1.一种瑞格列奈的有关物质分析方法，其特征在于:取本品细粉适量,相当于瑞格列奈25mg，置25ml量瓶中，加溶剂流动相A-乙腈,20:80,体积:体积，振摇超声10min使瑞格列奈溶解并稀释制成每1ml中含1 mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相A-乙腈,20:80,体积:体积,为溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，另取硬脂酸镁适量，精密称定，加溶剂流动相A-乙腈,20:80,体积:体积,振摇超声
10min，定量稀释制成浓度为每1ml中含1.6mg的溶液，过滤，取续滤液作为辅料定位对照溶液,照高效液相色谱法,试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液为流动相A,磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾4.0g，加水1000ml溶解后，用磷酸调节pH值至3.2,以乙腈为流动相B，按下程序进行梯度洗脱；
流速为每分钟1.0ml，检测波长为240nm；柱温为45℃,取供试品溶液，置90℃水浴加热24小时，放冷，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，瑞格列奈峰保留时间为23分钟，理论板数按瑞格列奈峰计算不低于2000，瑞格列奈峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求,取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使瑞格列奈色谱峰的峰高为满量程的20～25%，再精密量取供试品溶液、对照溶液与辅料定位对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图,扣除0.10倍主峰保留时间前的辅料峰和辅料定位对照溶液中对应的色谱峰，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰的
0.5%，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5%,供试品溶液色谱图中峰面积小于对照溶液中瑞格列奈峰0.05倍的杂质可忽略不计，时间分钟 流动相A% 流动相B%
本品 的制备方法是如下任意一种瑞格列奈缓释片的制备方法瑞格列奈缓释片的制备方法，1000片量，瑞格列奈 6g羟丙基甲基纤维素 40g聚乙烯醇 15g聚乙二醇2000 15g羟脯氨酸 10g微晶纤维素 20g硬脂酸镁 1g粘合剂：5％PVP80％乙醇溶液
将瑞格列奈、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇2000、羟脯氨酸按等量递增法混匀，加适量粘合剂制备软材，过18目筛制粒，60℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片；
瑞格列奈 6g丙烯酸树脂 50g聚乙烯醇 15g聚乙二醇2000 15g羟脯氨酸 10g微晶纤维素 50g硬脂酸镁 1g粘合剂：5％PVP80％乙醇溶液
将瑞格列奈、丙烯酸树脂、微晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇2000、羟脯氨酸按等量递增法混匀，加适量粘合剂制备软材，过18目筛制粒，60℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片；
瑞格列奈 6g泊洛沙姆 50g聚乙烯醇 15g聚乙二醇2000 15g羟脯氨酸 10g微晶纤维素 100g硬脂酸镁 2g粘合剂：无水乙醇
将瑞格列奈、泊洛沙姆、微晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇2000、羟脯氨酸按等量递增法混匀，加适量粘合剂制 备软材，过18目筛制粒，60℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。
一种瑞格列奈的缓释制剂
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及到一种瑞格列奈的缓释制剂及其制备方法、分析方法。
背景技术
[0002] 瑞格列奈是一种胰岛素分泌刺激剂，常温下呈白色或黄白色粉末，是一种具有氨基酸结构的非磺脲类的新型的短效的口服的促胰岛素分泌的降糖药。英文名称：repaglinide，其化学名称为：2-乙氧基-4-{2-{[(1S)-3-甲基-1-[2-(哌啶-1-基)苯基]丁基]氨基]-2-氧代乙基]苯甲酸，分子式：C27H36N204，分子量：452.6，结构式如下：
[0003]
[0004] 瑞格列奈是由Novo Nordi sk和Boehr inger Ingelheim联合研发的甲基苯甲胺苯甲酸(CBMA)类口服降糖药，于1998年4月在美国首次上市，同年10月在英国上市。临床主要用于治疗2型糖尿病。
[0005] 正常人的胰岛素分泌是脉冲式的，进餐后会出现一个分泌高峰，以对应处理餐后大量食物带来的血糖，而2型糖尿病患者餐后的胰岛素峰会延迟、低减甚至消失，导致餐后高血糖，餐后高血糖已被证明较空腹高血糖更容易诱发心脏、血管病变，引发危险的糖尿病并发症。利用瑞格列奈作用时间短、起效迅速、清除快的特点，餐前给药，餐时刺激胰岛素释放，餐后形成一个胰岛素分泌高峰，而在二餐之间，则不会刺激胰岛素分泌，达到模仿生理性胰岛素分泌的目的。这对控制全日平均血糖水平，减少并发症发生，保护胰岛中正常的β细胞有重要意义。
