注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂及其制备方法，所述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，其包含以重量份计的下述组分：更昔洛韦100～400份、右旋糖苷4010～50份、增溶剂5～50份、纳米载体材料10～100份和冻干骨架剂10～80份。制备方法包括如下步骤：将右旋糖酐40、增溶剂、更昔洛韦、纳米载体材料及冻干骨架剂按顺序依次加入注射用水中溶解，将溶液经逐级过滤后，经冷冻干燥得冻干制剂。本发明的方法中没有引入活性炭，避免了使用活性炭后造成将活性炭微粒引入制剂中从而对人体产生伤害的危险；另外，本发明的制剂pH为6～8，与血浆pH相近，避免了碱度过高对人体产生局部刺激性。

权利要求

1.一种注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，其包含以重量份计的下述组分：更昔洛韦

250份、右旋糖苷4010～40份、增溶剂30～40份、纳米载体材料60～80份和冻干骨架剂

30～80份；

所述增溶剂为羟丙基-β-环糊精；

所述纳米载体材料为聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物；所述纳米载体材料的数均分子量

600～2000。

2.根据权利要求1所述的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，其特征在于：所述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中还包括抗氧化剂，所述抗氧化剂的重量份为1-5份。

3.根据权利要求1所述的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，其特征在于：所述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂由以重量份计的如下组分组成：更昔洛韦250份、右旋糖苷

4010～40份、增溶剂30～40份、纳米载体材料60～80份、冻干骨架剂30～80份、抗氧化剂1-5份。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，其特征在于：所述冻干骨架剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、氯化钠、甘氨酸中的至少一种。

5.根据权利要求2或3所述的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，其特征在于所述抗氧化剂选自亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠中的至少一种。

6.制备权利要求2-5中任一项所述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的方法，包括下述步骤：向配液罐中加入注射用水并加热至50～60℃，称取权利要求2-5中任一项所述重量份的右旋糖酐40、增溶剂、抗氧化剂加入配液罐中，搅拌至溶解；称取权利要求2-5中任一项所述重量份的更昔洛韦加入上述药液中，搅拌至溶解；在搅拌下加入权利要求2-5中任一项所述重量份的纳米载体材料，继续搅拌至均匀；再加入权利要求2-5中任一项所述重量份的冻干骨架剂，搅拌使其溶解，得到溶液I，然后将溶液Ⅰ进行过滤，补加注射用水，使溶液Ⅰ中更昔洛韦的浓度为0.040～0.085g/ml，得到更昔洛韦的纳米囊溶液Ⅱ；将所述更昔洛韦的纳米囊溶液Ⅱ分装在西林瓶中，半加塞，经冷冻干燥得冻干制剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：在所述过滤前，还包括将所述溶液Ⅰ的温度降至大于等于40℃小于等于45℃的步骤。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述过滤的方法包括如下步骤：将所述溶液Ⅰ进行0.22μm孔径过滤，得到滤液a；再将滤液a进行截留分子量为10000道尔顿的超滤，得到滤液b；将滤液b进行0.22μm孔径过滤，得到滤液c，补加注射用水至溶液Ⅰ中更昔洛韦的浓度为0.040～0.085g/ml，得到更昔洛韦的纳米囊溶液Ⅱ。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述冷冻干燥包含以下步骤；①预冻：将分装好的药液置于-40℃预冻5～8小时；②温度降至－45℃，抽真空至15Pa以下；③升华：升温加热15～20小时至－20℃，保温10～18小时，至基本干燥；升温至－10℃，保温

