猴耳环提取物及其在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物中的应用

摘要

本发明公开了中草药猴耳环的水、乙醇、乙醇水溶液提取物及其相应石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水层萃取物在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物（MRSA）及抗生素抗MRSA增敏类药物中的应用。同时也公开了上述提取物或萃取物的制备方法。实验结果显示：猴耳环水、10%乙醇、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇提取物及相应乙酸乙酯、正丁醇、水层萃取物均具有较强的抗MRSA作用，其中猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位活性最强；猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗MRSA具有增敏作用。

权利要求

1.猴耳环水提取物或乙醇提取物或乙醇水溶液提取物在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述提取物的制备方法为：取猴耳环药材，用水或者乙醇或者乙醇水溶液提取，回收溶剂制浸膏，浸膏加水稀释，再用乙酸乙酯或正丁醇萃取，萃取液浓缩得猴耳环提取物。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述乙醇水溶液的乙醇浓度是10％、30％、

60％或95％。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：取猴耳环药材，按药材重量与溶剂体积比为1:10的比例用60％乙醇水溶液提取三次，回收溶剂得浸膏，浸膏加水稀释后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液浓缩得所述猴耳环提取物。

5.猴耳环60％乙醇水溶液提取物的乙酸乙酯萃取物在制备抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌增敏药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的萃取物由以下方法制备：取猴耳环药材，按药材重量与溶剂体积比为1:10的比例用60％乙醇水溶液提取三次，回收溶剂得浸膏，浸膏加水稀释后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液浓缩得所述猴耳环萃取物。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的抗生素是红霉素或头孢曲松钠或左氧氟沙星。

说明书

猴耳环提取物及其在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药

物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属中药制药领域，涉及中草药猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.) 提取物的新用途。

背景技术

[0002] 众所周知，当前细菌耐药已成为全球范围的重大公共健康问题，抗生素的滥用是造成细菌耐药的重要原因。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，以下简称“MRSA”)具有多重耐药性并伴有高发病率和高死亡率，是导致坏死性肺炎、严重败血症、坏死性筋膜炎等疾病的重要致病菌，是医院感染和社区感染的重要病原菌之一，给临床治疗带来了极大的困难。MRSA对绝大多数的抗菌药耐药，甚至对目前临床抗耐药菌最为有效的万古霉素也开始出现耐药，一旦MRSA发展到对万古霉素普遍耐药的程度，感染MRSA的患者将面临无药可治的危险境地。因此，针对细菌耐药日趋严重的情况，寻找、开发具有抗耐药菌MRSA、对抗生素具有增敏作用的抗菌药物，刻不容缓。

[0003] 猴耳环为含羞草科猴耳环属植物猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)的干燥幼枝及叶，是两广地区常用的中草药，用于治疗上呼吸道感染、急性咽喉炎、细菌性痢疾等疾病。目前有文献公开猴耳环的水及乙醇的单纯提取液具有抗病毒作用，但对上述提取液的其他用途或其他方法制备的提取物的药物应用则没有报道。

发明内容

[0004] 本发明的目的是开发猴耳环在制药领域上的新用途。

[0005] 目的之一是，将猴耳环水或乙醇或乙醇水溶液提取物用于制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物和抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌增敏药物。

[0006] 目的之二是，进一步优化猴耳环水或乙醇或乙醇水溶液提取物，开发活性更强的提取物。

[0007] 目的之三是，公开上述提取物的制备方法。

[0008] 本发明的技术方案：

[0009] 一、本发明所述猴耳环提取物的制备方法，包括以下步骤：

[0010] 1.取猴耳环药材，用水或乙醇或乙醇水溶液提取，回收溶剂得浸膏，制得猴耳环水提取物或乙醇提取物或乙醇水溶液提取物。

[0011] 2.上述浸膏加水稀释，再用石油醚或乙酸乙酯或正丁醇萃取，取萃取液浓缩分别制得对应的猴耳环提取物。此提取物的成分进一步优化，其药效明显提高。制备中涉及的药材重量与溶剂体积比的单位，药材重量以克计，溶剂体积以毫升计。

