一种从仙茅中提取仙茅总苷物质的方法及其在制备防治围绝经期综合征药物中的应用

摘要

本发明涉及从仙茅中提取仙茅总苷物质的方法及其在制备防治围绝经期综合征药物中的应用，可有效解决从仙茅中提取仙茅总苷以用于制备防治围绝经期综合征药物的问题，方法是，将仙茅粉碎成药粉，用乙醇浸泡，回流提取2次，过滤，提取液减压回收乙醇至无醇味，浓缩，浓缩液加蒸馏水分散，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱，弃去水液；再用不同体积浓度的乙醇洗脱两次，收集第二次洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至干粉，得仙茅总苷；该仙茅总苷有效用于防治围绝经期综合征药物，实现仙茅总苷在制备防治围绝经期综合征药物中的应用，本发明原料丰富，制备方法独特，易操作，开辟了仙茅的药用价值，是防治围绝经期综合征药物上的创新。

权利要求

1.一种从仙茅中提取的仙茅总苷在制备防治围绝经期综合征药物中的应用，该仙茅总苷是，先将仙茅粉碎成过60-80目筛的药粉，用10倍药粉重量的、体积浓度为80%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，每次1.5h，过滤，得提取液，提取液减压回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度1.1-1.4的浓缩液，浓缩液加蒸馏水分散成含生药量0.5g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂，上样量与树脂体积的比例为1︰12，树脂柱径高比为1︰12；先用8倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；再用8倍柱体积的体积浓度为10%的乙醇洗脱，弃洗脱液；最后用10倍柱体积的体积浓度为75%的乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至干粉，得仙茅总苷。

说明书

一种从仙茅中提取仙茅总苷物质的方法及其在制备防治围

绝经期综合征药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及医药，特别是一种从仙茅中提取仙茅总苷物质的方法及其在制备防治围绝经期综合征药物中的应用。

背景技术

[0002] 仙茅为石蒜科多年生草本植物仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的根茎，性温，味辛，归肝、肾经，具有补肾助阳、益精血、强筋骨、行血消肿的作用，主要用于肾阳不足、阳痿遗精、虚痨内伤和筋骨疼痛等病症。其叶似茅，根状茎久服益精补髓，增添精神，故有仙茅之称。近年对仙茅的现代研究表明，仙茅的化学成分主要有皂苷、酚及酚苷和木脂素类化合物，少量有机酸及生物碱类等，仙茅中仙茅苷为含量较高的有效成分。现代药理研究发现，仙茅具有适应原样作用、增强性腺功能、延缓生殖系统老化、抗衰老、抗骨质疏松、抗炎、保肝、降血糖、调节免疫等作用，临床散在应用仙茅入复方治疗围绝经期综合征的报道。前期观察了仙茅对于小鼠围绝经期模型的影响，发现仙茅具有防治围绝经期综合征的作用。仙茅独特的化学成分和显著的生物新活性一直是国内外研究的热点之一。

[0003] 围绝经期综合征(Perimenopausal Syndrome，PMS)是女性常见多发病，又称更年期综合征。现认为其主要是由卵巢功能衰退，引起机体内分泌失调、免疫力低下和植物神经紊乱的症候群，全身多个系统出现功能和病理改变，卵巢功能衰退是核心病机和病理基础。雌激素长期缺乏会增加妇女围绝经期高血压、肥胖等的发病危险；多表现为潮热、汗出、晕眩、心悸、焦虑、抑郁、失眠、骨质疏松等，且50％～60％患者有轻度抑郁症状，并呈上升趋势，已成为严重影响中老年女性生活质量的主要疾患之一。

[0004] 女性围绝经期的研究多集中在围绝经期心血管、围绝经期骨质疏松症疾病方面，而随着生活节奏的加快，社会竞争的加剧，围绝经期抑郁症的发病率正在逐年上升。女子一生中约有1/3以上时间处于围绝经期及绝经后期，在这一阶段由于卵巢功能逐渐衰退或丧失，以致雌激素水平下降引起一系列以自主神经功能紊乱及代谢障碍为主的症状群。生理上的改变引起心理上的变化，而心理异常又可加剧躯体症状，因此围绝经期妇女抑郁症应引起全社会的关注和重视。

