人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法

摘要

本发明提供了一种人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，包括以下步骤：在用人工麝香灌胃后的大鼠血浆中，加入乙腈，以及内标工作液，混合涡旋，离心，取上清液置顶空进样器的顶空进样瓶中待测，所述顶空进样瓶中还加入有1wt％～5wt％NaCl水溶液；所述内标溶液为环己酮或正己烷的醇溶液；采用气质联用法进行测定。本发明采用顶空进样气质联用法，以乙腈沉蛋白作为生物样品前处理方法，以适当的程序升温条件，适当的顶空平衡温度和适当的顶空平衡时间进行测定。本测定方法专属性强，灵敏度高，测定迅速方便，可大大简化实验过程，适用于药代动力学研究。

权利要求

1.人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)血浆样品处理：在用人工麝香灌胃后的大鼠血浆中，加入乙腈，以及内标工作液，混合涡旋，离心，取上清液置顶空进样器的顶空进样瓶中待测，所述顶空进样瓶中还加入有

1wt％～5wt％NaCl水溶液；所述内标工作液为环己酮的醇溶液或正己烷的醇溶液；

(2)采用气质联用法进行测定；

所述顶空进样器的进样条件为：顶空平衡温度：90～97℃；定量环温度：100℃～

120℃，传输线温度：110℃～120℃；样品瓶平衡时间：3～10min；加压0.4～0.6min；定量环填充时间：0.1～0.2min；定量环平衡时间：0.1～0.2min；进样时间0.7～1min。

2.根据权利要求1所述的人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，气质联用法进行测定中的气相色谱仪测定条件：检测器：MSD；He流量：0.8～1.2ml/min；分流比：10：1～15：1；进样口温度：200℃～220℃；辅助通道温度：270℃～280℃；

色谱条件：柱箱程序升温：50℃～100℃保持1min；后以40℃/min升温至250℃，保持

3.5～5min；280℃～290℃后运行5～10min；

质谱电离方式：数据采集模式为选择性离子检测，检测离子为麝香酮的238m/z与内标环己酮98m/z；电离方式：EI，离子源温度：230℃，EM电压1.3kV。

3.根据权利要求1－2任一项所述的人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述血浆样品处理为：在用人工麝香灌胃后的大鼠血浆中，加入体积比为1：1的乙腈，以及内标工作液，混合涡旋40～120s，再以5000～8000r/min离心5～10min，取上清液置顶空进样器的顶空进样瓶中待测；所述顶空进样瓶中还加入有1wt％～5wt％NaCl水溶液；所述内标工作液为环己酮的醇溶液或正己烷的醇溶液。

4.根据权利要求3所述的人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述NaCl水溶液的浓度为1wt％。

5.根据权利要求2所述的人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述气相色谱仪测定条件为：使用毛细管柱HP-5MS 5％ Phenyl Methyl Siloxane，检测器：MSD；He流量：1ml/min；分流比：10：1；进样口温度：200℃；辅助通道温度：280℃。

6.根据权利要求2所述的人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述色谱条件为：柱箱程序升温：50℃保持1min；后以40℃/min升温至250℃，保持

3.5min；290℃后运行5min。

7.根据权利要求1－2任一项所述的人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述顶空进样器的进样条件为：顶空平衡温度：95℃；定量环温度：110℃，传输线温度：120℃；样品瓶平衡时间：高摆动多顶空提取时为3min，或高摆动单次提取时为

6min；加压0.4min；定量环填充时间：0.2min；定量环平衡时间：0.1min；进样时间1min；高摆动多顶空提取，每个样品瓶提取1－3次。

8.根据权利要求1－2任一项所述的人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述环己酮的醇溶液或正己烷的醇溶液是环己酮的甲醇溶液或正己烷的甲醇溶液，浓度为53－54μg/ml。

说明书

人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法

技术领域

[0001] 本发明涉及生物物质的分析方法，更具体的是涉及人工麝香中麝香酮(muscone)的血药浓度定量分析方法。

背景技术

[0002] 面对麝资源日益严峻的局面，SFDA根据国家林业局通报的有关天然麝香、熊胆粉资源状况及库存原料数量，确定并公布需要使用天然麝香的中成药品种名单。而未获得批准的，将不能再使用天然麝香。国家对天然麝香的严格管理为早在1994年即被卫生部认定为“与天然麝香等同配方使用”的人工麝香提供了市场机遇。人工麝香是我国1993年开发成功的一类中药新药，与麝香具有相同的药理作用，具体来说具有开窍醒神、活血通络、消肿止痛、化腐生肌解毒之功效，主治热病神昏、中风痰厥、气郁暴厥、中恶昏迷、经闭、心腹暴痛、痈肿瘰疬、痹痛麻木，治疗一切虚损恶病。

