穿琥宁注射液和制法

摘要

本发明涉及穿琥宁注射液和制法。具体地，本发明涉及一种药物组合物，其中包含：穿琥宁、碱金属盐、和注射用水。本发明还涉及制备该药物组合物的方法，其包括以下步骤：将碱金属盐等辅料溶解于适量注射用水中；将穿琥宁加至上述溶液中，搅拌使溶解；向溶液中加入约0.1～0.5%活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤脱炭；补加注射用水至全量，检查溶液的pH值，必要时用酸碱调节剂调节溶液的pH值至6.5～8.0范围内；使药液用0.4μm和0.22μm微孔滤膜过滤，将药液分装到玻璃瓶中，密封，115°C热压灭菌30min，即得。本发明制备得到的穿琥宁注射液具有良好的药学性质。

权利要求

1.一种溶液型的药物组合物，其中包含：穿琥宁、碳酸氢钠、L-半胱氨酸、羟丙基-β-环糊精、和注射用水；其中穿琥宁与碳酸氢钠的重量比为100：(12~17)，穿琥宁与L-半胱氨酸的重量比为100：(3~7)；穿琥宁与羟丙基-β-环糊精的重量比为100：(200~400)；穿琥宁在溶液中的浓度为0.1~10%。

2.根据权利要求1的药物组合物，其中穿琥宁与L-半胱氨酸的重量比为100：(4~6)。

3.根据权利要求1的药物组合物，其中穿琥宁与L-半胱氨酸的重量比为100：5。

4.根据权利要求1的药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为0.5~5%。

5.根据权利要求1的药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为1~3%。

6.根据权利要求1的药物组合物，其中以每100重量份的穿琥宁计，羟丙基-β-环糊精的量为250~350重量份。

7.根据权利要求1的药物组合物，其中以每100重量份的穿琥宁计，羟丙基-β-环糊精的量为280~320重量份。

8.根据权利要求1的药物组合物，其中以每100重量份的穿琥宁计，羟丙基-β-环糊精的量为300重量份。

9.根据权利要求1的药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为1.5~2.5%。

10.根据权利要求1的药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为2%。

11.根据权利要求1的药物组合物，其中还包含酸碱调节剂。

12.根据权利要求1的药物组合物，该药物组合物为溶液型药物组合物，其pH值为

6.5~8.0。

13.制备权利要求1-12任一项所述药物组合物的方法，其包括以下步骤：(a)将碳酸氢钠、L-半胱氨酸、羟丙基-β-环糊精溶解于适量注射用水中；

(b)将穿琥宁加至上述溶液中，搅拌使溶解；

(c)向溶液中加入0.1~0.5%活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤脱炭；

(d)补加注射用水至全量，检查溶液的pH值，用酸碱调节剂调节溶液的pH值至

6.5~8.0范围内；使药液用0.4μm和0.22μm微孔滤膜过滤，将药液分装到玻璃瓶中，密封，115℃热压灭菌30min，即得。

说明书

穿琥宁注射液和制法

技术领域

[0001] 本发明属医药技术领域，涉及一种用于治疗病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染的疾病的药剂，特别是涉及一种穿琥宁制剂，具体涉及一种稳定的穿琥宁注射液以及该注射液的制备方法。

背景技术

[0002] 穿琥宁，化学名称：14-脱羟11,12-二脱氢穿心莲内酯-3,19-二琥珀酸半酯单钾盐，英文名：Potassium Dehydroandrograpolide Succinate；分子式：C28H35KO10，分子量：570.68，其分子式如下以下式I(其在本发明中亦可称为式I化合物)：

[0003]

[0004] 现有临床上应用的穿琥宁制剂有冷冻干燥粉针剂、小容量水针剂和大容量输液剂，由于穿琥宁的稳定性通常存在问题，因此经典的还是以粉针剂的方式应用于临床，例如中国药典2005年版以及中国药典2010年版均已收载穿琥宁的原料和粉针剂，其中穿琥宁冻干粉针剂为白色或微黄色的冻干块状物或粉末，规格为每瓶20mg、40mg、100mg或200mg，而水针剂的稳定性特别是令人关注的。

[0005] 药理实验表明：(1)穿琥宁对细菌内毒素引起发热的家兔有较强的解热作用，能促进发热的消退，作用迅速并可维持4小时以上；(2)穿琥宁有较好的抗炎作用，能对抗由二甲苯或组织胺所引起毛细血管壁通透性增高，并对肾上腺素急性肺水肿有明显对抗作用；(3)穿琥宁能缩短戊巴比妥钠引起的白鼠睡眠潜伏期，延长其睡眠时间，还能加强阈下量的戊巴比妥钠作用，引起小白鼠睡眠，该实验结果提示本品有明显的镇静作用；(4)穿琥宁能明显地促进大白鼠肾上腺皮质功能，增加机体对病原体感染的应急能力；(5)经临床病原学诊断实验和组织培养灭活试验表明穿琥宁对流感病毒甲I型、甲III型、肺炎腺病毒(Adv)III型、IV型，肠合胞病毒及呼吸道合胞病毒(RSV)均有灭活作用。穿琥宁毒性小、无刺激性，静脉滴注LD50为675±30mg/kg。穿琥宁肌内或静脉给药后，在体内迅速吸收、分布，其吸收相半衰期(t1/2Ka)为18.90±12.12min，分布相半衰期(t1/2α)仅为1.3±0.3min。用药6小时后血药浓度明显下降，其消除相半衰期(t1/2β)为3.86±1.06小时，用药2天后可排出给药量的85%以上。肌注的生物利用度达94.2±32.9%，表明肌注后吸收利用较完全。