[0005] 围绝经期综合征现代机制主要有激素内分泌学说、免疫学说、细胞凋亡学说等，这些学说相互交叉，从不同角度揭示围绝经期综合征特点。

[0006] 激素内分泌学说认为卵巢功能衰退致下丘脑-垂体-卵巢（HPO）轴失衡，植物神经系统 功能紊乱，卵巢分泌雌激素水平下降。垂体前叶嗜碱性细胞分泌卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH），卵巢在FSH和LH作用下促使卵泡发育成熟，并合成雌激素，同时卵巢分泌的激素又影响垂体的分泌。围绝经期妇女由于雌激素分泌减少，对下丘脑、垂体负反馈作用减弱，引起下丘脑、垂体分泌亢进，促性腺激素分泌增加，刺激垂体释放FSH、LH，导致内分泌平衡失调，出现潮热、多汗、烦躁不安、失眠等植物神经紊乱症状。卵巢分泌的雌激素主要有雌二醇、雌三醇和雌酮，其中以雌二醇（E2）为主。雌激素需要与靶器官上的雌激素受体（ER）结合才发挥效应，其效应强弱取决于雌激素水平高低及靶细胞ER含量，下丘脑、垂体、子宫和卵巢等组织均有ER分布；ER除了与雌激素类物质结合发挥雌激素效应外，还参与HPO轴分泌活动的调节，影响整个生殖内分泌功能。女性进入围绝经期，雌激素水平降低，靶组织和靶器官中ER含量也减少，使雌激素效应降低，导致PMS。下丘脑是神经内分泌高级整合中枢，β-内啡肽（β-EP）是由下丘脑弓状核及垂体中叶合成分泌的活性较强的内源性阿片肽，对下丘脑-垂体系统及生殖激素呈抑制性调节，可抑制促性腺激素释放激素(GnRH)及LH的分泌；当卵巢功能降低并逐渐衰退时，E2水平下降，降低了对下丘脑和垂体的负反馈调节，下丘脑β-EP的释放和活性受到影响；β-EP浓度和活力降低，致使NE/DA比值升高，是围绝经期潮热发生的主要原因，且β-EP含量降低，影响生物胺代谢，神经递质释放紊乱，导致围绝经期眩晕、心悸。睾酮（T）是女性体内最有活性的雄激素,与雄激素受体（AR）结合产生效应，AR广泛分布在中枢神经系统和大脑皮层；睾酮的卵巢来源约25%，绝经后随着卵巢功能逐渐丧失，来自卵巢的T分泌减少，T水平降低会影响骨结构、肌肉量及心血管系统，是女性骨质疏松的标志之一；且雄激素在维持雌激素合成中起重要作用，雄激素水平异常也是PMS的诱发因素；E2可诱发产生AR，雌激素减少，也影响雄激素生物效应的产生。骨钙素（BGP）是骨组织中的一种非胶原蛋白质，是成骨细胞产生的一类多肽物质，是研究骨代谢的一项新的生化标志物，骨的基质是在性激素蛋白合成影响下合成的。雌激素对骨代谢的作用主要是抑制破骨细胞数量及活性，是一种抗吸收制剂。围绝经期综合征患者血清BGP含量明显降低，出现骨质疏松。5-羟色胺(5-HT)系统在抑郁症发生及治疗中有重要作用，抑郁症患者脑脊液中单胺神经递质5-HT、DA水平下降。

[0007] 免疫学说认为围绝经期综合征的发生是体内雌激素水平过度下降，免疫活性细胞不能获得生理剂量雌激素刺激，雌激素受体随之下降，继而免疫活性细胞不能有效产生足量IL-2等免疫介质，去甲肾上腺素（NE）比例失调，导致PMS。IL-2主要由CD4细胞产生释放，CD4细胞等免疫活性细胞内含有雌激素及孕激素受体，雌激素可通过免疫活性细胞相应受体影响IL-2等免疫介质的释放。IL-2等免疫介质亦可通过旁调节及反馈调节影响HPO轴。

[0008] 细胞凋亡学说认为卵巢颗粒细胞凋亡受B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、相关X蛋白Bax 基因调控，卵巢颗粒细胞凋亡，触发卵泡闭锁，颗粒细胞产生雌激素减少，促性腺激素受体减少而引发围绝经期综合征，生理水平E2可保护外周血淋巴细胞免于凋亡。

[0009] 上述学说各有特点，相互交叉，但雌激素及受体紊乱贯穿三个学说。HPO轴紊乱是PMS发生的根本，雌雄激素及相应受体水平失调是其紊乱的重要表现；雌雄激素及相应受体水平和下丘脑、垂体ERmRNA、Bcl-2、Bax表达密切相关，也受β-EP、GnRH、LH、FSH及IL-2、BGP水平的影响。

[0010] 现代医学对围绝经期综合征治疗常采用激素替代疗法（Hormon Replacement Therapy，HRT），临床上常用尼尔雌醇、谷维素双维B片、谷维素注射液、复方炔雌醇甲羟孕酮胶囊、复方盐酸普鲁卡因胶囊、戊酸雌二醇、氯烯雌醚滴丸等，HRT虽短期疗效确切，但长期使用雌激素有增加子宫内膜癌和乳腺癌发病率的危险，近期所发现HRT可增加心脑血管危险性等严重副作用的发生，更是明显限制了此法的临床应用。

[0011] 围绝经期综合征不仅是常见病、多发病，也是一种较难治疗且易复发的疾病，它不仅表现在妇科范围，同时也涉及到内科、精神科等领域。由于HRT的风险受益一直是国内外同行关注的焦点，所以寻求一种更为安全有效的治疗药物是亟待解决的技术问题。

[0012] 中医学对围绝经期综合征的认识已有数千年的历史。《素问·上古天真论》曰：“女子七七，任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭，地道不通，故形坏而无子也。”女性进入围绝经期会发生一系列生理病理变化，肾气亏虚，天癸将竭，任冲脉衰，出现一系列因肾精亏虚而导致的肾水不足、肝阴亏乏、虚火内生的证候；如潮热、汗出、五心烦热、失眠多梦、腰膝酸软等。肾阴肾阳是机体阴阳之根，一旦出现不足，必致全身脏腑经络失于滋养而致功能失调，故“肾虚”、“肾精亏”为该病之本。据研究，肾的阴阳失调与自主神经功能紊乱密切相关，卵巢功能衰退是肾虚证的内涵，E2、FSH、LH的变化是肾虚证一种表达，补肾药物对生殖内分泌系统作用的临床和实验研究也证明了这一点。因此，治疗PMS常以补肾为主，而究其本，兼调心、肝、脾而顾其标。温补肾阳、填补精血、固护肾气是其重要治疗法则。补肾阳中药能调整HPO轴功能，延缓卵巢老化；对神经-内分泌-免疫有调节作用，提高免疫功能、防止骨质疏松、调节中枢与植物神经系统，延缓衰老，且副作用少。中医药对围绝经期综合征的治疗具有优势，近年来随着对其研究的不断深入，其方法和治疗药物越发多样化。除辨证论治外，亦有专方专药、单味药物治疗、中西医结合治疗、针刺疗法、心身疗法，对围绝经期常见病症的专项治疗与研究等，那么能否利用仙茅的药性，从仙茅中提取一种仙茅总苷，并用于制备治疗围绝经期综合征药物呢，是本领域技术人员关心解决的技术问题。

