本发明公开了一种复方虫草灵芝组合物及其制备方法，该组合物中各成分的重量份为：虫草菌粉100-300重量份，灵芝菌粉100-220重量份，云芝菌粉100-220重量份。本发明复方虫草灵芝组合物能显著升元固本，增加机体免疫力，具有辅助抗肿瘤的作用。
1.一种复方虫草灵芝组合物的制备方法，其特征在于将各组分混合并搅拌均匀：组分为：
虫草菌粉100-300重量份 灵芝菌粉100-220重量份 云芝菌粉100-220重量份；虫草菌粉中虫草多糖≥1.5%， 灵芝菌粉中灵芝多糖≥1.5%，云芝菌粉中云芝多糖≥4.0%；其中，虫草菌粉液体深层发酵工艺如下：
取虫草菌-蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌种接于新鲜斜面培养基上，培养基配方为：土豆
8.0%，葡萄糖3.0%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，琼脂1.3%，26℃培养4天；在斜面培养好的菌种转接到摇瓶中，摇瓶培养基为：葡萄糖2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁
0.05%，26℃培养2天；摇瓶培养结束后，将菌种转接到种子罐中，种子罐培养基为：葡萄糖
2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，消泡剂0.1%，发酵工艺条件为：接种量10%，温度26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa；种子罐发酵3天后转接到大罐发酵，大罐培养基为：葡萄糖1.5%，蛋白胨2%，磷酸二氢钾0.05%，硫酸镁0.07%，消泡剂0.1%，发酵工艺为：接种量10%，培养温度26℃±1℃，通风量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa；发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机分离，菌丝体在70℃以下真空干燥，烘干后粉碎过100目筛即得虫草菌粉；
取灵芝菌种接于新鲜斜面培养基上，培养基配方为：土豆8%，葡萄糖2.0%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁 0.08%，琼脂1.5%，25℃培养3天；在斜面培养好的菌种转接到摇瓶中，摇瓶培养基为：黄豆饼粉1.0%，蔗糖3.0%，磷酸二氢钾0.15%，硫酸镁0.075%，硫酸铵0.05%，
25℃培养2天；摇瓶培养结束后，将菌种转接到种子罐中，种子罐培养基为：黄豆饼粉1%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，消泡剂0.1%，发酵工艺条件为：接种量10%，温度
26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa；种子罐发酵2天后转接到大罐发酵，大罐培养基为：黄豆饼粉2.0%，蚕蛹粉0.5%，葡萄糖1%，磷酸二氢钾0.08% 硫酸镁0.07%，消泡剂
0.1%，发酵工艺为：接种量10%，培养温度27℃±1℃，通风量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa；发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机分离，菌丝体在70℃以下真空干燥，烘干后粉碎过100目筛即得灵芝菌粉；
取杂色云芝菌种接于新鲜斜面培养基上，培养基配方为：土豆10.0%，葡萄糖2.0%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，琼脂1.3%，26℃培养5天；在斜面培养好的菌种转接到摇瓶中，摇瓶培养基为：黄豆饼粉1.0%，葡萄糖2%，蛋白胨0.5%，磷酸二氢钾0.1% ，硫酸镁
0.05%，26℃培养3天；摇瓶培养结束后，将菌种转接到种子罐中，种子罐培养基为：葡萄糖
2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钠0.1%，硫酸镁0.05%，消泡剂0.1%，发酵工艺条件为：接种量10%，温度26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa；种子罐发酵3天后转接到大罐发酵，大罐培养基为：葡萄糖2%，黄豆饼粉2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钠0.4%，硫酸镁0.05%，消泡剂
0.1%，发酵工艺为：接种量15%，培养温度26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm；罐压0.03MPa；发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机分离，菌丝体在70℃以下真空干燥，烘干后粉碎过100目筛即得云芝菌粉。