2～3小时；升温至0℃保温2～3小时；升温至10℃，保温2～3小时；升温至20℃，保温

1～2小时；升温至25℃，保温1～2小时；升温至40℃，保温7小时；③继续抽真空2～4小时，压塞，得冻干制剂。

说明书

注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 更昔洛韦(GCV)，化学名称为9-(1,3-二羟基-2-丙氧基)-鸟嘌呤，是鸟嘌呤核苷衍生物，是一种广谱抗疱疹病毒药物，尤其对人巨细胞病毒的活性特别强，目前已成为防治巨细胞感染的首选药物。其原理为GCV进入细胞后迅速被病毒编码的蛋白激酶(胸苷激酶，TK)磷酸化为单磷酸GCV，然后经细胞激酶的作用生成二磷酸和三磷酸GCV。三磷酸GCV通过竞争性抑制病毒DNA多聚酶和掺入病毒DNA链中阻断病毒DNA的延长这两种方式抑制病毒复制而发挥其抗病毒作用。更昔洛韦不溶于水，在氢氧化钠溶液中溶解，现有注射剂pH值约12，属强碱性，对血管组织的刺激性较大，因此制备注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂具有重要的临床意义。

发明内容

[0003] 本发明的目的是提供一种能同时提高水中溶解性和稳定性的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂。

[0004] 本发明所提供的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，其包含以重量份计的下述组分：更昔洛韦100～400份、右旋糖苷4010～50份、增溶剂5～50份、纳米载体材料10～100份和冻干骨架剂10～80份。

[0005] 所述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，进一步可包含以重量份计的如下组分：更昔洛韦250份、右旋糖苷4010～40份、增溶剂30～40份、纳米载体材料60～80份和冻干骨架剂30～80份。

[0006] 为了增加制剂的稳定性，所述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中还可包括抗氧化剂。所述抗氧化剂的重量份可为1-5份。

[0007] 当然所述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂，也可仅由以重量份计的如下组分组成：更昔洛韦250份、右旋糖苷4010～40份、增溶剂30～40份、纳米载体材料60～80份、冻干骨架剂30～80份、抗氧化剂1-5份。

[0008] 本发明中，所述增溶剂选自聚维酮K30、聚维酮K15、环糊精、环糊精衍生物（如羟丙基-β-环糊精）、聚山梨酯类（如吐温-80）、司盘类（如司盘-80）、泊洛沙姆类（如泊洛沙姆188）中的至少一种，优选羟丙基-β-环糊精。

[0009] 本发明中，所述纳米载体材料选自聚乳酸、聚乙交酯、乙交酯与丙交酯的共聚物、聚羟基丁酸酯、聚羟基戊酸酯、聚碳酸酯、聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物、聚乙二醇单甲醚-聚丙交酯两嵌段共聚物中的至少一种，优选聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物。上述聚合物的数均分子量可为600～2000。

[0010] 本发明中，所述冻干骨架剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、氯化钠、甘氨酸中的至少一种，优选甘露醇。

[0011] 本发明中，所述抗氧化剂选自亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠中的至少一种，优选亚硫酸钠。

[0012] 本发明还提供了制备上述注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的方法。

[0013] 本发明所提供的制备注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的方法，包括以下步骤：

[0014] 向配液罐中加入适量注射用水（温度50～60℃），称取处方量的右旋糖酐40、增溶剂、抗氧化剂加入配液罐中，搅拌至溶解；称取处方量的更昔洛韦加入上述药液中，搅拌至溶解；在搅拌下加入处方量的纳米载体材料，继续搅拌3～5小时至均匀；再加入处方量的冻干骨架剂，搅拌使其溶解，得到溶液I，然后将溶液Ⅰ进行过滤，补加注射用水，使溶液Ⅰ中更昔洛韦的浓度为0.040～0.085g/ml，得到更昔洛韦的纳米囊溶液Ⅱ；所配溶液Ⅱ含量合格后，分装在10ml西林瓶中，半加塞，经冷冻干燥得冻干制剂。

