一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法

摘要

本发明公开了一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法，其步骤：A、在花朵开始露白的时候，每个品种选择20朵开始露白的花，在花柄上挂吊牌并记录露白的日期，露白后记录花朵上的剩余花瓣数，计算花瓣脱落率；B、于头花露白后，选择植株，对植株所有的花器进行调查，统计灰霉病发病率和病情指数；C、计算草莓品种的感病性；感病性计算公式：Y=-0.248X+23.87+Z；D、抗性水平分类：根据不同草莓品种的感病性对其抗性水平进行分类。方法易行，操作简便，快速、准确并能大规模筛选鉴定草莓灰霉病抗性，适用于灰霉等腐生或弱寄生真菌的抗病性鉴定，具有鉴定结果稳定，精确性和准确性高，更适于遗传学研究的特点。

权利要求

1.一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法，其步骤是：

1)在花朵开始露白的时候，每个品种选择20朵开始露白的花，在花柄上挂吊牌并记录露白的日期，露白后7天记录花朵上的剩余花瓣数，计算花瓣脱落率，花瓣脱落率计算公式为：其中20为所调查的花朵数量；a为草莓花器的平均花瓣数；

2)于头花露白后14天，选择3株的植株，对三株植株所有的花器进行调查，统计灰霉病发病率和病情指数；

3)计算草莓品种的感病性；

感病性计算公式：Y = -0.248X + 23.87 + ZY:感病性；

X:花瓣7天脱落率；

Z:露白14天，病情指数在5级以上的花器官比例；

4)抗性水平分类：根据不同草莓品种的感病性对其抗性水平进行分类，分类标准如下：所述的花器灰霉病病情指数统计方法如下：

0级：花器健康无明显变色；

1级：萼片变红色面积小于10%；

3级：萼片变红色面积介于10-50%之间；

5级：萼片变红色面积介于50-100%之间或萼片变为棕褐色枯死的面积小于10%；

7级：萼片变为棕褐色枯死的面积大于10-100%。

说明书

一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及草莓品种鉴定技术领域，更具体涉及一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法。

背景技术

[0002] 灰霉病又称葡萄孢果腐病，是世界范围内最具毁灭性的病害之一。病原灰葡萄孢（Botrytis cinerea）是富克葡萄孢盘菌（Botryotinia fuckeliana）的无性型。灰葡萄孢是一种非专化性的死体病原菌，存在于上百种植物，主要是气候温暖的地区。灰葡萄孢在有些植物寄主的器官上可以产生病斑，而在其他寄主上作为弱寄生菌或腐生菌生长时，在寄主衰老或死亡前保持潜伏或休眠状态。

[0003] 花是灰葡萄孢侵染草莓果实的主要途径。因为花是开放的，易被侵染。分生孢子容易侵染花瓣、雄蕊和雌蕊，但是不侵染萼片。衰败的花器官是菌丝体侵染发育中果实（花托）的主要来源。果实也能被花瓣中的菌丝体所侵染，果实成熟时，病原菌在果实上迅速定殖、出现症状和产生孢子。但一般认为分生孢子对健康果实的直接侵染不太重要(Braui,P.G.and Sutton,J.C.1987.Inoculum sources of Botrytis cinerea in fruit rot of strawberry in Ontario.Can.J.Plant pathol.9:1-5)。

[0004] 由于灰葡萄孢的腐生特性，采用常规的抗性鉴定方法很难对草莓品种的灰霉病抗性水平进行准确鉴定。为此，发明一种准确有效的灰霉病抗性鉴定方法非常重要。

发明内容

[0005] 由于灰霉菌的腐生和弱寄生特性，目前尚没有能对草莓灰霉病抗性进行有效鉴定的方法。本发明的目的是在于提供了一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法，方法易行，操作简便，快速、准确并能大规模筛选鉴定草莓灰霉病抗性，进一步的杂交育种或分子标记辅助育种提供了技术支持，更适用于灰霉等腐生或弱寄生真菌的抗病性鉴定，具有鉴定结果稳定，精确性和准确性高，更适于遗传学研究的特点。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

