新型海洋生物免洗消毒液及其应用

摘要

本发明公开了一种新型海洋生物免洗消毒液，属于消毒技术领域。针对现有消毒技术特别是外科术前消毒技术的不足，本发明提供一种新型海洋生物免洗消毒液，其活性成分由壳聚糖、壳寡糖、黄芩苷、益菌素、聚六亚甲基胍、溶菌酶和虎杖提取物组成。当消毒液中各组分质量百分数为壳聚糖0.5%-2%、壳寡糖1-4%、黄芩苷2%-8%，益菌素0.5%～2%、聚六亚甲基胍为0.5%～1.5%，溶菌酶2%-5%，虎杖提取物为1.5%-5%，消毒效果较佳。本发明所公开的消毒消毒液可用于卫生消毒或外科术前消毒中的手消毒或皮肤消毒，其杀菌效果优异，作用持久，具有很好的应用前景和经济效益。

权利要求

1. 一种新型海洋生物免洗消毒液，其特征在于：其活性成分由壳聚糖、壳寡糖、黄芩 苷、益菌素、聚六亚甲基胍、溶菌酶和虎杖提取物组成，所述消毒液活性成分各组分重量百 分数为：壳聚糖0. 5%-2%、壳寡糖1-4%、黄芩苷2%-8%，益菌素0. 5%〜2%、聚六亚甲基胍为 0. 5%〜1. 5%，溶菌酶2%-5%，虎杖提取物为1. 5%-5%。

2. 如权利要求1所述的消毒液，其特征在于所述消毒液活性成分各组分重量百分数 为：壳聚糖1. 5%、壳寡糖3%、黄芩苷5%，益菌素1. 4%、聚六亚甲基胍为1%，溶菌酶3%，虎杖提 取物为3. 5%。

3. 如权利要求1或2所述的新型海洋生物免洗消毒液，其特征在于：所述消毒液中虎 杖提取物为白藜芦醇。

4. 如权利要求1或2所述的新型海洋生物免洗消毒液，其特征在于：所述消毒液含有 保湿剂和pH调节剂。

5. 如权利要求4所述的新型海洋生物免洗消毒液，其特征在于：所述消毒液中保湿剂 为丙三醇，所述pH调节剂为三乙醇胺、三异丙醇胺、二异丙醇胺或其组合。

6. 如权利要求1或2所述的新型海洋生物免洗消毒液，其特征在于：所述消毒液的pH 为 5. 0-6. 5。

7. 权利要求1或2所述的新型海洋生物免洗消毒液在皮肤消毒中的应用。

8. 权利要求1或2所述的新型海洋生物免洗消毒液在手消毒中的应用。

9. 如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的手消毒为卫生消毒或外科术前消毒。

说明书

新型海洋生物免洗消毒液及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于消毒剂技术领域，具体涉及一种新型海洋生物免洗消毒液。

背景技术

[0002] 在临床医疗护理工作中，医护人员在进行各项操作时必须要严格遵守无菌操作。 尤其是在外科接触病人比较频繁，发生感染的几率也相对大一些。因此，临床各种治疗、诊 断过程均需皮肤消毒；消毒是控制感染的重要环节，消毒的成功与否直接影响着治疗质 量。各种皮肤消毒剂中有一些消毒液虽然杀毒效果能达到要求，但作用时间较短，杀菌谱 窄，并且皮肤刺激性大，不适在用于临床外科中广泛使用。而选用高效低毒的皮肤消毒剂则 成为消毒是否成功的关键因素。

[0003] 临床常见的皮肤消毒剂主要有乙醇、碘与聚维酮碘、益菌素、季铵盐类化合物、三 氯生等。其中1)乙醇具有可靠的杀菌作用，其中60. 0%-80. 0%有效浓度的乙醇溶液杀菌效 果最好，为临床最常用浓度，但由于其杀菌谱较窄，杀灭效果较差，单独使用乙醇溶液消毒 并不能满足临床消毒的需要。2)碘和含碘制剂是被临床广泛应用的皮肤消毒剂。临床常 用的含碘制剂主要是碘酊、碘水和聚维酮碘。聚维酮碘是当前最主要的含碘皮肤消毒剂，是 碘与表面活性剂结合而成的不定型络合物。其所含表面活性成分能改变溶液对物体的湿 润性，可在皮肤表面上形成一层极薄的杀菌薄膜。具有协助碘穿透有机物作用，并能乳化脂 肪，缓慢持久的释放有效碘，加强碘的杀菌作用。