[0003] 麝香酮，化学名为三甲基环十五烷酮，是人工麝香中唯一公开的有效成分，具有兴奋动物呼吸的作用，应用后使动物呼吸频率和深度增加，对离体心脏有兴奋作用，可使家兔、狗、麻醉猫的血压上升。用猫乳头肌、豚鼠气管平滑肌等作实验，可观察到麝香酮能增强儿茶酚胺的作用。

[0004]

[0005] 麝香酮结构式

[0006] 为了证明人工麝香确实与麝香酮在心血管疾病方面有相同疗效，必须研究对心血管系统起主要疗效的麝香酮在生物体内的代谢情况。以前用于测定人工麝香灌胃后大鼠体内麝香酮的分析方法还未见报道，主要是涉及麝香酮直接灌胃和静脉注射给药，分析方法主要为气相色谱法，所用内标为异补骨脂素和正十九烷，生物样品处理方法为经乙醚萃取三次合并提取液并N2吹干，再加挥发性溶剂三氯甲烷或正己烷定容后测定。该分析方法存在的问题是生物样品处理步骤比较繁琐，麝香酮是易挥发物质，首先用乙醚提取三次的过程中有挥发损失，其次在用N2吹干复溶的过程中也有损失，造成分析结果的误差。如此复杂的处理步骤也不便用于药代动力学研究的大样本检测。

[0007] 麝香酮经胃肠道吸收后在人体内迅速代谢，其原型药物的血药浓度极低，Cmax约为3.14mg.L-1，而人工麝香中麝香酮的含量仅约为0.86％，更加难以测定。为了能够开展直接了解人工麝香在体内的吸收、分布、代谢、排泄有关特征的动物及人体药代动力学研究，有必要建立一个灵敏度高、快捷方便的麝香酮血药浓度定量分析方法。

发明内容

[0008] 本发明的目的是建立一个操作简便、准确度高、重现性好，能够测定大鼠人工麝香灌胃给药后麝香酮在体内的血药浓度定量分析方法。

[0009] 实现上述目的的技术方案如下：

[0010] 人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，包括以下步骤：

[0011] (1)血浆样品处理：在用人工麝香灌胃后的大鼠血浆中，加入乙腈，以及内标工作液，混合涡旋，离心，取上清液置顶空进样器的顶空进样瓶中待测，所述顶空进样瓶中还加入有1wt％～5wt％NaCl水溶液；所述内标溶液为环己酮(或正己烷)的醇溶液；

[0012] (2)采用气质联用法进行测定。

[0013] 其中一些优选实施例中，在用人工麝香灌胃后的大鼠血浆中，加入体积比为1∶1的乙腈，以及内标工作液，混合涡旋40～120s(更优选60～80s)，用以沉淀血浆蛋白，后以5000～8000r/min，优选6000～7000r/min，离心5～10min，优选6～7min，取上清液置顶空进样器的顶空进样瓶中待测；优选地，为了有助于样品的挥发，顶空进样瓶加入有1wt％～5wt％(更优选1wt％)NaCl水溶液

[0014] 其中一些优选实施例中，顶空进样器的进样条件为：顶空平衡温度：90～97℃(优选95℃)；定量环温度：100℃～120℃(优选110℃)，传输线温度：110℃～
120℃(优选120℃)；样品瓶平衡时间：3～10min；加压0.4～0.6min(优选0.4min)；定量环填充时间：0.1～0.2min(优选0.2min)；定量环平衡时间：0.1～0.2min(优选0.1min)；
进样时间0.7～1min(优选1min)；高摆动多顶空(HS)提取，每个样品瓶提取1～3次(优选3次)；

[0015] 本发明中，采用气质联用法进行测定时，的气相色谱仪使用毛细管柱HP-5MS 5％Phenyl Methyl Siloxane(苯基甲基硅氧烷，30.0m×250μm×0.25μm)，检测器：MSD；载气：高纯氦(He)，纯度＞99.999％，He流量：0.8～1.2ml/min，优选1ml/min；分流比：10∶1～15∶1，优选10∶1；进样口温度：200℃～220℃，优选200℃；辅助通道温度：
270℃～280℃，优选280℃；