发明内容

[0013] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从仙茅中提取仙茅总苷物质的方法及其在制备防治围绝经期综合征药物中的应用，可有效解决从仙茅中提取仙茅总苷以用于制备防治围绝经期综合征药物的问题。

[0014] 本发明解决的技术方案是，将仙茅粉碎成药粉，用乙醇浸泡，回流提取2次，过滤，得提取液，提取液减压回收乙醇至无醇味，浓缩，浓缩液加蒸馏水分散成含生药量0.5g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂，用蒸馏水洗脱，弃去水液；再用不同体积浓度的乙醇洗脱两次，收集第二次洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至干粉，得仙茅总苷；该仙茅总苷有效用于防治围绝经期综合征药物，实现仙茅总苷在制备防治围绝经期综合征药物中的应用。

[0015] 本发明原料丰富，制备方法独特，易操作，有效用于从仙茅中制备仙茅总苷，并实现仙茅总苷在制备防治围绝经期综合征药物中的应用，开辟了仙茅的药用价值，是防治围绝经期综合征药物上的创新。

具体实施方式

[0016] 以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

[0017] 本发明在具体实施中，是由以下步骤实现：先将仙茅粉碎成过60-80目筛的药粉，用10倍药粉重量的、体积浓度为80%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，每次1.5h，过滤，得提取液，提取液减压回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度1.1-1.4的浓缩液，浓缩液加蒸馏水分散成含生药量0.5g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂，上样量与树脂体积的比例为1︰12，树脂柱径高比为1︰12；先用8倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；再用8倍柱体积的体积浓度为10%的乙醇洗脱，弃洗脱液；最后用10倍柱体积的体积浓度为75%的乙醇洗脱，减压回收乙醇，浓缩至干粉，得仙茅总苷（物质），仙茅总苷含量≥52%；该仙茅总苷有效用于防治围绝经期综合征药物，实现仙茅总苷在制备防治围绝经期综合征药物中的应用。

[0018] 本发明方法所制备的仙茅总苷可有效用于制备防治围绝经期综合征药物，并经试验得到了充分证明，有关试验资料如下：

[0019] 实验一仙茅总苷对小鼠围绝经期模型的影响

[0020] 1实验材料

[0021] 1.1实验动物

[0022] 清洁级小鼠，昆明种，雌性，20-25g，由河北省实验动物中心提供。合格证编号1209021；实验室合格证号SYXK(豫)2010-001。

[0023] 1.2实验药物

[0024] 实验组：本发明提取的仙茅总苷；更年安胶囊，山西天星制药有限公司生产，批号120303； 大豆异黄酮维E软胶囊，威海紫光生物科技开发有限公司生产，批号12040301。

[0025] 1.3实验试剂

[0026] 羧甲基纤维素钠，天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号20110728；水合氯醛，天津市科密欧化学制剂开发中心，批号20120606；注射用青霉素钠，华北制药有限公司，规格：400万单位，批号c1107702；甲醛溶液（分析纯），烟台市双双化工有限公司，批号20120701；0.9%氯化钠注射液，郑州永和制药公司；批号12030501；小鼠E2ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20120901A；小鼠T ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20120901A；小鼠LH ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20120901A；小鼠FSH ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20120901A。

[0027] 1.4实验仪器

[0028] 电子称，上海民桥医疗器械有限公司，型号JY601；电子分析天平，奥豪斯（上海）公司，型号AR1140/C；高速台式离心机，上海安亭科学仪器厂，型号：TGL-168；电热恒温水浴锅，上海一恒科学仪器有限公司，型号HWS12；小鼠自主活动测试仪，成都泰盟科技有限公司，型号ZZ-6；小鼠避暗仪，成都泰盟科技有限公司，型号BA-200；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；酶标仪，美国BIO-RAD公司，型号680；电动显微镜，日本OLYMPUS公司，型号BX61。

[0029] 2实验方法

[0030] 2.1造模与给药

[0031] 造模方法：取体重22-25g雌性昆明小鼠100只，随机选出12只作为空白，做假手术处理，其余小鼠造围绝经期模型。小鼠称重后腹腔注射10%水合氯醛（0.03ml/10g）麻醉后腹位固定，然后从小鼠背部最末肋骨下，在腋中线和距脊柱外侧约1cm交叉处剪毛，消毒后切开皮肤和背肌约0.5～1cm，切口视野中可见一乳白色发亮的脂肪团，卵巢即包埋其中。用小镊子轻轻夹住脂肪团拉出切口外，分离脂肪团，即可见到一团细线状不规则呈黄红色的卵巢。剪取时先将卵巢下输卵管(包括脂肪)用细线结扎，再摘除卵巢，术后顺势将子宫角放回腹腔中，缝合肌肉及皮肤，同法摘除双侧卵巢。术后精心饲养，肌肉注射青霉素20万u/kg（每只0.1mL)以防感染，连续3d，每天1次。手术5d后开始逐只进行小鼠阴道涂片检查，每天1次，连续5d，以确定卵巢是否完全切除。涂片呈现动情反应的小鼠弃去不用，选择60只去势完全的小鼠随机均匀分为6组供实验用，分别为模型组，更年安胶囊组，大豆异黄酮软胶囊组，大、中、小剂量仙茅总苷组；在空白小鼠中选取10只做空白组。