[0006] 穿琥宁在临床上用于病毒性肺炎，病毒性上呼吸道感染等。粉针剂的使用方法通常是：临用前加氯化钠注射液适量溶解。肌内注射，一次100mg，一日1～2次，小儿酌减或遵医嘱。静脉滴注，一日400～800mg，用氯化钠注射液分2次稀释后滴注，每次不得过400mg，小儿酌减，或遵医嘱。此外，据产品说明书记载，穿琥宁忌与酸、碱性药物或含有亚硫酸氢钠，焦亚硫酸钠为抗氧剂的药物配伍。

[0007] 现有技术中关于穿琥宁的稳定性，包括它的物理稳定性和化学稳定性问题均多有报道。常见的物理稳定性是溶解度问题，例如粉针在使用时在出现溶解性不足的情况发生，例如黄宝秀报道(黄宝秀，注射用穿琥宁沉淀现象的研究，黑龙江医药，2001，14(5):366)穿琥宁在与不同浓度/pH值的葡萄糖注射液配伍后有沉淀现象出现。据信穿琥宁药物分子结构中存在桥形共轭结构、α和β-不饱和内酯键，其水溶液容易发生水解，导致产品色泽加深，含量下降。常见的化学稳定性表现为杂质增加和/或含量下降，例如付春梅等(付春梅，刘三康，李章万，钱广生，穿琥宁原料药及其注射液的有关物质检查和含测定方法研究，药物分析杂志，2005，25(2):157)报道：“注射液稳定性考察发现，有关物质的峰面积明显增加，含量降低，市售多家产品在放置半年后含量只有标示量的80%左右，且有关物质的增加与含量降低不匹配，说明有关物质检查没有完全反映样品的分解产物……建议生产单位改进注射液生产工艺或制成粉针剂，以改善其稳定性。”

[0008] 因此，人们期待为临床提供一种在物理稳定性和/或化学稳定性方面具有良好性能的穿琥宁制剂，例如穿琥宁注射液。

发明内容

[0009] 本发明的目的在于为临床提供一种在物理稳定性和/或化学稳定性方面具有良好性能的穿琥宁制剂，例如穿琥宁注射液。本发明人发现具有本发明所述配方的穿琥宁注射液具有良好的物理稳定性和/或化学稳定性。本发明基于此发现而得以完成。

[0010] 为此，在本发明的第一个方面提供了一种呈液体的药物组合物，其中包含：穿琥宁、碱金属盐、和注射用水。

[0011] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中还包含半胱氨酸或其药用盐。

[0012] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述半胱氨酸或其药用盐选自：L-盐酸半胱氨酸、L-半胱氨酸、DL-半胱氨酸、D-半胱氨酸、DL-盐酸半胱氨酸。

[0013] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中还包括选自下列的环糊精：α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、三甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺甲基醚-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精。本发明人在试验中发现，上述β-环糊精的衍生物均具有不同程度的水溶性，例如在水中的溶解度(25°C)分别为：三甲基-β-环糊精31g/100ml水、二甲基-β-环糊精55g/100ml水、羟乙基-β-环糊精54g/100ml水、羟丙基-β-环糊精51g/100ml水、磺甲基醚-β-环糊精74g/100ml水、磺丁基醚-β-环糊精78g/100ml水、麦芽糖基-β-环糊精95g/100ml水。

[0014] 在本发明中使用的羟丙基-β-环糊精例如可以从市场容易地购得，例如是国药准字F20090001的药用辅料。其它辅料也容易地从市场获得。尽管羟丙基-β-环糊精在这些环糊精中的溶解性并不是最佳的，但是其出人意料地显示对于本发明式I化合物的化学稳定性有良好的改善作用。

[0015] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述的碱金属盐选自碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、或其组合。

[0016] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述的碱金属盐选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、或其组合。

[0017] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述的碱金属盐是碳酸氢钠。

[0018] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含：穿琥宁、碱金属盐、半胱氨酸或其药用盐、环糊精、和注射用水。

[0019] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与碱金属盐(其以碱金属离子计，下同)二者的摩尔比为1：(0.2～2.0)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与碱金属盐二者的摩尔比为1：(0.5～1.5)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与碱金属盐二者的摩尔比为1：(0.8～1.2)(如果其中碱金属盐使用的是碳酸氢钠，则此时穿琥宁与碳酸氢钠二者的重量比约为100：(10～20)，例如约为100：(11.7～17.7)，例如约为100：(12～17))。

[0020] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与半胱氨酸或其药用盐的重量比为100：(1～10)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与半胱氨酸或其药用盐的重量比为100：(2～8)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与半胱氨酸或其药用盐的重量比为100：(3～7)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与半胱氨酸或其药用盐的重量比为100：(4～6)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与半胱氨酸或其药用盐的重量比为约100：5。

[0021] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与环糊精的重量比为100：(100～500)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与环糊精的重量比为100：
(200～400)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与环糊精的重量比为100：
(250～350)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与环糊精的重量比为100：
(280～320)。根据本发明第一方面的药物组合物，其中穿琥宁与环糊精的重量比为约100：
300。

[0022] 根据本发明第一方面的药物组合物，其为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为0.1～10%(w/v)。根据本发明第一方面的药物组合物，其为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为0.5～5%(w/v)。根据本发明第一方面的药物组合物，其为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为1～3%(w/v)。根据本发明第一方面的药物组合物，其为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为1.5～2.5%(w/v)。根据本发明第一方面的药物组合物，其为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为约2%(w/v)。