[0006] 瑞格列奈刺激胰腺释放胰岛素使血糖水平快速地降低，此作用依赖于胰岛β细胞，它与β细胞的结合位点和磺脲类药物如格列美脲(glimepiride)等不同，瑞格列奈通过与不同的受体结合以关闭B细胞膜中ATP一依赖性钾通道，它使β细胞去极化，打开钙通道、使钙的流入增加，此过程诱导β细胞中胰岛素的分泌，因其吸收快，服药后15分钟起效，达血药高峰时间为1小时，代谢迅速，半衰期为1小时，在每次主餐前即刻服用，可模拟生理性胰岛素分泌，达到降糖作用，有“餐时血糖调节剂”之称，瑞格列奈吸收迅速、起效快、在体内的清除速度也相对较快、半衰期短，具有“快开-速闭”的作用特点。
[0007] 瑞格列奈无论空腹或进食时服用均吸收良好，30～60分钟后达血浆峰值，并在肝脏内由CYP3A4酶系快速代谢为非活性物，大部分随胆汁清除，血浆半减期1小时。肝功能损害者血浆药物浓度更高。血浆胰岛素浓度随血清中药物浓度升高而增加，一般在下一次进餐前又回复到基础水平。
[0008] 瑞格列奈既可作为单独应用，也可与其他降糖药如罗格列酮(rosiglitazone)、二甲双胍(metformin)等联合应用增加疗效。但是，瑞格列奈在水中几乎不溶，在水中的溶解度仅为0.005mg/mL，药物体外溶出度差，导致其生物利用度低。目前，市售剂型只有瑞格列奈片，每天服用3次，因而给患者尤其是长期用药的患者带来诸多不便，且易造成药物浓度在体内波动性大的缺陷。因此，开发瑞格列奈的新制剂具有现实意义和市场前景。
发明内容
[0009] 本发明是研制一种瑞格列奈的缓释制剂，主要是解决难溶性药物瑞格列奈缓释的问题，从而达到进一步提高疗效的目的。
[0010] 一种瑞格列奈的缓释制剂，组分是羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、泊洛沙姆、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇等作为缓释材料。
[0011] 一种瑞格列奈的缓释制剂，在制备降血糖药物上的应用。
[0012] 一种瑞格列奈的缓释制剂，组分包括：
[0013]
[0014] 一种瑞格列奈的缓释制剂，组分包括：
[0015]
[0016] 一种瑞格列奈的缓释制剂，组分是：
[0017]
[0018] 一种瑞格列奈的缓释制剂，组分是：
[0019]
[0020] 一种瑞格列奈的缓释制剂，组分是：
[0021]
[0022]
[0023] 一种瑞格列奈的缓释制剂，组分是：
[0024]
附图说明
[0025] 图1中国药典测定条件
[0026] 图2美国药典32版原料有关物质测定条件
[0027] 图3美国药典32版片剂有关物质测定条件
[0028] 图4欧洲药典7.0有关物质测定条件
[0029] 图5本发明实施例7测定条件具体实施方式：
[0030] 实施例1瑞格列奈缓释片的制备(1000片量)
[0031]
[0032] 粘合剂：5％PVP80％乙醇溶液
[0033] 制备工艺：
[0034] 将瑞格列奈、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇2000、羟脯氨酸按等量递增法混匀，加适量粘合剂制备软材，过18目筛制粒。60℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。
[0035] 实施例3瑞格列奈缓释片的制备(1000片量)
[0036]
[0037] 粘合剂：5％PVP80％乙醇溶液
[0038] 制备工艺：
[0039] 将瑞格列奈、丙烯酸树脂、微晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇2000、羟脯氨酸按等量递增法混匀，加适量粘合剂制备软材，过18目筛制粒。60℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。
[0040] 实施例4瑞格列奈控释片的制备(1000片量)
[0041]
[0042] 粘合剂：无水乙醇
[0043] 制备工艺：
[0044] 将瑞格列奈、泊洛沙姆、微晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇2000、羟脯氨酸按等量递增法混匀，加适量粘合剂制备软材，过18目筛制粒。60℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。
[0045] 实施例5瑞格列奈缓释片
[0046]
[0047] 制备工艺：
[0048] 将瑞格列奈、聚乙烯吡咯烷酮采用溶剂法制备固体分散体，粉碎过100目筛，将瑞格列奈固体分散体、羟丙基乙基纤维素、微晶纤维素、CMC-Na、聚乙烯醇、聚乙二醇2000、羟脯氨酸按等量递增法混匀，加入硬脂酸镁混合均匀，粉末直接压片。
[0049] 实施例6本发明产品对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响
[0050] 1.实验材料
[0051] 1.1动物：清洁级雄性ICR小鼠，18-22g，
[0052] 2药物及试剂：
[0053] 四氧嘧啶，美国sigma公司，Lot37H1381；
