枸杞多糖在制备用于治疗糖尿病药物中的应用转让专利
申请号 : CN201310538746.3
文献号 : CN103520199B
文献日 : 2015-03-18
发明人 : 赵蕊 , 郑小亮 , 黄玉兰 , 邵星月
申请人 : 黑龙江八一农垦大学
摘要 :
一种枸杞多糖在治疗糖尿病药物中的应用，治疗糖尿病药物为干燥枸杞提炼的枸杞多糖。时间生物学研究表明,人体胰岛素和血糖浓度的变化存在着近日节律,24h血糖监测发现,凌晨3时血糖最低,午后1时或2时血糖最高,并提出葡萄糖耐糖试验也呈昼夜节律性。机体对胰岛素及降糖药物的敏感性,无论对健康人或糖尿病人都有昼夜节律性。机体于早上5-9时对胰岛素最敏感。通过试验研究证明，上午9:00用药能更有效降低老龄糖尿病大鼠的血糖，改善胰岛素抵抗大鼠高胰岛素血症，无毒副作用，使用方便，价格低廉，有广泛的开发前景。
权利要求 :
1.一种枸杞多糖在制备用于治疗糖尿病药物中的应用，其特征在于：所述枸杞多糖是干燥枸杞经以下方法提炼得到的：（1）将干燥枸杞置于索氏提取器，按1：3的比例加入乙醚溶液,在75℃下抽提6 h，以除去脂肪、部分单糖和脂溶性色素；
（2）将步骤（1）中的残渣加30倍体积蒸馏水，在温度75℃，功率200 W条件下，应用微波-超声协同萃取仪提取25min，2次，合并滤液并减压蒸馏浓缩；
（3）将步骤（2）中浓缩液中加入5倍体积的95%的乙醇，于冰箱冷藏静置12 h后，3000 rpm离心10 min，沉淀物先后用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，称重，得枸杞多糖；
（4）枸杞多糖水溶液用氨水调pH8.0，45℃下滴加20% H2O2至溶液为淡黄色，保温1 h，透析；
（5）脱色后的枸杞多糖加入0.2倍体积的Sevage试剂，混合物剧烈震荡20～30 min，静置2 h，清除上清液，除去中间变性蛋白和下层有机溶剂；所述Sevage试剂是氯仿:正丁醇=5:1的混合物；
（6）采用先制粒，然后再灌制胶囊的方法，取枸杞多糖适量，过40目筛，喷入乙醇并搅拌混合均匀，过 20 目筛制粒，鼓风干燥箱中干燥，再过 20 目筛制粒。
说明书 :
枸杞多糖在制备用于治疗糖尿病药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及药物学技术领域，尤其是指一种枸杞多糖在治疗糖尿病药物中的应用。
背景技术
[0002] 糖尿病是一种多病因的代谢疾病，其特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌和或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。目前糖尿病严重泛滥，2003年，全世界有1.94亿人患有糖尿病，年龄从20岁至79岁不等，到2025年这一数字可能会增长72%而达到
3. 33亿，且大约80%的病例将分布在贫困的工业发展中国家。随着我国人口老龄化的进展加速，糖尿病的患病率将会进一步增加。因此说糖尿病已是老年人的多发病、常见病，同时糖尿病及其并发症已成为继癌症、心血管及脑血管疾病之后的主要死亡原因，已是老年人的主要健康问题，必须引起高度重视。中医理论认为,糖尿病从病变脏腑而言属于脾病范畴,脾气亏虚是糖尿病及其并发症发生发展的基本病机之一。健脾益气药是中医临床治疗糖尿病及其并发症的基本药物,目前有关这类中药的抗糖尿病作用及其机制的研究较多，但是从时间生物学角度进行的研究开展较少。时间生物学观点认为,糖尿病相关的病理生理变化中存在着周期节律性,从某种意义上说,抗糖尿病治疗就是对糖尿病相关节律紊乱的调整。现代医学已经阐明高血糖是由于胰岛素分泌或作用的缺陷,或者两者同时存在而引起。
3. 33亿，且大约80%的病例将分布在贫困的工业发展中国家。随着我国人口老龄化的进展加速，糖尿病的患病率将会进一步增加。因此说糖尿病已是老年人的多发病、常见病，同时糖尿病及其并发症已成为继癌症、心血管及脑血管疾病之后的主要死亡原因，已是老年人的主要健康问题，必须引起高度重视。中医理论认为,糖尿病从病变脏腑而言属于脾病范畴,脾气亏虚是糖尿病及其并发症发生发展的基本病机之一。健脾益气药是中医临床治疗糖尿病及其并发症的基本药物,目前有关这类中药的抗糖尿病作用及其机制的研究较多，但是从时间生物学角度进行的研究开展较少。时间生物学观点认为,糖尿病相关的病理生理变化中存在着周期节律性,从某种意义上说,抗糖尿病治疗就是对糖尿病相关节律紊乱的调整。现代医学已经阐明高血糖是由于胰岛素分泌或作用的缺陷,或者两者同时存在而引起。
