治疗腹泻的药物组合物及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及治疗腹泻的药物组合物及其制备方法和用途。具体而言，本发明涉及一种治疗腹泻的药物组合物，其由香薷挥发油、忍冬叶乙醇-水提取物、金樱根水提取物和茯苓水提取物组成，以生药重量份计，香薷为5-167份、忍冬叶为2.5-80份、金樱根为4.2-80份和茯苓为2.5-100份。该药物组合物可用于治疗哺乳动物腹泻，无明显的毒副作用。本发明还涉及该药物组合物的制备方法，以及一种治疗腹泻的药物制剂，其包括治疗有效量的本发明的药物组合物作为活性成分以及一种或多种药学上可接受的载体。

权利要求

1.治疗腹泻的药物组合物，其由香薷挥发油、忍冬叶乙醇-水提取物、金樱根水提取物和茯苓水提取物组成，以生药重量份计，香薷为5-167份、忍冬叶为2.5-80份、金樱根为

4.2-80份和茯苓为2.5-100份。

2.根据权利要求1所述的治疗腹泻的药物组合物，其中以生药重量份计，香薷为167份、忍冬叶为80份、金樱根为80份和茯苓为100份。

3.根据权利要求1所述的治疗腹泻的药物组合物，其中以生药重量份计，香薷为5份、忍冬叶为2.5份、金樱根为4.2份和茯苓为2.5份。

4.根据权利要求1所述的治疗腹泻的药物组合物，其中以生药重量份计，香薷为81份、忍冬叶为39份、金樱根为38份和茯苓为49份。

5.根据权利要求1-4任一项所述的治疗腹泻的药物组合物，其中所述提取物经以下方法制得：用水蒸汽蒸馏法提取香薷，得香薷挥发油；

用3-40倍量的乙醇-水混合溶液浸泡忍冬叶，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得忍冬叶乙醇-水提取物；

用2-30倍量水浸泡金樱根，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得金樱根水提取物；

用2-30倍量水浸泡茯苓，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得茯苓水提取物。

6.一种制备根据权利要求1所述的药物组合物的方法，其包括以下步骤：分别称量5-167重量份香薷、2.5-80重量份忍冬叶、4.2-80重量份金樱根和2.5-100重量份茯苓；

用水蒸汽蒸馏法提取香薷，得香薷挥发油；

用3-40倍量的乙醇-水混合溶液浸泡忍冬叶，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得忍冬叶乙醇-水提取物；

将金樱根粉碎，用2-30倍量水浸泡，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得金樱根水提取物；

将茯苓粉碎，用2-30倍量水浸泡，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得茯苓水提取物，以及将上述4种提取物充分混合制得所述药物组合物。

7.治疗腹泻的药物制剂，其包括治疗有效量的根据权利要求1-4任一项所述的药物组合物作为活性成分以及一种或多种药学上可接受的载体。

8.根据权利要求7所述的治疗腹泻的药物制剂，其中所述载体选自稀释剂、润滑剂、缓冲剂、崩解剂、矫味剂、表面活性剂和粘合剂。

9.根据权利要求7或8所述的治疗腹泻的药物制剂，其中所述药物制剂是以片剂、注射剂、胶囊剂、气雾剂、丸剂、粉剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂或栓剂的形式施用。

10.根据权利要求1-4任一项所述的药物组合物在制备治疗哺乳动物腹泻的药物中的用途。

11.根据权利要求10所述的药物组合物在制备治疗哺乳动物腹泻的药物中的用途，所述腹泻为急性腹泻和慢性腹泻。

说明书

治疗腹泻的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

[0001] 本发明涉及治疗腹泻的药物组合物（其由香薷挥发油、忍冬叶乙醇-水提取物、金樱根水提取物和茯苓水提取物组成）以及该药物组合物的制备方法，和治疗哺乳动物腹泻的用途。本发明还涉及治疗腹泻的药物制剂，其包括治疗有效量的本发明的药物组合物作为活性成分以及一种或多种药学上可接受的载体。

背景技术

[0002] 腹泻（diarrhea）是一种常见症状，是指排便次数明显超过平日习惯的频率，粪质稀薄，水分增加，每日排便量超过200g，或含未消化食物或脓血、粘液。腹泻常伴有排便急迫感、肛门不适、失禁等症状。腹泻分急性和慢性两类。急性腹泻发病急剧，病程在2～3周之内。慢性腹泻指病程在两个月以上或间歇期在2～4周内的复发性腹泻。