[0032] 配药方法：0.5%CMC配制：称取CMC4g，用蒸馏水配成800ml。大、中、小剂量仙茅-1 -1 -1总苷组给药剂量分别为400mg·kg 、200mg·kg 、100mg·kg （给药剂量结合临床仙茅用量和仙茅中 仙茅总苷的含量确定），配置方法：分别称取仙茅总苷1600mg、800mg、400mg，用-1 -1 -1 -1
40mL的0.5%CMC溶解，浓度为40mg·mL 、20mg·mL 、10mg·mL 。更年安胶囊(675mg·kg ，-1
浓度67.5mg·mL ，相当于临床用量的15倍)，配置方法：取更年安胶囊9粒，用40mL的-1 -1
0.5%CMC溶解。大豆异黄酮维E软胶囊（250mg·kg ，浓度25mg·mL ，相当于临床用量的15倍）；配置方法：取大豆异黄酮胶囊2粒，用40mL的0.5%CMC溶解。给药体积均为0.1mL/10g。

[0033] 给药方法：各组动物于手术后第10天给予相应药物。更年安胶囊组灌服更年安-1 -1胶囊混悬液675mg·kg ，大豆异黄酮软胶囊组灌服大豆异黄酮软胶囊混悬液250mg·kg ，-1 -1
大、中、小剂量仙茅总苷组分别按组别灌服大、中、小剂量仙茅总苷400mg·kg 、200mg·kg 、-1
100mg·kg 。空白组和模型组分别灌服同体积蒸馏水，每日灌胃给药1次，连续给药21d。

[0034] 2.2观察项目及检测方法

[0035] 各组小鼠于给药18d时测定5min内自主活动次数，于给药19～20d时测定小鼠首次进入暗室的潜伏期及5min内进入暗室遭电击的次数。于末次给药后2h（禁食不禁水12h），小鼠称重后摘眼球取血，分离血清，测定血清中E2、T、LH、FSH的含量；然后脱颈椎处死小鼠，解剖小鼠，摘除胸腺、脾脏、子宫组织，称量其湿重并计算脏器指数（脏器指数= 脏器湿重mg/小鼠体重g），然后取脑；将胸腺、脾脏、子宫、脑组织固定于10%甲醛溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组的组织形态学变化。

[0036] 2.2.1自主活动次数测试

[0037] 将各组小鼠放入自主活动仪中，先适应环境1min，然后测定5min内自主活动次数。

[0038] 2.2.2避暗法测试

[0039] 将各组小鼠尾部对着进入暗室的小口放入测定盒中，进行训练，24h后重新测定小鼠首次进入暗室的潜伏期及5min内进入暗室遭电击的次数。

[0040] 2.2.3试剂盒测定方法

[0041] 小鼠雌二醇（E2）ELISA检测试剂盒测定方法：从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封发袋密封放回4℃。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加入不同浓度的标准品50μL。样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白孔不加。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔。37℃水浴锅或恒温箱温育60min。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min。甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。每孔先加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。取出酶标板，每孔加终止液50μL，15min内，在450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。根据标准 品的浓度及对应的OD值，绘制出标准品回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、4、8、16、32、
64pmol／L。

[0042] 小鼠睾酮（T）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇，其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.5、3、6、12、24ng／mL。

[0043] 小鼠黄体生成素（LH）ELISA检测试剂盒测定测定方法同雌二醇，其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、150、300、600、1200、2400pg／mL。

[0044] 小鼠促卵泡素（FSH）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇，其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80mIU／mL。

[0045] 2.3统计学处理方法

[0046] 数据分析用SPSS17.0医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差 表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用LSD法，方差不齐者用Games-Howell法检验，等级资料采用Ridit检验。

[0047] 实验结果

[0048] 1对围绝经期模型小鼠自主活动的影响

[0049] 实验各组小鼠自主活动测试结果，见表1。

[0050] 表1仙茅总苷对围绝经期模型小鼠自主活动的影响

[0051]

[0052] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0053] 由上表可看出，与空白组比，模型组小鼠的活动、站立次数均显著减少（P<0.01），反映了围绝经期模型小鼠对新鲜环境的好奇程度降低。与模型组比，大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊、大、中、小剂量仙茅总苷组均可显著提高小鼠的活动次数（P<0.01）。

[0054] 2对围绝经期模型小鼠避暗法潜伏期和受电击次数的影响

[0055] 实验各组小鼠避暗法测试结果，见表2。

[0056] 表2仙茅总苷对围绝经期模型小鼠暗室潜伏期和受电击次数的影响

[0057]

[0058] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

[0059] 由上表可看出，与空白组比，模型组小鼠的受电击次数显著增加（P<0.01），反映了围绝经期模型小鼠记忆力降低。与模型组比，大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊、大、中、小剂量仙茅总苷组均可显著延长暗室潜伏期，减少小鼠受电击次数（P<0.01）。

[0060] 3对围绝经期模型小鼠脏器指数的影响

[0061] 实验各组小鼠胸腺、脾脏、子宫指数，见表3。

[0062] 表3仙茅总苷对围绝经期模型小鼠胸腺、脾脏、子宫指数的影响

[0063]