[0016] 本发明的色谱条件为：柱箱程序升温：50℃～100℃保持1min，优选50℃；后以40℃/min升温至250℃，保持3.5～5min，优选3.5min；280℃～290℃后运行5～10min，优选290℃后运行5min。

[0017] 本发明的数据采集模式为选择性离子检测，检测离子为麝香酮的238m/z与内标离子。电离方式：EI，离子源温度：230℃，EM电压1.3kV。

[0018] 在其中一个实施例中，本发明所述内标溶液为环己酮(或正己烷)的醇溶液，优选环己酮，检测离子优选98m/z。

[0019] 本发明人通过大量实验，包括气相、气质联用、液质联用等各种测定仪器，最终选用气质联用，配套使用顶空进样器作为分析仪器。由于麝香酮具挥发性，而顶空-气质联用是目前测定挥发性物质最为方便以及灵敏度最高的分析方法。选择运用顶空进样器使得样品的处理方法变得非常简单、可靠。

[0020] 本发明是所述人工麝香中麝香酮(muscone)的血药浓度定量分析方法。采用顶空进样气质联用法，以乙腈沉蛋白作为生物样品前处理方法，以适当的程序升温条件，适当的顶空平衡温度和适当的顶空平衡时间进行测定。本测定方法专属性强，灵敏度高，测定迅速方便，可大大简化实验过程，适用于药代动力学研究。

附图说明

[0021] 图1是大鼠灌胃人工麝香(625mg.kg-1)3h的色谱图，其中，(a)血浆样品；(b)空-1白大鼠血浆加入麝香酮(378ng.mL )；(c)空白大鼠血浆。

具体实施方式

[0022] 实施例1

[0023] (一)溶液配制

[0024] 对照品系列溶液

[0025] 精密称取麝香酮标准品0.0567g，置100ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，作为麝香酮标准品储备液(567μg/ml)。将储备液用甲醇依次稀释，制成浓度分别为0.756、1.134、5.67、11.34、56.7、113.4μg/ml的麝香酮标准溶液。溶液置于4℃冰箱中，保存待用。

[0026] 内标工作液

[0027] 精密称取环己酮0.0117g，用甲醇配制为浓度为117μg/ml的内标储备液，将储备液用甲醇稀释为浓度为53.7μg/ml的内标溶液。溶液置于4℃冰箱中，保存待用。

[0028] (二)质控样品的配制

[0029] 取大鼠空白血浆0.3ml，分别加入0.756、1.134、5.67、11.34、56.7、113.4μg/ml各20μl的麝香酮标准溶液，混合均匀。

[0030] (三)血浆样品处理

[0031] 大鼠灌胃人工麝香后一定时间内，眼眶取血并置于肝素化试管中，将取得的血液离心后得到上层的血浆样品，取血浆样品0.3ml，加0.3ml乙腈，同时加入内标环己酮的醇溶液20μl，混合涡旋60s后以6000r/min离心6min，取上清液置10ml顶空进样瓶中，再加入2ml 1wt％NaCl水溶液密封后待测。

[0032] (四)测定条件

[0033] 使用Agilent 6890N气相色谱仪，联接Agilent 5975B质谱仪，配套使用Agilent G1888A顶空进样器，顶空进样条件设为：顶空平衡温度：95℃，定量环温度：110℃，传输线温度：120℃，样品瓶平衡时间：3min；加压0.4min，定量环填充时间：0.2min，定量环平衡时间：0.1min，进样时间1min，高摆动多HS提取，每个样品瓶提取3次。

[0034] 气 相 条 件 为：使 用 毛 细 管 柱 HP-5MS 5 ％ Phenyl Methyl Siloxane(30.0m×250μm×0.25μm)，检测器：MSD；载气：高纯氦(He)，纯度＞99.999％，He流量：1.0ml/min，分流比：10∶1，进样口温度：200℃，辅助通道温度：280℃。柱箱程序升温：50℃保持1min后以40℃/min升温至250℃，保持3.5min，280℃后运行5min。质谱电离方式：EI，离子源温度：230℃，EM电压1.3kV。