[0003] 目前，治疗哺乳动物腹泻一般采用抗生素、抗病毒药物、吸附剂或抑制肠蠕动的药物治疗，同时采用补液疗法辅助，以防脱水。

[0004] 对于腹泻，并没有特效的抗病毒药物可用；而滥用抗生素的结果，不仅胃肠道反应加重腹泻症状，同时干扰肠道正常菌群，引起肠道菌群失调；吸附剂或抑制肠蠕动的药物虽然可以减轻症状，对于非传染性腹泻有较好的效果，但对于传染性腹泻，治标不治本，反而使大量复制的病毒不能随大便排出体外，有闭门留寇之虑，使发热久治不愈。

[0005] 中草药是祖国医学的瑰宝，我国人民有悠久的使用中草药的历史。通常，中草药具有安全性高、毒副作用小、不易产生抗药性等优点。

[0006] 腹泻是肠道的常发疾病，长期的临床实践证明中药无论是复方还是单味药，在治疗腹泻中有其独特的、不可替代的优势。中医认为腹泻的病因，在外因方面与湿盛的关系最为明显，多因湿邪侵入脾胃所致；在内因方面与脾虚关系较为密切；因此中药治疗腹泻多以健脾化湿为主。中药治疗腹泻的作用机制主要包括：抗炎、抗病毒、抑制肠道运动及其通透性、促进肠道的消化功能、改善机体的免疫功能、调节菌群和维持肠道菌的平衡。单一的中药成分或有效部位，多以恢复消化系统功能为主。如苍术、小檗碱，通过消除肠道的炎症，阻碍炎症介质作用而产生抗腹泻作用。而中药复方，多以双向调节而达到止泻目的，如葛根芩连汤中，炙甘草具有提高机体免疫力作用，而黄连中的小檗碱能杀死肠道的致病菌，炙甘草与黄芩黄连配伍能增强黄连的作用。常用于治疗腹泻的中成药有：参苓白术丸、人参健脾丸、六君子丸、附子理中丸、补脾益肠丸、四神丸、藿香正气丸等。常用于治疗腹泻的单味中药材包括：苍术、厚朴、防风、党参、茯苓、白术、山楂、甘草、补骨脂等。

[0007] 专利申请CN201210134158.9、CN201210139936.3、CN201010115348.7等报道了中药复方治疗腹泻的应用，但是这些中药复方过于复杂，基本上含有5种以上，甚至10种以上的中药材，原料成本高、制备工艺复杂，不适合工业化大生产。

[0008] 发明人选用我国资源丰富的香薷、忍冬叶、金樱根、茯苓4种药材为研究对象：

[0009] 香薷

[0010] 为唇形科植物香薷Mosla chinensis Maxim.的干燥地上部分，始载于《名医别录》，列为中品，为常用中药。性辛，微温，有发汗解表、和中利湿之功效；用于暑湿感冒、恶寒发热、无汗、腹痛、吐泻等症。分布于辽宁、河北、山东等地。资源极其丰富。现代研究表明，香薷主要含有挥发油类成分，全草含挥发油0.2%～1%，鲜茎叶含挥发油0.26%～0.59%，干茎叶含0.8%～2%，香薷挥发油具有广谱抗菌和杀菌作用，并有直接抑制流感病毒的作用。香薷煎剂（1:20）在体外对亚洲甲型流感病毒、京科68-1病毒株和孤儿病毒（ECHO11）也有显著抑制作用。香薷挥发油对机体非特异性和特异性免疫功能均有显著增强作用；对小鼠、大鼠、豚鼠和兔的离体回肠自发性收缩均有显著抑制作用，对蛋清所致豚鼠回肠过敏性收缩和氯化钡所致豚鼠回肠痉挛性收缩亦有显著抑制作用。

[0011] 忍冬叶

[0012] 忍冬叶为忍冬科植物忍冬Lonicerae japonica Thunb.的干燥叶。始载于梁·陶弘景集《名医别录》中，列为上品，曰：“……似藤生，凌冬不凋”，“十二月采，阴干”。忍冬叶与金银花在临床上均具有清热解毒之功效，是生产金银花的副产品，随着金银花生产整形修剪技术的推广，每年可以得到大量的枝叶。忍冬叶产量是金银花的10倍左右，长期以来却被视为非药用部位而被弃之，造成了极大浪费。