[0054] 葡萄糖测定试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司；
[0055] 瑞格列奈片，1.0mg/片；
[0056] 实施例1-5，1.0mg/片。
[0057] 2.实验方法
[0058] 随机取出小鼠10只作为正常组，其余小鼠禁食14-16h后，尾静脉注射四氧嘧啶60mg/kg，注射后72h眼眶后静脉丛取血，分离血清，预测血糖，选空腹血糖＞12mmol/L的小鼠，随机分组，分别按10ml/kg体重经口给予瑞格列奈片0.5mg/kg、实施例1-5片0.5mg/kg)，正常组和模型组经口给予等体积的0.2％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。每日灌胃给药一次，连续给药6天。各组给药前禁食3.5h，给药后再禁食1.5h，即所有小鼠禁食5h后，眼眶后静脉丛采血，分离血清，以葡萄糖氧化酶法测定血糖。
[0059] 3.统计：实验数据以 ±SE表示，并用t检验统计表示组间差异。
[0060] 4.结果
[0061] 4.1复方对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响
[0062] 表1各组治疗前后血糖水平比较(mmol/L， ±SE)
[0063]
[0064]
[0065] 如表1所示，与正常组相比，四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖极明显升高(P＜0.01*)。与模型组相比，给药后6天，瑞格列奈片组、实施例1-5组均极显著(P＜0.01*)降低糖尿病小鼠的空腹血糖；实施例1-5组比瑞格列奈片组更显著(P＜0.05▲)降低糖尿病小鼠的空腹血糖。
[0066] 实施例7本发明产品的分析方法
[0067] 本发明产品(包括而不限制于实施例1-5的产品)，含瑞格列奈应为标示量的95.0％～105.0％。
[0068] 性状
[0069] 本品为白色或类白色片。
[0070] 鉴别
[0071] (1)取本品细粉适量(相当于瑞格列奈0.5mg)，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液适量，振摇使瑞格列奈溶解，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照紫外-可见分光光度法(附录IV A)测定，在243nm与298nm的波长处有最大吸收。
[0072] (2)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
[0073] 检查
[0074] 含量均匀度
[0075] 取本品1片，置20ml量瓶中，照含量测定项下的方法，自“加0.1mol/L盐酸溶液适量”起，依法测定，计算含量，应符合规定(附录X E)。
[0076] 溶出度
[0077] 取本品，照溶出度测定法(附录X C第二法)，以pH5.0磷酸盐缓冲液(10.2g一水柠檬酸和36.51g十二水磷酸氢二钠，加水1000ml使溶解)900ml为溶出介质，转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量滤过，照含量测定项下的色谱条件，精密量取续滤液100μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取瑞格列奈对照品适量，精密称定，加甲醇适量使溶解，用溶出介质定量稀释制成每1ml中含0.56μg的溶液，同法测定，计算每片的溶出量，限度为标示量的80％，应符合规定。
[0078] 有关物质取本品细粉适量(相当于瑞格列奈25mg)，置25ml量瓶中，加溶剂流动相A-乙腈(20∶80)(体积∶体积)，振摇超声10min使瑞格列奈溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相A-乙腈(20∶80)(体积∶体积)为溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。另取硬脂酸镁适量，精密称定，加溶剂流动相A-乙腈(20∶80)(体积∶体积)振摇超声10min，定量稀释制成浓度为每1ml中含1.6mg的溶液，过滤，取续滤液作为辅料定位对照溶液。照高效液相色谱法(附录V D)试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾4.0g，加水1000ml溶解后，用磷酸调节pH值至3.2)为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml，检测波长为240nm；柱温为45℃。取供试品溶液，置90℃水浴加热24小时，放冷，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，瑞格列奈峰保留时间为23分钟，理论板数按瑞格列奈峰计算不低于2000，瑞格列奈峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使瑞格列奈色谱峰的峰高为满量程的20～25％，再精密量取供试品溶液、对照溶液与辅料定位对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。扣除0.10倍主峰保留时间前的辅料峰和辅料定位对照溶液中对应的色谱峰，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰的0.5倍(0.5％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(1.5％)。供试品溶液色谱图中峰面积小于对照溶液中瑞格列奈峰0.05倍的杂质可忽略不计。
