一种黄蜀葵花药材的鉴别方法

摘要

本发明涉及一种黄蜀葵花药材的鉴别方法，是以芦丁、金丝桃苷、槲皮素为对照品或以芦丁、金丝桃苷为对照品，将供试品溶液和对照药品溶液点于同一聚酰胺薄膜上，以60～75%冰醋酸为展开剂，三氯化铝试液显色，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本发明提供的黄蜀葵花药材鉴别方法专属性强，药材及化学试剂使用量少，操作简便，重现性好，适用于所有来源的黄蜀葵花药材的鉴别以及含有黄蜀葵花药材的制成品中是否含有黄蜀葵花药材的鉴别。

权利要求

1.一种黄蜀葵花药材的鉴别方法，是以芦丁、金丝桃苷和槲皮素为对照品，采用薄层色谱法进行鉴别，具体方法包括：取黄蜀葵花药材粉末0.1～0.5g，加C1～4一元醇10ml，充分溶解后，滤过，取滤液作为供试品溶液；

分别取芦丁、金丝桃苷、槲皮素对照品，以C1～4一元醇制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg、槲皮素0.05～0.1mg的溶液，作为芦丁对照品溶液、金丝桃苷对照品溶液和槲皮素对照品溶液；或将芦丁、金丝桃苷和槲皮素对照品同时溶于C1～4一元醇中，制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg、槲皮素0.05～0.1mg的溶液，作为对照品溶液；

分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2～10μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以60～

75%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与各对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.一种黄蜀葵花药材的鉴别方法，是以芦丁、金丝桃苷为对照品，采用薄层色谱法进行鉴别，具体方法包括：取黄蜀葵花药材粉末0.1～0.5g，或相当于0.1～0.5g黄蜀葵花药材的含黄蜀葵花药材制成品粉末，加C1～4一元醇10ml，充分溶解后，滤过，取滤液作为供试品溶液；

分别取芦丁、金丝桃苷对照品，以C1～4一元醇制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg的溶液，作为芦丁对照品溶液、金丝桃苷对照品溶液；或将芦丁、金丝桃苷对照品同时溶于C1～4一元醇中，制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg的溶液，作为对照品溶液；

分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2～10μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以60～

75%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与各对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3.根据权利要求1或2所述的黄蜀葵花药材的鉴别方法，其特征是所述的充分溶解是将溶液置于超声波中处理20min。

4.根据权利要求1或2所述的黄蜀葵花药材的鉴别方法，其特征是所述展开剂为70%冰醋酸。

说明书

一种黄蜀葵花药材的鉴别方法

技术领域

[0001] 本发明涉及药材的定性、鉴别方法，特别是涉及黄蜀葵花药材的鉴别方法。

背景技术

[0002] 黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵的干燥花冠，在我国有悠久的药用历史，《嘉祐本草》、《本草纲目》上均有药用记载。性甘、寒，归肾、膀胱经，用于湿热壅遏，淋浊水肿；外治痈疽肿毒，水火烫伤。

[0003] 黄蜀葵花的主要成分包括金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素、杨梅素、芦丁等。其中金丝桃苷含量最高，有显著的局部镇痛作用，对心肌、脑缺血起保护作用，对肝胃粘膜起保护作用，并有解痉镇痛和降血脂、增强免疫功能等作用。槲皮素可作为药品，具有较好的祛痰、止咳和平喘作用，此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂等作用。芦丁具有抗炎、抗病毒及维持血管抵抗力、降低其通透性、减少血管脆性等作用。

[0004] 山东省中药材标准(2002年版)收载了黄蜀葵花药材，其鉴别项选用盐酸镁粉反应，鉴别其中的黄酮苷，以出现红色至紫红色反应为指标，操作相对简单，但专属性差，只要含有黄酮苷类成分的不同药材均可呈现正反应。

[0005] 中华人民共和国药典(2010年版)一部中新收载黄蜀葵花，改善了黄蜀葵花药材的鉴别方法。其操作过程为：“取本品粉末1g，加0.18%盐酸乙醇溶液20ml，置水浴上加热回流1小时，趁热滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸5：4：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视，在与对照品色谱相应的位置上，呈相同颜色的荧光斑点”。该方法是通过盐酸水解反应，将黄蜀葵花中有效成分金丝桃苷、槲皮素－3－葡萄糖苷、异槲皮苷等去掉取代基转换为槲皮素，然后以槲皮素对照品作为参比，鉴别药材真伪。其方法专属性相对较强，但是存在操作过程繁锁、使用化学试剂种类多、鉴别时间长等不足，不适合生产过程中快速检验的要求。