[0007] 一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法（鉴定草莓对灰霉病抗性的方法），包括以下步骤：

[0008] A、在花朵刚开始露白的时候，每个品种选择20朵刚开始露白的花，在花柄上挂吊牌并记录露白的日期。露白后7天记录花朵上的剩余花瓣数，计算花瓣脱落率。花瓣脱落率计算公式为：

[0009]

[0010] 其中20为所调查的花朵数量；a为草莓花器官的平均花瓣数。

[0011] B、于头花露白后14天，选择3株有代表性的植株，对三株植株所有的花器进行[0012] 调查，统计灰霉病发病率和病情指数；

[0013]

[0014] C、计算草莓品种的感病性；

[0015] 感病性计算公式：Y=-0.248X+23.87+Z

[0016] Y:感病性；

[0017] X:花瓣7天脱落率；

[0018] Z:露白14天，病情指数在5级以上的花器官比例。

[0019] D、抗性水平分类：根据不同草莓品种的感病性对其抗性水平进行分类，分类标准[0020] 如下：

[0021]

[0022] 所述的花器灰霉病病情指数统计方法如下：

[0023] 0级：花器官健康无明显变色；

[0024] 1级：萼片变红色面积介于0-10%；

[0025] 3级：萼片变红色面积介于10-50%之间；

[0026] 5级：萼片变红色面积介于50-100%之间或萼片变棕褐色枯死的面积为0-10%；

[0027] 7级：萼片变为棕褐枯死的面积为10-100%。

[0028] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0029] 1.现有草莓抗病育种过程中通过观察果实和花器的灰霉病发病情况对各品种的灰霉病抗性进行鉴定，田间鉴定过程中植株的发病情况易受环境条件的影响，抗性鉴定结果不稳定。本发明根据草莓花器露白7天后花瓣的脱落率对草莓品种的灰霉病抗性进行鉴定。草莓花器露白7天后花瓣的脱落率与植株的花器结构有关，受植物相应基因控制，具有遗传稳定性不易受环境条件的影响。

[0030] 2.现有草莓抗病育种过程中需要对草莓果实的灰霉病病情指数进行调查，需要等到果实成熟后才能进行相应调查，耗费时间长。由于灰霉菌通过草莓花器侵染果实的特性，而花瓣脱落速度与果实的发病率显著负相关。本发明通过统计花器露白7天后花瓣的脱落率来反映草莓品种的灰霉病抗性，节省时间。

[0031] 3.现有的草莓抗病育种过程中需要对花器进行离体接种鉴定，耗费时间和人力。本发明可以在现有的育种圃内进行，不需进行人工接种等。只需描述植株的花器露白7天后花瓣的脱落率和花器官感病性这两项指标就可以确定品种的灰霉病抗性，具有节省人力物力的优势。

附图说明

[0032] 图1为草莓花器露白7天后花瓣脱落率与果实灰霉病发病率相关性分析。

[0033] 图1的结果显示草莓花器露白7天后花瓣脱落率与果实灰霉病发病率显著正相关，这映证了灰霉菌主要是从草莓花瓣侵染感染果实。同时也说明了，通过测定草莓花器露白7天后花瓣脱落率来反映草莓品种的灰霉病抗性的方法是可靠的。

具体实施方式

[0034] 实施例1：

[0035] 一种草莓灰霉病抗性鉴定的方法，其步骤是：

[0036] 1、植物材料：供试的灰霉菌不同抗性的草莓栽培品种为：甜查利、晶玉、晶瑶、丰香、红颊共5个品种；

[0037] 2、植物性状调查：每个品种选择20朵刚露白的花，用白色吊牌悬挂于花柄上，在吊牌上记录露白的日期。露白后7天、14天、21天、28天，分别记录花器上残留的花瓣数量，计算花瓣脱落率；