[0015] 上述过程中，在所述过滤前，可包括将所述溶液Ⅰ的温度降至大于等于40℃小于等于45℃的步骤。通常初次加入的注射用水量为总注射用水量的80%。

[0016] 上述过程中，所述过滤的方法可包括如下步骤：将所述溶液Ⅰ进行0.22μm孔径过滤，得到滤液a；再将滤液a进行截留分子量为10000道尔顿的超滤，得到滤液b；将滤液b进行0.22μm孔径过滤，得到滤液c，补加注射用水至处方全量，得到更昔洛韦的纳米囊溶液Ⅱ。

[0017] 上述过程中，所述冷冻干燥包含以下步骤；①预冻：将分装好的药液置于-40℃预冻5～8小时；②温度降至－45℃，抽真空至15Pa以下；③升华：升温加热15～20小时至－20℃，保温10～18小时，至基本干燥；升温至－10℃，保温2～3小时；升温至0℃保温2～3小时；升温至10℃，保温2～3小时；升温至20℃，保温1～2小时；升温至25℃，保温1～2小时；升温至40℃，保温7小时；③继续抽真空2～4小时，压塞，得冻干制剂。

[0018] 与现有技术相比，本发明的优点是：

[0019] 1.本制剂的pH值为6～8，与血浆pH值相似，避免了现有更昔洛韦注射剂因强碱性造成的输入人体后血管刺激性较大的局部刺激副作用，提高人体耐受性，增加治疗作用，并可用于肌肉注射。其配制过程不需调节pH值，方便生产控制。

[0020] 2.本发明选用羟丙基-β-环糊精作为增溶剂。在普通更昔洛韦制备工艺中，一般的增溶剂无法使更昔洛韦完全溶于水中，基本上是根据调节pH来达到溶解更昔洛韦的目的，但在复溶过程中往往达不到注射剂澄清度的要求。本发明选用羟丙基-β-环糊精包合的药物就解决了这方面的弊端，不仅溶解速度快，而且能增加生物体对药物的吸收，有利于提高生物利用度，消除血管刺激性。此外，羟丙基-β-环糊精在人体内基本上不被分解代谢，也不积累，口服羟丙基-β-环糊精绝大多数随粪便排出体外，非肠道给药基本上全部随尿液排出体外，可降低药物对人体的毒副作用。

[0021] 3.选用聚乙二醇-聚乳酸嵌段作为生物可降解的纳米载体材料。聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物作为生物可降解的纳米载体材料，在形成乳状液和聚合固化纳米囊的过程中，药物即被包裹于纳米囊中或吸附于纳米囊表面，大大提高了更昔洛韦在水溶液中的溶解性和稳定性，保证了产量质量。相比没有加入纳米载体材料的普通制剂而言，在同等条件下的同类产品中稳定性更好，有效性更高。此外，由生物可降解的聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物作为纳米囊的载体，在人体内可以得到较快的降解，相对于不可降解的纳米载体材料，使更昔洛韦在体内的释药速率和有效利用率有了较大的提高。同时，生物可降解的纳米载体材料相对于单体的聚乳酸和聚乙二醇来说，聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的亲水性能大大提高，保证了制剂长期澄清度的合格，并使纳米囊药物的释药性能大大改善。

[0022] 4.将羟丙基-β-环糊精与聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(PELA)配合使用时，大大提高了更昔洛韦注射制剂的溶解度和稳定性，尤其是溶液状态的稳定性更加优良，使得更昔洛韦能够长期保持澄清度合格状态，羟丙基-β-环糊精作为增溶剂，可以起到使纳米囊保持较小粒径的作用，同时可用于纳米颗粒的长循环修饰，提高颗粒的载药量，并额外的提高更昔洛韦在体内的释药速率。

[0023] 5.工艺中采用冷却除杂精滤法，先将溶液的温度调节在45℃以下，使更昔洛韦中的某些大分子物质或杂质通过温度的降低而析出，使用0.22μm滤器循环过滤，去除析出的大分子物质、药液中存在的细菌和颗粒以及不溶性杂质，使药液中的细菌的残存量大大降低，提高制剂的稳定性。

