nm。

说明书

(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法。

背景技术

[0002] 中药 虎杖(Rhizoma polygoni cuspidati)系 蓼科 植物 虎杖 (Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)的干燥根及茎，具有祛风利湿、散淤定痛、止咳化痰等功效。虎杖学成分研究已较为深入,迄今从中分离到的化学成分主要有:蒽醌类、二苯乙烯类，如大黄素、大黄素-6-甲醚、大黄酚、大黄酸、白藜芦醇和白藜芦醇苷等。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种从中药虎杖中制备(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法。

[0004] 本发明的技术解决方案是：

[0005] 一种(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法，其特征是：包括下列步骤：

[0006] （1）提取：取虎杖药材、粉碎，按1：5w/v，加入95%乙醇，浸泡12h；回流提取2次，每次1h，合并提取液，减压浓缩干燥，干浸膏研磨至粉末，加入石油醚-乙酸乙酯混合溶剂，混合溶剂中石油醚：乙酸乙酯=1：1v/v，超声助溶、过滤、滤液干燥，得干燥物（Ⅰ）；干燥物（Ⅰ）按1：1.5w/w加入硅胶,减压浓缩干燥，得样品；

[0007] （2）分离纯化：将样品按干燥物（Ⅰ）：硅胶=1：30w/w的比例干法上样，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱溶剂，石油醚：乙酸乙酯=8：2v/v，收集含(22Z)-ETO洗脱液，减压浓缩至干，得干燥物（Ⅱ），加入100%乙醇溶解，供制备HPLC分离用；

[0008] 以日本倒津公司LC-8A为制备色谱仪，以串联紫外-荧光检测器作为同时监测装置，与95%的甲醇作为流动相，对上述样品进行分离、纯化；紫外检测器的波长条件λ=350nm，荧光检测器的波长条件λex=390nm，λem=470nm。

[0009] (22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮化学结构式为：

[0010]

[0011] 本发明方法简便，得到的(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮具有优异的荧光性能，可以用于制作化学传感器材料和荧光装饰材料，制成的化学传感器荧光性能优异。

附图说明

[0012] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

[0013] 图1是(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的纯品TLC色谱图。该化合物显强的蓝绿色荧光斑点。

[0014] 图2是(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的纯品荧光检测（FLD，λex=390nm，λem=470nm）RP-HPLC色谱图。

[0015] 图3是(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的纯品紫外检测（UVD，λ=350nm）RP-HPLC色谱图。

[0016] 图2、图3中样品浓度及进样量相同。

[0017] 图4是虎杖95%乙醇提取物样品荧光检测（FLD，λex=390nm，λem=470nm）色谱图。其中箭头指示(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮色谱峰。

[0018] 图5是虎杖95%乙醇提取物样品紫外检测（UVD，λ=350nm）色谱图。

[0019] 图4、图5中样品浓度及进样量相同。

[0020] 图6-图14是(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的核磁共振谱图（I-Ⅸ）。

具体实施方式

[0021] 一种(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮的制备方法，包括下列步骤：

[0022] （1）提取：取虎杖药材、粉碎，按1：5（重量/体积比，w/v）比例，加入95%乙醇，浸泡12h。回流提取2次，每次1h，合并提取液，减压浓缩干燥。干浸膏研磨至粉末，加入混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯，1：1，体积比），粉末：混合溶剂=1:50w/v左右；超声助溶、过滤、滤液干燥，得干燥物（Ⅰ）；干燥物（Ⅰ）按1：1.5（w/w）加入硅胶,减压浓缩干燥，得样品。

[0023] （2）分离纯化：将样品按干燥物（Ⅰ）：硅胶=1：30w/w的比例干法上样，以石油醚-乙酸乙酯（8：2体积比）为洗脱溶剂，收集含(22Z)-ETO洗脱液，减压浓缩至干，得干燥物（Ⅱ）。加入适量100%乙醇溶解，供制备HPLC分离用；上述干燥物与100%乙醇的用量比例为1：50w/v左右。

[0024] 以日本倒津公司LC-8A为制备色谱仪，以串联紫外(UVD，λ=350nm)-荧光检测器(FLD，λex=390nm，λem=470nm)作为同时监测装置，与95%的甲醇作为流动相，对上述样品进行分离、纯化。

[0025] (22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮（简称：(22Z)-ETO）为无色片状结晶，在UV(365nm)紫外灯下显高亮度蓝绿色荧光斑点(图5)，化学性质稳定，HPLC分析没有观察到顺反结构的变化。

[0026] 采用MS、13C NMR、1H NMR、HMBC、1H-1H COSY、DEPT、HSQC、ROESY进行结构分析。HR + 13ESI-MS给出分子量392.3057(M)，分子式C28H40O，不饱和度为9。 C NMR及DEPT(500MHz，CD3OD)（谱图I～III）谱给出28个碳信号，分别为6个甲基，6个亚甲基，10个次甲基(包括5个双键碳δ123.2，125.4，133.8，135.9，136.5)和6个季碳(其中含1个酮羰基碳δ202.2和3个双键碳δ167.8，125.9，157.8)，因此该化合物的分子式为C28H40O。

[0027] 1H NMR(500MHz，CD3OD)(谱图IV)δ(ppm)：0.85(3H，d，J=6.8Hz，H-26)，0.87(3H，d，J=6.8Hz，H-27)，0.96(3H，d，J=6.8Hz，H-28)，1.08(3H，d，J=6.7Hz，H-21)，1.01(3H，s，H-18)，1.02(3H，s，H-19)表明分子中存在六个甲基。δ5.26-5.29范围显示2个烯质子,其形状为类三重峰(triplet-like)（谱图V）,可以判断该处双键为顺式结构(Z)，且烯氢之间J=7.5,故可进一步确定该处双键立体构型为顺式(Z)。δ5.71(1H，s，H-4)；在较低场处有2个烯质子信号δ6.1(1H，d，J=9.5Hz，H-6)，δ6.7(1H，d，J=9.5Hz，H-7)。

[0028] 以Roesy谱对该化合物的立体结构进行分析，其母核立体结构如图1A所示。H-23与H-17呈Roesy相关，佐证C-22处双键为顺式结构（谱图VI）。

[0029] 根据以上分析，并综合分析lH-1H COSY，HMBC，HMQC所提供的结构信息，可确定该化合物的结构为(22Z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮((22Z)-Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one,22Z-ETO)。经 查新，确定该化合物为新化合物。

[0030] 表1.(22Z)-麦角甾-4，6，8，22-四烯-3-酮1H-NhIR、l3C-NMR数据(CD3OD)[0031]

[0032] 表2.(22Z)-麦角甾-4，6，8，22-四烯-3-酮1H-NMR及其相关谱解析（CD3OD)[0033]

[0034] 该化合物与已知化合物(22E)-Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one，22E-ETO)互为异构体，(22E)-ETO主要存在于在各种真菌，如猪苓、冬虫夏草等。(22Z)-ETO与1
(22E)-ETO的波谱数据相似(谱图XI～XIII)，其主要区别：(22E)-ETO的 HNMR谱在δ5.19-5.29范围烯质子呈现双二重峰，且2个烯质子偶合常数分别为J=15.3，15.1Hz，具反式结构特征。