[0012] 二、将上述猴耳环提取物作为活性成分应用于抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物的制备。

[0013] 三、将上述猴耳环提取物作为活性成分应用于抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌增敏药物制备。特别是作为红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗MRSA组合药物的增敏剂。

[0014] 本发明通过对猴耳环进行提取和分离，对各提取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用进行筛选，并进行联合药敏试验，来考察猴耳环抗MRSA及其对抗生素抗MRSA的增敏作用。实验结果显示：猴耳环水、10%乙醇、 30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇提取物及相应乙酸乙酯、正丁醇和水层萃取物均具有较强的抗MRSA作用，其中猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物活性最强，相对于不经萃取的水提取物的抗菌作用强4倍；猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗MRSA具有增敏作用。

[0015] 本发明通过下述方法对猴耳环提取物的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药理作用进行筛选。

[0016] 以微量肉汤稀释法测定猴耳环提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。

[0017] 菌株：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA，编号为M1-M20)临床分离株20株；金黄色葡萄球菌标准菌株(Sa，ATCC25923)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供，经中山大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。

[0018] MH肉汤培养基：MH肉汤干粉(英国 OXOID LTD.)2.1g，定容至100ml，NaOH调节pH至7.0，高压灭菌，置4℃冰箱备用。

[0019] 方法：参照美国国立临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的微量肉汤稀释法操作。

[0020] 本发明通过下述方法对猴耳环提取物对红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的增敏作用进行考察。

[0021] 菌株：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA，编号为M1-M20)临床分离株100株；金黄色葡萄球菌标准菌株(Sa，ATCC25923)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供，经中山大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。

[0022] MH肉汤培养基：MH肉汤干粉(英国 OXOID LTD.)2.1g，定容至100ml，NaOH调节pH至7.0，高压灭菌，置4℃冰箱备用。

[0023] 方法：参照美国国立临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的棋盘稀释法操作。

[0024] 本发明的有益效果是：

[0025] 用本发明方法制备得到的产品具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的作用，并对红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗MRSA具有增敏作用，可作为天然的抗菌剂、抗生素增敏剂，应用于食品、药品等行业；同时实现猴耳环植物的综合利用和提高其附加值。本发明所称的药物包括人用药物及其他动物用药物。

[0026] 本发明的上述猴耳环提取物可作为抗菌类药物制剂的活性成分，制成片剂、胶囊、缓释剂、注射剂、栓剂、复方制剂等。

具体实施方式

[0027] 以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。

[0028] 实施例1

[0029] 制备猴耳环水提取物及其萃取物

[0030] 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)由广州市花城制药厂提供。猴耳环300g，用水3000ml煎煮2次，每次2小时，过滤；合并滤液，浓缩得浸膏(水提取物)81.9g。
取浸膏54.6g，用水200ml混悬后，以每次200ml，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚提取物0.9g、乙酸乙酯提取物14.8g、正丁醇提取物11.7g、水层提取物27.1g。

[0031] 实施例2

[0032] 猴耳环水提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选

[0033] 1实验方法

[0034] 1)最低抑菌浓度(MIC)的测定：

[0035] 猴耳环水提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素分别在5
MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×10CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。

[0036] 2)最低杀菌浓度(MBC)的测定：

[0037] 从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。

[0038] 通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。

[0039] 2实验结果

[0040] 猴耳环水提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表1。

[0041] 猴耳环水提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表2。

[0042] 经过统计分析，猴耳环水提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表3。

[0043] 经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表4：

[0044] 表1 猴耳环水提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果[0045]

[0046] 表2 猴耳环水提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果

[0047]

[0048] 表3 猴耳环水提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果[0049]

[0050] 表4 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果

[0051]