[0004] 氯己定属于双胍类抗菌剂，具有毒性低、刺激性小、抗菌谱广等特点，主要用作皮 肤及黏膜的抗菌处理。氯己定本身难溶于水，但是葡萄糖酸的形式是水溶性的。抗菌活性 是黏附并破坏细胞浆膜，导致细胞内容物沉淀。氯己定的即刻抗菌活性比乙醇慢。它具 有很好的抗革兰阳性菌作用，对革兰阴性菌和真菌的作用较弱，对分枝杆菌属作用小，对芽 胞无效。体外试验显示对有膜的病毒如疱疹病毒、HIV、巨细胞病毒、流感病毒和RSV有效， 但明显对无膜的病毒如轮状病毒、肠道病毒和腺病毒有效性较低。

[0005] 季铵盐是一大类结构复杂多变的化合物。其中烷基苯扎氯胺（苯扎溴铵）已 经在临床广泛使用。其他用作消毒剂的化合物包括苯扎氯胺、苯扎溴胺。曾广泛应用于医 疗卫生等各个领域。近年来发现苯扎溴铵等季铵盐类抗菌剂尽管抑菌作用很强，但杀菌谱 较窄：对铜绿假单胞菌等革兰阴性菌的作用较差，对结核分枝杆菌和细菌芽胞则基本无效； 仅可灭活亲脂病毒，而对亲水病毒作用较差。

[0006] 三氯生是一种高效广谱抗菌剂。于20世纪60年代后期开发，广泛用于肥皂、牙 膏、洗面奶、洗手液等消费品中供医护人员和公共场所使用。抗菌浓度为〇.2%_2.0%。三氯 生的抗菌活性是进入细菌细胞而影响细胞浆膜和RNA、脂肪酸和蛋白质合成。三氯生有一定 的抗菌谱，但是偏向于抑菌。三氯生对革兰阳性菌（包括M RSA)的作用强于革兰阴性杆 菌，特别是铜绿假单胞菌。三氯生对分枝杆菌属和假丝酵母菌属有一定的活性，但是对细丝 真菌的活性较弱。大量研究显示，用三氯生洗手后菌落的降低数比益菌素、聚维酮碘和乙醇 产品低。

[0007] 2011年美国FDA与EPA重新评估三氯生的安全性，源于含有三氯生的产品一旦与 含氯的自来水发生反应，可形成一种被称为"哥罗芳"的物质，即氯仿。氯仿动物试验发现， 会对心脏和肝脏造成损伤，具有轻度致畸性，可诱导小白鼠发生肝癌，但尚无人体致癌的研 究资料。为保险起见，国际癌症研究中心和美国都将氯仿列为对人体有潜在威胁的可疑致 癌物。在临床使用方面，由于滥用抗生素，对变异细菌进行自然选择，从而产生了"超级细 菌"，它可以使致病细菌无比强大，抵御所有的抗生素。

[0008] 因此，开发安全、广谱、高效、使用浓度低、环境友好、对使用人员皮肤有保护的消 毒剂一直是未来临床需求的重要，可是随着试验微生物和消毒剂不安全因素的增加，实验 条件要求日趋严格，导致新型消毒剂开发难度大、耗资多。市面上也不乏含有中药提取物凝 胶，多采用多种中药材复配，作用成份复杂，机理不明确。本发明提供了一种成分明确，具有 优异抗菌效果的植物干洗消毒凝胶。