[0024] 6.工艺中采用10000道尔顿分子量的超滤膜超滤，去除了内毒素和原料中可能存在的大分子物质，提高溶液的澄清度，进一步降低了除菌过滤前药液的微生物污染水平，提高了制剂的无菌保证水平，从而降低更昔洛韦冻干制剂的不良反应的发生率，提高了产品的安全性。

[0025] 7.本发明制备方法只需采用常规的工艺设备，就可规模化、高效率的生产，产品质量稳定，是一种独特的、低成本的工业化制备更昔洛韦制剂的方法。

具体实施方式

[0026] 下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

[0027] 下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

[0028] 下述实施例中所使用的更昔洛韦购自湖北葛店仁福药业有限公司，其产品批号是100107201001。

[0029] 下述实施例中的加速试验：是在加速条件下进行，其目的是通过加速药物的化学或物理变化，探讨药物的稳定性，为制剂设计、包装、运输、贮存提供必要的资料。供试品有三批，在温度40℃±2℃、相对湿度75%±5%的条件下放置6个月，分别于1、2、3、6个月取样进行检测。

[0030] 下述实施例中的长期试验：是在接近药物的实际贮存条件下进行，其目的是为制定药物的有效期提供依据。供试品有三批，在温度25±2℃、相对湿度60%±10%的条件下放置24个月，分别于0、3、6、9、12、18、24个月取样进行检测。

[0031] 实施例1：

[0032] 一、注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的制备（3000ml量）

[0033] 处方：更昔洛韦250g、右旋糖酐4010g、羟丙基-β-环糊精30g，聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(数均分子量1000)60g、甘露醇30g、亚硫酸钠1g，注射用水定容至3000ml。

[0034] 制备方法：

[0035] ⑴准备：处理配液所用的容器具、管道后，以注射用水清洗；西林瓶、胶塞按常规方法清洗、灭菌、烘干备用。

[0036] ⑵配液：在配液罐中加入处方量80%的注射用水（2400ml）（温度50～60℃），先称取处方量的右旋糖酐40、增溶剂、亚硫酸钠加入配液罐中，搅拌至溶解；称取处方量的更昔洛韦，加入上述药液中，搅拌至溶解；在搅拌下加入处方量的聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物（数均分子量600），继续搅拌4小时至均匀；再加入处方量的甘露醇，搅拌使其溶解，得到溶液I。

[0037] ⑶将溶液I的温度降至40℃，然后将溶液I用0.22μm孔径滤器进行过滤，得到滤液a。将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b。用注射用水将滤液b补足至3000ml，再用0.22μm孔径滤器进行过滤，得到滤液c。

[0038] ⑷对滤液c进行如下指标检验：更昔洛韦含量、药液pH值、澄清度和可见异物。检验合格，将滤液c分装于西林瓶(10ml)中，每瓶装量为3ml，半加塞。

[0039] ⑸冷冻干燥：①预冻：将分装好的药液置于-40℃预冻5小时；②温度降至－45℃，抽真空至15Pa以下；③升华：升温加热15小时至－20℃，保温约12小时，至基本干燥；升温至－10℃，保温2小时；升温至0℃保温2小时；升温至10℃，保温2小时；升温至
20℃，保温1小时；升温至25℃，保温1小时；升温至40℃，保温7小时；③继续抽真空2小时，压塞，得冻干制剂。

[0040] ⑹轧盖、包装、检验、入库。

[0041] 二、注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的检测

[0042] 取按照步骤一所述方法制备的、不同批次的、保存不同时间的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂进行如下检测。

[0043] 1、检测更昔洛韦的含量

[0044] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的冻干制剂中的更昔洛韦含量，均按照如下方法进行。

[0045] 按照标准要求，注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中更昔洛韦的含量应为90.0%～110.0%。