[0013] 用鲜忍冬叶治疗急性腹泻，效果显著；忍冬叶水煎剂保留灌肠治疗急性胃炎，患者均于24小时获得痊愈。民间还用忍冬茎叶治疗感冒发热、中暑、疮疖、肌肉或关节酸痛。

[0014] 忍冬叶中含有丰富的有机酸、黄酮类等成分，具有良好的抗菌和抗病毒作用。将忍冬叶或忍冬叶乙醇-水提取物与辅料混合后作为饲料添加剂，可有效降低鸡仔及成年鸡的发病率及死亡率，对鸡、鸭等家禽有防病治病之功效。

[0015] 有机酸、黄酮、环烯醚萜类成分为忍冬叶的主要化学成分。有机酸中主要含有绿原酸、异绿原酸和咖啡酸等成分。黄酮类化合物主要含木犀草素、木犀草苷和忍冬素等。忍冬叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等多种革兰阳性菌及革兰阴性菌均具有一定的抑制作用。绿原酸和粗黄酮对大肠杆菌均有较强的抑制作用，后者活性是前者的2倍，粗黄酮对金黄色葡萄球菌的抑菌效果是绿原酸粗品的4倍。研究还发现，木犀草素对猪传染性胃肠炎病毒具有抑制作用。木犀草素、忍冬苷和马钱苷均具有抗炎作用，而以木犀草素最为显著。

[0016] 金樱根

[0017] 别名金樱蔃、脱骨丹等，为蔷薇科植物金樱子Rosa laevigata Michx.的根或根皮。金樱根分布长江以南各省，资源极其丰富。《本草纲目》记载金樱根“止滑痢，煎醋服化骨哽。寸白虫，锉二两，入糯米三十粒，水二升，煎五合，空心服，须臾泻下，神验”。《湖南药物志》治泄泻：金樱根一两。水煎服。金樱根性味酸涩平，有固精涩肠作用，临床报道其可治疗细菌性痢疾、小儿脱肛等。金樱根煎剂对金黄色葡萄球菌大肠杆菌有很强的抑制作用，对绿脓杆菌也有效。用金樱根多糖持续6d治疗后，小鼠肠道主要的菌群的数量基本恢复，其中肠杆菌和双歧杆菌与自然恢复组对比有显著差异（P<0.05）。金樱根、金樱茎多糖对正常小鼠肠道菌群失调有一定调整作用。

[0018] 茯苓

[0019] 茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，性味甘、淡，平；归心、脾、肺、肾经，具利水渗湿、健脾、宁心之功效，主要用于水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安、惊悸失眠等症。产于云南、安徽、湖北、河南、四川等地。研究表明，茯苓中含有多糖类、萜类、甾体类、蛋白质等多种化合物，其中，多糖类化合物在该药材中含量甚高，具有抗炎、抗氧化损伤和免疫调节等多个方面的生物活性，一直备受各国研究者的重视。

[0020] 具体而言，发明人用水、醇及其混合溶剂提取香薷、忍冬叶、金樱根、茯苓，获得香薷挥发油、金樱根水提取物、忍冬叶乙醇-水提取物、茯苓水提取4种提取物。经过深入研究，令人惊奇地发现以上4部位按照一定比例混合后具有明显的止泻、抗炎作用，且组方效果优于其中的单一提取物，作用较持久，无明显的毒副反应和药物耐受性。

发明内容

[0021] 本发明所要解决的技术问题是提供一种治疗腹泻的药物组合物，其由香薷挥发油、忍冬叶乙醇-水提取物、金樱根水提取物和茯苓水提取物组成，以生药重量份计，香薷为5-167份、忍冬叶为2.5-80份、金樱根为4.2-80份和茯苓为2.5-100份。优选地，以生药重量份计，香薷为167份、忍冬叶为80份、金樱根为80份和茯苓为100份；或者，以生药重量份计，香薷为5份、忍冬叶为2.5份、金樱根为4.2份和茯苓为2.5份。更优选地，以生药重量份计，香薷为81份、忍冬叶为39份、金樱根为38份和茯苓为49份。

[0022] 在一个实施方案中，所述提取物经以下方法制得：

[0023] 用水蒸汽蒸馏法提取香薷，得香薷挥发油；

[0024] 用3-40倍量的乙醇-水混合溶液浸泡忍冬叶，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得忍冬叶乙醇-水提取物；