[0009] 壳聚糖（chitosan)是由自然界广泛存在的几丁质（chitin)经过脱乙酰作用得到 的，化学名称为聚葡萄糖胺（1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖，自1859年，法国人Rouget首先得 到壳聚糖后，这种天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性 等优良性能被各行各业广泛关注，在医药、食品、化工、化妆品、水处理、金属提取及回收、生 化和生物医学工程等诸多领域的应用研究取得了重大进展。壳聚糖的抑菌活性壳聚糖在弱 酸溶剂中易于溶解，特别值得指出的是溶解后的溶液中含有氨基（NH2+)，这些氨基通过结 合负电子来抑制细菌。壳聚糖的抑制细菌活性，使其在医药、纺织和食品等领域有着广泛的 应用。壳聚糖及其衍生物有较好的抗菌活性，能抑制一些真菌、细菌、和病毒的生长繁殖。目 前认为其可能的机制有三：一是由于壳聚糖的多聚阳离子，易于真菌细胞表面带负电荷的 基团作用，从而改变病原菌细胞膜的流动性和通透性；二是干扰DNA的复制与转录；三是阻 断病原菌代谢。近年来，有许多研究者提出壳聚糖通过诱导病程相关蛋白，积累次生代谢产 物和信号传导等方式来达到抗菌的目的的观点。

[0010] 中国专利CN1309304C公开了一种消毒凝胶及其制备方法和应用，其包括溶葡萄 球菌酶0· 0001-0. Olwt%，溶菌酶0· οΐ-lwt%，增稠剂l-20wt%，润肤剂0· l-15wt%，水余量。其 可以用于手部皮肤的清洁和消毒，但该消毒凝胶在使用过程中长期杀灭效果不佳。

[0011] 中国专利申请CN1498538A公开了一种以甲壳素、海藻酸素、琼脂素凝胶糖、玉洁 纯DP300、柏木醇为有效成分的海洋生物消毒剂，该消毒剂无刺激，气味清香，但其同样存在 长期杀毒效果不佳的缺陷，难以适应长时间手术的需要。

[0012] 因此，开发一种皮肤刺激性小，杀菌谱宽以及作用时间长的新型免洗消毒液，对广 大医务科研工作者来说是一件任重而道远的工作。

发明内容

[0013] 本发明提供一种新型海洋生物免洗消毒液，本发明新型海洋生物免洗消毒液可用 于卫生消毒或外科术前消毒中的手消毒或皮肤消毒，其杀菌效果优异，作用持久，具有很好 的应用前景和经济效益。

[0014] 本发明是采用如下技术方案实现的：

[0015] 本发明一种新型海洋生物免洗消毒液，其活性成分由壳聚糖、壳寡糖、黄芩苷、益 菌素、聚六亚甲基胍、溶菌酶和虎杖提取物组成。

[0016] 其中：

[0017] 壳聚糖是由β_ (1，4)糖苷键连接的氨基葡萄糖大分子天然聚合物，是自然界中 唯一带有正电荷作用的多糖，壳聚糖通过自身所携带的正电荷与微生物细胞所携带的负电 荷相互作用，破坏细菌细胞壁结构，造成细胞成分泄漏而起到抗菌作用；对没有细胞膜的微 生物，通过渗透进入细胞内与带有阴离子的生物大分子发生类似絮凝作用，扰乱细胞的正 常生理功能，阻断DNA生物合成，从而抑制细菌的繁殖和生长不产生耐药性，显著改善局部 免疫功能、改善黏膜充血、保护黏膜、促进上皮细胞生长。

[0018] 壳寡糖也叫壳聚寡糖，也称几丁寡糖，学名β-1，4-寡糖-葡萄糖胺，是将壳聚糖 经特殊的生物酶技术处理而得到的一种全新的产品，是水溶性较好、功能作用大、生物活性 高的低分子量产品。它具有壳聚糖所没有的较高溶解度和容易被生物体吸收等诸多独特的 功能，其作用为壳聚糖的14倍。预防或治疗由金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、放线杆菌、 突变链球菌等细菌引起的动物疾病。可诱导植物的抗病性，对多种真菌、细菌和病毒产生 免疫和杀灭作用。抗氧化：可消除人体氧自由基，活化机体细胞，延缓衰老，抑制皮肤表面有 害菌滋生，保湿性能优异。