2.根据权利要求1所述的复方虫草灵芝组合物的制备方法，其特征在于各成分的重量份为：虫草菌粉100-250重量份 灵芝菌粉150-220重量份 云芝菌粉100-200重量份。
3.根据权利要求1所述的复方虫草灵芝组合物的制备方法，其特征在于各成分的重量份为：虫草菌粉100-250重量份 灵芝菌粉100-200重量份 云芝菌粉150-220重量份。
4.根据权利要求1所述的复方虫草灵芝组合物的制备方法，其特征在于各成分的重量份为：虫草菌粉100-300重量份 灵芝菌粉100-200重量份 云芝菌粉100-220重量份。
5.根据权利要求1、2、3或4所述的复方虫草灵芝组合物的制备方法，其特征在于该组合物与药学上可接受的辅料制成制剂。
6.根据权利要求5所述的复方虫草灵芝组合物的制备方法，其特征在于所述的制剂为散剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液或注射剂。
一种复方虫草灵芝组合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种复方虫草灵芝组合物及其制备方法，属于生物医药领域。
背景技术
[0002] 目前，市场上保健品种类繁多，大多具有提高免疫力、抗氧化、抗衰老等功效，但这些保健品为了增进药效大都添加化学制剂，人们短期服用不会存在什么危害，但长期服用后就会出现各种不同的副作用。
发明内容
[0003] 本发明的目的是提供一种配方简单，服用量低却能够显著提高人体免疫力，改善微循环，延缓衰老的复方虫草灵芝组合物。
[0004] 本发明的目的是通过以下方式实现的：
[0005] 一种复方虫草灵芝组合物，其特征在于该组合物中各成分的重量份为：
[0006] 虫草菌粉100-300重量份 灵芝菌粉（又称灵芝菌丝粉）100-220重量份 云芝菌粉100-220重量份。
[0007] 优选该组合物中各成分的重量份为：
[0008] 虫草菌粉100-250重量份 灵芝菌粉150-220重量份 云芝菌粉100-200重量份。
[0009] 优选该组合物中各成分的重量份为：
[0010] 虫草菌粉100-250重量份 灵芝菌粉100-200重量份 云芝菌粉150-220重量份。
[0011] 优选该组合物中各成分的重量份为：
[0012] 虫草菌粉100-300重量份 灵芝菌粉100-200重量份 云芝菌粉100-220重量份。
[0013] 上述虫草菌粉中虫草多糖≥1.5%，灵芝菌粉中灵芝多糖≥1.5%，云芝菌粉中云芝多糖≥4.0%。
[0014] 上述复方虫草灵芝组合物的制备方法包括以下步骤：将虫草菌粉、灵芝菌粉、云芝菌粉按比例混合。
[0015] 本发明使用的虫草菌粉、灵芝菌粉和云芝菌粉原料均可以通过市售获得或自制获得。
[0016] 灵芝菌粉，为棕黄色至棕褐色粉末，具有产品特有的香味、味酸咸、微苦、无异味，其中，灵芝多糖≥1.5g/100g。虫草菌粉中虫草多糖≥1.5%，云芝菌粉中云芝多糖≥4.0%。上述原料还可以通过液体深层发酵的菌丝体烘干粉碎制得。
[0017] 本发明复方虫草灵芝组合物可与药学上可接受的辅料制成制剂，如：散剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液或注射剂等。本发明复方虫草灵芝组合物能有效提高人体免疫力，改善微循环，具有抗动脉粥样硬化，抗衰老等功效，能用于制备增加机体免疫力的药物，还可以用于制备具有辅助抗肿瘤的作用的药物。本发明组合物与虫草菌粉、灵芝菌粉、云芝菌粉单一组分或任意两者组合比较，可显著减少服用量。
[0018] 以下通过具体试验例对本发明进行进一步说明：
[0019] 取该复方虫草灵芝混合菌粉与同剂量的单纯虫草菌粉和灵芝菌粉比较其免疫力增强作用，有显著性差异，结果见表1、表2和表3。
[0020] 试验例1：对小鼠胸腺指数（胸腺平均质量mg/平均体质量g）的影响[0021] 本试验共分为7组，每组20只小鼠，其中空白组为基础饲料喂养，单纯虫草菌粉组为基础饲料+单纯虫草菌粉（2g/d）喂养，单纯灵芝菌粉组为基础饲料+单纯灵芝菌粉（2g/d）喂养，实施例2为基础饲料+实施例2配方（2g/d）喂养，实施例4为基础饲料+实施例4配方（2g/d）喂养，实施例6为基础饲料+实施例6配方（2g/d）喂养，实施例8为基础饲料+实施例8配方（2g/d）喂养，喂养时间为10d，10d后检测其胸腺指数。
[0022] 表1
[0023]组别 动物数量（只） 胸腺指数 P值
空白组 20 14.13±1.07 /
单纯虫草菌粉组 20 22.87±5.25 ＜0.05
单纯灵芝菌粉组 20 23.18±6.92 ＜0.05
实施例2 20 33.02±8.46 ＜0.05