[0025] 用2-30倍量水浸泡金樱根，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得金樱根水提取物；以及

[0026] 用2-30倍量水浸泡茯苓，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得茯苓水提取物。

[0027] 另一方面，本发明还提供一种制备本发明药物组合物的方法，其包括以下步骤：

[0028] 分别称量5和167重量份香薷、2.5和80重量份忍冬叶、4.2和80重量份金樱根、以及2.5和100重量份茯苓；

[0029] 用水蒸汽蒸馏法提取香薷，得香薷挥发油；

[0030] 用3-40倍量（优选20-40倍量，更优选30倍量）的乙醇-水混合溶液（优选40-60%乙醇，更优选50%乙醇）浸泡忍冬叶，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得忍冬叶乙醇-水提取物；

[0031] 将金樱根粉碎，用2-30倍量（优选10-25倍量，更优选20倍量）水浸泡，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得金樱根水提取物；

[0032] 将茯苓粉碎，用2-30倍量（优选10-25倍量，更优选20倍量）水浸泡，加热回流0.5-3小时，过滤，浓缩得茯苓水提取物。

[0033] 将上述4种提取物充分混合制得所述药物组合物。

[0034] 此外，本发明还提供一种治疗腹泻的药物制剂，其包括治疗有效量的本发明的药物组合物作为活性成分以及一种或多种药学上可接受的载体。所述载体选自稀释剂、润滑剂、缓冲剂、崩解剂、矫味剂、表面活性剂和粘合剂。

[0035] 在一个实施方案中，所述药物制剂是以片剂、注射剂、胶囊剂、气雾剂、丸剂、粉剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂的形式施用。

[0036] 进一步，本发明还涉及所述药物组合物在制备治疗哺乳动物腹泻的药物中的用途。所述哺乳动物包括人类、狗、猫、猪、鼠、羊、马、牛、鸡等等。所述腹泻优选为急性腹泻和慢性腹泻。

[0037] 文中所用术语“治疗有效量”是指根据本发明的试剂的以下量，其需要治疗、改善或预防目标疾病的病状，或者需要显示出可测量的治疗或预防效果。

[0038] 本发明的药物组合物的有效剂量可以通过传统方法来确定。任何特定患者所需的具体的剂量水平取决于大量的因素，包括要治疗病状的严重性、患者一般健康状况（即年龄、体重和饮食）、患者的性别、施用时间和频率以及治疗的耐受和反应。但是一般来说，日剂量（无论单剂量或分剂量施用）在每日1至50g范围内，按照每单位体重施用典型剂量在0.1g/kg和5g/kg之间。

[0039] 本发明的药物组合物可以非肠道、透皮、肌肉内、静脉内、皮内、鼻内、皮下、腹腔内、心室内或直肠内施用。

[0040] 本发明药物组合物可以制成普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

[0041] 为了将制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。其它载体如聚丙烯酸树脂类、脂质体，水溶性载体如PEG4000和PEG6000、PVP等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

[0042] 为了制成胶囊，可以将有效成分本发明药物组合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。

[0043] 例如，将本发明组合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和／或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

[0044] 此外，如需要，也可以向组合物中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。对于局部施用，可以将本发明的化合物制备成软膏和霜剂的形式。

[0045] 在不背离本发明的精神或范围下，可以对本发明的药物组合物、用途和制剂进行各种修饰和改变，这对于本领域技术人员而言是显而易见的。

具体实施方式

[0046] 下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应当理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不能限制本发明的保护范围。

[0047] 若非特别说明，以下采用的药材均满足《中华人民共和国药典》2010年版第1部的规定，各种试剂、药用辅料均为市售品，符合相关的国家标准。

[0048] 实验材料：

[0049] 香薷：生产批号：20100910；生产日期：2011.3.1；生产企业：北京三和药业有限公司

[0050] 金樱根：生产批号：1101096；生产日期：2011.1.15；生产企业：中山市同心药业有限公司中药饮片分公司

[0051] 茯苓：生产批号：1212066；生产日期：2012.12.06；安国市冷背药材有限公司[0052] 忍冬叶：生产批号：12041806；生产日期：2012.04.18；广西玉林祥发药材购销部[0053] 实验动物：