[0019] 黄芩苷（Baicalin)是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有显著 的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，并且具有较强的抗癌反应等生理效 能。在临床医学已占有重要地位。黄芩苷还能吸收紫外线，清除氧自由基，又能抑制黑色素 的生成，因此既可用于医药，也可用于化妆品，是一种很好的功能性美容化妆品原料。为黄 芩抗菌成分之一，含3%黄芩苷的眼药水临床用于治疗沙眼，疗效与治疗沙眼较好的药物利 福平相似。

[0020] 益菌素是以甘蔗为主要原料，经一系列酶的催化转变成低聚果糖，再配以决明子 精华。益菌素是双歧杆菌的营养源，用后肠道内双歧杆菌10-100倍的繁殖。双歧杆菌是人 体内部最好斗的有益细菌，它通过排挤吞噬等手段，将人体内部的有害菌排泄或者消灭。低 聚果糖因对双歧杆菌神速增殖的效用而被称为"益菌因子"。益菌素便是低果糖系列产品用 比较杰出的一种。其不仅可以抑制肠道内有害菌生长，促进有益菌的迅速繁殖，改善肠道微 生态环境，而且能够建立肠道生物屏障，阻止致病菌入侵，防止肠道功能紊乱导致的顽固性 腹泻及便秘等。

[0021] 聚六亚甲基胍，具有杀菌广谱；有效浓度低；作用速度快；性质稳定；易溶于水的 优良性能；可在常温下使用；长期抑菌、无副作用；无腐蚀性；无色、无嗅；无毒；不燃、不 爆、使用安全；价格适中；运输方便，可以说是最佳的杀菌剂。事实上，该产品是一种环保型 多用途新型聚合物，在工业、农业、医用和日常生活中有着极其广泛的用途。其为多胍类高 分子聚合物，在水溶液中能产生电离，它的亲水基部分含有强烈的正电性，吸附通常呈负电 性的各类细菌、病毒，进入细胞膜，抑制膜内脂质体合成，造成菌体凋亡，达到最佳的杀菌效 果。

[0022] 溶菌酶（lysozyme)又称胞壁质酶（muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶 (N-acetylmuramide glycanohydrlase)，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通 过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β -1，4糖苷键，使细胞壁不溶 性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带 负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具 有抗菌、消炎、抗病毒等作用。医学上可作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质，具有抗 菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用。临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉 炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染。 口服和肌注均有效。

[0023] 虎杖中的大黄素、7-乙酰基-2-甲氧基-6-甲基-8-羟基-1，4-萘醌、白藜芦醇 均具有抗菌活性。白藜芦醇体外抗菌试验表明：其对导致顽癣、汗疱状白癣的深红色发癣 菌、趾间发癣菌具有强力抗菌性能，并对枯草杆菌、藤黄八迭菌等有较强的杀菌作用。大黄 素、PD、大黄素-8-葡萄糖甙对金黄色葡萄球菌、肝炎双球菌有抑制作用。虎杖中含有的一 种黄酮类物质对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、变形杆菌有抑制作用。10%虎杖煎液对单 纯疱疹病毒、流感亚洲甲型京科68-1病毒及埃可II型病毒（ECH011)均有抑制作用。3%煎 液对479号腺病毒3型、72号脊髓灰质炎II型、44号埃可9型、柯萨奇A9型及B5型、乙型 脑炎（京卫研I株）、140号单纯疱疹等7种代表性病毒株均有较强的抑制作用。虎杖单体 I和II可使乙型肝炎抗原滴度降低8倍。为了更清楚表达本发明虎杖提取物，申请人提供 一种制备上述虎杖提取物的制备方法，其步骤包括：取干燥虎杖，粉碎，取样l〇g，盛于烧杯 中，加入提取溶剂120mL，用氢氧化钠溶液或者盐酸溶液将浸提液的pH值调至指定值，浸 泡16〜24h。溶液颜色变成黄棕色或棕色后用4层纱布过滤，取55mL滤液在50°C下用旋 转蒸发器进行蒸馈至5mL。冷藏，备用。

[0024] 本发明将上述活性成分成分按照最佳比例制成消毒液，经过多次试验及临床验 证，既能够广谱高效的杀灭常见的致病菌群、减少临床感染机率，同时具有很好的组织相容 性，皮肤刺激性小。多种药物组分合用，在杀灭常见致病菌方面具有显著的协同作用，阻止 致病菌的黏附、繁殖，也避免了使用抗生素引发的耐药性、二重感染、过敏反应以及对机体 的毒副作用等弊端。

