灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基及其增殖方法

摘要

本发明公开了一种灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基及其增殖方法；本发明得到的最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号增殖的培养基为：在改良B5培养基的基础上，(NH4)2SO4和CaCl2调整为原来的2倍，MgSO4调整为原来的0.6倍，微量元素浓度调整为原来的1/3，有机物浓度调整为原来的1/2，铁盐浓度调整为原来的1.5倍，并添加6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、吲哚乙酸0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L；而增殖时最佳的切割工艺为将诱导出来的芽切割成1-1.2cm长的茎段，不去叶片，留上部茎段2mm。本发明建立了灰毡毛忍冬渝蕾1号种苗产业化体系，解决了灰毡毛忍冬种苗问题。

权利要求

1.灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基，其特征在于：由以下浓度的组分组成：

2.使用权利要求1所述的灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗增殖的方法，其特征在于：将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗诱导出来的芽切割成1-1.2cm长的茎段，不去叶片，留上部茎段2mm，然后接种到所述增殖培养基中进行芽的增殖培养。

说明书

灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基及其增殖方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基及其增殖方法。

背景技术

[0002] 灰毡毛忍冬(Lonicera m acranthoides Hand.Mazz)是忍冬科忍冬属多年生半常绿缠绕小灌木或直立小灌木植物，其花蕾绿原酸含量在全国各种金银花中最高，是西南、中南地区商品金银花的主要品种之一。它含有挥发油、黄酮类、三萜皂甙、有机酸及无机元素等，具有抑菌、抗病毒、解热、抗炎、保肝、抗艾滋病等作用。

[0003] ‘渝蕾1号’是灰毡毛忍冬的一个品种，于2008年经重庆市林木品种审定委员会专家审定为新品种，该品种高产高抗，亩产鲜花达400千克以上，较传统种植灰毡毛忍冬增产30%～80%，抗逆性和适应性均较传统家种灰毡毛忍冬强。最显著的特点是花期可达20～
30d，基本上不开花，整个花期都是花蕾，相比于传统家种灰毡毛忍冬的7～10d花蕾期，其采摘期大大延长，便于采摘用工安排和加工时间安排。该品种现在在重庆地区已列入推动重庆两翼农户“万元增收行动”的计划中。但其品种的植株性状变异较大，所以通常采用无性系育种方法，如扦插、嫁接繁殖优良单株无性系。但嫁接的砧木和接穗资源不多，扦插成活率低于40%，导致繁殖系数较低，推广缓慢，不能满足生产和市场需求。通过组织培养的无性繁殖在短期内实现种苗产业化很有市场前景。

发明内容

[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基及其增殖方法，探索植物组织培养所需的营养元素、切割工艺对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的增殖的影响，得到最佳的增殖培养基，建立灰毡毛忍冬渝蕾1号种苗产业化体系，解决灰毡毛忍冬种苗问题。

[0005] 为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0006] 本发明公开了一种灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基，由以下浓度的组分组成：

[0007]

[0008] 本发明还公开了一种使用上述灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗增殖的方法，将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗诱导出来的芽切割成1-1.2cm长的茎段，不去叶片，留上部茎段2mm，然后接种到所述增殖培养基中进行芽的增殖培养。

[0009] 本发明的有益效果在于：本发明在无菌体系建立的基础上，探索植物组织培养所需的营养元素、切割工艺对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的增殖的影响，得出在改良B5培养基的基础上，(NH4)2SO4和CaCl2调整为原来的2倍，MgSO4调整为原来的0.6倍，微量元素浓度调整为原来的1/3，有机物浓度调整为原来的1/2，铁盐浓度调整为原来的1.5倍，并添加6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、吲哚乙酸0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，是最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号增殖的培养基；而增殖时最佳的切割工艺为将诱导出来的芽切割成1-1.2cm长的茎段，不去叶片，留上部茎段2mm。总之，本发明建立了灰毡毛忍冬渝蕾1号种苗产业化体系，解决了灰毡毛忍冬种苗问题。

具体实施方式

[0010] 下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。

[0011] 本发明实施例所用的试验材料灰毡毛忍冬渝蕾1号外植体采自重庆市秀山县，无菌苗由重庆文理学院花卉研究所组培车间提供。

[0012] 1.基本培养基的筛选

[0013] 将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗初代培养诱导的丛芽切取单芽，剪切成1.0～1.2cm长的茎段，接种于以MS、改良B5、WPM、B5为基本培养基，附加了6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、吲哚乙酸（IAA）0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L的培养基中进行芽的增殖培养。
各处理接种8瓶，每瓶接种3个基本一致的外植体。培养25d后观察试管苗增殖的效果。增殖系数= 调查时有效芽数/接种时的外植体数，有效芽是指长度1cm以上的丛生芽。

[0014] 试验结果见表1，从表1可以看出，不同基本培养基类型对灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖影响较大；仅对比增殖系数，改良B5为基本培养基是组培苗增殖系数最高达2.6，虽然以原B5培养基为基本培养基中的苗增殖跟改良的差不多，但是组培苗的长势存在很大的差异，一个芽苗芽色深绿、抽高快、有侧芽，一个芽苗颜色偏黄、抽高快、有侧芽。所以，灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖最佳基本培养基为改良B5。

[0015] 表1不同基本培养基对组培苗增殖的影响

[0016]

[0017] 2.大量元素浓度的调整

[0018] 将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗初代培养诱导的丛芽切取单芽，剪切成1.0～1.2cm长的茎段，接种于以改良B5为基本培养基，调整了其大量元素浓度，并附加了6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、吲哚乙酸（IAA）0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L的培养基中进行芽的增殖培养。各处理接种8瓶，每瓶接种3个基本一致的外植体。培养25d后观察试管苗增殖的效果。