[0023] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含：穿琥宁、碱金属盐、半胱氨酸或其药用盐、环糊精、和注射用水；其中以每100重量份的穿琥宁计，碱金属盐的量为10～20重量份(例如约为11.7～17.7重量份，例如约为12～17重量份)，半胱氨酸或其药用盐的量为1～10重量份(例如2～8重量份，例如约为3～7重量份，例如约为4～6重量份，例如约为5重量份)，环糊精的量为100～500重量份(例如约为200～400重量份，例如约为250～350重量份，例如约为280～320重量份，例如约为300重量份)；该药物组合物为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为0.1～10%(w/v)(例如为0.5～5%(w/v)，例如为1～3%(w/v)，例如为1.5～2.5%(w/v)，例如为约2%(w/v)。

[0024] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含：穿琥宁、碱金属盐、半胱氨酸或其药用盐、环糊精、和注射用水；其中以每100重量份的穿琥宁计，碱金属盐的量为12～17重量份，半胱氨酸或其药用盐的量为3～7重量份，环糊精的量为200～400重量份；该药物组合物为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为1～3%(w/v)。

[0025] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含：穿琥宁、碳酸氢钠、L-半胱氨酸、羟丙基-β-环糊精、和注射用水；其中以每100重量份的穿琥宁计，碳酸氢钠的量为10～20重量份(例如约为11.7～17.7重量份，例如约为12～17重量份)，L-半胱氨酸的量为1～10重量份(例如2～8重量份，例如约为3～7重量份，例如约为4～6重量份，例如约为5重量份)，羟丙基-β-环糊精的量为100～500重量份(例如约为200～400重量份，例如约为250～350重量份，例如约为280～320重量份，例如约为300重量份)；该药物组合物为溶液型药物组合物，其中穿琥宁在溶液中的浓度为0.1～10%(w/v)(例如为
0.5～5%(w/v)，例如为1～3%(w/v)，例如为1.5～2.5%(w/v)，例如为约2%(w/v)。

[0026] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中还包含酸碱调节剂(亦称为pH值调节剂)。根据本发明第一方面的药物组合物，其为溶液型药物组合物，其pH值为6.5～8.0。

[0027] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述的酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。在一个实施方案中，所述的酸碱调节剂是盐酸溶液或者氢氧化钠溶液，例如1M盐酸溶液或者1M氢氧化钠溶液。

[0028] 根据本发明第一方面的药物组合物，其为溶液型注射剂。

[0029] 根据本发明第一方面的药物组合物，其基本上是照以下步骤的方法制备得到：

[0030] (a)将碱金属盐、半胱氨酸或其药用盐、环糊精溶解于适量注射用水中；

[0031] (b)将穿琥宁加至上述溶液中，搅拌使溶解；

[0032] (c)向溶液中加入约0.1～0.5%活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤脱炭；

[0033] (d)补加注射用水至全量，检查溶液的pH值，必要时用酸碱调节剂调节溶液的pH值至6.5～8.0范围内(例如调节至7.0～7.5范围内)；使药液用0.4μm和0.22μm微孔滤膜过滤，将药液分装到玻璃瓶中，密封，115°C热压灭菌30min，即得。

[0034] 根据本发明第一方面的药物组合物，其中步骤(a)中适量注射用水可以是处方全量的50～95%的注射用水，例如可以是处方全量的70～95%的注射用水，例如可以是处方全量的80～90%的注射用水。

[0035] 进一步，本发明第二方面提供了制备本发明第一方面所述药物组合物的方法，其包括以下步骤：

[0036] (a)将碱金属盐、半胱氨酸或其药用盐、环糊精溶解于适量注射用水中；

[0037] (b)将穿琥宁加至上述溶液中，搅拌使溶解；

[0038] (c)向溶液中加入约0.1～0.5%活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤脱炭；

[0039] (d)补加注射用水至全量，检查溶液的pH值，必要时用酸碱调节剂调节溶液的pH值至6.5～8.0范围内(例如调节至7.0～7.5范围内)；使药液用0.4μm和0.22μm微孔滤膜过滤，将药液分装到玻璃瓶中，密封，115°C热压灭菌30min，即得。

[0040] 根据本发明第二方面的方法，其中步骤(a)中适量注射用水可以是处方全量的50～95%的注射用水，例如可以是处方全量的70～95%的注射用水，例如可以是处方全量的80～90%的注射用水。

[0041] 在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

[0042] 本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

[0043] 本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

[0044] 在本发明中式I化合物还将包括式I所示化合物可能存在的任一种单一异构体，或者式I所示化合物可能存在的任意2个以上的异构体以任意比例的混合物。

[0045] 本文所用的“药学可接受的辅料”指的是可用于配制药物特别注射用药物的辅料，其对生物体基本上没有不良影响，并且通常是生物体可耐受的。

[0046] 在本发明中，符号%，根据其所使用的语境，可以具有本领域技术人员容易理解的含义。例如在提及固形物含量时，该符号表示重量/体积的百分数(w/v，例如g/100ml)；又例如在提及冷冻干燥粉针剂中的“水含量”时，例如水含量在8%以下，此时该符号%表示重量/重量的百分数(w/w，g/100g)。一般而言，在固体分散在液体中时，%表示重量/体积百分数；在固体分散在固体中或者液体分散在固体中(例如粉针的含水量)时，%表示重量/重量百分数。在其它情况下，如无另外说明，符号%表示重量/重量百分数。