[0064] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0065] 从上表可以看出，与空白组比，模型组小鼠的子宫指数显著降低（P<0.01），说明摘除卵巢导致围绝经期模型小鼠子宫萎缩。与模型组比，大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊、大、中、小剂量仙茅总苷组均可显著提高胸腺、子宫指数（P<0.01），大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊、中剂量仙茅总苷组可显著提高脾脏指数（P<0.01），大、小剂量仙茅总苷可明显提高脾脏指数（P<0.05）。

[0066] 4对围绝经期模型小鼠血清性激素含量的影响

[0067] 各组小鼠血清中E2、T、FSH、LH含量，见表4-5。

[0068] 表4仙茅总苷对围绝经期模型小鼠血清中E2、T含量的影响

[0069]

[0070] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0071] 表5仙茅总苷对围绝经期模型小鼠血清中LH、FSH含量的影响

[0072]

[0073] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0074] 从上表可以看出，与空白组比，模型组小鼠血清中E2、T水平显著下降（P<0.01），LH、FSH水平均显著升高（P<0.01），说明摘除卵巢导致围绝经期模型小鼠血清中的性激素水平紊乱，围绝经期小鼠模型复制成功。与模型组比，各给药组均可显著升高血清T水平（P<0.01）；大、中剂量仙茅总苷与更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊可显著升高血清E2水平（P<0.01），小剂量仙茅总苷可明显升高血清E2水平（P<0.05）；大剂量仙茅总苷与更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊可显著降低升高的LH水平（P<0.01），中、小剂量仙茅总苷可明显降低LH水平（P<0.05）；各给药组均可显著降低升高的FSH水平（P<0.01）。

[0075] 5对围绝经期模型小鼠器官组织形态的影响

[0076] 实验各组小鼠子宫、下丘脑、胸腺、脾脏的病理组织学观察结果如下。

[0077] 5.1对围绝经期模型小鼠子宫组织形态的影响

[0078] 根据实验各组小鼠子宫内膜、腺体、肌层出现的不同程度的改变，采用半定量标准，将病理组织形态分为四个级别，对实验各组小鼠子宫进行测定，观察结果见表6。

[0079] 表6仙茅总苷对围绝经期模型小鼠子宫病理变化的影响单位：个

[0080]

[0081] “-”子宫内膜上皮细胞、腺体、肌层、浆膜均正常；“+”子宫内膜上皮细胞、腺体少部分萎缩，肌层、浆膜均正常；“++”子宫内膜上皮细胞、腺体部分萎缩，肌层稍有萎缩，浆膜正常；“+++”子宫内膜上皮细胞、腺体明显萎缩，肌层明显萎缩，浆膜正常

[0082] 经Ridit检验，从上表可知，与空白组比，模型组小鼠子宫出现显著的病理组织病变（P<0.01）。与模型组比，各用药物均可显著的改善小鼠的子宫病理组织病变（P<0.01），其中大剂量仙茅总苷组效果最好。

[0083] 5.2对围绝经期模型小鼠下丘脑组织形态的影响

[0084] 根据实验小鼠下丘脑神经细胞的不同程度的病理改变，采用半定量的标准，将分为四个级别，对实验各组小鼠下丘脑进行测定，观察结果见表7。

[0085] 表7仙茅总苷对围绝经期模型小鼠下丘脑病理变化的影响单位：个

[0086]

[0087] “-”：下丘脑的脑神经细胞核团的细胞胞浆、细胞体积无异常改变，神经胶质细胞基本正常；“+”：下丘脑的脑神经细胞核团的少数细胞胞浆减少体积缩小，神经胶质细胞基本正常；“++”：下丘脑的脑神经细胞核团的部分细胞胞浆减少体积缩小，少数神经胶质细胞固缩；“+++”：下丘脑的脑神经细胞核团的大部分细胞胞浆明显减少体缩小，神经胶质细胞固缩或消失。

[0088] 经Ridit检验，从上表可知，与空白组比，模型组小鼠下丘脑出现显著的病理组织病变（P<0.01）。与模型组比，各用药组均可显著的改善小鼠下丘脑的病理组织病变（P<0.01），大剂量仙茅总苷效果最好。

[0089] 5.3对围绝经期模型小鼠胸腺组织形态的影响

[0090] 采用测微尺，对实验各组每只小鼠胸腺皮质最厚处和最窄处测定其厚度求得均数，然后用测微尺的基线测得压在基线上的胸腺皮质最厚处和最窄处的淋巴细胞数求得均数，结果见表8。

[0091] 表8仙茅总苷对围绝经期模型小鼠胸腺病理变化的影响

[0092]

[0093] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0094] 从上表可知，与空白组比，模型组小鼠胸腺皮质厚度与皮质淋巴细胞个数显著减少（P<0.01），说明小鼠造围绝经期模型后胸腺体积萎缩。与模型组比，各给药组均可显著增厚胸腺皮质，并显著增加皮质淋巴细胞个数（P<0.01），其中大剂量仙茅总苷组效果最好。

[0095] 5.4对围绝经期模型小鼠脾脏组织形态的影响

[0096] 采用测微尺的基线落在脾小结上，以中央动脉为中心分别测定两侧的脾小结厚度大小，求均数；同时计算落在基线上两侧的淋巴细胞数的个数，求均数，结果见表9。

[0097] 表9仙茅总苷对围绝经期模型小鼠脾脏病理变化的影响

[0098]

[0099]

[0100] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0101] 从上表可知，与空白组比，模型组小鼠脾小结体积与淋巴细胞个数显著降低（P<0.01），说明小鼠造围绝经期模型后脾脏萎缩。与模型组比，各给药组均能显著增大脾小结体积（P<0.01）；并显著升高淋巴细胞数量（P<0.01），且与剂量呈正相关。