[0019] 试验结果见表2，从表2可以看出，培养基中大量元素的浓度对组培苗增值的影响较大；这些大量元素不仅影响到组培苗的增殖系数，同时对芽苗的长势影响也较大，植株颜色，有无侧芽，能否抽高等都与大量元素的含量有关系。当KNO3浓度不变，变化其他元素的浓度时其增殖系数变化不大，而植株的颜色逐渐变好；逐渐降低KNO3的浓度其它浓度不变时，其增殖系数明显下降。这说明KNO3对植株颜色变化没有影响，而对组培苗的增殖影响明显。从统计的结果看，在改良B5培养基的基础上，当KNO3的浓度不改变，（NH4)2SO4和CaCl2都为原来的2倍，MgSO4为原来0.6倍时的大量元素组合是最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗增殖的，其增殖系数达到最高2.88，芽苗长势好、颜色深绿、有侧芽、抽高快，达到了理想的增殖效果。

[0020] 表2培养基大量元素对组培苗增殖的影响

[0021]

[0022] 3.微量元素浓度的调整

[0023] 将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗初代培养诱导的丛芽切取单芽，剪切成1.0～1.2cm长的茎段，接种于以改良B5为基本培养基，调整了其微量元素浓度（微量元素浓度为原来的1/4、1/3、1/2、1倍），并附加了6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、吲哚乙酸（IAA）0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L的培养基中进行芽的增殖培养。各处理接种8瓶，每瓶接种3个基本一致的外植体。培养25d后观察试管苗增殖的效果。

[0024] 试验结果见表3，从表3可以看出，微量元素的浓度对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的增殖影响不明显，但是对组培苗植株长势的影响较大。微量元素浓度越低其植株越矮小，但对随浓度的升高其侧芽逐渐减少，叶片也枯黄得较厉害，结果表明所有浓度处理中都存在叶片枯黄的现象，这可能与改良B5培养基中其它成分有关。所以在微量元素试验中，综合增殖系数和苗的长势，选用1/3B5的微量元素浓度最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的增殖。

[0025] 表3微量元素对组培苗增殖的影响

[0026]

[0027] 4.有机物浓度的调整

[0028] 将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗初代培养诱导的丛芽切取单芽，剪切成1.0～1.2cm长的茎段，接种于以改良B5为基本培养基，调整了其有机物浓度（有机物浓度为原来的1/4、1/3、1/2、1倍），并附加了6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、吲哚乙酸（IAA）0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L的培养基中进行芽的增殖培养。各处理接种8瓶，每瓶接种3个基本一致的外植体。培养25d后观察试管苗增殖的效果。

[0029] 试验结果见表4，从表4可以看出，随有机物浓度的增加，其增殖系数也是呈现上升的趋势，最高的可以达到2.83。虽然达到了增殖的目的但植株的长势不好，应该是营养过剩表现出叶片中毒黑掉导致整个植株死亡。所以要实现灰毡毛忍冬的产业化，必须选用不仅增殖系数高，而且植株的生长情况也要正常的有机物浓度。结果表明选用有机物浓度为1/2B5为最佳浓度，其增殖系数为2.75，植株的长势正常。

[0030] 表4有机物对组培苗增殖的影响

[0031]

[0032] 5.铁盐浓度的调整

[0033] 将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗初代培养诱导的丛芽切取单芽，剪切成1.0～1.2cm长的茎段，接种于以改良B5为基本培养基，调整了其铁盐浓度（铁盐浓度为原来的1/2、1、1.5、2倍），并附加了6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、吲哚乙酸（IAA）0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L的培养基中进行芽的增殖培养。各处理接种8瓶，每瓶接种3个基本一致的外植体。培养25d后观察试管苗增殖的效果。

[0034] 试验结果见表5，从表5可以看出，铁盐的浓度对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的增殖影响不明显，但是植株的生长情况影响严重。随铁盐浓度的升高，其叶片颜色逐渐变为正常。综合其增殖系数和植株的生长情况，灰毡毛忍冬渝蕾1号增殖的最佳铁盐浓度为1.5B5。

[0035] 表5铁盐对组培苗增殖的影响

[0036]

[0037] 综上所述，本发明最终得到的最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号增殖的培养基为：在改良B5培养基的基础上，(NH4)2SO4和CaCl2调整为原来的2倍，MgSO4调整为原来的0.6倍，微量元素浓度调整为原来的1/3，有机物浓度调整为原来的1/2，铁盐浓度调整为原来的1.5倍，并添加6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、吲哚乙酸0.8mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L。

[0038] 改良B5培养基为植物组织培养中常用的基本培养基，其具体配方如下表所示：

[0039]

[0040]

[0041] 因此，本发明的灰毡毛忍冬渝蕾1号的增殖培养基的配方为：

[0042]

[0043]

[0044] 6.增殖时切割工艺的选择

[0045] 将灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗初代培养诱导的丛芽分别按以下3种工艺切割：（1）茎段增殖，即将诱导出来的芽切割成1-1.2cm长的茎段，去掉叶片留叶柄2mm，留上部茎段2mm；（2）丛生芽增殖，将诱导出来的芽切成带有1-2个腋芽的段，不去叶片，去掉顶心；
（3）茎段增殖，即将诱导出来的芽切割成1-1.2cm长的茎段，不去叶片，留上部茎段2mm。然