[0006] 另外，中药市场上掺杂掺假、以次充好的现象数不胜数。中药是用于治病的，如果治疗使用假药材或劣质药材，不但不能起到治疗效果，反而可能延误病情，甚至危害生命，故加强中药材和中成药质量管理成为越来越重要的工作。中药材的鉴别历来是难点，方法专属性直接决定鉴别方法的价值。采用单一对照品进行鉴别虽然具有一定的专属性，但是由于中药材成分复杂，很多中药材都含有同一有效成分，因此常常会出现误判现象。比如，药典中收录的含槲皮素的中药材就有瓦松、地锦草、垂盆草、杠板归、金钱草、侧柏叶、银杏叶、葶苈子、黄蜀葵花等，使用黄蜀葵花药材的鉴别方法对这些药材进行鉴别时，均会出现槲皮素特征点，造成假阳性结果。

发明内容

[0007] 本发明的目的是提供一种黄蜀葵花药材的鉴别方法，本发明提供的方法操作简便、专属性更强、重现性好，能够快速准确地对黄蜀葵花药材进行鉴别。

[0008] 本发明提供的黄蜀葵花药材的鉴别方法是以芦丁、金丝桃苷和槲皮素为对照品，采用薄层色谱法进行鉴别，具体方法包括：

[0009] 1)、供试品溶液制备

[0010] 取黄蜀葵花药材粉末0.1～0.5g，加C1～4一元醇10ml，充分溶解后，滤过，取滤液作为供试品溶液；

[0011] 2)、对照品溶液制备

[0012] 分别取芦丁、金丝桃苷、槲皮素对照品，以C1～4一元醇制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg、槲皮素0.05～0.1mg的溶液，作为芦丁对照品溶液、金丝桃苷对照品溶液和槲皮素对照品溶液；

[0013] 或者，

[0014] 将芦丁、金丝桃苷和槲皮素对照品同时溶于C1～4一元醇中，制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg、槲皮素0.05～0.1mg的溶液，作为对照品溶液；

[0015] 3)、薄层色谱法鉴别

[0016] 分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2～10μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以60～75%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与各对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0017] 本发明提供的黄蜀葵花药材的鉴别方法还可以是以芦丁和金丝桃苷为对照品，采用薄层色谱法进行鉴别，具体方法包括：

[0018] 1)、供试品溶液制备

[0019] 取黄蜀葵花药材粉末0.1～0.5g，或相当于0.1～0.5g黄蜀葵花药材的含黄蜀葵花药材制成品粉末，加C1～4一元醇10ml，充分溶解后，滤过，取滤液作为供试品溶液；

[0020] 2)、对照品溶液制备

[0021] 分别取芦丁、金丝桃苷对照品，以C1～4一元醇制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg的溶液，作为芦丁对照品溶液、金丝桃苷对照品溶液；

[0022] 或者，

[0023] 将芦丁、金丝桃苷对照品同时溶于C1～4一元醇中，制成每1ml含芦丁0.05～0.1mg、金丝桃苷0.1～0.3mg的溶液，作为对照品溶液；

[0024] 3)、薄层色谱法鉴别

[0025] 分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2～10μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以60～75%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与各对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0026] 本发明上述方法中，步骤1)中所述的充分溶解是采取各种常规的溶解手段，如搅拌、振荡、加热等，用C1～4一元醇将黄蜀葵花药材中的有效成分尽可能多地溶解出来。其中最简单有效的溶解方法是将溶液置于超声波中处理20min。

[0027] 本发明提供的上述黄蜀葵花药材的鉴别方法是一个典型的定性分析方法。在不同的实验环境和试验条件下，得到的实验结果可能会有略微的区别。在实际操作中，允许对上述鉴别方法中的实验条件进行适当的调整，以其获得最佳的试验结果，以方便鉴别。

[0028] 一般地，优选以70%冰醋酸为展开剂。可以根据实际情况，对展开剂的浓度进行适当调整。

[0029] 如果由于上述实验条件改变，或者受实验环境的影响，使得样品斑点显色不好，还可以对薄层板进行适当加热，以利于显色。

[0030] 本发明所述百分浓度均为体积百分浓度。

[0031] 本发明的黄蜀葵花鉴别方法不仅适用于所有来源的、单一的（包括干品、鲜品、不同产地）黄蜀葵花药材，同样也适用于以所有来源黄蜀葵花药材制备的人用药品、食品、保健品、化妆品、兽药等各种制成品（包括单方、复方制成品）中是否含有黄蜀葵花药材的鉴别。

[0032] 本发明所使用的芦丁、金丝桃苷、槲皮素标准品由中国药品生物制品检定所制备。以薄层色谱法鉴别黄蜀葵花依据中华人民共和国药典(2010年版)的相应规定进行。

[0033] 本发明鉴别方法成熟，经过不同实验条件鉴别以及对多批不同产地、不同来源的黄蜀葵花药材进行鉴别对比，均能准确鉴别药材，专属性强、重现性好。进而将本发明鉴别方法应用于含有黄蜀葵花的制成品如复方黄葵颗粒中黄蜀葵花的鉴别，阴性无干扰，专属性好，同样具有很好的鉴别效果。