[0102] 实验二仙茅总苷对大鼠围绝经期模型的影响

[0103] 1实验材料

[0104] 1.1实验动物

[0105] Wistar大鼠，清洁级，雌性，由山东省实验动物中心提供，本批大鼠合格证编号：0013765；实验室合格证号SYXK（豫）2010-001。

[0106] 1.2实验药物

[0107] 本发明制备的仙茅总苷；

[0108] 更年安胶囊，山西天星制药有限公司生产，批号120303；大豆异黄酮维E软胶囊，威海紫光生物科技开发有限公司生产，批号12040301。

[0109] 1.3实验试剂

[0110] 水合氯醛，天津市科密欧化学制剂开发中心，批号20120606；羧甲基纤维素钠，天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号20110728；注射用青霉素钠，华北制药有限公司，规格：400万单位，批号c1107702；甲醛溶液（分析纯），烟台市双双化工有限公司，批号20120701；0.9%氯化钠注射液，郑州永和制药公司，批号1203050；大鼠E2ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠T ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠LH ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠FSH ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号
20130101A；大鼠GnRH ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠AR ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠ER ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；
大鼠BGP ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠β-EP ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠IL-2ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠Bcl-2ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A；大鼠Bax ELISA检测试剂盒，R&D公司，批号20130101A。

[0111] 1.4实验仪器

[0112] 电子称，上海民桥医疗器械有限公司，型号JY601；电子分析天平，奥豪斯（上海）公司，型号AR1140/C；高速台式离心机，上海安亭科学仪器厂，型号TGL-168；电热恒温水浴 锅，上海一恒科学仪器有限公司，型号HWS12；电动显微镜，日本OLYMPUS公司，型号BX61；酶标仪，美国BIO-RAD公司型号：680；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司。

[0113] 2实验方法

[0114] 2.1造模与给药

[0115] 造模方法：取体重210～230g雌性wistar大鼠100只，随机取12只作为空白组外，做假手术处理，其余大鼠造围绝经期模型。大鼠称重后腹腔注射10%水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉后腹位固定，然后从大鼠背部最末肋骨下，在腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处剪毛，消毒后切开皮肤和背肌约1cm，切口视野中可见一乳白色发亮的脂肪团，卵巢即包埋其中。用小镊子轻轻夹住脂肪团拉出切口外，分离脂肪团，即可见到一团细线状不规则呈黄红色的卵巢。剪取时先将卵巢下输卵管(包括脂肪)用细线结扎，完全摘除左侧卵巢，右侧摘除80%。术后顺势将子宫角放回腹腔中，缝合肌肉及皮肤。术后精心饲养，肌肉注射青霉素20万u/kg（每只0.1mL）以防感染，连续3d，每天1次。选择60只状态良好的大鼠随机均匀分为6组供实验用，分别为模型组，更年安胶囊组，大豆异黄酮软胶囊组，大、中、小剂量仙茅总苷组，从空白的12之中选取状态良好、活动正常的10只作为空白组。

[0116] 配药方法：0.5%CMC配制方法：称取CMC4g，用蒸馏水配成800mL。大、中、小剂量仙-1 -1 -1茅总苷组给药剂量分别为267mg·kg 、133mg·kg 、67mg·kg ，（给药剂量结合临床仙茅用量和仙茅中仙茅总苷的含量确定）。配置方法：分别称取仙茅总苷5336mg、2668mg、1334mg，-1 -1 -1
用200mL的0.5%CMC溶解，浓度为配成26.7mg·mL 、13.3mg·mL 、6.7mg·mL 。更年安胶-1 -1
囊(450mg·kg ，配成45mg·mL ，相当于临床用量的10倍)；配置方法：取更年安胶囊30-1 -1
粒，用200mL0.5%CMC溶解。大豆异黄酮维E软胶囊（170mg·kg ，配成17mg·mL ，相当于临床用量的10倍）；配置方法：取大豆异黄酮胶囊7粒，用200mL的0.5%CMC溶解。

[0117] 给药方法：于手术后10d给予相应药物。更年安胶囊组灌服更年安胶囊混悬液-1（450mg·kg ，相当于临床剂量的10倍），大豆异黄酮软胶囊组灌服大豆异黄酮软胶囊混悬-1
液（170mg·kg ，相当于临床剂量的10倍），大、中、小剂量仙茅总苷组分别按组别灌服大、-1 -1 -1
中、小剂量仙茅总苷（给药剂量分别为267mg·kg 、133mg·kg 、67mg·kg ）。空白组和模型组分别灌服同体积蒸馏水，给药体积为1mL/100g，每日灌胃给药1次，连续给药35d。

[0118] 2.2观察项目及检测方法

[0119] 各组大鼠于给药34d时测定水平-垂直运动积分。末次灌胃后2h（禁食不禁水12h），摘眼球取血，分离血清，测定血清中E2、T、LH、FSH、GnRH、IL-2、BGP的含量，血浆β-EP含量；解剖大鼠，摘除胸腺、脾脏、子宫和剩余20%卵巢组织，称量其湿重并计算脏器指数 （脏器指数= 脏器湿重mg/大鼠体重g），然后取脑中下丘脑和垂体，将下丘脑、垂体、卵巢和
1/2子宫制备组织匀浆，测定组织匀浆中雌、雄激素受体的含量，测定下丘脑和垂体匀浆中Bcl-2、Bax的含量。将胸腺、脾脏、子宫固定于10%甲醛溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组的组织形态学变化。