[0054] 品种：小鼠

[0055] 品系：昆明

[0056] 级别：SPF级（Specefic Pathogen Free，无特定病原体）

[0057] 来源：购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号为SCXK（京）2012-0001。

[0058] 性别：雄性

[0059] 体重：22-24g

[0060] 动物房：试验期间动物饲养于中国中医科学院医学实验动物中心动物房，实验设施许可证SYXK（京）2008－0023。设施管理遵循中华人民共和国国家标准GB14925-2001《实验动物环境及设施》。

[0061] 喂养条件：采用人工光照12小时明暗周期，环境温度维持在20-24℃，湿度在40%-70%，每小时换气15次。动物饲养于聚碳酸酯小鼠饲养笼，每笼饲养同剂量组的5只同性别小鼠。每2天更换一次清洁动物笼和垫料。

[0062] 饲料及其提供单位：使用标准小鼠颗粒饲料，由北京市科澳协力饲料有限公司提供，产品许可证号：SCXK（京）2009-0012，登记证号：京饲（配）字第238号。

[0063] 饮用水：纯净水，动物可自由摄取，每日更换新的水瓶和新鲜水。

[0064] 提取工艺：

[0065] 香薷挥发油的制备：香薷5000g，水蒸汽蒸馏提取挥发油约35mL。下文称为受试物B。

[0066] 忍冬叶乙醇-水提取物的制备：忍冬叶300g，9000mL50%乙醇回流提取1小时，过滤，回收乙醇得浸膏60g。

[0067] 金樱根水提取物的制备：金樱根1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮0.5小时，过滤，合并滤液，浓缩成浸膏500g。下文称为受试物C。

[0068] 茯苓水提取物的制备：茯苓1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮0.5小时，过滤，合并滤液，浓缩成浸膏23g。

[0069] 番泻叶提取物的制备：番泻叶340g，50%乙醇冷浸12小时，过滤，滤液回收至无醇味，得浓缩液1000mL。

[0070] 实施例1

[0071] 取1.17mL香薷挥发油，忍冬叶乙醇-水提取物16g，金樱根水提取物40g，茯苓水提取物2.3g，将上述4种提取物充分研磨乳化制成100mL混悬液备用，下文称为受试物A1。

[0072] 实施例2

[0073] 取0.035mL香薷挥发油，忍冬叶乙醇-水提取物0.5g，金樱根水提取物2.1g，茯苓水提取物0.058g，将上述4种提取物充分研磨乳化制成100mL混悬液备用,下文称为受试物A2。

[0074] 实施例3

[0075] 取0.567mL香薷挥发油，忍冬叶乙醇-水提取物7.8g，金樱根水提取物19g，茯苓水提取物1.13g，将上述4种提取物充分研磨乳化制成100mL混悬液备用,下文称为受试物A3。

[0076] 实施例4本发明的药物组合物对番泻叶致小鼠急性腹泻治疗作用的研究[0077] 昆明小鼠，雄性，94只。按体重随机分为：1）正常对照（10只），2）模型组（12只），3）阳性药组（盐酸小檗碱，12只），4）受试物A1、A2、A3（各12只），5）受试物B（12只），6）受试物C（12只），共8组。实验前动物禁食不禁水16小时，除正常对照组外，模型组和各给药组均灌胃0.3g生药/mL的番泻叶煎剂，20mL/kg。给药后即刻将小鼠置于单笼内观察，笼下铺洁净滤纸作排便情况记录。在滤纸上留有污迹的粪便为稀便，没有污迹的为干便，排稀便的小鼠视为发生腹泻。造模1小时后，各药物组给予相应药液，20mL/kg，正常对照组和模型组给予等体积蒸馏水。各组动物于造模后观察4小时，为给药后3小时。分别记录以下数据以计算腹泻指数：1）稀便数：动物排稀便的个数。2）干便数：动物排干便的个数。
3）稀便级：表示稀便的程度，以稀便污染滤纸形成污迹面积的大小定级。分为4级：1级（污染直径<1cm），2级（污染直径为1-1.9cm），3级（污染直径为2-3cm），4级（污染直径>3cm）。
上述试验方法可参见徐叔云，卞如濂，陈修主编.镇痛药物实验法.药理实验方法学(第三版）.北京：人民卫生出版社出版，2001：882-883.和杨正腾.温胃化湿汤对小鼠急性腹泻及胃排空作用的研究[J].中南药学.2011,9(7):501-504.