[0046] 取冻干制剂5支，分别向其中加入流动相（流动相为甲醇-水(体积比为5:95)）溶解并全量转移至同一量瓶中，混匀，精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中约含更昔洛韦40μg的溶液，作为供试品溶液；另取更昔洛韦对照品约25mg（购于中国药品生物制品检定所，批号：100380-201002），精密称定，置25ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液1ml使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，加流动相制成每1ml中含更昔洛韦40μg的溶液，作为对照溶液。

[0047] 按下述步骤进行检测：

[0048] 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（5：95,v/v）为流动相；检测波长为252nm，理论板数按更昔洛韦峰计算不低于3000。进样量20μl，流速1.0ml/min，主成分峰的保留时间为9～11min。

[0049] 分别取上述供试液和对照液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算更昔洛韦含量，计算公式如下：

[0050]

[0051] 标示量为12.5mg/ml。

[0052] 实验设2次重复，结果取平均值，检测结果如表1和表2所示，结果表明：

[0053] 更昔洛韦在加速实验和长期实验中不同时间点的制剂中的浓度几乎相同，含量均在98%以上，符合要求；表明本发明的制剂中更昔洛韦含量稳定，没有降解。

[0054] 2、检测更昔洛韦制剂中的“有关物质”的含量

[0055] “有关物质”的定义：药剂中除了更昔洛韦和处方中的辅料以外的其它物质。

[0056] 检测方法：取注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂1支，加流动相(流动相为甲醇-水（5：95，v/v）)溶解并稀释制成每1ml中含0.3mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液1ml，置100ml量瓶中，加如上述流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

[0057] 进行色谱检测，液相色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（5：95）为流动相，检测波长为252nm；进样量20μl，流速1.0ml/min；理论板数按更昔洛韦峰计算不低于3000。

[0058] 取上述对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的15%。精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积（1.0%）。

[0059] “有关物质”的计算方法：

[0060]

[0061] 实验设2次重复，结果取平均数。检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中的“有关物质含量”均小于0.2%，符合低于1.0%的要求。

[0062] 3、检测本发明中更昔洛韦制剂的“不溶性微粒”的含量

[0063] “不溶性微粒”是指注射剂中的颗粒状杂质。

[0064] 检测方法：采用光阻法测定。取本品5支，用水将容器外壁洗净，晾干，分别加入5ml微粒检查用水，使内容物溶解，小心合并容器中的溶液（使总体积不少于20ml），将供试液置于取样杯中，将取样杯置于取样器上，开启搅拌使溶液均匀（避免气泡产生），然后进行检测。

[0065] 实验设4次重复，第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，计算每个取样杯所含的微粒数；检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中的“不溶性微粒”的含量符合标准要求。标准要求为：每个供试品容器中含10μm及10μm以上的颗粒不得过6000粒，含25μm及25μm以上的微粒不得过600粒。

[0066] 4、检测本发明中更昔洛韦制剂的“可见异物”含量

[0067] “可见异物”是指注射剂中目视可以观测到的、粒径或长度通常大于50μm的不溶性物质。

[0068] 检测方法：取本品5支，擦净容器外壁，分别加入3ml溶剂，使药粉全部溶解后，轻轻旋转和翻转瓶，使瓶中的药液中存在的可见异物悬浮（注意不使药液产生气泡），将瓶置于灯检仪黑色背景下，在1000～1500lx光照强度下轻轻翻转，目检视。

[0069] 实验设3次重复，检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中未检出可见异物。

[0070] 综上分析各指标表明，本发明得到的更昔洛韦制剂中能引起不良反应的大分子等物质含量非常低。

[0071] 5、检测本发明中更昔洛韦制剂的pH值

[0072] pH值：是指表示溶液酸性或碱性程度的数值。

[0073] 检测方法：取本品1支，加入3ml注射用水溶解，用酸度计测定pH值，应在6.0～8.0。

[0074] 检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂的PH值均在6.0～8.0之间。

[0075] 实施例2：

[0076] 一、注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的制备（3000ml量）

[0077] 处方：更昔洛韦250g、右旋糖酐4015g、羟丙基-β-环糊精40g，聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物（数均分子量1000）70g、甘露醇60g、亚硫酸钠3g，注射用水定容至3000ml。

