一种壳聚糖与三肽组合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物及其制备方法和应用，其制备方法为：配制0.01wt%-20wt%的甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的水溶液；配制壳聚糖凝胶：含0.01-10wt%羧甲基壳聚糖，搅拌充分溶胀成凝胶，加入甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的水溶液，搅拌均匀，得到壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物凝胶；采用该方法制备的组合物，具备了比两者单独使用更好的抗放射性皮炎及促创口愈合的作用。

权利要求

1.一种壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物的制备方法，其特征在于，制备方法为：将0.01g甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽溶解在50mL水溶液中，配制得

0.02％甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽水溶液，将5g羧甲基壳聚糖加50ml水溶胀，过夜消泡，配制得10％壳聚糖凝胶，将所述的水溶液与凝胶等量混合，搅匀，制备得10％壳聚糖+0.01％甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物。

2.一种壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物的制备方法，其特征在于，制备方法为：将20g甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽溶解在50mL水溶液中，配制得

40％甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽水溶液，将0.1g羧甲基壳聚糖加50ml水溶胀，过夜消泡，配制得0.2％壳聚糖凝胶，将所述的水溶液与凝胶等量混合，搅匀，制备得0.1％壳聚糖+20％甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物。

3.权利要求1或2所述的组合物在制备预防及治疗放射性皮炎、促进伤口的愈合、减少疤痕的产生的药物及医用敷料和创口护理剂中的应用。

说明书

一种壳聚糖与三肽组合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的组合物及其制备方法和应用，旨在通过组合，协同提高两种化合物抗放射性皮炎、促进创口愈合的能力，属于医学材料领域。

背景技术

[0002] 甲壳素是从虾、蟹等甲壳类动物的甲壳以及真菌的细胞壁中提取出来的一种天然多糖，也是自然界仅次于纤维素的第二大生物资源。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰化衍生物，具有良好的生物相容性、生物可降解性、天然无毒性和多种生物活性。近年来，壳聚糖作为一种天然医用生物敷料，因其抗菌性和抗炎作用，在创口护理方面应用受到人们的广泛关注。

[0003] 中国专利申请号201210534121.5公开了甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的结构及其制备方法，并详细描述了其在制备治疗脑卒中药物中的应用，甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽制备的抗脑卒中的药物具有较好的疗效，通过动物实验表明甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽可改善大鼠的行为学，起到治疗脑卒中的作用。

发明内容

[0004] 本发明的目的是提供了壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的组合物及其制备方法和应用，采用该方法制备的组合物，具备了比两者单独使用更好的抗放射性皮炎及促创口愈合的作用。

[0005] 本发明提供的技术方案是：

[0006] 壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的组合其制备方法为：配制0.01%-20%的甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的水溶液；配制壳聚糖凝胶：含0.01-10%羧甲基壳聚糖，搅拌充分溶胀成凝胶，加入甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的水溶液，搅拌均匀，得到壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物凝胶。

[0007] 壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物具备抗放射性皮炎和促进伤口愈合作用，其作用优于单纯使用壳聚糖、单纯使用甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的作用，实验结果见表1，图1。

[0008] 本发明采用上述的技术方案，其优点在于：保留壳聚糖对皮损的抗菌、抗炎作用，同时复配甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的促细胞增殖作用，增强促伤口愈合的效果。

[0009] 壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物具备抗感染作用，作用优于单纯使用甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的作用，实验结果见表2；具有促伤口愈合作用，其作用优于单纯使用壳聚糖、单纯使用甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的作用，实验结果见表3。

[0010] 本发明利用壳聚糖的杀菌性、抗炎性及可以成膜后的阻菌性，在皮损部位和创口表面形成护理膜，利用甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的抗氧化性，渗入组织内，促进细胞增殖、加速创口愈合。由于壳聚糖成膜后，可形成局部半封闭环境，并增强皮肤的水合作用，可提高甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的透皮吸收性。

附图说明

[0011] 图1壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物、壳聚糖凝胶、甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽、生理盐水治疗放射性皮炎的作用比较。

具体实施方式

[0012] 以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

[0013] 实施例1：

[0014] 将20g甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽溶解在50mL水溶液中，配制得40%甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽水溶液。将0.1g羧甲基壳聚糖加50ml水溶胀，过夜消泡，配制得0.2%壳聚糖凝胶。将上述两种溶液等量混合，搅匀，制备得0.1%壳聚糖+20%甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物。

[0015] 实施例2:

[0016] 将0.01g甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽溶解在50mL水溶液中，配制得0.02%甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽水溶液。将5g羧甲基壳聚糖加50ml水溶胀，过夜消泡，配制得10%壳聚糖凝胶。将上述两种溶液等量混合，搅匀，制备得10%壳聚糖+0.01%甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物。

[0017] 实施例3:采用1%壳聚糖+5%甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物，建立大鼠放射性皮炎模型，探讨组合物抗放射性皮炎的作用。