[0047] 在配制本发明的药液时，本领域技术人员公知，可使用例如约0.45um的微孔滤膜进行粗滤过滤，在将药液灌装到玻璃瓶中之前，可以使用例如约0.22um的微孔滤膜进行精滤过滤以除菌，必要时可以过滤多次。

[0048] 根据本发明的药物组合物，其为溶液型的注射剂即注射液。在一个实施方案中，该注射液为单剂量制剂(例如玻璃瓶装的注射液)，每一单位剂量中式I化合物的量可以例如但不限于约5mg、约10mg、约20mg、约40mg、约50mg、约75mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、或约500mg。

[0049] 穿心莲为爵床科植物穿心莲(Andrographispaniculata(Burm.F.)Nees)的干燥地上部分，秋初茎叶茂盛时采割，晒干。穿心莲又名春莲秋柳，一见喜，榄核莲、苦胆草、金香草、金耳钩、印度草，苦草等。有清热解毒、消炎、消肿止痛作用。主治细菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎和流行性感冒等，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种。该品种己收载于中华人民共和国2010版药典一部。

[0050] 已知穿心莲中包含以下化学组成：穿心莲内酯(又名穿心莲乙素，Andrographolide)、脱氧穿心莲内酯(又名穿心莲甲素，deoxyandrographolide)、新穿心莲内酯(又名穿心莲丙素，Neoandrographolide)、脱水穿心莲内酯(又名穿心莲丁素，deoxydidehydroandrographolide)。此外人们还将这些化合物经结构改造制备成它们的衍生物，例如：

[0051] 穿心莲内酯—(脱羟、脱氢)—>脱水穿心莲内酯—(双琥珀酸酯化、成碱金属盐)—>穿琥宁(半K盐)或炎琥宁(K-Na盐)，它们的化学结构区别如下：

[0052]

[0053] 以穿心莲内酯(Andrographolide)及其衍生物例如穿琥宁或炎琥宁为代表药物具有清热解毒、凉血消肿等功能。是治疗上呼吸道感染、急性菌痢、病毒性感冒等常用穿心莲制剂的主要有效成分。20世纪70年代初，国内开始将穿心莲的茎叶或全草提取后，制成了穿心莲片等普通口服制剂。普通制剂对细菌、病毒虽然县有一定的抑制作用，但因其主要有效成分不溶于水而威力不足。

[0054] 由于穿心莲内酯是从穿心莲中提取的有效成分，单体纯度高，产品质量和药理作用较穿心莲更具有优势。目前SFDA己批准生产穿心莲内酯片剂、胶囊、软胶囊、滴丸等口服剂型。其缺点是穿心莲内酯为二萜类内酯化合物，难溶于水，通常仅能口服给药。针对临床上病毒感染急症的需求，将其结构中引入不同的亲水基团，增强其水溶性制备成注射剂，提高疗效。在我国，自七十年代开始对穿心莲内酯水溶性衍生物进行研究，开发了一系列注射剂，其中最主要产品为穿琥宁和炎琥宁。

[0055] 穿琥宁是穿心莲内酯经酯化、脱水、成盐而制成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐；炎琥宁则是由穿琥宁与氢氧化钠或碳酸（氢）钠的反应而得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钠钾盐；临床上广泛用于治疗高热、呼吸道感染、儿童秋季腹泻、流行性腮腺炎等病毒性疾病，为中医院急诊科（室）必备纯中药制剂之一，打破了中药只能用来治疗慢性病的传统说法。目前穿琥宁己收载于中华人民共和国药典（二部）。近年来，随着该药的广泛应用，其不良反应时有发生。据国家药品不良反应监测中心近几年通报，有关穿琥宁或炎琥宁注射剂的主要不良反应为过敏性反应和血小板减少。具体分析不良反应产生的主原因有(1)个体差异（过敏性体质）造成；(2)穿心莲内酯稳定性差，容易发生内酯的水解、开环、异构化以及不饱和键的氧化。(3)初始原料（穿心莲内酯）的纯度不高，主要杂质为高分子植物蛋白、穿心莲内酯水解、氧化产物以及色素等，文献报道用活性炭脱色、用分子截流量5000的超滤膜进行超滤后可将小鼠单次静脉给药的LD50从757mg/kg提高到910mg/kg；(4)穿心莲内酯在酯化、脱水的过程中因生产工艺不稳定而造成产品质量不稳定。综上所述，虽然中药注射剂这一特性决定了穿琥宁或炎琥宁等品种或多或少的不良反应是不可避免，但提高产品质量纯度即可大幅度提高产品临床安全性也是一个不争的事实。

[0056] 在本发明中，本发明注射剂中式I化合物的含量和有关物质，以及原料药的含量和有关物质，均可以采用高效液色谱法(例如参见中国药典2010年版二部附录V D)测定，或者采用分光光度法测定。在一个示例性含量和有关物质的测定方法中，均可以采用如下具体的【HPLC法A】进行(在本发明上下文中，如未另外说明，测定各种制品中穿琥宁的含量和/或有关物质)。

[0057] 【HPLC法A】：

[0058] 照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定；

[0059] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05%磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至2.5±0.05)-甲醇(3:7)为流动相；检测波长为251nm。理论板数按脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯峰计算不低于3000；