[0078] 统计分析

[0079] 各组试验数据均以均数±标准差表示，用student T检验进行组间比较，以P＜0.05为差异显著的检验标准。腹泻指数按下述公式计算。

[0080] 稀便率(%)= 稀便数/总便数×100%

[0081] 平均稀便级数= 所有稀便级数之和/稀便次数

[0082] 腹泻指数= 稀便率×稀便级

[0083] 试验结果

[0084] 给予受试物前，各组动物在给予番泻叶水煎液后均出现不同程度的腹泻，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.05，P<0.01，P<0.001），说明造模成功。其中，阳性药组和受试物C组的腹泻指数偏低，而受试物A1、B组的腹泻指数偏高；但各造模组之间比较未见统计学意义。模型组腹泻指数随着造模时间的延长逐渐增加，至造模后3小时（即给药后2小时）达到最高，与对照组相比具有极显著性差异（P<0.001），造模后4小时（即给药后3小时），模型组腹泻程度减轻，腹泻指数下降,与对照组比较仍有差异（P<0.05）。给药后2小时，各药物组与模型组比较没有明显统计学差异；给药后3小时，受试物A1、A2、A3、C组较模型组腹泻指数明显下降（P<0.05）。结果见表1。

[0085] 表1本发明的药物组合物对番泻叶致小鼠急性腹泻的治疗作用

[0086]

[0087] 注：与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

[0088] 与模型组比较#P<0.05

[0089] 实施例5本发明的药物组合物预防性用药3天对番泻叶致小鼠急性腹泻作用的研究

[0090] 分组方法同实施例4。阳性药和各受试物组均预防性给药3天，每天1次，20mL/kg，对照组和模型组给予等体积蒸馏水。于末次给药后1小时（禁食不禁水12小时），除正常对照组外，模型组和各给药组均灌胃0.3g生药/mL的番泻叶煎剂，40mL/kg，造模后2小时动物正常进食。同实施例4中所述方法记录动物排便情况，计算造模后4小时的腹泻指数。

[0091] 统计分析

[0092] 各组试验数据均以均数±标准差表示，用student T检验进行组间比较，以P＜0.05为差异显著的检验标准。腹泻指数按下述公式计算。

[0093] 稀便率(%)= 稀便数/总便数×100%

[0094] 平均稀便级数= 所有稀便级数之和/稀便次数

[0095] 腹泻指数= 稀便率×稀便级

[0096] 试验结果

[0097] 造模后1-3小时，模型组与对照组相比腹泻指数显著增高（P<0.01，P<0.001），至造模后第4小时，番泻叶的致腹泻作用减弱，模型组与对照组比较没有统计学意义。给药后2小时，阳性药和各受试物均能明显抑制腹泻的发生（P<0.01，P<0.001），其中阳性药、受试物A1、A3和C药效作用持续至给药后4小时（P<0.001）。累计统计给予各受试物后的各组腹泻情况，模型组小鼠的腹泻指数较对照组明显增高（P<0.001），造模成功；阳性药与受试物A1、A2、A3、B、C均能有效抑制腹泻的发生，腹泻指数显著降低（P<0.05，P<0.001）。结果见表2。

[0098] 表2本发明的药物组合物预防性用药3天对番泻叶致小鼠急性腹泻的作用[0099]

[0100] 注：与对照组比较***P<0.001

[0101] 与模型组比较#P<0.05，##P<0.01,###P<0.001

[0102] 实施例6本发明的药物组合物对番泻叶致小鼠慢性腹泻作用的研究

[0103] 分组方法同实施例4。除正常对照组外，模型组和各给药组均灌胃0.3g生药/mL的番泻叶煎剂，20mL/kg，连续6天造成小鼠慢性腹泻模型。于末次造模后1h，各药物组给予相应药液20mL/kg，对照组和模型组给予等体积蒸馏水。实验过程中动物正常摄食饮水。给药后即刻将小鼠置于单笼内观察，笼下铺洁净滤纸作排便情况记录。记录给药后4小时内各组动物的排便情况，并计算腹泻指数。