实施例4 20 34.18±7.95 ＜0.05
实施例6 20 32.92±7.67 ＜0.05
实施例8 20 35.32±9.19 ＜0.05
[0024] 结论：从上表可以看出与空白组相比，单纯虫草菌粉和灵芝菌粉对小鼠胸腺指数增加效果显著；而与单纯虫草菌粉和灵芝菌粉相比，复合虫草灵芝菌粉对小鼠胸腺指数增加均具有显著性差异，效果显著。
[0025] 试验例2：对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
[0026] 本试验共分为7组，每组20只小鼠，其中空白组为基础饲料喂养，单纯虫草菌粉组为基础饲料+单纯虫草菌粉（2g/d）喂养，单纯灵芝菌粉组为基础饲料+单纯灵芝菌粉（2g/d）喂养，实施例1为基础饲料+实施例1配方（2g/d）喂养，实施例3为基础饲料+实施例3配方（2g/d）喂养，实施例5为基础饲料+实施例5配方（2g/d）喂养，实施例7为基础饲料+实施例7配方（2g/d）喂养，喂养时间为10d，10d后检测其淋巴细胞增殖情况。
[0027] 表2
[0028]组别 动物数量（只） 光密度差值 P值
空白组 20 0.0517±0.0235 /
单纯虫草菌粉组 20 0.2753±0.0897 ＜0.05
单纯灵芝菌粉组 20 0.2688±0.0769 ＜0.05
实施例1 20 0.5047±0.0572 ＜0.05
实施例3 20 0.5381±0.0497 ＜0.05
实施例5 20 0.5649±0.0539 ＜0.05
实施例7 20 0.6014±0.0329 ＜0.05
[0029] 结论：从上表可以看出与空白组相比，单纯虫草菌粉和灵芝菌粉对小鼠脾淋巴细胞增殖效果显著；而与单纯虫草菌粉和灵芝菌粉相比，复合虫草灵芝菌粉对小鼠脾淋巴细胞增殖效果显著。
[0030] 试验例3：对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响
[0031] 本试验共分为7组，每组20只小鼠，其中空白组为基础饲料喂养，单纯虫草菌粉组为基础饲料+单纯虫草菌粉（2g/d）喂养，单纯灵芝菌粉组为基础饲料+单纯灵芝菌粉（2g/d）喂养，实施例2为基础饲料+实施例2配方（2g/d）喂养，实施例3为基础饲料+实施例3配方（2g/d）喂养，实施例4为基础饲料+实施例4配方（2g/d）喂养，实施例9为基础饲料+实施例9配方（2g/d）喂养，喂养时间为10d，10d后检测其巨噬细胞吞噬指数。
[0032] 表3
[0033]组别 动物数量（只） 吞噬指数 P值
空白组 20 22.54±7.62 /
单纯虫草菌粉组 20 30.72±8.91 ＜0.05
单纯灵芝菌粉组 20 32.15±7.39 ＜0.05
实施例2 20 35.38±5.64 ＜0.05
实施例3 20 35.29±4.39 ＜0.05
[0034]实施例4 20 36.64±5.86 ＜0.05
实施例9 20 37.09±4.85 ＜0.05
[0035] 结论：从上表可以看出与空白组相比，单纯虫草菌粉和灵芝菌粉对小鼠巨噬细胞吞噬能力效果显著；而与单纯虫草菌粉和灵芝菌粉相比，复合虫草灵芝菌粉对小鼠巨噬细胞吞噬能力效果显著。
[0036] 由此可知，本发明组合物的增加机体免疫力、具有辅助抗肿瘤的作用并非各组成成分功能的简单相加，是各个组成成分的协同增效作用的。另外，本发明组合物在常温条件下放置6个月左右，其有效成分含量基本不变。具体实施方式：
[0037] 以下通过具体实施例进一步说明本发明。但实施例的具体细节仅用于解释本发明，不应理解为对本发明总的技术方案的限定。
[0038] 虫草菌粉液体深层发酵工艺：
[0039] 虫草菌粉用菌株：虫草菌-蝙蝠蛾拟青霉（Paecilomyces hepiali chen）Cs-4，购买于中国科学院微生物菌种保藏中心。
[0040] 从冰箱中取出的保存菌种接于新鲜斜面培养基上，培养基配方为：土豆8.0%，葡萄糖3.0%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，琼脂1.3%，26℃培养4天。
[0041] 在斜面培养好的菌种转接到摇瓶中，摇瓶培养基为：葡萄糖2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，26℃培养2天。
[0042] 摇瓶培养结束后，将菌种转接到种子罐中，种子罐培养基为：葡萄糖2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，消泡剂0.1%，发酵工艺条件为：接种量10%，温度26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa。