[0035] 将6个不同浓度的标准血浆与血浆样品分别顶空自动进样后采用选择性离子238m/z，98m/z采集谱图数据，根据6个不同浓度的标准血浆的峰面积得出标准曲线，根据标准曲线计算麝香酮与内标的峰面积计算麝香酮的量。本法对麝香酮高、中、低浓度(7560、
756、378ng/ml)的平均回收率分别为86.2％，84.1％，88.6％(n＝5)，RSD＝3.8％，6.1％，
9.9％，均小于15％，符合生物样品测定要求。

[0036] 实验证明该方法可用于血浆样品中麝香酮的定量测定。

[0037] 实施例2：

[0038] (一)溶液配制

[0039] 对照品系列溶液，质控样品的配制同实施例1。

[0040] (二)血浆样品处理

[0041] 大鼠灌胃人工麝香后一定时间内，眼眶取血并置于肝素化试管中，将取得的血液离心后得到上层的血浆样品，取血浆样品0.3ml，加0.3ml乙腈，同时加入内标溶液(53.7μg/ml的环己酮的醇溶液)20μl，混合涡旋100s后以8000r/min离心5min，取上清置10ml顶空进样瓶中，再加入2ml 3wt％NaCl溶液密封后待测。

[0042] (三)测定条件

[0043] 使用Agilent 6890N气相色谱仪，联接Agilent 5975B质谱仪，配套使用Agilent G1888A顶空进样器，顶空进样条件设为：顶空平衡温度：90℃，定量环温度：120℃，传输线温度：110℃，样品瓶平衡时间：10min，加压0.6min，定量环填充时间：0.2min，定量环平衡时间：0.1min，进样时间1min，高摆动多HS提取，每个样品瓶提取1次。

[0044] 气 相 条 件 为：使 用 毛 细 管 柱 HP-5MS 5 ％ Phenyl Methyl Siloxane(30.0m×250μm×0.25μm)，检测器：MSD；载气：高纯氦(He)，纯度＞99.999％，He流量：1.0ml/min，分流比：10∶1，进样口温度：200℃，辅助通道温度：280℃。柱箱程序升温：50℃保持1min后以40℃/min升温至250℃，保持3.5min，280℃后运行10min。质谱电离方式：EI，离子源温度：230℃，EM电压1.3kV。

[0045] 将6个不同浓度的标准血浆与血浆样品分别顶空自动进样后采用选择性离子238m/z，98m/z采集谱图数据，根据6个不同浓度的标准血浆的峰面积得出标准曲线，根据标准曲线计算麝香酮与内标的峰面积计算麝香酮的量。本法对麝香酮高、中、低浓度(7560、
756、378ng/ml)的平均回收率分别为82.4％，83.1％，85.2％(n＝5)，RSD＝5.8％，6.9％，
11.9％，均小于15％，符合生物样品测定要求。

[0046] 实验证明该方法可用于血浆样品中麝香酮的定量测定。

[0047] 实施例3：

[0048] (一)溶液配制

[0049] 对照品系列溶液，质控样品的配制同实施例1。

[0050] (二)血浆样品处理

[0051] 大鼠灌胃人工麝香后一定时间内，眼眶取血并置于肝素化试管中，将取得的血液离心后得到上层的血浆样品，取血浆样品0.3ml，加0.3ml乙腈，同时加入内标环己酮的醇溶液20μl，混合涡旋120s后以6000r/min离心7min，取上清液置10ml顶空进样瓶中，再加入2ml 3wt％NaCl溶液密封后待测。

[0052] (三)测定条件

[0053] 使用Agilent 6890N气相色谱仪，联接Agilent 5975B质谱仪，配套使用Agilent G1888A顶空进样器，顶空进样条件设为：顶空平衡温度：97℃，定量环温度：110℃，传输线温度：110℃，样品瓶平衡时间：5min，加压0.4min，定量环填充时间：0.2min，定量环平衡时间：0.1min，进样时间0.7min，高摆动多HS提取，每个样品瓶提取3次。

[0054] 气 相 条 件 为：使 用 毛 细 管 柱 HP-5MS 5 ％ Phenyl Methyl Siloxane(30.0m×250μm×0.25μm)，检测器：MSD；载气：高纯氦(He)，纯度＞99.999％，He流量：0.8ml/min，分流比：10∶1，进样口温度：220℃，辅助通道温度：280℃。柱箱程序升温：50℃保持1min后以40℃/min升温至250℃，保持3.5min，280℃后运行5min。质谱电离方式：EI，离子源温度：230℃，EM电压1.3kV。