发明内容
[0003] 本发明提供一种枸杞多糖在治疗糖尿病药物中的应用，本发明的目的在于提供一种在上午9:00用药能更有效降低老龄糖尿病大鼠的血糖，改善胰岛素抵抗大鼠高胰岛素血症，无毒副作用，使用方便，价格低廉，有广泛的开发前景的治疗糖尿病的药物。
[0004] 本发明的目的是以如下方式实现的：一种枸杞多糖在治疗糖尿病药物中的应用，治疗糖尿病药物为干燥枸杞提炼的枸杞多糖。
[0005] 枸杞多糖在治疗糖尿病药物中的应用包括如下步骤：
[0006] 1、将干燥枸杞置于索氏提取器，按1：3的比例加入乙醚溶液,在75℃下抽提6 h，以除去脂肪、部分单糖和脂溶性色素；
[0007] 2、将步骤1中的残渣加30倍体积蒸馏水，在温度75℃，功率200 W条件下，应用微波-超声协同萃取仪提取25min，2次，合并滤液并减压蒸馏浓缩；
[0008] 3、将步骤2中浓缩液中加入5倍体积的95%的乙醇，于冰箱冷藏静置12 h后，3000 rpm离心10 min，沉淀物先后用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，称重，得枸杞多糖；
[0009] 4、枸杞多糖水溶液用氨水调pH8.0，45℃下滴加20% H2O2至溶液为淡黄色，保温1 h，透析；
[0010] 5、脱色后的枸杞多糖加入0.2倍体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=5:1），混合物剧烈震荡20～30 min，静置2 h，清除上清液，除去中间变性蛋白和下层有机溶剂；
[0011] 6、采用先制粒，然后再灌制胶囊的方法，取枸杞多糖适量，过40目筛，喷入乙醇并搅拌混合均匀，过 20 目筛制粒。鼓风干燥箱中干燥，再过 20 目筛制粒。
[0012] 本发明的有益效果是：时间生物学研究表明,人体胰岛素和血糖浓度的变化存在着近日节律,24 h血糖监测发现,凌晨3时血糖最低,午后1时或2时血糖最高,并提出葡萄糖耐糖试验也呈昼夜节律性。机体对胰岛素及降糖药物的敏感性,无论对健康人或糖尿病人都有昼夜节律性。机体于早上5-9时对胰岛素最敏感。通过试验研究证明，上午9:00用药能更有效降低老龄糖尿病大鼠的血糖，改善胰岛素抵抗大鼠高胰岛素血症，无毒副作用，使用方便，价格低廉，有广泛的开发前景。
[0013] 附图说明：
[0014] 图1为正常老龄大鼠昼夜血糖浓度的波动节律性变化图。
[0015] 具体实施方式：
[0016] 以下实施例得到的枸杞多糖在治疗糖尿病药物中的应用，其特征在于：治疗糖尿病药物为干燥枸杞提炼的枸杞多糖。
[0017] 枸杞多糖在治疗糖尿病药物中的应用包括如下步骤：
[0018] 1、将干燥枸杞置于索氏提取器，按1：3的比例加入乙醚溶液,在75℃下抽提6 h，以除去脂肪、部分单糖和脂溶性色素；
[0019] 2、将步骤1中的残渣加30倍体积蒸馏水，在温度75℃，功率200 W条件下，应用微波-超声协同萃取仪提取25min，2次，合并滤液并减压蒸馏浓缩；
[0020] 3、将步骤2中浓缩液中加入5倍体积的95%的乙醇，于冰箱冷藏静置12 h后，3000 rpm离心10 min，沉淀物先后用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，称重，得枸杞多糖；
[0021] 4、枸杞多糖水溶液用氨水调pH8.0，45℃下滴加20% H2O2至溶液为淡黄色，保温1 h，透析；
[0022] 5、脱色后的枸杞多糖加入0.2倍体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=5:1），混合物剧烈震荡20～30 min，静置2 h，清除上清液，除去中间变性蛋白和下层有机溶剂；
[0023] 6、采用先制粒，然后再灌制胶囊的方法，取枸杞多糖适量，过40目筛，喷入乙醇并搅拌混合均匀，过 20 目筛制粒。鼓风干燥箱中干燥，再过 20 目筛制粒。
[0024] 通过本实验对证明枸杞多糖在治疗糖尿病对正常小鼠空腹血糖的影响。
[0025] 1、模型的建立
[0026] 将Wistar 大鼠腹腔注射D-半乳糖（50mg/kg/d），连续60 d建立老龄鼠模型，老龄鼠随机分为正常对照组、糖尿病造模组。正常对照组, 喂以普通饲料, 糖尿病造模组给予高糖高热量饮食( 10%蔗糖, 10%猪油, 1%胆固醇) , 4 周后, 用0. 25%链脲佐菌素( 溶于0. 1mol/ L、pH4. 2柠檬酸缓冲液, 现用现配) 以50mg/ kg 剂量一次性腹腔注射1.5mL, 其后自由采食普通饲料, 饮自来水, 72h后测空腹血糖。