[0060] 含量测定法：取本品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注人液相色谱仪，记录色谱图；另取脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(C28H36O10)的含量，与1.072相乘，即得；

[0061] 涉及穿琥宁原料的有关物质测定法：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相稀释制成每1ml含8μg的溶液作为对照溶液。照上述色谱条件，取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%；精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍；供试品溶液的色谱图中，如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(2.0%)；

[0062] 涉及穿琥宁制剂例如穿琥宁粉针的有关物质测定法：取装量差异项下的内容物适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含穿琥宁0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含穿琥宁8μg的溶液作为对照溶液。照上述色谱条件，取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%；精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍；供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(4.0%)。

[0063] 此外，还可以采用以下杨蕾等的文献方法(该方法在本发明中可称为【HPLC法B】)测定本发明组合物中的特定的杂质，即杂质1和杂质2：杨蕾，孔遥，袁军，HPLC测定穿琥宁注射液中的有关物质，华西药学杂志，2012，27(4):445～446。其中杂质1和杂质2可参考上述文献中记载的相对保留时间进行定位(定性)。

[0064] 在本发明上下文中，如未另外特别地说明，当测定各种组合物或者原料药中的穿琥宁含量以及有关物质总量时，使用【HPLC法A】；而当测定各种组合物或者原料药中的特定的杂质即杂质1和杂质2含量时，使用【HPLC法B】。

[0065] 在本发明中，式I化合物，以及它们的标准品，均可从市场购得，或者采用现有技术公开的方法制备。

[0066] 本发明提供的组合物可以有效地用于治疗病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染的疾病。

具体实施方式

[0067] 以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中。下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备组合物的方法。

[0068] 在下面制备各种组合物例如注射液的例子中，每批次样品的制备规模为1000ml，每瓶中所包含的式I化合物的量为100mg(各例子中所列配方为1瓶含量的量)；尽管现有产品中有多种包装规格的产品，例如有20mg/瓶、40mg/瓶、200mg/瓶，本领域技术人员容易通过上述100mg/瓶的配方获得上述多种装量规格的产品，例如在将药液分装到玻璃瓶中时，每瓶加倍分装药液，即可容易获得200mg/瓶的装量规格的产品。在下面制备各种组合物的例子中，在配液过程中，必要时使用pH调节剂(1M氢氧化钠溶液或者1M盐酸溶液)调节药液至pH值在7.0-7.5的范围内。

[0069] A、试验方法例部分

[0070] 试验例1：测定各注射液剂样品高温放置后的残余率

[0071] 本试验例中，测定各试验所得的注射液在40°C下放置6个月后，其中式I化合物的含量[40°C，6月，可称为高温平均含量，mg/ml，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20°C下处理相应时间时式I化合物的含量[20°C，6月，可称为常温平均含量，mg/ml，测定10瓶的平均值]的百分数，其可理解为残余百分数(%)，即可用下式计算：

[0072]

[0073] 其中，高温平均含量(mg/ml)和常温平均含量(mg/ml)是样品经【HPLC法A】测定并经计算得到的式I化合物的含量(10瓶的均值)，该残余百分数(%)的大小反映注射液中活性成分的变化情况，残余百分数(%)越大(越趋近于100%)则注射液经高温处理后其中活性成分保持更多，稳定性更好。

[0074] 试验例2：测定各注射液样品高温放置后的有关物质变化值

[0075] 本试验例方法中，以【HPLC法A】测定各试验所得的注射液在40°C下放置6个月后，其中总有关物质的量[40°C，6月，可称为高温有关物质，以%表示，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20°C下处理相应时间时总有关物质的量[20°C，6月，可称为常温有关物质，以%表示，测定10瓶的平均值]的差值，其可理解为总的有关物质变化值(%)，或可称为总有关物质变化值(%)，即可用下式计算：

[0076] 总有关物质变化值(%)=高温有关物质(%)—常温有关物质(%)

[0077] 对于类似于本发明组合物的产品，2010年版二部收载的穿琥宁原料以及注射用穿琥宁(粉针)有关物质限度分别为2%和4%，本发明注射液可参照粉针剂的限定，例如规定总有关物质的限定应低于4%。

[0078] 上述有关物质变化值(%)的大小反映注射液中杂质总量的变化情况，有关物质变化值(%)越大则注射液经高温处理后注射液中总杂质量更多，稳定性更差。由于有关物质变化值(%)由上述公式计算，因此该值为1%时，其亦表明有较大变化；例如注射液在20°C放置6月后总的有关物质为3%，而经测定经40°C放置6月处理后注射液有关物质变化值(%)为1%时，该40°C高温处理样品杂质含量就已临近不合格产品(>4%)的限度了。

[0079] 试验例3：测定各注射液样品高温放置后的特定杂质即杂质1和杂质2的变化值[0080] 本试验例方法中，以【HPLC法B】测定各试验所得的注射液在40°C下放置6个月后，其中杂质1和杂质2的量[40°C，6月，可称为高温杂质量，以%表示，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20°C下处理相应时间时杂质1和杂质2的量[20°C，6月，可称为常温杂质量，以%表示，测定10瓶的平均值]的变化百分数，其可用下式计算：

[0081]

[0082] 以及下式：

[0083]

[0084] 上述杂质变化百分数(%)的大小反映注射液中特定杂质即杂质1或杂质2的变化情况，杂质变化百分数(%)越大则注射液经高温处理后注射液中该杂质量增加越多，稳定性越差。