[0038] 3、花器露白后14天，采用5点取样法对花的发病情况进行调查。每个点选择3颗草莓植株，对其上的所有花朵发病情况进行调查统计；

[0039] 4、在果实完成转色后，采用5点取样法调查果实发病率。每个品种选择5个点，每点选择

[0040] 50个已转色的果实，调查果实发病情况；

[0041] 5、通过花器露白7天后花瓣脱落率和花器发病率分别计算不同草莓品种的感病性；根据各品种的感病性，将各个品种的灰霉病抗性水平分为免疫、高抗、中抗、中感和高感五种水平。

[0042] 草莓花器官灰霉病病情指数分级标准：

[0043] 0级：花器官健康无明显变色；

[0044] 1级：萼片变红色面积介于0-10%；

[0045] 3级：萼片变红色面积介于10-50%之间；

[0046] 5级：萼片变红色面积介于50-100%之间或萼片变棕褐色枯死的面积为0-10%；

[0047] 7级：萼片变为棕褐枯死的面积为10-100%。

[0048] 草莓果实灰霉病病情指数分级标准：

[0049] 0级：果实健康灰霉病侵染；

[0050] 1级：果实被灰霉病侵染的面积占整个果实面积的比例小于25%；

[0051] 2级：果实被灰霉病侵染的面积占整个果实面积的比例大于25%小于50%；

[0052] 3级：果实被灰霉病侵染的面积占整个果实面积的比例大于50%小于75%；

[0053] 4级：果实被灰霉病侵染的面积占整个果实面积的比例大于75%小于100%；

[0054] 试验结果与分析

[0055] 1、花瓣脱落情况

[0056] 表1、各草莓品种花器露白后不同时间的花瓣脱落率

[0057]

[0058] 由表1可以看出，草莓品种晶瑶的花瓣脱落率在花器露白7天后就已经达到99%，花器的绝大部分花瓣都已经脱落。晶玉、丰香、红颊的花瓣脱落率介于晶瑶与甜查利之间，第28天时所有调查品种的花瓣脱落率均达到90%以上。

[0059] 表2、不同草莓品种花器官发病情况

[0060]

[0061]

[0062] 草莓的花器受灰霉菌侵染发病会影响坐果率从而影响最终产量。由表2可以看出，草莓品种晶瑶、丰香、红颊的花器官易感病，灰霉菌易侵染晶瑶的花器并引起花器发病，而草莓品种晶玉和甜查利的花器则对灰霉菌侵染免疫。

[0063] 表3、不同草莓品种果实发病情况

[0064]

[0065] 由表3可以看出，草莓品种晶瑶、晶玉、丰香和红颊发病植株的比率都低于9%，而发病果实的比率都低于为4%；病情指数低于0.21；甜查利的果实发病较为严重，56%的植株上有果实发病，发病果实比例为19%，病情指数为11%。由此可见，甜查利的果实发病最为严重，晶瑶、晶玉、丰香和红颊发病轻。

[0066] 根据图1可知，对不同草莓品种花器露白7天后花瓣脱落率与果实发病率的相关性分析表明：草莓品种的果实发病率与花器露白7天后花瓣脱落率显著负相关（图1）。灰霉菌主要通过雄蕊、雌蕊和花瓣侵染草莓花器，在花器中潜伏，待果实感熟后感染果实。在开花后，花瓣的展开面积比雄蕊和雌蕊更大，易被灰霉菌侵染定殖，花器上花瓣的快速脱落有助于减少灰霉病通过花器官侵染果实的几率；同时，花器感染灰霉病会直接影响坐果，花器灰霉病病情指数在5级以上时不能正常坐果。因此在草莓灰霉病抗性鉴定过程中需综合考虑草莓花器官露白后7天花瓣脱落率和花器官的灰霉病抗性水平。为此，通过花瓣脱落率和花器官的抗病性综合计算植物的感病性，以此反映植物抗性水平的方法是合理的。

[0067] 感病性(Y)计算公式：Y=-0.247X+23.87+Z

[0068] Y:感病性；

[0069] X:花器露白7天后花瓣脱落率；

[0070] Z:花器露白后14天后，病情指数在5级以上的花器比例。

[0071] 表4、5个草莓品种抗病性评价

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[0074] 表5、草莓灰霉病抗性分级

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