[0055] 将6个不同浓度的标准血浆与血浆样品分别顶空自动进样后采用选择性离子238m/z，54m/z采集谱图数据，根据6个不同浓度的标准血浆的峰面积得出标准曲线，根据标准曲线计算麝香酮与内标的峰面积计算麝香酮的量。本法对麝香酮高、中、低浓度(7560、
756、378ng/ml)的平均回收率分别为85.7％，84.3％，82.8％(n＝5)，RSD＝3.8％，5.7％，
7.9％，均小于15％，符合生物样品测定要求。

[0056] 实验证明该方法可用于血浆样品中麝香酮的定量测定。

[0057] 实施例4：

[0058] (一)溶液配制

[0059] 对照品系列溶液，质控样品的配制同实施例1。

[0060] (二)血浆样品处理

[0061] 大鼠灌胃人工麝香后一定时间内，眼眶取血并置于肝素化试管中，将取得的血液离心后得到上层的血浆样品，取血浆样品0.3ml，加0.3ml乙腈，同时加入内标溶液(53.7μg/ml的环己酮的醇溶液)20μl，混合涡旋120s后以5000r/min离心10min，取上清置10ml顶空进样瓶中，再加入2ml 5wt％NaCl溶液密封后待测。

[0062] (三)测定条件

[0063] 使用Agilent 6890N气相色谱仪，联接Agilent 5975B质谱仪，配套使用Agilent G1888A顶空进样器，顶空进样条件设为：顶空平衡温度：95℃，定量环温度：120℃，传输线温度：120℃，样品瓶平衡时间：5min，加压0.5min，定量环填充时间：0.2min，定量环平衡时间：0.1min，进样时间1min，高摆动多HS提取，每个样品瓶提取3次。

[0064] 气 相 条 件 为：使 用 用 毛 细 管 柱 HP-5MS 5 ％ Phenyl Methyl Siloxane(30.0m×250μm×0.25μm)，检测器：MSD；载气：高纯氦(He)，纯度＞99.999％，He流量：0.8ml/min，分流比：15∶1，进样口温度：220℃，辅助通道温度：280℃。柱箱程序升温：50℃保持1min后以40℃/min升温至250℃，保持3.5min，280℃后运行5min。质谱电离方式：EI，离子源温度：230℃，EM电压1.3kV。

[0065] 将6个不同浓度的标准血浆与血浆样品分别顶空自动进样后采用选择性离子238m/z，54m/z采集谱图数据，根据6个不同浓度的标准血浆的峰面积得出标准曲线，根据标准曲线计算麝香酮与内标的峰面积计算麝香酮的量。本法对麝香酮高、中、低浓度(7560、
756、378ng/ml)的平均回收率分别为86.1％，84.7％，83.3％(n＝5)，RSD＝7.8％，6.5％，
8.9％，均小于15％，符合生物样品测定要求。

[0066] 实验证明该方法可用于血浆样品中麝香酮的定量测定。

[0067] 实施例5：

[0068] (一)溶液配制

[0069] 对照品系列溶液，质控样品的配制同实施例1。

[0070] (二)血浆样品处理

[0071] 大鼠灌胃人工麝香后一定时间内，眼眶取血并置于肝素化试管中，将取得的血液离心后得到上层的血浆样品，取血浆样品0.3ml，加0.3ml乙腈，同时加入内标溶液(53.7μg/ml的环己酮的醇溶液)20μl，混合涡旋120s后以6000r/min离心7min，取上清置10ml顶空进样瓶中，再加入2ml 5wt％NaCl溶液密封后待测。

[0072] (三)测定条件

[0073] 使用Agilent 6890N气相色谱仪，联接Agilent 5975B质谱仪，配套使用Agilent G1888A顶空进样器，顶空进样条件设为：顶空平衡温度：95℃，定量环温度：110℃，传输线温度：120℃，样品瓶平衡时间：3min，加压0.5min，定量环填充时间：0.2min，定量环平衡时间：0.1min，进样时间1min，高摆动多HS提取，每个样品瓶提取3次。