[0120] 2.2.1Open field法测试

[0121] 实验装置为立方形敞箱，高40cm，长宽80cm，周壁、底面为黑色，底面由面积相等的25块组成，用白线划分。实验时将大鼠置于敞箱中心方格内，观察大鼠5min内穿越底面块数(四爪均进入的方格方可记数)的水平活动得分，以及后肢直立次数(两前爪腾空或攀附墙壁)的垂直活动得分。每次实验完后须将粪便彻底清除，每只大鼠于给药后2h测定1次。此实验在安静的房间内进行。

[0122] 2.2.2试剂盒测定方法

[0123] 大鼠雌二醇（E2）ELISA检测试剂盒测定方法同实验1。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、4、8、16、32、64pmol／L

[0124] 大鼠睾酮（T）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、20、40、80、160、320pg／mL

[0125] 大鼠黄体生成素（LH）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48mIU／mL。

[0126] 大鼠促卵泡素（FSH）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.75、1.5、3、6、12IU／L。

[0127] 大鼠促性腺激素释放激素（GnRH）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80mIU／mL。

[0128] 大鼠白细胞介素2（IL-2）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、100、200、400、800、1600pg／mL。

[0129] 大鼠骨钙素（BGP）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.75、1.5、3、6、12ng／mL。

[0130] 大鼠β-内啡肽（β-EP）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48pg／mL。

[0131] 大鼠雌激素受体（ER）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、4、8、16、32、64pg／mL。

[0132] 大鼠雄激素受体（AR）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg／mL。

[0133] 大鼠B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、10、20、40、80、160pg／mL。

[0134] 大鼠Bcl-2相关X蛋白（BAX）ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8ng／mL。

[0135] 2.3统计学处理方法

[0136] 数据分析用SPSS17.0医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差 表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用LSD法，方差不齐者用Games-Howell法检验，等级资料采用Ridit检验。

[0137] 实验结果

[0138] 1对围绝经期模型大鼠行为学的影响

[0139] 实验各组大鼠行为学测试结果，见表21。

[0140] 表21仙茅总苷对围绝经期模型大鼠水平-垂直积分的影响

[0141]

[0142] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0143] 由上表可看出，与空白组比，模型组大鼠的水平、垂直运动积分均显著减少（P<0.01），反映了大鼠对新鲜环境的好奇程度降低。与模型组比，各给药组均可显著提高大鼠水平运动和垂直运动积分（P<0.01），大剂量仙茅总苷组效果最优。

[0144] 2对围绝经期模型大鼠脏器指数的影响

[0145] 实验各组大鼠胸腺、脾脏、子宫指数，见表22。

[0146] 表22仙茅总苷对围绝经期模型大鼠胸腺、脾脏、子宫指数的影响

[0147]

[0148]

[0149] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0150] 由上表可看出，与空白组比，模型组大鼠的胸腺指数、脾脏指数、子宫指数显著下降（P<0.01），说明不完全摘除卵巢所致围绝经期大鼠模型出现胸腺、脾脏和子宫萎缩。与模型组比，大、中剂量仙茅总苷与更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊可显著提高围绝经期模型大鼠胸腺、子宫指数（P<0.01），明显提高围绝经期模型大鼠脾脏指数（P<0.05）；小剂量仙茅总苷可显著提高围绝经期模型大鼠胸腺、子宫指数（P<0.01），对大鼠脾脏指数有升高的趋势。

[0151] 3对围绝经期模型大鼠血液生化指标含量的影响

[0152] 各组大鼠血清中E2、T、LH、FSH、GnRH、IL-2、BGP含量，血浆β-EP含量，见表23～26。

[0153] 表23仙茅总苷对围绝经期模型大鼠血清中E2、T含量的影响

[0154]

[0155] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0156] 表24仙茅总苷对围绝经期模型大鼠血清中LH、FSH含量的影响

[0157]

[0158]

[0159] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0160] 由上表可看出，与空白组比，模型组大鼠的血清E2、T水平显著下降（P<0.01），LH、FSH水平显著升高（P<0.01），说明不完全摘除卵巢致围绝经期大鼠模型性激素紊乱，围绝经期大鼠模型复制成功。与模型组比，各用药组均可显著升高血清E2、T水平（P<0.01）；大剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著降低升高的LH水平（P<0.01），中、小剂量仙茅总苷可明显降低升高的LH水平（P<0.05）；大、中剂量仙茅总苷和大豆异黄酮软胶囊可显著降低升高的FSH水平（P<0.01），小剂量仙茅总苷、更年安胶囊可明显降低升高的FSH水平（P<0.05）。

[0161] 表25仙茅总苷对围绝经期模型大鼠血清GnRH、血浆β-EP含量的影响

[0162]

[0163] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0164] 由上表可看出，与空白组比，模型组大鼠的血清GnRH水平显著升高、血浆β-EP水平显著下降（P<0.01），说明不完全摘除卵巢致围绝经期大鼠模型性激素紊乱，导致下丘脑分泌的相关激素也因负反馈调节发生紊乱。与模型组比，中剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著降低GnRH水平（P<0.01），大剂量仙茅总苷可明显降低GnRH水平（P<0.05），小剂量仙茅总苷具有降低GnRH水平的趋势；大剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著升高血浆β-EP水平（P<0.01），中剂量仙茅总苷可明显升高血浆β-EP水平（P<0.05），小剂量仙茅总苷具有升高血浆β-EP水平的趋势。

[0165] 表26仙茅总苷对围绝经期模型大鼠血清中BGP、IL-2含量的影响

[0166]

