一种化妆品中十种合成着色剂的高效液相色谱测定方法转让专利
申请号 : CN201310452307.0
文献号 : CN103487524B
文献日 : 2014-12-10
发明人 : 刘海山 , 钱晓燕 , 吕春华 , 朱晓雨 , 陈笑梅
申请人 : 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心
摘要 :
本发明公开了一种同时测定化妆品中10种合成着色剂的检测方法，该方法用四氢呋喃、二甲基亚砜和甲醇在超声波辅助条件下提取样品中的着色剂，通过高速离心净化，在EclipseXDB-C18（3.5μm，4.6×150mm）色谱柱上分离，乙腈-0.02mol/L乙酸铵溶液（pH=4.6）为流动相进行梯度洗脱，二极管阵列检测器测定,外标法定量；本发明可同时测定化妆品中颜料红57、颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、溶剂蓝35、苏丹红Ⅱ、苏丹红IV和分散黄3等10种合成着色剂，测定低限均为20mg/kg。本发明简便、快速、灵敏，适合油状、粉状和膏状化妆品中着色剂的定量检测。
权利要求 :
1.一种同时测定化妆品中10种合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述10种合成着色剂包括：酸性黄36、分散黄3、颜料红57；颜料红53、颜料橙5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、酸性紫49、溶剂蓝35；该方法包括如下步骤：（1）准确称取0.50 g样品于50 mL塑料离心管中，加入2.0 mL 四氢呋喃，涡旋混匀；
（2）向离心管中加入1.0 mL 二甲基亚砜，混匀后超声提取15 min；
（3）再向离心管中缓慢加入7.0 mL甲醇，混匀后超声提取15 min；
（4）以8500 r/min离心5 min后，取上清液供高效液相色谱分析，该上清液为样品溶液；
（5）配制标准溶液：准确称取适量的着色剂标准物质，其中，颜料红57和颜料红53分别用二甲基亚砜溶解并配制成浓度为500 µg/mL的标准储备溶液；颜料橙5用四氢呋喃溶解并配制成100 µg/mL的标准储备溶液；苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ分别用四氢呋喃溶解并配制成500 µg/mL的标准储备溶液；罗丹明B、酸性黄36和酸性紫49分别用甲醇溶解并配制成1000 µg/mL的标准储备溶液；分散黄3和溶剂蓝35分别用甲醇溶解并配制成
500 µg/mL的标准储备溶液，密封避光于4℃下保存；将颜料红57、颜料红53、颜料橙5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、酸性黄36、酸性紫49、分散黄3和溶剂蓝35按照体积比
2:2:10:2:2:1:1:1:2:2混合；然后用甲醇稀释成10种合成着色剂的浓度均为0.5 µg/mL、
1.0 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL或10.0 µg/mL的系列混合标准工作溶液；
（6）将步骤（5）配置的标准工作溶液和步骤（4）配置的样品溶液依次用高效液相色谱仪测定，外标法定量；高效液相色谱条件：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.6 mm(i.d.)×150 mm，5 μm；流动相：(A)乙腈；(B)0.02 mol/L乙酸铵溶液，pH=4.60；梯度洗脱条件：0.0～8.0 min，35%A～55%A和65-45%B；8.0～20.0 min，55%A～98%A和45-2%B；
20.0～22.0 min，98%A～35%A和2-65%B，所述百分比为质量百分比；流速：1.0 mL/min；
进样量：20 µL；柱温：室温；检测波长：酸性黄36和分散黄3为417 nm；颜料红53、颜料红
57、颜料橙5、苏丹红II和苏丹红IV为485 nm；罗丹明B为550 nm；酸性紫49为590 nm；
溶剂蓝35为640 nm。
说明书 :
一种化妆品中十种合成着色剂的高效液相色谱测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及化妆品色谱分析技术领域，尤其涉及一种化妆品中颜料红57 (C.I.15850)、颜料橙5 (C.I.12075)、酸性黄36 (C.I.13065)、颜料红53 (C.I.15585)、酸性紫49 (C.I.42640)、罗丹明B (C.I.45170)、溶剂蓝35 (C.I.61554)、苏丹红Ⅱ (C.I.12140)、苏丹红IV (C.I.26105)和分散黄3 (C.I.11855)等10种合成着色剂的高效液相色谱测定方法。
背景技术
[0002] 化妆品中含有多种化学物质，因有机合成色素遮盖力、着色力强，被广泛用于指甲油、眼影、唇膏等美容化妆品中。但是很多合成着色剂对人体是有害的，有些会引起皮肤过敏，甚至会致癌、致畸、致突变。