[0027] 2、血糖和血清胰岛素测定
[0028] 禁食12 h后，用血糖仪检测血糖，利用酶联免疫法检测胰岛素。
[0029] 3、小鼠急性毒性试验
[0030] 经预试验得知枸杞多糖胶囊无法测出小鼠口服的LD50，故改作一日内最大耐受量试验。取小鼠20只，19-21 g，雌雄各半。试验前禁食(不禁水)12 h，进行小鼠急性经口毒理试验，采用最大浓度最大体积(40 mL/kg)一次性灌胃小鼠，连续观察7 d，记录受试小鼠的行为、活动、摄食量、体重、粪便和死亡等情况，未死亡的小鼠于1 w后处死进行尸检。
[0031] 5、结果
[0032] 枸杞多糖的含量为15.21%，胶囊制备的优化条件为乙醇润湿剂的浓度为95%，用量比是1：1.2；颗粒干燥温度是70℃；临界相对湿度为72%。枸杞胶囊的制备工艺简单、质量稳定，促进枸杞资源的利用。
[0033] 20只小鼠给药当天毛色光滑，活动、饮食、粪便色泽与质地均正常，观察枸杞多糖胶囊 24 h灌胃后产生的急性毒性和死亡情况。给小鼠灌胃，使药物达到最大浓度(溶液已经非常浓，很难再对其进行浓缩)，1 w内无死亡及其它异常现象发生。处死后进行尸检，各主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)经肉眼观察未见明显异常改变。说明枸杞多糖胶囊实际无毒较安全。
[0034] 通过我们择时（上午9时和下午9时）对老龄糖尿病大鼠进行枸杞多糖胶囊干预，达到即降低血糖又把异常的节律调整到正常范围，可达到提高枸杞多糖胶囊的疗效作用。试验测定各组大鼠昼夜6个时间点的血糖值,描绘各组昼夜血糖-时间曲线图,对各组血糖值的生物时间序列进行宏观分析并进行比较。结果表明，正常老龄大鼠昼夜血糖浓度的波动呈明显的峰值与谷值交替,表现出血糖呈昼夜节律性变化（见图1）。在所检测的24 h之内,出现2次峰值(分别为10:00和22:00)和2次谷值(分别为6:00和18:00),且昼夜血糖浓度均低于10.0 mmol/L。老龄糖尿病大鼠血糖水平的昼夜节律与正常老龄大鼠相比,其峰值与谷值时间发生移位,出现明显的节律紊乱,其血糖浓度也有2次峰值时间(分别为10:00和18:00),2次谷值时间(分别为14:00和2:00),且其血糖浓度明显高于
10.0 mmol/L,但是,老龄糖尿病大鼠的血糖峰值浓度与谷值浓度相比无显著性差异。模型鼠分两组，上午9时和下午9时给药4w后，上午9时给药组各时间点血糖值与给药前比明显降低，且一昼夜出现的血糖峰值和谷值时间与正常糖尿病鼠趋于一致（见表1）。老年肥胖型糖尿病多伴有胰岛素抵抗症状，试验结果也表明，枸杞多糖胶囊给药4w后，胰岛素抵抗大鼠血浆胰岛素水平降低，且上午9时给药组降胰岛素水平明显优于下午9时给药组（见表
2）。
10.0 mmol/L,但是,老龄糖尿病大鼠的血糖峰值浓度与谷值浓度相比无显著性差异。模型鼠分两组，上午9时和下午9时给药4w后，上午9时给药组各时间点血糖值与给药前比明显降低，且一昼夜出现的血糖峰值和谷值时间与正常糖尿病鼠趋于一致（见表1）。老年肥胖型糖尿病多伴有胰岛素抵抗症状，试验结果也表明，枸杞多糖胶囊给药4w后，胰岛素抵抗大鼠血浆胰岛素水平降低，且上午9时给药组降胰岛素水平明显优于下午9时给药组（见表
2）。
[0035] 表1 各组大鼠不同时间点血糖变化比较（mmol/L, ±S.D.,n=10）[0036]
[0037] 注：与正常组同时间点比较，*P<0.01；与本组给药前1d比较，△P<0.05[0038] 如表1所示,每组大鼠10只。老龄糖尿病大鼠在每天9am和9pm时间给予枸杞多糖胶囊 4w后, 血糖水平有所下降，但各时间点血糖浓度仍然维持在较高的水平，血糖值明显高于正常组(P<0.01)。上午9时给药组在给药4w后在6pm、2am、6am 3个时间点与给药前相比血糖浓度明显下降(P<0.05)；其昼夜血糖节律明显恢复，即血糖峰值时间和谷值时间分别与正常组大体上一致(峰值时间出现在10am和10pm,谷值时间出现在6am和6pm)。下午9时组给予枸杞多糖后，血糖浓度也有所降低，但是糖尿病大鼠的昼夜血糖节律仍然处于紊乱状态。糖尿病组给予等量生理盐水4w后，各时间点血糖值明显高于正常组(P<0.01)，血糖浓度维持在高水平，而且各时间点血糖值并不随给药时间而变化(P>0.05)。
[0039] 表2 枸杞多糖择时给药治疗前后各指标变化（ ±S.D.,n=10）
[0040]
[0041] 注：与本组治疗前比较，*P＜0.05，与9pm组治疗后比较，△P＜0.05。