灰色产色链霉菌YN-6及其在防治根肿病中的应用

摘要

本发明提供一株从染有根肿病的十字花科作物的带菌土壤中分离到的灰色产色链霉菌（Streptomyces griseochromogenes）YN-6，其保藏号为CCTCC No：M2013187。通过对根肿病菌休眠孢子萌发抑制和温室盆栽试验验证菌株YN-6对十字花科作物根肿病有较好的防治效果。该菌株在田间自然条件下适应力及定殖力强，不易与大田土壤中复杂的微生物种类之间发生拮抗作用，防治病害效果稳定，有效规避了化学防治、抗病品种及农业防治等方法中存在的不足，是适合用于大田根肿病防治的理想生防菌剂。

权利要求

1.灰色产色链霉菌(Streptomyces griseochromogenes)YN-6，其保藏号为CCTCC No：M2013187。

2.权利要求1所述灰色产色链霉菌YN-6的培养方法，其特征在于，将灰色产色链霉菌YN-6接种于pH值为7.2-7.4的高氏一号培养基中，在24-28℃，黑暗条件下培养5-6d。

3.由权利要求1所述灰色产色链霉菌YN-6制备的生防菌剂。

4.权利要求1所述灰色产色链霉菌YN-6或权利要求3所述生防菌剂在防治作物根肿病中的应用，其中，所述作物为十字花科作物白菜、石排菜心。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，采用灌根法将灰色产色链霉菌YN-6培养液或所述生防菌剂施于染病作物的根部，每次每钵15-25mL，每3-5d浇注Hoagland营养液

25-35mL。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，采用灌根法将灰色产色链霉菌YN-6培养液或所述生防菌剂施于染病作物的根部，每次每钵20mL，每3-5d浇注Hoagland营养液

30mL。

说明书

灰色产色链霉菌YN-6及其在防治根肿病中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及生物防治领域，具体地说，涉及一株灰色产色链霉菌YN-6及其在防治根肿病中的应用。

背景技术

[0002] 十字花科作物根肿病是由芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassicae）侵染引起的世界性土传植物病害。芸薹根肿菌为专性寄生菌，以其休眠孢子在带有病残体的土壤以及未腐熟的厩肥中越冬，存活能力极强，一般能存活至少8年，条件适宜可存活15年以上。目前对于十字花科作物根肿病的主要防治措施有化学防治、抗病品种利用，农业防治以及生物防治等。

[0003] 化学防治是采用的较普遍的防治方法，多菌灵、五氯硝基苯、百菌清、福帅得(氟啶胺)、科佳(氰霜哇)等对根肿病均具有一定的防治效果，能在短期内有效的防治病害，确保作物的产量不会受到很大的影响，但是该种方法防治的成本相对比较高，而且大多数的药剂会在作物上留有残留，对作物的食用安全产生很大的影响。

[0004] 选育抗病品种是防治根肿病的理想方法。但是由于抗病品种培育需要时间久，周期长，且根肿病菌存在生理小种分化，抗病品种应用数年后就感病化，因此，要通过抗病品种完全控制根肿病亦十分困难。

[0005] 农业防治方法如温汤浸种、增施熟石灰或草木灰等，这些处理方法也有一定的局限性，如施熟石灰改变了土壤酸碱性，但长期使用会破坏了土壤结构，不适合长期使用。

[0006] 生物防治即利用有益微生物杀灭或者抑制病原微生物的生长而减少病原微生物的数量，从而控制植物病害发生、发展的一类措施。从控制植物病害的可持续性来考虑，生物防治是一类绿色安全有效的防治方法。

发明内容

[0007] 本发明的目的是提供一株灰色产色链霉菌YN-6及其在防治十字花科作物根肿病中的应用。

[0008] 为了实现本发明目的，本发明提供一株灰色产色链霉菌（Streptomyces griseochromogenes）YN-6，该菌是从染有根肿病的十字花科作物的带菌土壤中分离出的对十字花科作物根肿病有较好防治效果的链霉菌，现已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC No：M2013187，保藏日期2013年5月8日。

[0009] 上述灰色产色链霉菌YN-6的培养方法：将灰色产色链霉菌YN-6接种于pH值为7.2-7.4的高氏一号培养基中，在24-28℃，黑暗条件下培养5-6d。

[0010] 采用平皿插片法观察灰色产色链霉菌YN-6的形态：基内菌丝细长多分枝，直形或波曲，不断裂；气生菌丝螺旋，相对粗壮，易断裂；孢子偏圆柱形，表面有凹陷（图1和2）。

[0011] 菌株YN-6的生理生化特性：产黑色素和H2S，能利用D-果糖、葡萄糖、蔗糖、木糖、D-甘露醇，不能使明胶液化，不能使淀粉水解（不产淀粉酶），不能分解纤维素（不产生纤维素酶），不能利用L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、肌醇。

[0012] 灰色产色链霉菌YN-616S rDNA测序结果如Seq ID No.1所示。

[0013] 本发明还提供由灰色产色链霉菌YN-6制备的生防菌剂。

[0014] 本发明还提供灰色产色链霉菌YN-6或所述生防菌剂在防治十字花科作物（如白菜、四季奶油小白菜、石排菜心等）根肿病中的应用。

[0015] 链霉菌YN-6在高氏一号液体培养基平板上活化后，用打孔器打取直径5mm的2个菌饼接入装有150mL高氏一号液体培养基的250mL三角瓶中，28℃180r/min条件下，在摇床中振荡培养6d，用灭菌纱布（4层）过滤，获得链霉菌YN-6培养液。