[0085] B、制备例部分：制备包含式I化合物的本发明注射液组合物

[0086] 制备例1、制备含穿琥宁的注射液

[0087] 配方：

[0088]式I化合物 100mg，
碳酸氢钠 15mg，
L-半胱氨酸 5mg，
羟丙基-β-环糊精 300mg，
注射用水 适量，加至5ml。

[0089] 制备方法：

[0090] (a)将碱金属盐、半胱氨酸或其药用盐、环糊精溶解于处方量的约85%注射用水中；

[0091] (b)将穿琥宁加至上述溶液中，搅拌使溶解；

[0092] (c)向溶液中加入约0.3%活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤脱炭；

[0093] (d)补加注射用水至全量，检查溶液的pH值，必要时用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.3；使药液用0.4μm和0.22μm微孔滤膜过滤，将药液分装到玻璃瓶中，密封，115°C热压灭菌30min，即得。

[0094] 在本发明中该制备例1的样品可简称为Ex1-01。

[0095] 在本制备例中，补充以下制备过程，作为补充制备例：

[0096] 补充制备例1：在不同的配方中，除了碳酸氢钠用量改为以下表第2行(mg行)所列用量外，处方中的其它要素以及制备工艺均同上述制备例1。表中第1行(No.行)为所得注射液样品编号，编号01的完整编号为Eb1-01，表示补充制备例1所得01号注射液，编号02的完整编号为Eb1-02，亦有类似含义。

[0097]No. 01 02 03 04 05 06
mg 5 9 12 17 20 25

[0098] 考察以上Ex1-01以及Eb1-01至Eb1-06各试样：

[0099] 外观：无色澄明液体。

[0100] 照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验并测试，结果：

[0101] 含量残余百分数(%)：Ex1-01、Eb1-03、Eb1-04各试样的残余百分数(%)均在95%～99%之间，例如Ex1-01的残余百分数为98.8%；而Eb1-01、Eb1-02、Eb1-05、Eb1-06各试样的残余百分数(%)均在75%～88%之间，例如Eb1-01、Eb1-02二者的残余百分数分别为77.5%、86.4%；

[0102] 总有关物质变化值(%)：Ex1-01、Eb1-03、Eb1-04各试样的总有关物质变化值(%)均在0.07%～0.21%之间，例如Ex1-01的总有关物质变化值(%)为0.18%；而Eb1-01、Eb1-02、Eb1-05、Eb1-06各试样的总有关物质变化值(%)均在0.86%～1.74%之间，例如Eb1-01、Eb1-02二者的总有关物质变化值(%)分别为1.13%、0.96%。

[0103] 此外，经测定，Ex1-01以及Eb1-01至Eb1-06各试样在高温处理前和高温处理后的pH值均在6.8～7.6之间，例如Ex1-01、Eb1-03二者在高温处理后的pH值分别为7.13、7.04。

[0104] 以上结果表明，本发明配方在碳酸氢钠用量为12～17重量份(相对于每100重量份穿琥宁计)范围内时，本发明注射液具有良好的稳定性，但是当碳酸氢钠用量偏离上述范围时，即使将药液的pH值均调节到6.5～8.0的范围内，亦显示出不能令人满意的稳定性。

[0105] 补充制备例2：在不同的配方中，除了半胱氨酸用量改为以下表第2行(mg行)所列用量外，处方中的其它要素以及制备工艺均同上述制备例1。表中第1行(No.行)为所得注射液样品编号，编号01的完整编号为Eb2-01，表示补充制备例2所得01号注射液，编号02的完整编号为Eb2-02，亦有类似含义。

[0106]No. 01 02 03 04 05 06
mg 0 1 3 7 10 15

[0107] 考察以上Eb2-01至Eb2-06各试样：

[0108] 外观：无色澄明液体。

[0109] 照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验并测试，结果：

[0110] 含量残余百分数(%)：Eb2-03、Eb2-04各试样的残余百分数(%)均在97%～99%之间，例如Eb2-03的残余百分数为98.6%；而Eb2-01、Eb2-02、Eb2-05、Eb2-06各试样的残余百分数(%)均在71%～89%之间，例如Eb2-01、Eb1-02二者的残余百分数分别为71.3%、84.6%；

[0111] 总有关物质变化值(%)：Eb2-03、Eb2-04各试样的总有关物质变化值(%)均在0.11%～0.20%之间，例如Eb2-03的总有关物质变化值(%)为0.17%；而Eb2-01、Eb2-02、Eb2-05、Eb2-06各试样的总有关物质变化值(%)均在0.7%～2.7%之间，例如Eb2-01、Eb2-02二者的总有关物质变化值(%)分别为2.64%、1.26%。

[0112] 此外，经测定，Eb2-01至Eb2-06各试样在高温处理前和高温处理后的pH值均在6.8～7.6之间，例如Eb2-01、Eb2-02二者在高温处理后的pH值分别为7.06、6.94。

[0113] 以上结果表明，本发明配方在L-半胱氨酸用量为3～7重量份(相对于每100重量份穿琥宁计)范围内时，本发明注射液具有良好的稳定性，但是当L-半胱氨酸用量偏离上述范围时，即使将药液的pH值均调节到6.5～8.0的范围内，亦显示出不能令人满意的稳定性。