[0078] 制备方法：

[0079] ⑴准备：处理配液所用的容器具、管道后，以注射用水清洗；西林瓶、胶塞按常规方法清洗、灭菌、烘干备用。

[0080] ⑵配液：在配液罐中加入处方量80%的注射用水（2400ml）（温度50～60℃），先称取处方量的右旋糖酐40、增溶剂、亚硫酸钠加入配液罐中，搅拌至溶解；称取处方量的更昔洛韦，加入上述药液中，搅拌至溶解；在搅拌下加入处方量的聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，继续搅拌4小时至均匀；再加入处方量的甘露醇，搅拌使其溶解，得到溶液I。

[0081] ⑶将溶液I的温度降至40℃，然后将溶液I用0.22μm孔径滤器进行过滤，得到滤液a。将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b。用注射用水将滤液b补足至3000ml，再用0.22μm孔径滤器进行过滤，得到滤液c。

[0082] ⑷对滤液c进行如下指标检验：更昔洛韦含量、药液pH值、澄清度和可见异物。检验合格，将滤液c分装于西林瓶(10ml)中，每瓶装量为3ml，半加塞。

[0083] ⑸冷冻干燥：①预冻：将分装好的药液置于-40℃预冻8小时；②温度降至－45℃，抽真空至15Pa以下；③升华：升温加热20小时至－20℃，保温约12小时，至基本干燥；升温至－10℃，保温3小时；升温至0℃保温3小时；升温至10℃，保温3小时；升温至
20℃，保温2小时；升温至25℃，保温2小时；升温至40℃，保温7小时；③继续抽真空4小时，压塞，得冻干制剂。

[0084] ⑹轧盖、包装、检验、入库。

[0085] 二、注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的检测

[0086] 取按照步骤一所述方法制备的、不同批次的、保存不同时间的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂进行如下检测。

[0087] 1、检测更昔洛韦的含量

[0088] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中更昔洛韦的含量，均按照实施例1中所述方法进行。标示量为12.5mg/ml。

[0089] 实验设2次重复，实验设2次重复，结果取平均值，检测结果如表1和表2所示，结果表明：

[0090] 更昔洛韦在加速实验和长期实验中不同时间点的制剂中的浓度几乎相同，含量均在98%以上，符合要求；表明本发明的制剂中更昔洛韦含量稳定，没有降解。

[0091] 2、检测更昔洛韦制剂中的“有关物质”的含量

[0092] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中的有关物质含量，均按照实施例1中所述方法进行。

[0093] 实验设2次重复，结果取平均数。检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中的“有关物质”含量均小于0.2%，符合低于1.0%的要求。

[0094] 3、检测本发明中更昔洛韦制剂的“不溶性微粒”的含量。

[0095] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中的不溶性微粒的含量，均按照实施例1中所述方法进行。

[0096] 实验设4次重复，第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，计算每个取样杯所含的微粒数；检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中的“不溶性微粒”的含量符合标准要求。

[0097] 4、检测本发明中更昔洛韦制剂的“可见异物”含量

[0098] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中“可见异物”的含量，均按照实施例1中所述方法进行。

[0099] 实验设3次重复，检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中未检出可见异物。

[0100] 5、检测本发明中更昔洛韦制剂的pH值

[0101] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的pH值，均按照实施例1中所述方法进行。

[0102] 检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂的pH值均在6.0～8.0之间。

[0103] 综上分析各指标表明，本发明得到的更昔洛韦制剂中能引起不良反应的大分子等物质含量非常低。

[0104] 实施例3：

[0105] 一、注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的制备（3000ml量）

[0106] 处方：更昔洛韦125g、右旋糖酐4020g、羟丙基-β-环糊精20g，聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物（数均分子量2000）40g、甘露醇40g，亚硫酸钠2g，注射用水定容至3000ml。

