一种制备虫菌结合物及提取该结合物多糖的方法

摘要

本发明公开了一种用益生菌寄生蜈蚣制备虫菌结合物及提取该结合物多糖的方法，该虫菌结合物制备的方法为：(1)冬虫夏草菌的培养；(2)结合物的制备：将菌液和蜈蚣虫混合，培养，即得蜈蚣和冬虫夏草菌结合物；进行多糖测定。所述虫菌结合物多糖的提取方法包括以下步骤：(1)溶解；(2)提取；(3)洗涤，再浓缩，冻干，粉碎，即得虫体结合物的多糖。由于本发明采取了上述技术方案，得到的虫菌结合物能够产生大量多糖类物质，实现电刺激后蜈蚣虫体的开发利用，提高多糖含量，有助于提高虫体的经济价值。

权利要求

1.一种制备虫菌结合物的方法，其特征在于所述虫菌结合物的制备方法为：

(1)、冬虫夏草菌的培养：将冬虫夏草菌用牙签挑取，放入PDY液体培养基活化，制备孢子，搜集孢子，配置菌液；

(2)、结合物的制备：将菌液和蜈蚣虫体数按照5～60ml：200～300条的比例，用喷壶将菌液均匀喷洒在虫体表面或者虫体浸泡在菌液中1～3分钟后，放置在15～25℃的环境中，培养7～15天，虫体3天后出现开始变黑，5天后菌丝开始形成白色菌丝体，7天后布满虫体，10天取出虫体，自然干燥，即得蜈蚣和冬虫夏草菌结合物；进行多糖测定。

2.一种如权利要求1所述虫菌结合物多糖的提取方法，其特征在于该提取方法包括以下步骤：(1)、冬虫夏草菌的培养：将冬虫夏草菌用牙签挑取，放入PDY液体培养基活化，制备孢子，搜集孢子，配置菌液；

(2)、结合物的制备：将菌液和蜈蚣虫体数按照5～60ml：200～300条的比例，用喷壶将菌液均匀喷洒在虫体表面或者虫体浸泡在菌液中1～3分钟后，放置在15～25℃的环境中，培养7～15天，虫体3天后出现开始变黑，5天后菌丝开始形成白色菌丝体，7天后布满虫体，10天取出虫体，自然干燥，即得蜈蚣和冬虫夏草菌结合物；

(3)、溶解：取50g干燥的虫菌结合物的菌粉，按菌粉：水的质量比为1∶25～35加去离子水3L；

(4)、提取：95℃水浴提取2h后，5000r/min，离心8～12min，取上清液，旋转蒸发浓缩至原体积的1/4；

(5)、洗涤：浓缩后的水提液，边搅拌边加入4倍的无水乙醇，充分搅拌后静置8～12h，

5000r/min离心8～12min，弃去上清液，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤2次，用最小体积的去离子水复溶沉淀，再浓缩，冻干，粉碎，即得虫体结合物的多糖。

说明书

一种制备虫菌结合物及提取该结合物多糖的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及到益生真菌的应用，具体涉及一种用益生菌寄生蜈蚣制备虫菌结合物及提取该结合物多糖的方法。

背景技术

[0002] 蜈蚣在我国大江南北均有分布，传统医学将蜈蚣用于疾病的预防和治疗已有两千余年历史，药用始见于《神农本草经》。蜈蚣头部有一对颚足内含有毒腺能够分泌毒液，这些毒液一方面在捕食时通过毒颚刺入并把毒液注入被捕食动物体内，使之麻痹甚至死亡，另一方面这些毒液有助于增强动物防御能力。然而，这些毒液应用于医学研究后发现：这些毒液具有中枢抑制及抗惊厥，改善微循环，防止心肌损伤，降低血黏度，促进胃肠运动和消化酶分泌，抗衰老等作用。蜈蚣取毒随之成了大家关心的话题，早期对蜈蚣取毒都是采用剪取蜈蚣的鳌足，然后研碎，用水或缓冲液提取，这些提取物仅能说是蜈蚣颚足的提取液，其纯度不高。随后，人们采用电刺激方法进行取毒，此法可以多次进行毒素提取，且纯度相对较高。但经多次刺激后动物免疫能力下降，导致大量死亡现象，致使大量动物尸体需要处理。这些虫体作为中药毒素使用其标准含量缺乏，动物尸体的深层次开发和利用成为迫切需要解决问题。益生真菌寄生虫体，转化虫体物质组成，产生的有益物质已多有报道，而且应用于临床实践，如家蚕幼虫制备僵蚕，蝙蝠蛾幼虫形成的冬虫夏草，蝉幼虫形成蝉花。这些都实现了虫菌之间结合，在此过程这些益生真菌分解虫体后产生多糖类物质，该物质对于增强人体免疫功能具有重要意义。由此，本发明为蜈蚣取毒后虫体处理提供一个有效处理方法，该方法能够增加虫体多糖含量。

发明内容

[0003] 本发明目的在于克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种用益生菌寄生蜈蚣制备虫菌结合物及提取该结合物多糖的方法。该结合产物能够产生大量多糖类物质，实现电刺激后蜈蚣虫体的开发利用，提高多糖含量，有助于提高虫体的经济价值。