[0025] 发明人以上述消毒液对致病菌的杀灭效果为评价标准对上述消毒液中组分含 量进行了探索，发明人发现当上述消毒液中组分重量百分数为：壳聚糖〇.5%_2%、壳寡糖 1-4%、黄芩苷2%-8%，益菌素0. 5%〜2%、聚六亚甲基胍为0. 5%〜1. 5%，溶菌酶2%-5%，虎杖 提取物为1.5%-5%，余量为水，所述消毒液对致病菌的杀灭效果较好。其中当消毒液含有壳 聚糖1. 5%、壳寡糖3%、黄芩苷5%，益菌素1. 4%、聚六亚甲基胍为1%，溶菌酶3%，虎杖提取物 为3. 5%时，其对致病菌的杀灭效果最好。

[0026] 本发明所述消毒液除含有活性成分外，还可以含有保湿剂和pH调节剂。现有技 术中关于保湿剂和pH调节剂均可用于本发明消毒液。其中所述保湿剂优选为丙三醇。所 述pH调节剂优选为三乙醇胺、三异丙醇胺、二异丙醇胺或其组合。所述消毒液的pH优选为 5· 0-6· 5〇

[0027] 本发明所述新型海洋生物免洗消毒液可以广泛应用于皮肤消毒领域，其作用机理 为：

[0028] a)壳聚糖是大分子聚合物，分子链弥散伸展，呈极大的膨胀状态，并具有粘性；聚 六亚甲基胍具有较强的抑菌性和成膜性。本发明所述消毒液可形成澄清的粘稠的凝胶物 质，凝胶附着于皮肤表面形成保护膜，可以使消毒面与外界隔离，避免二次交叉感染。

[0029] b)该凝胶呈微酸性，不受微生物影响，特别是本发明消毒液中多种抑菌活性成分 联用，不仅可以扩大消毒液的抗致病菌谱，而且可以在抗菌活性方面具有显著的协同增强 效果，从而抑制病原体繁殖，增强病变部位对病菌、病毒的抵抗能力和免疫能力。

[0030] c)壳聚糖均具水溶性基质的特点，在发挥自身抗菌活性的同时，可以将包裹其中 的益菌素、黄芩苷和虎杖提取物缓慢释放，延长组合物的杀毒效果。

[0031] 基于此，本发明提供一种上述消毒液的用途，即上述消毒液在手消毒或皮肤消 毒中应用，其中所述手消毒或皮肤消毒可以为卫生消毒或外科术前消毒。本发明实施例 7表明本发明消毒液对大多数的致病菌据均具有较强的杀灭作用。本发明实施例8表明 本发明消毒凝胶能有效杀灭金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus )、铜绿假单胞杆 菌（Pseudomonas aeruginosa )、大肠杆菌（Escherichia coli )和白色念珠菌（Candida albicans )等，且消毒15min后和200min后抑制率均达98. 5%以上，优于参比实施例1 和参比实施例2。从消毒时间上来看，本发明新型海洋生物免洗消毒液作用时间更为持久， 15min和200min的菌落杀灭度相差不大，而参比实施例1和参比实施例2的菌落杀灭率随 着消毒时间的延长则快速降低。本发明新型海洋生物免洗消毒液更适宜长时间的手术使 用。本发明实施例9实验结果显示，本发明新型海洋生物免洗消毒液多次用药对皮肤刺激 性很小，与对照组无显著性差异。

[0032] 本发明所述新型海洋生物免洗消毒液的使用方法为：1)外科术前消毒：按规范用 皂液洗手后，流水冲净，用无菌毛巾擦干，然后取本品原液均匀涂于手及前臂部一遍，每手 手臂约5-10ml，作用3分钟双手搓擦至干。2)手的卫生消毒：取本品3ml涂于手部作用1 分钟搓擦至干。3)皮肤卫生消毒：取本品适量涂于或喷于皮肤表面至湿润，作用3分钟自 然干燥。

