一种贝伐单抗滴眼液及其制备方法

摘要

本发明涉及一种贝伐单抗滴眼液及其制备方法。所述滴眼液的组分及其用量为：贝伐单抗0.25~25g/L；增稠剂0.1~25 g/L；甘油0.1~25 g/L；蛋白保护剂0.025~1.0g/L；渗透压调节剂2.5~12.5 g/L；并调节所述滴眼液的PH至5.0~7.5。本发明所述的滴眼液能防止药物的外溢流失，使药物长时间滞留在病灶区，且能起到润滑角膜的作用，增加了贝伐单抗的生物利用度。此外，加入甘油增加贝伐单抗滴眼液的保存时间。

权利要求

1.一种贝伐单抗滴眼液，其特征在于：所述滴眼液由以下组分组成：贝伐单抗 1.25g；

透明质酸钠 1.25g；

甘油 1.25g；

人血白蛋白 0.05g；

氯化钠 1g；

磷酸二氢钠 0.045g；

磷酸氢二钠 0.1g；

注射用水加至 100ml共制得 250支测得的pH值为7.0。

2.一种如权利要求1所述的贝伐单抗滴眼液的制备方法，其特征在于制备方法如下：（1）将处方量透明质酸钠于适量的无菌注射用水中，在121°C热压灭菌，冷却至30℃备用；

（2）将处方量贝伐单抗、人血白蛋白、氯化钠和磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶于适量无菌注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

（3）在无菌调节下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液均匀混合，用无菌注射用水定容后立即分装，并于4℃下保存。

说明书

一种贝伐单抗滴眼液及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及生物制品领域，特别是涉及一种贝伐单抗滴眼液及其制备方法。

背景技术

[0002] 角膜新生血管（corneal neovascularization，CNV）是多种眼表疾病如严重的化学和热烧伤、感染、变性或外伤等的共同病理特征。可降低角膜透明性，导致显著的视力下降、角膜瘢痕、脂质沉积、改变角膜的“免疫赦免”功能，且使得角膜移植后的排斥反应增加，导致穿透性角膜移植的失败。目前治疗的方法很多，但效果并不理想。近年研究显示, 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在角膜新生血管形成中发挥着重要作用。动物实验发现炎症和血管化的角膜中VEGF明显上调。Lai等的实验证实了特异性的下调VEGF生成，能显著减少角膜新生血管的形成。因此，探讨VEGF拮抗剂在角膜新生血管性疾病中的应用对于预防和治疗眼表新生血管性疾病具有重要的临床意义和实用价值。

[0003] 贝伐单抗（Bevacizumab），商品名阿瓦斯汀（Avastin），是新型人源化抗血管内皮生长因子的重组鼠单克隆IgG1 抗体,分子量为149kDa。贝伐单抗可与VEGF-A的5种亚型结合，其抗新生血管的主要机制为阻止VEFG与内皮细胞表面的VEFG受体结合，使内源化VEGF的生物活性失效，抑制内皮细胞有丝分裂，减少血管通透性，从而阻碍新生血管的形成。自2004年贝伐单抗作为抑制肿瘤新生血管生成的药物在美国第一个获准上市，贝伐单抗随后被引入眼科领域，广泛应用于眼底新生血管性疾病的防治。其主要通过玻璃体腔注射治疗脉络膜新生血管、湿性年龄相关性黄斑变性、糖尿病、视网膜分支静脉阻塞等引起的黄斑水肿和视网膜新生血管等眼底疾病,并取得了肯定的疗效。然而，贝伐单抗在眼表新生血管的研究相对较少,仍处于试验阶段，缺乏可直接用于临床使用的治疗眼表疾病的局部用药制剂。目前针对贝伐单抗对眼表新生血管作用的实验研究的眼局部给药方式有两种，常用的一种方式为直接用药物滴眼，另一种为将药物注射入球结膜下后，通过巩膜浸润扩散进入角膜基质层和角巩膜缘组织进入眼内。使用注射给药时，局部刺激性大，患者常会有一定程度的疼痛不适和刺破眼球的危险。大多需要反复给药，多次注射容易造成结膜下出血和瘢痕化，更增加此药物的使用不便。此外，滴眼液使用方便，滴眼后没有全身其他系统不良反应，但使用眼表局部滴入结膜囊后药液容易外溢流失，并随泪液而稀释，生物利用度较低。目前，眼表新生血管疾病的动物研究使用的贝伐单抗溶液，为直接用生理盐水稀释的贝伐单抗原液制成，这种溶液的物理特性，如渗透压、PH值等与生理情况下的正常泪液存在一定差异，限制了其在临床上的使用。有研究观察贝伐单抗抑制碱烧伤致鼠角膜新生血管模型时，发现贝伐单抗局部应用虽然能够有效抑制小鼠角膜新生血管，但同时观察到有明显的角膜混浊形成，其推测可能与生理盐水稀释贝伐单抗原液制成的滴眼液渗透压相对较低，造成的角膜水肿。因此，寻找一种即能充分发挥贝伐单抗抗新生血管作用又能最大限度减少并发症的给药方式显得尤为重要。