[0003] 本发明中涉及的10种有机合成着色剂分别属于偶氮类、蒽醌类、三苯甲烷类和呫吨类染料。我国《化妆品卫生规范》（2007版）、欧盟化妆品指令76/768/EEC和美国FDA对化妆品用着色剂品种、使用范围和限制条件都作了明确的规定，其中禁止使用的着色剂有颜料橙5 (C.I.12075)、酸性黄36 (C.I.13065)、颜料红53 (C.I.15585)、酸性紫49 (C.I.42640)、罗丹明B (C.I.45170)、溶剂蓝35 (C.I.61554)、苏丹红Ⅱ (C.I.12140)、苏丹红IV (C.I.26105)和分散黄3 (C.I.11855)，我国和欧盟规定颜料红57 (C.I.15850)的含量不得超过0.2%（质量分数），美国FDA规定颜料红57禁止用于眼部化妆品。
[0004] 对于化妆品中有机着色剂的测定主要采用高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法、分光光度法和胶束荧光法等。分光光度法灵敏度较低，且容易受到干扰；胶束荧光法灵敏度较高，但只适用于能产生荧光的着色剂，如罗丹明B等；高效液相色谱-串联质谱法灵敏度高、可适用于大部分着色剂检测，但价格昂贵；高效液相色谱法因其高灵敏度以及分析速度快等特点而被广泛应用于化妆品中有害物质的分析测定。能同时检测化妆品中颜料红57等10种禁用和限用合成着色剂的方法尚未见报道。
发明内容
[0005] 本发明要解决目前化妆品着色剂检测中存在的问题，提供一种化妆品中十种合成着色剂的高效液相色谱测定方法。
[0006] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种同时测定化妆品中10种合成着色剂的检测方法，所述10种合成着色剂包括：酸性黄36、分散黄3、颜料红57；颜料红53、颜料橙5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、酸性紫49、溶剂蓝35。该方法包括如下步骤：
[0007] （1）准确称取0.50 g样品于50 mL塑料离心管中，加入2.0 mL 四氢呋喃(THF)，涡旋混匀；
[0008] （2）向离心管中加入1.0 mL 二甲基亚砜(DMSO)，混匀后超声提取15 min；
[0009] （3）再向离心管中缓慢加入7.0 mL甲醇，混匀后超声提取15 min；
[0010] （4）以8500 r/min离心5 min后，取上清液供高效液相色谱分析，该上清液为样品溶液；
[0011] （5）配制标准溶液：准确称取适量的着色剂标准物质，其中，颜料红57和颜料红53分别用二甲基亚砜溶解并配制成浓度为500 µg/mL的标准储备溶液；颜料橙5用四氢呋喃溶解并配制成100 µg/mL的标准储备溶液；苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ分别用四氢呋喃溶解并配制成500 µg/mL的标准储备溶液；罗丹明B、酸性黄36和酸性紫49分别用甲醇溶解并配制成1000 µg/mL的标准储备溶液；分散黄3和溶剂蓝35分别用甲醇溶解并配制成500 µg/mL的标准储备溶液，密封避光于4℃下保存；将颜料红57、颜料红53、颜料橙
5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、酸性黄36、酸性紫49、分散黄3和溶剂蓝35按照体积比
2:2:10:2:2:1:1:1:2:2混合。然后用甲醇稀释成10种合成着色剂的浓度均为0.5 µg/mL、
1.0 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL或10.0 µg/mL的系列混合标准工作溶液；
5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、酸性黄36、酸性紫49、分散黄3和溶剂蓝35按照体积比
2:2:10:2:2:1:1:1:2:2混合。然后用甲醇稀释成10种合成着色剂的浓度均为0.5 µg/mL、
1.0 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL或10.0 µg/mL的系列混合标准工作溶液；
[0012] （6）将步骤5配置的标准工作溶液和步骤4配置的样品溶液依次用高效液相色谱仪测定，外标法定量；高效液相色谱条件：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.6 mm(i.d.)×150 mm，5 μm；流动相：(A)乙腈；(B)0.02 mol/L乙酸铵溶液（pH=4.60）；梯度洗脱条件：0.0～8.0 min，35%A～55%A和45-65%B；8.0～20.0 min，55%A～98%A和2-45%B；20.0～22.0 min，98%A～35%A和2-65%B，所述百分比为质量百分比；流速：1.0 mL/min；
进样量：20 µL；柱温：室温；检测波长：酸性黄36和分散黄3为417 nm；颜料红53、颜料红
57、颜料橙5、苏丹红II和苏丹红IV为485 nm；罗丹明B为550 nm；酸性紫49为590 nm；
溶剂蓝35为640 nm。
进样量：20 µL；柱温：室温；检测波长：酸性黄36和分散黄3为417 nm；颜料红53、颜料红