[0107] 制备方法：

[0108] ⑴准备：处理配液所用的容器具、管道后，以注射用水清洗；西林瓶、胶塞按常规方法清洗、灭菌、烘干备用。

[0109] ⑵配液：在配液罐中加入处方量80%的注射用水（2400ml）（温度50～60℃），先称取处方量的右旋糖酐40、增溶剂、亚硫酸钠加入配液罐中，搅拌至溶解；称取处方量的更昔洛韦，加入上述药液中，搅拌至溶解；在搅拌下加入处方量的聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，继续搅拌4小时至均匀；再加入处方量的甘露醇，搅拌使其溶解，得到溶液I。

[0110] ⑶将溶液I的温度降至40℃，然后将溶液I用0.22μm孔径滤器进行过滤，得到滤液a。将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b。用注射用水将滤液b补足至3000ml，再用0.22μm孔径滤器进行过滤，得到滤液c。

[0111] ⑷对滤液c进行如下指标检验：更昔洛韦含量、药液pH值、澄清度和可见异物。检验合格，将滤液c分装于西林瓶中，半加塞。

[0112] ⑸冷冻干燥：①预冻：将分装好的药液置于-40℃预冻7小时；②温度降至－45℃，抽真空至15Pa以下；③升华：升温加热15～20小时至－20℃，保温12小时，至基本干燥；升温至－10℃，保温2小时；升温至0℃保温2小时；升温至10℃，保温2小时；升温至20℃，保温2小时；升温至25℃，保温2小时；升温至40℃，保温7小时；③继续抽真空2小时，压塞，得冻干制剂。

[0113] ⑹轧盖、包装、检验、入库。

[0114] 二、注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的检测

[0115] 取按照步骤一所述方法制备的、不同批次的、保存不同时间的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂进行如下检测。

[0116] 1、检测更昔洛韦的含量

[0117] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中更昔洛韦的含量，均按照实施例1中所述方法进行。标示量为12.5mg/ml。

[0118] 实验设2次重复，实验设2次重复，结果取平均值，检测结果如表1和表2所示，结果表明：

[0119] 更昔洛韦在加速实验和长期实验中不同时间点的制剂中的浓度几乎相同，含量均在98%以上，符合要求；表明本发明的制剂中更昔洛韦含量稳定，没有降解。

[0120] 2、检测更昔洛韦制剂中的“有关物质”的含量

[0121] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中的有关物质含量，均按照实施例1中所述方法进行。

[0122] 实验设2次重复，结果取平均数。检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中的“有关物质”含量均小于0.2%，符合低于1.0%的要求。

[0123] 3、检测本发明中更昔洛韦制剂的“不溶性微粒”的含量。

[0124] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中的不溶性微粒的含量，均按照实施例1中所述方法进行。

[0125] 实验设4次重复，第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，计算每个取样杯所含的微粒数；检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中的“不溶性微粒”的含量符合标准要求。

[0126] 4、检测本发明中更昔洛韦制剂的“可见异物”含量

[0127] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂中“可见异物”的含量，均按照实施例1中所述方法进行。

[0128] 实验设3次重复，检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂中未检出可见异物。

[0129] 5、检测本发明中更昔洛韦制剂的pH值

[0130] 检测加速实验和长期实验中，不同时间点的注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂的pH值，均按照实施例1中所述方法进行。

[0131] 检测结果如表1和表2所示。结果表明，本发明制得的更昔洛韦制剂的pH值均在6.0～8.0之间。

[0132] 综上分析各指标表明，本发明得到的更昔洛韦制剂中能引起不良反应的大分子等物质含量非常低。

[0133] 表1注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂加速试验结果

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[0136] 表2注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂长期试验结果

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