[0004] 另外，贝伐单抗属于单克隆抗体，一般状态下不易保存，极容易变质失效，甚至引起过敏反应。寻找一种保护贝伐单抗蛋白质的保护剂，延长贝伐单抗的有效时间极为重要。

[0005] 玻璃酸钠是玻璃酸的钠盐形式，为一种粘多糖类透明化合物，其分子质量为150万-300万道尔顿。玻璃酸钠在溶液中的无规则卷曲状态和流体力学特点赋予它具有许多重要的物理特性，如：高度黏弹性、可塑性、渗透性、独特的流变学特性以及良好的生物相容性，这些特性使得玻璃酸钠成为临床上用途十分广泛的生物医学材料。

[0006] 总之，在眼表新生血管性疾病中，寻找一种操作简单方便又增加疗效的贝伐单抗复合用药制剂应用于临床上面十分必要。本发明突破各项技术难题，首次将贝伐单抗制作成滴眼液，将对眼表新生血管疾病的治疗产生极大的影响。

发明内容

[0007] 根据现有技术的不足，为了实现贝伐单抗用于眼表新生血管的局部治疗，并增加贝伐单抗滴眼液在角膜新生血管疾病中的生物利用度，增加滴眼液的稳定性和保存，本发明提供了一种刺激性小且稳定性好的贝伐单抗滴眼液及其制备方法。

[0008] 本发明提供的技术方案为：一种贝伐单抗滴眼液，所述滴眼液包含有以下组分及各组分的比例为：

[0009] 贝伐单抗0.25~25g/L；

[0010] 增稠剂0.1~25 g/L；

[0011] 甘油0.1~25 g/L；

[0012] 蛋白保护剂0.025~1.0g/L；

[0013] 渗透压调节剂2.5~12.5 g/L；

[0014] 并调节所述滴眼液的PH至5.0~7.5。

[0015] 所述滴眼液包含有以下组分及各组分的比例优选为：

[0016] 贝伐单抗2.5~12.5g/L；

[0017] 增稠剂5~12.5 g/L；

[0018] 甘油5~12.5 g/L；

[0019] 蛋白保护剂0.125~0.5g/L；

[0020] 渗透压调节剂5~10 g/L；

[0021] 并调节所述滴眼液的PH至5.0~7.5。

[0022] 所述蛋白保护剂为人血白蛋白、甘露醇或聚乙二醇。

[0023] 所述渗透压调节剂为氯化钠或山梨醇。

[0024] 所述滴眼液的渗透压为295~305mmol/L。

[0025] 所述滴眼液采用PH调节剂调节PH值,所述PH调节剂为磷酸缓冲对、硼酸缓冲对或盐酸/氢氧化钠缓冲对。

[0026] 一种贝伐单抗滴眼液的制备方法，包含以下步骤：

[0027] （1）首先按比例称量各个组分；

[0028] （2）接着将增稠剂分散于无菌注射用水中，高压蒸汽灭菌后冷却至30℃-40℃；

[0029] （3）将贝伐单抗、蛋白保护剂、渗透压调节剂和PH调节剂溶于无菌注射用水中，过滤除菌；

[0030] （4）在无菌环境下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液混合均匀后得到产品。

[0031] 所述滴眼液0.4ml分装保存于4℃。

[0032] 本发明与现有的技术相比，具有以下的有益效果：

[0033] 玻璃酸钠具有高度黏弹性、可塑性、渗透性、独特的流变学特性、良好的生物相容性、显著的亲水能力以及润滑作用，同时研究还发现，人眼角膜内皮细胞上含有内源性玻璃酸钠及其受体，并且玻璃酸钠还能与纤维连接蛋白结合，通过后者的作用促进角膜上皮细胞的连接和伸展，从而促进角膜上皮细胞的创伤修复。有研究在家兔角膜上皮损伤模型中观察到对碘蒸汽及n- 庚醇所引起的角膜上皮剥脱，0.1%玻璃酸钠能使创面显著缩小，促进角膜上皮细胞延伸。玻璃酸钠的上述特性能够很好的发挥贝伐单抗的抗新生血管作用，并有助于角膜损伤的修复。