[0052] 实验结果表明，猴耳环水提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中水提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。

[0053] 实施例3

[0054] 制备猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物

[0055] 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)由广州市花城制药厂提供。猴耳环300g，用10%乙醇3000ml回流提取2次，每次2小时，过滤；合并滤液，浓缩得浸膏(10%乙醇提取物)95.1g。取浸膏63.4g，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，每次200ml，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物1.2g、乙酸乙酯萃取物17.3g、正丁醇萃取物16.3g、水层萃取物28.6g。

[0056] 实施例4

[0057] 猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选

[0058] 1实验方法

[0059] 3)最低抑菌浓度(MIC)的测定：

[0060] 猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素5
分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×10CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。

[0061] 4)最低杀菌浓度(MBC)的测定：

[0062] 从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。

[0063] 通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌的作用。

[0064] 2实验结果

[0065] 猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表5。

[0066] 猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表6。

[0067] 经过统计分析，猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表7。

[0068] 经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表8：

[0069] 表5 猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果

[0070]

[0071] 表6 猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果[0072]

[0073] 表7 猴耳环10%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果

[0074]

[0075] 表8 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果

[0076]

[0077] 实验结果表明，猴耳环10%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。

[0078] 实施例5

[0079] 制备猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物

[0080] 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)由广州市花城制药厂提供。猴耳环300g，用30%乙醇3000ml回流提取2次，每次2小时，过滤；合并滤液，浓缩得浸膏(30%乙醇提取物)115.5g。取浸膏77.0g，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，每次200ml，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物1.6g、乙酸乙酯萃取物21.7g、正丁醇萃取物17.6g、水层萃取物36.1g。

[0081] 实施例6

[0082] 猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选

[0083] 1实验方法

[0084] 5)最低抑菌浓度(MIC)的测定：

[0085] 猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素5
分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×10CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。

[0086] 6)最低杀菌浓度(MBC)的测定：

[0087] 从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。

[0088] 通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。

[0089] 2实验结果

[0090] 猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表9。

[0091] 猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表10。

[0092] 经过统计分析，猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表11。

[0093] 经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表12：

[0094] 表9 猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果

[0095]

[0096] 表10 猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果[0097]

[0098] 表11 猴耳环30%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果

[0099]

[0100] 表12 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果

[0101]

[0102] 实验结果表明，猴耳环30%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中30%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。

[0103] 实施例7

[0104] 制备猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物

[0105] 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)由广州市花城制药厂提供。猴耳环300g，用95%乙醇3000ml回流提取2次，每次2小时，过滤；合并滤液，浓缩得浸膏(95%乙醇提取物)119.4g。取浸膏79.6g，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，每次200ml，分别合并各萃取液，浓缩得石油醚萃取物2.3g、乙酸乙酯萃取物22.5g、正丁醇萃取物23.3g、水层萃取物31.4g。

[0106] 实施例8

[0107] 猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用的筛选

[0108] 1实验方法

[0109] 7)最低抑菌浓度(MIC)的测定：

[0110] 猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素5
分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×10CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。

[0111] 8)最低杀菌浓度(MBC)的测定：

[0112] 从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。

[0113] 通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。

[0114] 2实验结果

[0115] 猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表13。

[0116] 猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表14。

[0117] 经过统计分析，猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表15。

[0118] 经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表16：

[0119] 表13 猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果

[0120]

[0121] 表14 猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果[0122]

[0123] 表15 猴耳环95%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果

[0124]

[0125] 表16 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果

[0126]

[0127] 实验结果表明，猴耳环95%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗MRSA的活性最强。

[0128] 实施例9

[0129] 制备猴耳环60%乙醇提取物及其萃取物

[0130] 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)由广州市花城制药厂提供。猴耳环300g打成粗粉，用60%乙醇3000ml回流2次，每次2小时，过滤；合并滤液，浓缩得浸膏(60%乙醇提取物)133.8g。取浸膏89.2g，用水200ml混悬后，以每次200ml，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取三次，分别合 并各萃取液，浓缩得石油醚提取物2.3g、乙酸乙酯提取物26.2g、正丁醇提取物19.5g、水层提取物41.1g。