[0114] 补充制备例3：照制备例1进行，不同的是将其中的L-半胱氨酸分别替换为等量的L-盐酸半胱氨酸、DL-半胱氨酸、D-半胱氨酸、DL-盐酸半胱氨酸，得到四个试样分别记为Eb3-01至Eb3-04；照制备例1进行，不同的是将其中的L-半胱氨酸分别替换为3重量份(相对于每100重量份穿琥宁计)的L-盐酸半胱氨酸、DL-半胱氨酸、D-半胱氨酸、DL-盐酸半胱氨酸，得到四个试样分别记为Eb3-05至Eb3-08；照制备例1进行，不同的是将其中的L-半胱氨酸分别替换为7重量份(相对于每100重量份穿琥宁计)的L-盐酸半胱氨酸、DL-半胱氨酸、D-半胱氨酸、DL-盐酸半胱氨酸，得到四个试样分别记为Eb3-09至Eb3-12。

[0115] 考察以上Eb3-01至Eb3-12各试样：

[0116] 外观：无色澄明液体。

[0117] 照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验并测试，结果：

[0118] 含量残余百分数(%)：Eb3-01至Eb3-12各试样的残余百分数(%)均在76%～87%之间，例如Eb3-01、Eb3-05的残余百分数分别为86.6%和82.3%；

[0119] 总有关物质变化值(%)：Eb3-01至Eb3-12各试样的总有关物质变化值(%)均在0.81%～2.25%之间，例如Eb3-03的总有关物质变化值(%)为1.57%。

[0120] 此外，经测定，Eb3-01至Eb3-12各试样在高温处理前和高温处理后的pH值均在6.8～7.6之间。

[0121] 以上结果表明，本发明配方在L-半胱氨酸用量为3～7相对重量份范围内时，本发明注射液具有良好的稳定性，但是当改用相当量的其它形式的半胱氨酸时，即使将药液的pH值均调节到6.5～8.0的范围内，亦显示出不能令人满意的稳定性，例如活性药物在高温处理时含量明显降低，而总杂质增加明显。

[0122] 补充制备例4：在不同的配方中，除了环糊精用量改为以下表第2行(mg行)所列用量外，处方中的其它要素以及制备工艺均同上述制备例1。表中第1行(No.行)为所得注射液样品编号，编号01的完整编号为Eb4-01，表示补充制备例4所得01号注射液，编号02的完整编号为Eb4-02，亦有类似含义。

[0123]No. 01 02 03 04 05 06
mg 0 100 200 400 500 600

[0124] 考察以上Eb4-01至Eb4-06各试样：

[0125] 外观：Eb4-03至Eb4-06各试样无色澄明液体，Eb4-01和Eb4-02有明显浑浊，表明不用环糊精时活性成分有不完全溶解的现象。

[0126] Ex1-01、Eb4-03至Eb4-06各试样在经历“0°C×24hr—>25°C×24hr”反复10次处置后，Ex1-01、Eb4-03和Eb4-04显示原有的无色澄明液体，但出人意料的是环湖精用量过大的Eb4-05和Eb4-06却明显出现有沉淀。显示环糊精的量为200～400重量份(相对于每100重量份穿琥宁计)时对药物的成型以及物理稳定性是非常有益的。

[0127] 照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验并测试，结果：

[0128] 含量残余百分数(%)：Eb4-03至Eb4-06各试样的残余百分数(%)均在97%～99%之间，例如Eb4-04的残余百分数为98.2%；而Eb4-01、Eb4-02各试样的残余百分数(%)均在78%～86%之间，例如Eb4-01的残余百分数分别为79.6%；

[0129] 总有关物质变化值(%)：Eb4-03至Eb4-06各试样的总有关物质变化值(%)均在0.04%～0.25%之间，例如Eb4-05的总有关物质变化值(%)为0.22%；而Eb4-01、Eb4-02各试样的总有关物质变化值(%)均在0.6%～1.3%之间，例如Eb4-01的总有关物质变化值(%)为1.24%。

[0130] 此外，经测定，Eb4-01至Eb4-06各试样在高温处理前和高温处理后的pH值均在6.9～7.7之间。

[0131] 补充制备例5：照制备例1进行，不同的是将其中的羟丙基-β-环糊精分别替换为等量的以下6种环糊精：三甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、磺甲基醚-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精，得到6个试样分别记为Eb5-01至Eb5-06；照制备例1进行，不同的是将其中的羟丙基-β-环糊精分别替换为200重量份(相对于每100重量份穿琥宁计)的以下6种环糊精：三甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、磺甲基醚-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精，得到6个试样分别记为Eb5-07至Eb5-12；

[0132] 照制备例1进行，不同的是将其中的羟丙基-β-环糊精分别替换为400重量份(相对于每100重量份穿琥宁计)的以下6种环糊精：三甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、磺甲基醚-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精，得到6个试样分别记为Eb5-13至Eb5-18。

[0133] 考察以上Eb5-01至Eb5-18各试样：

[0134] 外观：无色澄明液体；各试样在经历“0°C×24hr—>25°C×24hr”反复10次处置后，均显示原有的无色澄明液体状态。

[0135] 照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验并测试，结果：

[0136] 含量残余百分数(%)：Eb5-01至Eb5-18各试样的残余百分数(%)均在96%～99%之间，例如Eb5-01、Eb5-05的残余百分数分别为98.6%和97.3%；

[0137] 总有关物质变化值(%)：Eb5-01至Eb5-18各试样的总有关物质变化值(%)均在0.11%～0.35%之间，例如Eb5-03和Eb5-12的总有关物质变化值(%)分别为0.27%和
0.21%。