[0033] 本发明新型海洋生物免洗消毒液用于手消毒或皮肤消毒时，与现有技术相比具有 如下技术优势：

[0034] 1)本发明通过合理配方制得的新型海洋生物免洗消毒液通过联用多种抑菌活性 成分，在显著扩大抑菌谱的同时各组分在抑菌方面取得显著协同作用，从而抑制病原体繁 殖，增强病变部位对病菌、病毒的抵抗能力和免疫能力。

[0035] 2)本发明新型海洋生物免洗消毒液中活性组分主要来自于自然界，生物相容性 好，副作用低，避免了使用抗生素引发的耐药性、二重感染、过敏反应以及对机体的毒副作 用等弊端。

[0036] )本发明新型海洋生物免洗消毒液用于皮肤消毒时，其药物刺激性小，杀菌活性持 久，可以显著提高医护工作者用药依从性和药物的治疗效果，大大降低了手术感染。

具体实施方式

[0037] 以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。在 本发明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明所述的消毒组合物 进行适当改进、替换功效相同的组分，对于本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视 为包括在本发明的范围之内。

[0038] 实施例1:本发明新型海洋生物免洗消毒液

[0039] -种用于新型海洋生物免洗消毒液，活性成分包括壳聚糖、壳寡糖、益菌素、黄芩 苷、聚六亚甲基胍、溶菌酶、虎杖提取物。其中壳聚糖浓度为1%、壳寡糖浓度为3%、益菌素浓 度为1. 2%、黄芩苷浓度为3. 7%、聚六亚甲基胍浓度为1%、溶菌酶浓度为2. 5%、虎杖提取物 3% 〇

[0040] 以制备一千克凝胶为例，每千克凝胶中含有l〇g壳聚糖、30g壳寡糖、12g益菌素、 37g黄芩苷、10g聚六亚甲基胍、25g溶菌酶，30g虎杖提取物。具体制备方法是把10g壳聚 糖、25g溶菌酶和30g壳寡糖加入846毫升纯化水中，用高速分散机使其充分溶解；同时把 12g益菌素充分分散于50毫升丙二醇中、把分散好的益菌素加入上述充分溶解的溶液中， 继续搅拌使混合均匀，溶液的PH值在5. 0至6. 0之间，产品变成凝胶状；最后用0. 22um微 孔滤膜无菌过滤聚六亚甲基胍的水溶液和虎杖提取物的水溶液，再按照每千克凝胶中的含 量加入凝胶中，最后加入保湿剂和pH调节剂即可制成成品。

[0041] 实施例2-实施例6本发明新型海洋生物免洗消毒液

[0042] 皮肤消毒剂处方如表1所示，制备方法同实施例1海洋生物免洗消毒液制备方法。

[0043] 表1实施例2-实施例6皮肤消毒液的百分比组成

[0044]

[0045] 实施例7本发明消毒组合物的体外抑菌实验

[0046] 本实验所使用的菌种及培养基分别为甲型溶血性链球菌（32209)、乙型溶血 性链球菌（32210)、大肠埃希氏菌（44102)、普通变形杆菌（49101)、铜绿假单胞杆菌 (Pseudomonas aeruginosa )、白色念珠菌（Candida albicans )甲型副伤寒沙门氏菌 (50001)、痢疾志贺氏菌（51252)、金黄色葡萄球菌[26111 (5)]、流感杆菌（58529-4)，营养 琼脂培养基（中困药品生物制品检定所）；比浊管（中国细菌浊度标准，中国药品生物制晶 检定所）。

[0047] 体外抑菌实验：①制备含药琼脂平板。将受试物按倍比稀释配制不同药物浓度的 培养基，加热，调制各自所需pH值，121°C灭菌30 min，冷至45°C。倾注成无菌平板（平皿 d=65 mm，10 ml/平皿），最终使培养基中含受试物原液（2g/ml)的稀释倍数分别为1 :2，1 : 4……1 :1〇24。同时做各自的空白对照培养基。②接种。取传至第三代的幼龄菌，分别用 0.9%氯化钠溶液按标准比浊管校正浓度为108 cfu/ml的待检菌液，分别接种于不同倍比 稀释的各自含药琼脂表面，同时接种平行点3点，使每点含2滴菌液。每一接种点的液滴直 径为5-8 mm。待接种点干燥后，翻转平板于36°C恒温培养箱培养20 h观察结果（同时做 空白对照）。③判定标准。以不出现菌落的琼脂平板上的最低稀释受试物浓度为其最低抑 菌浓度（MIC)。