[0004] 本发明的目的是这样实现的：

[0005] 本发明所述用益生菌寄生蜈蚣制备虫菌结合物的方法为：

[0006] (1)、冬虫夏草菌的培养：将冬虫夏草菌用牙签挑取，放入PDY液体培养基活化，制备孢子，搜集孢子，配置菌液；

[0007] (2)、结合物的制备：将菌液和蜈蚣虫体数按照5～60ml∶200～300条的比例，用喷壶将菌液均匀喷洒在虫体表面或者虫体浸泡在菌液中1～3分钟后，放置在15～25℃的环境中，培养7～15天，虫体3天后出现开始变黑，5天后菌丝开始白色菌丝体，7天后布满虫体，10天取出虫体，自然干燥，即得蜈蚣和冬虫夏草菌结合产物；进行多糖测定。

[0008] 本发明所述虫菌结合物多糖的提取方法包括以下步骤：

[0009] (1)、溶解：取50g干燥的虫菌结合物的菌粉，按菌粉∶水＝1∶25～35(质量比)加去离子水3L；

[0010] (2)、提取：95℃水浴提取2h后，5000r/min，离心8～12min，取上清液，旋转蒸发浓缩至原体积的1/4；

[0011] (3)、洗涤：浓缩后的水提液，边搅拌边加入4倍的无水乙醇，充分搅拌后静置8～12h，5000r/min离心8～12min，弃去上清液，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤2次，用最小体积的去离子水复溶沉淀，再浓缩，冻干，粉碎，即得虫体结合物的多糖。

[0012] 由于本发明采取了上述技术方案，得到的虫菌结合物能够产生大量多糖类物质，实现电刺激后蜈蚣虫体的开发利用，提高多糖含量，有助于提高虫体的经济价值。

附图说明

[0013] 图1是本发明所述虫菌结合物。

具体实施方式

[0014] 本发明所述用益生菌寄生蜈蚣制备虫菌结合物的方法为：

[0015] (1)、冬虫夏草菌的培养：将冬虫夏草菌用牙签挑取，放入PDY液体培养基活化，制备孢子，搜集孢子，配置菌液；

[0016] (2)、结合物的制备：将菌液和蜈蚣虫体数按照5～60ml∶200～300条的比例，用喷壶将菌液均匀喷洒在虫体表面或者虫体浸泡在菌液中1～3分钟后，放置在15～25℃的环境中，培养7～15天，虫体3天后出现开始变黑，5天后菌丝开始白色菌丝体，7天后布满虫体，10天取出虫体，自然干燥，即得蜈蚣和冬虫夏草菌结合产物；进行多糖测定。

[0017] 上述冬虫夏草菌可由菌种资源库购买得到。

[0018] 本发明所述虫菌结合物多糖的提取方法包括以下步骤：

[0019] (1)、溶解：取50g干燥的虫菌结合物的菌粉，按菌粉∶水＝1∶25～35(质量比)加去离子水3L；

[0020] (2)、提取：95℃水浴提取2h后，5000r/min，离心8～12min，取上清液，旋转蒸发浓缩至原体积的l/4；

[0021] (3)、洗涤：浓缩后的水提液，边搅拌边加入4倍的无水乙醇，充分搅拌后静置8～12h，5000r/min离心8～12min，弃去上清液，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤2次，用最小体积的去离子水复溶沉淀，再浓缩，冻干，粉碎，即得虫菌结合物的多糖。

[0022] 实施例1：

[0023] 按下列数量比备料

[0024] 菌液 5mL

[0025] 蜈蚣虫体数 200条

[0026] 将用喷壶将菌液均匀喷洒在虫体表面，然后放18℃，培养15天，虫体3天后出现开始变黑，5天后菌丝开始白色菌丝体，7天后布满虫体，10天取出虫体，自然干燥，即得蜈蚣和冬虫夏草菌结合产物。

[0027] 实施例2：

[0028] 按下列数量比备料

[0029] 菌液 5～15mL

[0030] 蜈蚣虫体数 200～300条

[0031] 讲上述菌液和虫体放入烧杯，不断晃动烧杯，混合均匀，持续1分钟，然后放18℃，培养7天，3天后菌丝开始白色菌丝体，5天后布满虫体，7天取出虫体，自然干燥，即得蜈蚣和冬虫夏草菌结合产物，进行多糖测定。

[0032] 实施例3：

[0033] 按下列数量比备料

[0034] 菌液 50～60mL

[0035] 蜈蚣虫体数 200～300条

[0036] 讲上述菌液和虫体放入烧杯，浸泡1分钟，然后放20℃，培养7天，虫体3天后菌丝开始白色菌丝体，7天后布满虫体，取出虫体，自然干燥，得到虫菌结合物，进行多糖测定。

[0037] 不同方法多糖生成含量均明显高于未用冬虫夏草菌处理虫体多糖含量，相比之下实施方案3效果更好，具体见下表：

[0038]类别 实施例1 实施例2 实施例3
多糖含量增加％ 25.17 21.24 0.63