[0138] 此外，经测定，Eb5-01至Eb5-18各试样在高温处理前和高温处理后的pH值均在6.8～7.6之间。

[0139] 照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验，并用【HPLC法B】测定各注射液样品高温放置后的特定杂质即杂质1和杂质2的变化值，结果：

[0140] 杂质1变化百分数(%)：Eb5-01至Eb5-18各试样的杂质1变化百分数(%)均达183%～266%，例如Eb5-04、Eb5-13各试样的杂质1变化百分数(%)分别为183.7%和～
238%。但上文制备得到的具有本发明特征的试样Ex1-01、Eb1-03、Eb1-04、Eb2-03、Eb2-04、Eb4-03和Eb4-04，它们的杂质1变化百分数(%)均在23%～56%，例如Ex1-01、Eb2-04各试样的杂质1变化百分数(%)分别为33.2%和28.4%。

[0141] 杂质2变化百分数(%)：Eb5-01至Eb5-18各试样的杂质2变化百分数(%)均达168%～251%，例如Eb5-03、Eb5-11各试样的杂质2变化百分数(%)分别为193%和～214%。
但上文制备得到的具有本发明特征的试样Ex1-01、Eb1-03、Eb1-04、Eb2-03、Eb2-04、Eb4-03和Eb4-04，它们的杂质2变化百分数(%)均在21%～63%，例如Ex1-01、Eb2-03各试样的杂质2变化百分数(%)分别为47.4%和34.1%。可见，当使用特定的环糊精时可以有效地抑制注射液中特定杂质的生成。

[0142] 环糊精对穿琥宁的增溶性考察试验：

[0143] 向100ml水中边搅拌边添加穿琥宁使其溶解，至不溶时测得该100ml水中能够溶解最大量的穿琥宁量为基础溶解量(W0)；

[0144] 向上述溶液中，添加10g的三甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺甲基醚-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、或麦芽糖基-β-环糊精，搅拌使环糊精溶解，得到7种溶液；

[0145] 分别上上述7种溶液中边搅拌边添加穿琥宁并使其溶解，至穿琥宁不溶时测得第二次添加的穿琥宁的溶解量，该溶解量表征环糊精对穿琥宁的增溶量(W1)；

[0146] 以下式计算穿琥宁增溶百分数：穿琥宁增溶百分数(%)=W1/W0×100%。

[0147] 结果，羟乙基-β-环糊精、磺甲基醚-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精的穿琥宁增溶百分数均在213%～293%，例如麦芽糖基-β-环糊精的穿琥宁增溶百分数为243%；二甲基-β-环糊精、三甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、的穿琥宁增溶百分数均在83%～146%，例如羟丙基-β-环糊精的穿琥宁增溶百分数为115%。尽管本领域技术人员公知，环糊精对小分子化合物有通过包合作用而起到增溶并进而改善药物稳定性的可能，然而上述结果显示羟丙基-β-环糊精对穿琥宁的增溶效果相对于其它环糊精而言并不是特别的理想，然而从本发明上下文可见，当使用羟丙基-β-环糊精而非其它环糊精时可以显著有效地抑制注射液中特定杂质的量，这是任何理论都无法解释的。

[0148] 补充制备例6：对照试样制备及其与市售试样的考察

[0149] 对照试样1：照CN101380302A(中国专利申请号2008102305850，南阳普康)说明书实施例1的配方和制法制备得到的注射液。

[0150] 对照试样2：照CN101721359A(中国专利申请号2009101727544，辅仁怀庆堂)说明书[0059]至[0060]段所记载的配方和制法制备得到的注射液。

[0151] 对照试样3：市售品穿琥宁注射液(国药准字H20046670)。

[0152] 对照试样4：市售品穿琥宁注射液(国药准字H42023017)。

[0153] 以上对照试样1、2、3、4分别照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验并测试，结果：

[0154] 含量残余百分数(%)：对照试样1、2、3、4各试样的残余百分数(%)均在93%～97%之间，例如对照试样1的残余百分数为93.4%；

[0155] 总有关物质变化值(%)：对照试样1、2、3、4各试样的总有关物质变化值(%)均在0.83%～1.45%之间，例如对照试样2的总有关物质变化值(%)为1.23。

[0156] 此外，经测定，对照试样1、2、3、4各试样在高温处理前和高温处理后的pH值均在6.8～7.6之间。

[0157] 以上对照试样1、2、3、4分别照上文“A、试验方法例部分”方法进行高温处置的稳定性试验，并用【HPLC法B】测定各注射液样品高温放置后的特定杂质即杂质1和杂质2的变化值，结果：

[0158] 杂质1变化百分数(%)：对照试样1、2、3、4各试样的杂质1变化百分数(%)均达175%～250%，例如对照试样1的杂质1变化百分数(%)为197%；

[0159] 杂质2变化百分数(%)：对照试样1、2、3、4各试样的杂质2变化百分数(%)均达190%～267%，例如对照试样2的杂质2变化百分数(%)为241%；

[0160] 制备例2、制备含穿琥宁的注射液

[0161] 配方：

[0162]式I化合物 100mg，
碳酸氢钠 12mg，
L-半胱氨酸 7mg，
羟丙基-β-环糊精 200mg，
酸碱调节剂，适量 调节pH值7.0，
注射用水 适量，加至5ml。

[0163] 制备方法：参照制备例1的方法进行。

[0164] 制备例3、制备含穿琥宁的注射液

[0165] 配方：

[0166]式I化合物 100mg，
碳酸氢钠 17mg，
L-半胱氨酸 3mg，
羟丙基-β-环糊精 400mg，