[0104] 统计分析

[0105] 各组试验数据均以均数±标准差表示，用student T检验进行组间比较，以P＜0.05为差异显著的检验标准。腹泻指数按下述公式计算。

[0106] 稀便率(%)= 稀便数/总便数×100%

[0107] 平均稀便级数= 所有稀便级数之和/稀便次数

[0108] 腹泻指数= 稀便率×稀便级

[0109] 试验结果

[0110] 给予受试物前，各造模组均出现不同程度的腹泻，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.001），且动物出现纳呆、消瘦、毛枯槁、活动频率下降、萎靡、倦卧、体重降低等症状，体重与正常对照组比较亦有显著性下降（P<0.001），此时慢性腹泻模型成功。

[0111] 给药后1-4小时，因未禁食，番泻叶的致腹泻作用一直较为明显，与对照组相比有显著差异（P<0.01，P<0.001）。与模型组比较，受试物A1在给药后3、4小时以及4小时内的累计统计均能有效抑制腹泻（P<0.05）；且在给药后3、4小时以及4小时内的累计统计止泻效果明显优于阳性药和A2组，在给药后3小时明显优于受试物C（P<0.05）；A3在给药后4小时以及4小时内的累计统计均能有效抑制腹泻（P<0.05）；而阳性药和受试物B、C未见明显的抗腹泻作用。结果见表3。

[0112] 表3本发明的药物组合物对番泻叶致小鼠慢性腹泻的治疗作用

[0113]

[0114]

[0115] 注：与对照组比较**P<0.01,***P<0.001

[0116] 与模型组比较#P<0.05，##P<0.01

[0117] 与阳性药组和A2组比较△P<0.05

[0118] 与受试物C组比较※P<0.05

[0119] 实施例7本发明的药物组合物对小鼠毛细血管通透性的影响

[0120] 分组方法同实施例4。阳性药和各受试物组均预防性给药4天，每天1次，20mL/kg，对照组和模型组给予等体积蒸馏水。于末次给药后1小时，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射1％冰醋酸生理盐水溶液0.1mL/10g，正常对照组注射等体积生理盐水。给予醋酸后30min，所有动物尾静脉注射0.5％伊文思蓝溶液0.2mL/10g，20min后脱颈椎处死。将2mL生理盐水注入腹腔，轻揉腹部40次后，收集腹腔液，再用6mL生理盐水分2次洗涤腹腔，每次3mL，分别收集腹腔液，合并2次的腹腔液后定容至8mL。将腹腔液经3000rpm离心
15min，取上清液在610nm处比色，读取吸光度值。并以不同浓度的伊文思兰为标准，绘制标准曲线，计算腹腔液中伊文思蓝含量，以ug/mL表示。

[0121] 统计分析

[0122] 各组试验数据均以均数±标准差表示，用student T检验进行组间比较，以P＜0.05为差异显著的检验标准。

[0123] 试验结果

[0124] 模型组动物由于腹腔毛细血管通透性增高，腹腔内伊文思蓝渗出量较对照组显著性增高（P<0.001）。阳性药和受试物A1、A3能明显抑制炎性渗出（P<0.05），且效果明显优于受试物C（P<0.05）。结果表明本发明的药物组合物对急性渗出性炎症模型有明显抑制作用。结果见表4。

[0125] 表4本发明的药物组合物对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高的抑制作用

[0126]

[0127] 注：与对照组比较***P<0.001

[0128] 与模型组比较#P<0.05

[0129] 与受试物C组比较※P<0.05

[0130] 由实施例3-7可以看出：本发明的药物组合物对番泻叶致小鼠急性和慢性腹泻治疗作用的研究结果显示，本发明的药物组合物有明显的对抗腹泻的作用，但起效较慢，在给药后3小时有效，其中本发明的药物组合物中的金樱根成分（即受试物C）在给药后第3小时与模型组相比腹泻指数亦明显减小，本发明的药物组合物中的香薷挥发油成分（即受试物B）也有所降低，但未见明显的统计学差异。

[0131] 本发明的药物组合物预防性用药3天后，各受试物组均能明显对抗番泻叶造成的小鼠腹泻，其中受试物A1、A3、C的效果最明显，但各给药组之间并无显著性差异。随着番泻叶给予次数的增多，动物持续腹泻，小鼠体重明显减低，造成慢性腹泻模型，阳性药无明显的治疗作用，但本发明的药物组合物仍能显著对抗腹泻的发生，且效果至少持续至给药后4小时，明显优于阳性药组和金樱根组。

[0132] 本发明的药物组合物预防性给药4天，对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有明显的抑制作用，且效果明显优于金樱根，提示本发明的药物组合物能明显抑制炎性