[0034] 加入一定的缓冲盐离子和渗透压调节剂，可以形成接近正常生物泪液的生理特性：如生理浓度的离子浓度和酸碱度，滴眼液组织相容性好，舒适无刺激反应，更有利于眼表损伤的修复。

[0035] 此外，甘油等蛋白质保护剂能够增加贝伐单抗的保存时间。加入这些保护剂可以延长贝伐单抗的保存时间，保持贝伐单抗的药理作用。

[0036] 本发明提供了一种用于临床使用的抑制眼表新生血管的贝伐单抗滴眼液，为临床上治疗角膜新生血管性疾病增添了一种新的方法，同时增加了贝伐单抗治疗疾病的范围。

[0037] 本发明添加玻璃酸钠等增稠剂，增加滴眼液在眼表停留时间，加强其生物利用度，尤其是玻璃酸钠减少了滴眼液对受伤眼的刺激，增加滴眼液舒适度。

[0038] 本发明的滴眼液为0.4ml单剂量包装，避免添加防腐剂对受伤眼的刺激。且单剂量包装避免重复滴眼过程中对滴眼液的污染。

[0039] 具体实施方法

[0040] 下面结合本发明的实施例做进一步的说明，这些实施例应理解为不会限制本发明的实施范围，其变型及等同方式均被涵盖在本发明的保护范围内。

[0041] 实施例1

[0042] 贝伐单抗滴眼液组分：

[0043] 贝伐单抗 25mg；

[0044] 透明质酸钠 10mg；

[0045] 甘油 10mg；

[0046] 人血白蛋白 2.5mg；

[0047] 氯化钠 250mg；

[0048] 磷酸二氢钠 50mg；

[0049] 磷酸氢二钠 125mg；

[0050] 注射用水加至 100ml

[0051] 共制得 250支

[0052] 测得的PH值为6.8。

[0053] 上述贝伐单抗滴眼液的制备方法步骤如下：

[0054] （1）将处方量玻璃酸钠分散于适量的无菌注射用水中充分溶胀，在121°C热压灭菌，冷却至40℃备用；

[0055] （2）将处方量贝伐单抗、人血白蛋白、氯化钠和磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶于适量无菌注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

[0056] （3）在无菌调节下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液均匀混合，用无菌注射用水定容后立即分装，并于4℃下保存。

[0057] 将本实施例所得滴眼液进行兔角膜碱烧伤模型实验，发现能够使碱烧伤后新生血管发生时间延迟1天；使得损伤后一周的角膜新生血管面积较对照组减少20%；使得损伤后一周角膜组织中VEGF蛋白表达较对照组减少20%；使得损伤后一周角膜组织中VEGFmRNA表达减少15%，使得损伤后一周的房水内VEGF蛋白表达减少25%。

[0058] 实施例2

[0059] 贝伐单抗滴眼液组分：

[0060] 贝伐单抗 250mg；

[0061] 透明质酸钠 500mg；

[0062] 甘油 500mg；

[0063] 人血白蛋白 12.5mg；

[0064] 氯化钠 500mg；

[0065] 磷酸二氢钠 45mg；

[0066] 磷酸氢二钠 100mg；

[0067] 注射用水加至100ml

[0068] 共制得 250支

[0069] 测得的PH值为7.0。

[0070] 上述贝伐单抗滴眼液的制备方法步骤如下：

[0071] （1）将处方量玻璃酸钠分散于适量的无菌注射用水中充分溶胀，在121°C热压灭菌，冷却至35℃备用；

[0072] （2）将处方量贝伐单抗、人血白蛋白、氯化钠和磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶于适量无菌注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

[0073] （3）在无菌调节下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液均匀混合，用无菌注射用水定容后立即分装，并于4℃下保存。

[0074] 将本实施例所得滴眼液进行兔角膜碱烧伤模型实验，发现能够使碱烧伤后新生血管发生时间延迟1.5天；使得损伤后一周的角膜新生血管面积较对照组减少25%；使得损伤后一周角膜组织中VEGF蛋白表达较对照组减少30%；使得损伤后一周角膜组织中VEGFmRNA表达减少25%，使得损伤后一周的房水内VEGF蛋白表达减少30%。

[0075] 实施例3

[0076] 贝伐单抗滴眼液组分：

[0077] 贝伐单抗 2.5g；

[0078] 聚乙烯醇 2.5g；

[0079] 甘油 2.5g；

[0080] 人血白蛋白 0.1g；

[0081] 山梨醇 1.25g；

[0082] 磷酸二氢钠 0.1g