[0167]

[0168] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0169] 由上表可看出，与空白组比，模型组大鼠的血清IL-2和BGP水平均显著降低（P<0.01），说明不完全摘除卵巢所致围绝经期大鼠模型机体免疫力与骨钙质有所降低。与模型组比，大、中剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著升高BGP水平（P<0.01），小剂量仙茅总苷可明显升高BGP水平（P<0.05）；各用药组均可显著升高IL-2水平（P<0.01）。

[0170] 4对围绝经期模型大鼠组织中ER、AR含量的影响

[0171] 各组大鼠相关组织中ER、AR含量，见表27～29。

[0172] 表27仙茅总苷对围绝经期模型大鼠组织中AR含量的影响（1）

[0173]

[0174] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0175] 表28仙茅总苷对围绝经期模型大鼠组织中ER含量的影响（2）

[0176]

[0177] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0178] 表29仙茅总苷对围绝经期模型大鼠组织中ER含量的影响（3）

[0179]

[0180]

[0181] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0182] 由上表可看出，与空白组比，模型大鼠各组织ER、AR水平均显著降低（P<0.01），说明不完全摘除卵巢所致围绝经期大鼠模型机体相关组织分布的性激素受体有所降低，从而降低了雌雄激素的生物效应。与模型组比，大、中剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊均可显著升高下丘脑、垂体AR水平（P<0.01），小剂量仙茅总苷可明显升高下丘脑、垂体AR水平（P<0.05）；大剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著升高下丘脑ER水平（P<0.01），中、小剂量仙茅总苷可明显升高下丘脑ER水平（P<0.05）；大、中剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著升高垂体ER水平（P<0.01），小剂量仙茅总苷可明显升高下丘脑ER水平（P<0.05）；各用药组均可显著升高子宫ER水平（P<0.01）；大、中剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著升高卵巢ER水平（P<0.01），小剂量仙茅总苷可明显升高卵巢ER水平（P<0.05）。

[0183] 5对围绝经期模型大鼠下丘脑中Bcl-2、Bax含量的影响

[0184] 各组大鼠下丘脑中Bcl-2、Bax含量，见表30。

[0185] 表30仙茅总苷对围绝经期模型大鼠下丘脑中Bcl-2、Bax含量的影响

[0186]

[0187] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0188] 由上表可看出，与空白组比，模型大鼠丘脑中Bcl-2水平显著降低、Bax水平均显著升高（P<0.01），说明不完全摘除卵巢所致围绝经期大鼠模型机体细胞凋亡增加。与模型组比，中剂量仙茅总苷、更年安胶囊均可显著升高Bcl-2水平（P<0.01），大、小剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊可明显升高Bcl-2水平（P<0.05）；大、中剂量仙茅总苷、大豆异黄酮软胶囊、更年安胶囊可显著降低Bax水平（P<0.01），小剂量仙茅总苷具有降低Bax水平的趋势。

[0189] 6对围绝经期模型大鼠器官组织形态的影响

[0190] 实验各组大鼠子宫、胸腺、脾脏的病理组织学观察结果如下。

[0191] 6.1对围绝经期模型大鼠子宫组织形态的影响

[0192] 根据实验各组大鼠子宫内膜、腺体、肌层出现的不同程度的改变，采用半定量标准，将病理组织形态分为四个级别，对实验各组大鼠子宫进行测定，观察结果见表31。

[0193] 表31仙茅总苷对围绝经期模型大鼠子宫病理变化的影响单位：个

[0194]

[0195] “-”：子宫内膜上皮细胞、腺体、肌层、浆膜均正常；“+”：子宫内膜上皮细胞、腺体少部分萎缩，腺上皮分泌增加，肌层、浆膜均正常；“++”：子宫内膜上皮细胞、腺体部分萎缩，腺上皮分泌增加，肌层稍有萎缩，浆膜正常；“+++”：子宫内膜上皮细胞、腺体明显萎缩，肌层明显萎缩，浆膜正常。

[0196] 经Ridit检验，从上表可知，与空白组比，模型组大鼠子宫出现显著的病理组织病变（P<0.01）。与模型组比，各用药组均可显著的改善大鼠子宫的病理组织病变（P<0.01），以大剂量仙茅总苷组效果最好。

[0197] 6.2对围绝经期模型大鼠胸腺组织形态的影响

[0198] 采用测微尺，对实验各组每只大鼠胸腺皮质最厚处和最窄处测定其厚度求得均数，然后用测微尺的基线测得压在基线上的胸腺皮质最厚处和最窄处的淋巴细胞数求得均数，结果见表32。

[0199] 表32仙茅总苷对围绝经期模型大鼠胸腺组织病理变化的影响

[0200]

[0201]

[0202] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0203] 从上表可知，与空白组比，模型组大鼠胸腺皮质厚度与皮质淋巴细胞个数显著减少（P<0.05），说明大鼠造围绝经期模型后胸腺体积萎缩。与模型组比，各给药组均可显著增厚胸腺皮质厚度（P<0.01）；并显著增加皮质淋巴细胞个数（P<0.01），以大剂量仙茅总苷组效果最优。

[0204] 6.3对围绝经期模型大鼠脾脏组织形态的影响

[0205] 采用测微尺的基线落在脾小结上，以中央动脉为中心分别测定两侧的脾小结厚度大小，求均数；并同时计算落在基线上两侧的淋巴细胞的个数，求均数。测得结果见表33。

[0206] 表33仙茅总苷对围绝经期模型大鼠脾脏组织病理变化的影响

[0207]

[0208] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01