[0018] 材料方法

[0019] （一）试验动物

[0020] SD鼠，雌雄兼用，由武汉大学动物试验中心提供。

[0021] （二）试验材料

[0022] 试剂：羧甲基壳聚糖(药用级，浙江金壳生物化学有限公司)，批号：D061226300；甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽，自己合成。

[0023] （三）试验方法

[0024] 造模方法：采用6Mev电子线，吸收剂量为60Gy，剂量率为600cGy/分，一次照射对大鼠裸露的右后大腿，产生10%II度放射性皮炎。

[0025] 分组及给药：动物24只，随机分为4组，每组6只。模型组；模型+壳聚糖凝胶治疗组；模型组+甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组；模型+壳聚糖+甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物组；于出现急性放射性皮炎后，模型组每天于照射部位喷涂生理盐水，一天二次；给药物喷涂相应药物，于照射部位，一天二次。于给药后4周结束实验，照像并用图像软件计算皮炎面积。

[0026] 统计学处理：采用SPSS10.0如见进行统计分析。计量资料以（χ±S）表示，结果进行t检验；计数资料采用卡方检验。P<0.05为差异显著。

[0027] 实验结果

[0028] 治疗放射性皮炎的作用研究

[0029] 结果可见，壳聚糖凝胶、甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽水溶液、壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物对放射性皮炎均有显著的治疗作用，且治疗作用以壳聚糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物效果最好，结果见表1、图1。如图1所示，经6Mev电子线，吸收剂量为60Gy的照射，14天后，采用相应药物进行治疗4周，2
结果可见，生理盐水组的平均红肿面积为：0.94cm、单独壳聚糖凝胶组的平均红肿面积为：
2 2
0.49cm、单独甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽水溶液的平均红肿面积为：0.45cm、壳聚
2
糖与甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物的平均红肿面积为：0.08cm。表明组合物具备抗放射性皮炎作用，其作用优于单纯使用壳聚糖、单纯使用甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽的作用

[0030] 表1.壳聚糖凝胶、三肽水溶液、壳聚糖与三肽组合物治疗放射性皮炎的作用[0031] （χ±S）

[0032]

[0033] 实施例4:采用2%壳聚糖+2%甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物，建立家兔创伤模型、小鼠感染模型，探讨组合物对伤口的保护作用。

[0034] 材料方法

[0035] （一）试验动物

[0036] 日本大耳白兔，雌雄兼用，由武汉大学动物试验中心提供；昆明小鼠，雌雄兼用，由武汉大学动物试验中心提供。

[0037] （二）试验材料

[0038] 试剂：羧甲基壳聚糖(药用级，浙江金壳生物化学有限公司)，批号：D061226300；甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽（食品级，广州久恒贸易有限公司），批号：20110302。

[0039] 药品：青霉素钠，国药集团国瑞药业有限公司提供，批号20070518；龙胆紫由国药集团化学试剂有限公司提供，批号：F20070418；

[0040] （三）试验方法

[0041] 1．家兔皮肤大创口愈合试验：

[0042] 家兔，去毛，在脊柱两侧分别切除1×2cm皮肤，用湿纱布浸润伤口1h后，给予相应护理品，7天后观察家兔伤口愈合率。

[0043] 2．小鼠创口感染试验：

[0044] 昆明种小鼠60只，随机分为：纯壳聚糖膜组；壳聚糖生物胶组；生理盐水组；生理盐水组。各组小鼠沿脊柱两侧脱毛，划#字口，金黄色葡萄球菌菌液涂抹伤口，于接菌后30min给予相应药物，每天重复一次，连续7d。分别记录各组死亡率。

[0045] 实验结果

[0046] 小鼠创口感染试验

[0047] 结果可见，金黄色葡萄球菌可引起小属死亡，7天内的死亡率为50%，壳聚糖凝胶和壳聚糖+甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物组可明显保护伤口感染，7天内感染死亡率为20%；甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽无抗感染作用，7天内感染死亡率为50%。结果见下表2。

[0048] 表2.壳聚糖凝胶、三肽水溶液、壳聚糖与三肽组合物对小鼠金黄色葡萄球菌伤口[0049] 感染死亡率的保护作用

[0050]

[0051] 家兔皮肤大创口愈合试实验

[0052] 结果可见，家兔大伤口7天自然愈合率为50％；壳聚糖凝胶组7天愈合率为70％；甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组7天愈合率为60％，壳聚糖+甘氨酸-L-半胱氨酸-高牛磺酸三肽组合物组7天愈合率为90％，结果见下表3。

[0053] 表3.壳聚糖凝胶、三肽水溶液、壳聚糖与三肽组合物对家兔大伤口7天愈合作用观察

[0054]组别 7天愈合率(％)
壳聚糖凝胶组 70
三肽组 60
壳聚糖+三肽组合物组 90
生理盐水组 50

[0055] 应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。