57、颜料橙5、苏丹红II和苏丹红IV为485 nm；罗丹明B为550 nm；酸性紫49为590 nm；
溶剂蓝35为640 nm。
[0013] 本发明的有益效果是，本发明建立了高效液相色谱法同时测定化妆品中颜料红57、颜料红53、颜料橙5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、酸性紫49、酸性黄36、分散黄3、罗丹明B和溶剂蓝35等10种禁用和限用着色剂的检测方法，该方法快速简便、灵敏度高、干扰少、结果准确、重现性好，能较好地应用于实际化妆品样品的检测，为我国化妆品中禁限用色素的监管和产品质量控制提供了技术支持。
附图说明
[0014] 图1为酸性黄36和分散黄3在417nm下的色谱图；
[0015] 图2为颜料红57、颜料红53、颜料橙5、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ在485nm下的色谱图；
[0016] 图3为罗丹明B在550nm下的色谱图；
[0017] 图4为酸性紫49在590nm下的色谱图；
[0018] 图5为溶剂蓝35在640nm下的色谱图；
[0019] 图6为实施例1的样品在485 nm下的色谱图；
[0020] 图7为实施例2的样品在485 nm下的色谱图。
[0021] 图中，1为酸性黄36、2为分散黄3、3为颜料红57；4为颜料红53、5为颜料橙5、6为苏丹红Ⅱ、7为苏丹红Ⅳ、8为罗丹明B、9为酸性紫49、10为溶剂蓝35。
具体实施方式
[0022] 本发明提供一种同时测定化妆品中10种合成着色剂的检测方法，所述10种合成着色剂包括：酸性黄36、分散黄3、颜料红57；颜料红53、颜料橙5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、酸性紫49、溶剂蓝35。该方法包括如下步骤：
[0023] （1）准确称取0.50 g样品于50 mL塑料离心管中，加入2.0 mL 四氢呋喃(THF)，涡旋混匀。
[0024] （2）向离心管中加入1.0 mL 二甲基亚砜(DMSO)，混匀后超声提取15 min。
[0025] （3）再向离心管中缓慢加入7.0 mL甲醇，混匀后超声提取15 min。
[0026] （4）以8500 r/min离心5 min后，取上清液供高效液相色谱分析，该上清液为样品溶液。
[0027] （5）配制标准溶液：准确称取适量的着色剂标准物质，其中，颜料红57和颜料红53分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解并配制成浓度为500 µg/mL的标准储备溶液；颜料橙5用四氢呋喃(THF)溶解并配制成100 µg/mL的标准储备溶液；苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ分别用四氢呋喃(THF)溶解并配制成500 µg/mL的标准储备溶液；罗丹明B、酸性黄36和酸性紫49分别用甲醇溶解并配制成1000 µg/mL的标准储备溶液；分散黄3和溶剂蓝35分别用甲醇溶解并配制成500 µg/mL的标准储备溶液，密封避光于4℃下保存；将颜料红57、颜料红53、颜料橙5、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、酸性黄36、酸性紫49、分散黄3和溶剂蓝35按照体积比2:2:10:2:2:1:1:1:2:2混合。然后用甲醇稀释成10种合成着色剂的浓度均为0.5 µg/mL、1.0 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL或10.0 µg/mL的系列混合标准工作溶液。
[0028] （6）将标准工作溶液和样品溶液依次用高效液相色谱仪测定，外标法定量；高效液相色谱条件：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.6 mm(i.d.)×150 mm，5μm；流动相：梯度洗脱条件见表1；流速：1.0 mL/min；进样量：20µL；柱温：室温；检测波长：酸性黄36和分散黄3为417nm；颜料红53、颜料红57、颜料橙5、苏丹红II和苏丹红IV为485 nm；罗丹明B为550 nm；酸性紫49为590 nm；溶剂蓝35为640 nm；如图1-5所示。
[0029] 表1：梯度洗脱条件
[0030]
[0031] 实施例1：
[0032] 一种红色指甲油，准确称取0.50 g样品于50 mL塑料离心管中，按照上述方法操作，结果检出颜料红57：963.6 mg/kg，颜料橙5：125.1 mg/kg，其余着色剂未检出。试样在485 nm下的色谱图见图2。
[0033] 实施例2：
[0034] 一种红色指甲油，准确称取0.50 g样品于50 mL塑料离心管中，按照上述方法操作，结果检出颜料红57：138.4 mg/kg，颜料红53：82.2 mg/kg，其余着色剂未检出。试样在485 nm下的色谱图见图3。
[0035] 上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。