[0048] 本实验中消毒液的浓度为消毒液中壳聚糖、壳寡糖、黄芩苷、益菌素、聚六亚甲基 胍、溶菌酶和虎杖提取物等活性成分的总浓度。其对各致病菌株的最小抑菌浓度如表2所 示：

[0049] 表2本发明消毒组合物对致病菌株的最小抑菌浓度

[0050]

[0051] 结果显示，本发明消毒液对大多数的致病菌据均具有较强的杀灭作用。

[0052] 参比实施例1采用CN1309304C实施例1的消毒凝胶

[0053] 制备方法为：首先称取溶葡萄球菌酶的含量O.Olg (0.01 wt%)，溶菌酶的含量 0. 3g(0. 3 wt%)，羟基丙基纤维素的含量3g(3wt%)，甘油5g(5wt%)，余量为水，混合均匀， 即可得到所需的消毒凝胶。

[0054] 参比实施例2采用中国专利申请CN1498538A中配方三

[0055] 其处方组成为：甲壳素3. 0-6. 0,海藻酸素2. 0-5. 0,琼脂素凝胶糖1. 0-2. 0,玉洁 纯DP300 0· 5-0. 8,柏木醇1. 8-2. 0,纯化水加至100。

[0056] 实施例8本发明新型海洋生物免洗消毒液的消毒效果比较

[0057] 使用待测菌液均匀涂到医疗器械表面，并取一滴（0. 05ml)待测菌液放入培养基平 板中培养，在器械表面迅速涂上本发明消毒消毒液。分别于15min后和200min后从器械表 面刮取1滴（〇. 〇5ml)置于平板中培养。各菌液在平板在各菌适宜温度下分别培养48小时 分别计数。计算涂消毒液后15min和200min后的菌落杀灭率。

[0058] 表3本发明消毒组合物的消毒效果比较

[0059]

[0060] 本发明消毒凝胶无杂质、无颗粒物。由表3可以看出，其能有效杀灭金黄色葡萄 球菌（Staphyloccocus aureus )、铜绿假单胞杆菌（Pseudomonas aeruginosa )、大肠杆菌 (Escherichia coli )和白色念珠菌（Candida albicans )等，且消毒 15min 后和 200min 后抑制率均达98. 5%以上，优于参比实施例1和参比实施例2。从消毒时间上来看，本发明 消毒消毒液作用时间更为持久，15min和200min的菌落杀灭度相差不大，而参比实施例1和 参比实施例2的菌落杀灭率随着消毒时间的延长则快速降低。本发明消毒消毒液更适宜长 时间的手术使用。

[0061] 实施例9本发明消毒组合物的多次皮肤刺激性试验

[0062] 实验动物选用普通级白色新西兰种家兔4只，试验前24h将动物背部脊柱两侧毛 剃掉，剃毛范围左右各约3cmX3cm，试验时将受试物0. 5ml (按本发明实施例3制备得到的 本发明新型海洋生物免洗消毒液）均匀涂抹于左侧2. 5cmX2. 5cm皮肤上，右侧用蒸馏水 作对照。每天涂抹一次，连续14d。从第二天开始，每天涂抹前去毛，用温水清洗，lh后观察 皮肤反应并进行皮肤刺激反应评分，试验结束后，分别计算14天总积分、14天每只动物积 分均值，每天每只动物积分均值，并进行皮肤刺激强度分级。本发明新型海洋生物免洗消毒 液多次皮肤刺激性试验结果如表4所示。

[0063] 表4本发明消毒组合物多次皮肤刺激性试验结果

[0064]

[0065] 由表4实验结果显示，本发明新型海洋生物免洗消毒液多次用药对皮肤刺激性很 小，与对照组无显著性差异。