RacemosinsA在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用转让专利
申请号 : CN201310470467.8
文献号 : CN103463003B
文献日 : 2015-06-17
发明人 : 严建山
申请人 : 嵊州市百恩贸易有限公司
摘要 :
本发明公开了Racemosins A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用，属于药物新用途技术领域。Racemosins A对治疗缺血性脑损伤具有治疗作用，因此具有良好的开发应用前景，属于首次公开，而且其对于治疗缺血性脑损伤活性强，具有突出的实质性特点和显著的进步。
权利要求 :
1.Racemosins A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用，所述化合物RacemosinsA结构如式（Ⅰ）所示：
式（Ⅰ）。
说明书 :
Racemosins A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及化合物Racemosins A的新用途，尤其涉及Racemosins A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。
背景技术
[0002] 本发明人通过大量的实验发现，Racemosins A有抗缺血性脑损伤、抗脑缺血/再灌注损伤的药理作用，具有预防或者治疗缺血性脑损伤的医药用途。
[0003] 本发明涉及的化合物Racemosins A是一个2013年发表（Ding-Quan Liu，et al.,Racemosins A and B,two novel bisindole alkaloids from the green alga Caulerparacemosa.Fitoterapia,91(2013):15–20.）的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途发现其能减弱β淀粉样肽25-35(Aβ25–35)导致的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞损伤（Ding-Quan Liu，et al.,Racemosins A and B,two novel bisindole alkaloids fromthe green alga Caulerpa racemosa.Fitoterapia,91(2013):15–20.），本发明涉及的Racemosins A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公开。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于根据现有Racemosins A研究中未发现其具有治疗缺血性脑损伤的报道的现状，提供了Racemosins A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。
[0005] 所述化合物Racemosins A结构如式（Ⅰ）所示：
[0006]
[0007] 式（Ⅰ）
[0008] 本发明涉及的Racemosins A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于缺血性脑损伤的作用强，具备突出的实质性特点，同时用于治疗缺血性脑损伤显然具有显著的进步。
[0009] 本发明人通过具体实施方式中的实验证明了Racemosins A具有治疗或预防缺血性脑损伤的作用。
具体实施方式
[0010] 本发明所涉及化合物Racemosins A的制备方法参见文献（Ding-Quan Liu，et al.,Racemosins A and B,two novel bisindole alkaloids from the green alga Caulerpa racemosa.Fitoterapia,91(2013):15–20.）
[0011] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
[0012] 实施例1：本发明所涉及化合物Racemosins A片剂的制备：
[0013] 取5克化合物Racemosins A加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
[0014] 实施例2：本发明所涉及化合物Racemosins A胶囊剂的制备：
[0015] 取5克化合物Racemosins A加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0016] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0017] 实验例1：Racemosins A对大鼠局部脑缺血损伤的影响
[0018] （1）实施材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，南京医科大学实验动物中心。阳性对照药：天保宁，康恩贝集团制药有限公司生产，每片含银杏叶精提取物40mg。
[0019] （2）方法与结果
[0020] 1）Racemosins A对大鼠中动脉血栓（MCAO）模型试验
[0021] 将60只大鼠随机分为六组，即假手术对照组、MCAO模型组、给药组3组，天保宁组（24mg/kg）。造模前灌胃给药，一日一次，共给药七次，假手术对照组、MCAT模型组、给予等量的饮用水（1ml/100g），造模后灌胃给药一次。大鼠腹腔注射12%水合氯醛溶液（350mg/kg）麻醉，大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约115cm，夹断颞骨，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧1mm处做一直径215mm骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉（位于嗅束及大脑下静脉之间）。将吸有50%氯化铁溶液10ul的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上30min后，取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。假手术组除不滴加氯化铁溶液外，其余手术步骤同模型组。MCAO大鼠神经症状和梗塞范围的评定：在手术不同时间（6h，24h），按Bederson等方法并加以改进，对动物进行行为评分。
1.提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、时屈曲、肩内旋或既有腕时的屈曲又有内旋者，记为1分。2.将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检测阻力。如双侧阻力对等且有力者记为0分；
如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。3.将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转着，记为1分；否则记为0分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高动物的行为障碍越严重。对行为检测打分值进行组间比较，t检验。结果见表1。动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在4℃下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中（每5ml染液中含4%TTC1.5ml，1M K2HPO40.1ml），37℃避光温孵30min，再取出置于10%甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占右侧半脑重量的百分比作为脑梗塞范围。结果进行组间比较，t检验，结果见表2。
1.提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、时屈曲、肩内旋或既有腕时的屈曲又有内旋者，记为1分。2.将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检测阻力。如双侧阻力对等且有力者记为0分；
如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。3.将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转着，记为1分；否则记为0分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高动物的行为障碍越严重。对行为检测打分值进行组间比较，t检验。结果见表1。动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在4℃下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中（每5ml染液中含4%TTC1.5ml，1M K2HPO40.1ml），37℃避光温孵30min，再取出置于10%甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占右侧半脑重量的百分比作为脑梗塞范围。结果进行组间比较，t检验，结果见表2。
[0022] 表1Racemosins A对MCAO大鼠脑梗塞范围及神经症状的影响（n=10）
[0023]
[0024] 注：与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。
[0025] 表2Racemosins A对光化学诱导脑血栓形成大鼠脑梗塞的影响（n=10）[0026]
[0027] 注：与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。
[0028] 结果显示，除假手术未见行为异常改变，MCAO模型组大鼠在术后6h、24h均出现偏瘫样症状。给药组与天保宁组的大鼠在术后6h、24h其神经症状均有不同程度的改善（P<0.01，P<0.05）。术后24h，除假手术组未见脑组织异常改变外，模型组相比具有显著差异（P<0.01，P<0.05）。Racemosins A可减轻梗塞灶，结果显示出一定的量效关系。
[0029] 实验例2：Racemosins A对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤的影响
[0030] （1）实验材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g。MDA，SOD，蛋白定量（考马斯亮蓝）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
[0031] （2）方法与结果
[0032] 1）实验方法：120只大鼠随机分为5组，即假手术组、模型组、3个给药组，每组25只。除假手术组不插线外，其余4组造模（MCAO）。给药组各剂量组ig每天1次，连续13d。术前1h ig再给药1次。6%水合氯醛（350mg/kg）腹腔麻醉，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）。结扎颈总动脉近心端、颈外动脉起始端后，在颈总动脉处剪一“V”形小口，沿颈总动脉插入线栓（线栓采用直径为0.235mm的鱼线，头端