[0131] 实施例10

[0132] 猴耳环60%提取物及其萃取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药理作用的筛选[0133] 1实验方法

[0134] 9)最低抑菌浓度(MIC)的测定：

[0135] 猴耳环提取物、红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素分别在MH肉汤培养基5
中进行一系列倍比稀释，调节接种菌为1.0×10CFU/ml。35℃培养24小时，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。

[0136] 10)最低杀菌浓度(MBC)的测定：

[0137] 从1)项无菌生长的孔中移取50μl至血平板上，均匀涂布，35℃培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9％或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。

[0138] 通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90，来评价药物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用。

[0139] 2实验结果

[0140] 猴耳环提取物及四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果见表17。

[0141] 猴耳环提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀菌试验结果见表18。

[0142] 经过统计分析，猴耳环提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌和 杀菌试验的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表19。

[0143] 经过统计分析，四种抗生素(红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星、万古霉素)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌试验的MIC50、MIC90见表20：

[0144] 表17 猴耳环60%乙醇提取物及其萃取物、四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验结果

[0145]

[0146] 表18 猴耳环60%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外杀菌试验结果[0147]

[0148] 表19 猴耳环60%乙醇提取物及其萃取物对MRSA的体外抑菌和杀菌试验的统计结果

[0149]

[0150] 表20 四种抗生素对MRSA的体外抑菌试验的统计结果

[0151]

[0152] 实验结果表明，猴耳环60%乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层具有较强的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作用。其中60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物(即本发明提取物)抗MRSA的活性最强。

[0153] 实施例11

[0154] 猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的增敏作用的考察

[0155] 1实验方法

[0156] 棋盘稀释法：

[0157] 采用棋盘稀释法，将猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物、红霉素(ERY)、头孢曲松钠(CRO)、左氧氟沙星(LVX)分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，调整菌悬5
液的浓度为1.0×10CFU/mL，接种于96孔无菌培养板内, 35℃培养24小时，观察配伍后的药物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的MIC。无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。

[0158] 按照公式 ，通过计算部分抑菌浓度指数(FIC)来评价猴耳环乙酸乙酯提取物与抗生素联合抗菌的相互作用(FIC≤0.5表示两种药呈现协同作用；0.5＜FIC≤1表示两种药呈现相加作用；1＜FIC≤2表示两种药无相互作用；FIC＞2表示两种药呈现拮抗作用)，并根据无菌生长孔找出猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物和抗生素的最佳浓度配比，最终评价猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对抗生素增敏作用的药效。

[0159] 2实验结果

[0160] 猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与抗生素联合药敏试验的FIC值见表21。猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与红霉素对20株MRSA和一株ATCC25923联合用药的结果为FIC≤0.5，呈协同作用；猴耳环乙酸乙酯提取物与头孢曲松钠对一株ATCC25923联合用药的结果为FIC=0.5，呈协同作用；猴耳环乙酸乙酯提取物与头孢曲松钠对20株MRSA联合用药的结果为0.5＜FIC≤1，呈相加作用；猴耳环乙酸乙酯提取物与左氧氟沙星对20株MRSA和一株ATCC25923 联合用药的结果为FIC=1，呈相加作用。

[0161] 猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对抗生素抗MRSA的增敏作用结果见表22。以M1号MRSA为例，100μg/ml的猴耳环乙酸乙酯提取物与头孢曲松钠联合给药，可以将头孢曲松的MIC从1024μg/ml(单独使用时的MIC)降低到256μg/ml(联合使用时的MIC)。实验结果显示，对于所有受试菌株，猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物均能降低红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星的MIC。说明猴耳环乙酸乙酯提取物具有对抗生素抗耐