[0016] 进行温室盆栽试验：采用菌土接种法让作物感染根肿病，分别在播种时、播种后7d、播种后14d采用灌根法将链霉菌YN-6培养液或所述生防菌剂施于作物的根部，每次每钵15-25mL（优选20mL）20mL，每3-5d浇注Hoagland营养液25-35mL（优选30mL）。

[0017] 本发明从染有根肿病的十字花科作物的带菌土壤中分离到的灰色产色链霉菌YN-6，通过对根肿病菌休眠孢子萌发抑制和温室盆栽试验验证菌株YN-6对十字花科作物根肿病有较好的防治效果。该菌株在田间自然条件下适应力及定殖力强，不易与大田土壤中复杂的微生物种类之间发生拮抗作用，防治病害效果稳定，有效规避了化学防治、抗病品种及农业防治等方法中存在的不足，是适合用于大田根肿病防治的理想生防菌剂。

附图说明

[0018] 图1为本发明实施例2中灰色产色链霉菌YN-6在高氏一号培养基上的形态（×600）。

[0019] 图2为本发明实施例2中灰色产色链霉菌YN-6的孢子链形态（×30000）。

[0020] 图3为本发明实施例2中灰色产色链霉菌YN-6在不同培养基平板上的培养结果。

[0021] 图4为本发明实施例2中采用平板对峙培养法鉴定链霉菌YN-6对不同病原菌的抑制效果。

具体实施方式

[0022] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

[0023] 实施例1灰色产色链霉菌YN-6培养液的制备

[0024] 将从染有根肿病的十字花科作物的带菌土壤中分离到的灰色产色链霉菌YN-6（CCTCC No：M2013187）在高氏一号液体培养基平板上活化后，用打孔器打取直径5mm的2个菌饼接入装有150mL高氏一号液体培养基的250mL三角瓶中，28℃180r/min黑暗条件下，在摇床中振荡培养6d，用灭菌纱布（4层）过滤，获得链霉菌YN-6培养液。

[0025] 实施例2通过对根肿病菌休眠孢子萌发抑制实验和温室盆栽试验评价菌株YN-6对十字花科作物根肿病菌的防治效果

[0026] 本 实 施 例 中 使 用 的 指 示 菌 株 为 橘 子 炭 疽 病 菌 (Colletotrichum geloeosporiolides)、稻曲病菌(Ustiloginoidea virens)、辣椒疫霉病菌（Phytophthorac apsici）、辣椒尖孢炭疽病菌（Colletotrichum spp.)、稻瘟病菌（Pyricularia oryzae）。

[0027] 1对根肿病菌休眠孢子萌发抑制实验

[0028] 将菌株YN-6培养液、根肿病菌休眠孢子悬浮液、白菜根分泌液分别以2mL、2mL、20mL的量加入灭菌的三角瓶中，以无菌水代替拮抗菌培养液为对照，pH值6.3，24℃黑暗培养，5d后用地衣红染色3min镜检休眠孢子萌发情况，重复3次，结果显示对根肿病菌休眠孢子萌发抑制率为61.75%。

[0029] 2温室盆栽试验

[0030] 采用菌土接种法让作物感染根肿病，分别在播种时、播种后7d、播种后14d采用灌根法将链霉菌YN-6培养液施于作物的根部，每次每钵浇20mL。设置清水、75%百菌清（×600倍液）为对照，共6个处理，每个处理6钵，每钵5株。每3-5d浇注Hoagland营养液约30mL，种植约30d后调查根肿病发生情况（表1和表2）。

[0031] 表1YN-6对易感品种四季奶油小白菜根肿病的防治效果

[0032]

[0033] 表2.YN-6对易感品种特纯良种石排菜心根肿病的防治效果

[0034]

[0035] 白菜根肿病是由原生动物门芸薹根肿菌（P.brassicae）侵染引起的世界范围内的土传植物病害，主要危害根部，形成大小不一的肿瘤，严重时引起植株根部腐烂乃至全株枯死，造成重大经济损失。目前防治十字花科作物根肿病采取的主要措施有包括化学防治、抗病品种利用，农业防治等，由于土传病害药剂防治用量大，对十字花科蔬菜食用安全存在隐患；目前抗病品种少，不能满足生产需要；农业防治仅能作为辅助防治措施。应用拮抗微生物进行生物防治该病是一种安全、有效、无污染的防治方法。从可持续发展的角度来考虑，筛选生防菌防治植物病害被认为是安全有效、无污染的防治方法。

[0036] 本发明从染有根肿病的十字花科作物的带菌土壤中分离到菌株YN-6，通过平板对峙培养实验，发现该菌株对多种病原指示菌，如橘子炭疽病菌(Colletotrichum geloeosporiolides)、稻曲病菌(Ustiloginoidea virens)、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）、辣椒尖孢炭疽病菌（Colletotrichum spp.)、稻瘟病菌（Pyricularia oryzae）等均有较好的拮抗效果。

[0037] 图3为使用不同培养基平板培养灰色产色链霉菌YN-6的结果。

[0038] 图4为采用平板对峙培养法鉴定链霉菌YN-6对不同病原菌的抑制效果。

[0039] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。