[0074] 气 相 条 件 为：使 用 毛 细 管 柱 HP-5MS 5 ％ Phenyl Methyl Siloxane(30.0m×250μm×0.25μm)，检测器：MSD；载气：高纯氦(He)，纯度＞99.999％，He流量：1ml/min，分流比：10∶1，进样口温度：200℃，辅助通道温度：280℃。柱箱程序升温：100℃保持1min后以40℃/min升温至250℃，保持5min，290℃后运行5min。质谱电离方式：EI，离子源温度：230℃，EM电压1.3kV。

[0075] 将6个不同浓度的标准血浆与血浆样品分别顶空自动进样后采用选择性离子238m/z，54m/z采集谱图数据，根据6个不同浓度的标准血浆的峰面积得出标准曲线，根据标准曲线计算麝香酮与内标的峰面积计算麝香酮的量。本法对麝香酮高、中、低浓度(7560、
756、378ng/ml)的平均回收率分别为88.1％，90.2％，85.3％(n＝5)，RSD＝4.8％，3.6％，
7.9％，均小于15％，符合生物样品测定要求。

[0076] 实验证明该方法可用于血浆样品中麝香酮的定量测定。

[0077] 实施例6

[0078] 1、专属性考察：

[0079] 取给药后采集得到的血浆样品，按实施例1所述血浆样品处理方法操作，除下述描述外，按实施例1所述的定量分析条件进行测定，得色谱图(a)；将一定浓度的麝香酮标准溶液加入空白血浆中，除不加内标外同法操作，得色谱图(b)。取大鼠空白血浆300μl，除不加内标外同法操作，获得空白样品的色谱图(c)。麝香酮和内标环己酮保留时间分别在8.1min和3.90min左右，峰形良好，血浆中的内源性干扰被分离，表明本方法有较好的特异性(参见图1)。

[0080] 2、标准曲线和线性范围考察：

[0081] 溶液配制、血浆样品处理、测定条件除下述描述外，都与实施例1相同。

[0082] 取空白血浆300μl，精密加入不同浓度的对照品溶液和相同浓度的内标溶液-120μl，使麝香酮在血浆中的浓度分别为50，75，378，756，3780，7560ng·mL 。按血浆样-1
品处理项操作，以血浆中麝香酮浓度(C ng·mL )为横坐标，以麝香酮峰面积AS和内标峰面积Ai的比值(f)为纵坐标，采用加权最小二乘法进行回归运算，求得回归方程如下：
2
f＝0.0016C-0.0059(权重系数w＝1/C，R ＝0.9998)，结果表明麝香酮的血浆浓度在-1 -1
50-7560ng·mL 范围内线性良好，最低检测限为25ng·mL (S/N＝3)。

[0083] 3、精密度：

[0084] 溶液配制、血浆样品处理、测定条件除下述描述外，都与实施例1相同。

[0085] 制备麝香酮高，中，低三个浓度(7560、756、378ng/ml)的质控样品用当日随行的标准曲线测定，每一浓度做6份，连续测定3d，计算日内和3个日间的精密度(RSD％)结果，本法日内和日间精密度均＜15％，满足生物样品分析的要求。

[0086] 4、提取回收率：

[0087] 溶液配制、血浆样品处理、测定条件除下述描述外，都与实施例1相同。

[0088] 制备麝香酮高、中、低三个浓度(7560、756、378ng/ml)的标准品血浆，按血浆样品处理操作，记录麝香酮和内标的峰面积；同时以相应浓度的麝香酮和内标的标准品溶液直接进样得到的峰面积作为对照，每个浓度平行操作5份，按提取回收率(％)＝(标准血浆的平均峰面积/标准品溶液的平均峰面积)×100％，结果见表1。

[0089] 表1大鼠血浆中麝香酮的绝对回收率(n＝5)

[0090]

[0091]

[0092] 5、稳定性：

[0093] 溶液配制、血浆样品处理、测定条件除下述描述外，都与实施例1相同。

[0094] 分别配制麝香酮血浆浓度低、中、高三个浓度(378、756、7560ng/ml)的样品，每个浓度5份，分别考察上述样本在直接进样分析，常温放置6h、反复冻融3次、4℃冰箱放置10h及-26℃冷冻保存1周的稳定性，经过GC-MS顶空进样分析，结果表明麝香酮血浆样本在上述条件下均稳定，其测定准确度在规定的85％～115％内。

[0095] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。