[0079] 有关物质的梯度洗脱程序
[0080]
[0081] 左旋异构体取本品细粉适量(相当于瑞格列奈25mg)，置50ml量瓶中，加甲醇15ml使瑞格列奈溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取
1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取消旋瑞格列奈对照品
5mg，置50ml量瓶中，加甲醇15ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为消旋对照品溶液。照高效液相色谱法(附录V D)试验，采用手性色谱柱(填料为α1-酸性糖蛋白，100mm×4.0mm×5μm)，以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.72g，加水
800ml使溶解，用氢氧化钠试液调节pH值至6.3，加水稀释至1000ml，摇匀)为流动相A，乙腈为流动相B，检测波长为240nm。按下表程序进行梯度洗脱。取消旋对照品溶液么20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为瑞格列奈峰与左旋异构体峰，其分离度应符合要求，理论板数按瑞格列奈峰计算不低于2000。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使瑞格列奈色谱峰的峰高为满量程的25％，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有左旋异构体峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5％)。
[0082] 左旋异构体的梯度洗脱程序
[0083]
[0084] 微生物限度照微生物限度检查法(中国药典2010年版第二部附录XIJ)取本品按常规法制成1∶10的供试液，细菌、霉菌和酵母菌计数采用平皿法，控制菌检查以常规法进行，每1g供试品中，细菌数不得过1000cfu，霉菌和酵母菌数不得过100cfu，不得检出大肠埃希菌。
[0085] 附录是中国药典2010年版第二部附录
[0086] 其他应符合片剂项下的有关各项规定(中国药典2010年版第二部附录I A)[0087] 含量测定照高效液相色谱法(中国药典2010年版第二部附录V D)测定。
[0088] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵缓冲液(取醋酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，用冰醋酸调pH值至4.0)-甲醇(20∶80)(体积∶体积)为流动相，检测波长为243nm。理论板数按瑞格列奈峰计算不低于2000。取有关物质项下经90℃水浴中放置24小时并放冷的溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为降解物峰与瑞格列奈峰，其分离度应符合要求。
[0089] 测定法取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(相当于瑞格列奈1.25mg)，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液适量，振摇使瑞格列奈溶解，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取瑞格列奈对照品，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含25μg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
[0090] 类别降血糖药。
[0091] 规格0.5mg
[0092] 贮藏遮光、密封、25℃以下保存。
[0093] 包装铝塑泡罩包装。
[0094] 有效期暂定24个月
[0095] 实施例8本发明产品的有关物质测定条件筛选过程
[0096] 一、各杂质对照品结构式
[0097] 取可能存在的已知杂质配制混合溶液，考察各杂质峰之间的分离度及杂质峰与主峰之间的分离度，各杂质如下：
[0098] 欧洲药典杂质A：4-(羧甲基)-2-乙氧基苯甲酸
[0099]
[0100] 欧洲药典杂质B：[3-乙氧基-4-(乙氧羰基)苯基]乙酸
[0101]
[0102] 欧洲药典杂质C：(1S)-3-甲基-1-[2-(哌啶-1-基)苯基]丁烷-1-胺[0103]
[0104] 欧洲药典杂质D：2-乙氧基-4-[2-[[(1S)-3-甲基-1-[2-(哌啶-1-基)苯基]丁基]氨基]-2-氧代乙基]苯甲酸
[0105]
[0106] 美国药典杂质C：
[0107] (S)-2-乙氧基-4-[2-[[2-苯基-1-[2-(1-哌啶基)苯基]乙基]氨基]-2-氧代乙基]苯甲酸
[0108]
[0109] 二、有关物质检测备选流动相条件
[0110]
[0111]
[0112]