[0034] 与现有药典中黄蜀葵花药材的鉴别方法比较，本发明的鉴别方法具有以下优点。

[0035] 1.专属性更强。本发明方法同时采用芦丁、金丝桃苷两种对照品或芦丁、金丝桃苷、槲皮素三种对照品作为参比物质，来鉴别黄蜀葵花药材及含黄蜀葵花药材制成品，能够更为全面地反映药材质量信息，更有效地避免假阳性结果，提高了鉴别专属性。能够在生产过程中更为全面、快速地检验判定产品质量，更好地控制黄蜀葵花药材及其制剂的临床安全性，保证产品质量稳定可靠。

[0036] 2.供试品溶液制备方法简便。直接加入C1～4一元醇的一种，采用超声或回流等方法提取即可得到，相对于药典方法需要配制盐酸乙醇溶液，以盐酸乙醇溶液加热回流以使水解反应完全简便了很多。

[0037] 3.鉴别时间缩短。整个操作过程在1小时内即可完成，而药典方法则至少需要2小时以上。

[0038] 4.药材、试剂使用量少。本发明鉴别方法仅需药材0.1～0.5g，整个检测仅需要C1～4一元醇、冰醋酸、三氯化铝少数几种试剂即可完成，而药典方法则需要至少1g药材，整个检测涉及盐酸、乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化铝多种试剂，且试剂使用量大，有机溶剂毒性大。

[0039] 5.方法灵敏度高。仅需极少量对照品即可以显色明显，灵敏度高。

附图说明

[0040] 图1为实施例1的薄层色谱展开效果图。

[0041] 图2为实施例2的薄层色谱展开效果图。

[0042] 图3为实施例3的薄层色谱展开效果图。

[0043] 图4为实施例4的薄层色谱展开效果图。

具体实施方式

[0044] 实施例1

[0045] 本实施例黄蜀葵花药材来源于安徽亳州。

[0046] 取黄蜀葵花药材粉末0.1g，加甲醇10ml，置超声波中处理20min充分溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；分别取芦丁、金丝桃苷、槲皮素对照品，加甲醇分别制成每1ml含芦丁0.05mg、金丝桃苷0.1mg、槲皮素0.05mg的溶液，作为对照品溶液。

[0047] 吸取上述四种溶液各10μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以60%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视。色谱图如图1，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，由此可判定所鉴别药材为黄蜀葵花。

[0048] 实施例2

[0049] 本实施例黄蜀葵花药材来源于江苏兴化。

[0050] 取黄蜀葵花药材粉末0.5g，加乙醇10ml，置超声波中处理20min充分溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；取芦丁、金丝桃苷和槲皮素对照品同时加入乙醇中，制成每1ml含芦丁0.05mg、金丝桃苷0.1mg、槲皮素0.05mg的溶液，作为对照品溶液；另取实施例1来源于安徽亳州的黄蜀葵花药材同法制成对照药材溶液。

[0051] 吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以75%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。色谱图如图2，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且与对照药材色谱图无明显区别，由此可判定所鉴别药材为黄蜀葵花。

[0052] 实施例3

[0053] 本实施例黄蜀葵花药材来源于河北刑台。

[0054] 取黄蜀葵花药材粉末0.5g，加正丁醇10ml，置超声波中处理20min充分溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；分别取芦丁、金丝桃苷对照品，分别加正丁醇制成每1ml含芦丁0.1mg、金丝桃苷0.3mg的溶液，作为对照品溶液。

[0055] 吸取上述三种溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以75%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。色谱图如图3，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，由此可判定所鉴别药材为黄蜀葵花。

[0056] 实施例4

[0057] 本实施例对复方黄葵颗粒中的黄蜀葵花药材进行鉴别，所用黄蜀葵花药材来源于江苏兴化。

[0058] 处方：黄蜀葵花1000g、败酱草500g、粉萆蔛240g、虎杖400g、刘寄奴350g、姜黄250g、 柴胡250g、酒大黄250g、白术250g、制何首乌200g。

[0059] 制法：黄蜀葵花、姜黄，乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏；败酱草、粉萆薢、虎杖、刘寄奴、柴胡、酒大黄、白术、制何首乌八味，加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，加乙醇冷沉24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩；合并上述二种浸膏，加乳糖100g、糊精400g，混匀，干燥，制成1000g，即得。

[0060] 取复方黄葵颗粒5g，加甲醇10ml，置超声波中处理20min充分溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；取芦丁、金丝桃苷对照品同时加入甲醇中，制成每1ml含芦丁0.1mg、金丝桃苷0.3mg的溶液，作为对照品溶液；另取除黄蜀葵花药材的复方黄葵颗粒阴性样品5g，加甲醇10mL，置超声波中处理20min充分溶解，滤过，取滤液作为阴性对照溶液。

[0061] 吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以70%冰醋酸为展开剂，展距6cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。色谱图如图4，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照样品无相应斑点，由此可判定所鉴别药物制成品中含有黄蜀葵花药材。