[0043] 种子罐发酵3天后转接到大罐发酵，大罐培养基为：葡萄糖1.5%，蛋白胨2%，磷酸二氢钾0.05%，硫酸镁0.07%，消泡剂0.1%。发酵工艺为：接种量10%，培养温度26℃±1℃，通风量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa。
[0044] 发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机分离，菌丝体在70℃以下真空干燥，烘干后粉碎过100目筛即得虫草菌粉。
[0045] 灵芝菌粉液体深层发酵工艺：
[0046] 灵芝菌粉用菌株：灵芝[Ganoderma lucidum（Curtis：Fr）P.Karst.]，购买于中国科学院微生物菌种保藏中心。
[0047] 从冰箱中取出的保存菌种接于新鲜斜面培养基上，培养基配方为：土豆8%，葡萄糖2.0%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.08%，琼脂1.5%，25℃培养3天。
[0048] 在斜面培养好的菌种转接到摇瓶中，摇瓶培养基为：黄豆饼粉1.0%，蔗糖3.0%，磷酸二氢钾0.15%，硫酸镁0.075%，硫酸铵0.05%，25℃培养2天。
[0049] 摇瓶培养结束后，将菌种转接到种子罐中，种子罐培养基为：黄豆饼粉1%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，消泡剂0.1%，发酵工艺条件为：接种量10%，温度26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa。
[0050] 种子罐发酵2天后转接到大罐发酵，大罐培养基为：黄豆饼粉2.0%，蚕蛹粉0.5%，葡萄糖1%，磷酸二氢钾0.08%硫酸镁0.07%，消泡剂0.1%。发酵工艺为：接种量10%，培养温度27℃±1℃，通风量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa。
[0051] 发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机分离，菌丝体在70℃以下真空干燥，烘干后粉碎过100目筛即得灵芝菌粉。
[0052] 云芝菌粉液体深层发酵工艺：
[0053] 云芝菌粉用菌株：杂色云芝[Polystictus Versicolor(L)Fr]，购买于中国科学院微生物菌种保藏中心。
[0054] 从冰箱中取出的保存菌种接于新鲜斜面培养基上，培养基配方为：土豆10.0%，葡萄糖2.0%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，琼脂1.3%，26℃培养5天。
[0055] 在斜面培养好的菌种转接到摇瓶中，摇瓶培养基为：黄豆饼粉1.0%，葡萄糖2%，蛋白胨0.5%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，26℃培养3天。
[0056] 摇瓶培养结束后，将菌种转接到种子罐中，种子罐培养基为：葡萄糖2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钠0.1%，硫酸镁0.05%，消泡剂0.1%，发酵工艺条件为：接种量10%，温度26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm，罐压0.03MPa。
[0057] 种子罐发酵3天后转接到大罐发酵，大罐培养基为：葡萄糖2%，黄豆饼粉2%，蛋白胨1%，磷酸二氢钠0.4%，硫酸镁0.05%，消泡剂0.1%，发酵工艺为：接种量15%，培养温度26℃±1℃，通气量1∶0.5vvm；罐压0.03MPa。
[0058] 发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机分离，菌丝体在70℃以下真空干燥，烘干后粉碎过100目筛即得云芝菌粉。
[0059] 虫草菌粉、灵芝菌粉和云芝菌粉其原料质量指标如下：
[0060]
[0061]
[0062] 实施例1
[0063] 虫草菌粉100mg，灵芝菌粉220mg，云芝菌粉180mg；三种组分混合即得。
[0064] 实施例2
[0065] 虫草菌粉100mg，灵芝菌粉180mg，云芝菌粉220mg；三种组分混合即得。
[0066] 实施例3
[0067] 虫草菌粉150mg，灵芝菌粉150mg，云芝菌粉200mg；三种组分混合即得。
[0068] 实施例4
[0069] 虫草菌粉150mg，灵芝菌粉200mg，云芝菌粉150mg；三种组分混合即得。
[0070] 实施例5
[0071] 虫草菌粉200mg，灵芝菌粉150mg，云芝菌粉150mg；三种组分混合即得。
[0072] 实施例6
[0073] 虫草菌粉250mg，灵芝菌粉100mg，云芝菌粉150mg；三种组分混合即得。
[0074] 实施例7
[0075] 虫草菌粉250mg，灵芝菌粉150mg，云芝菌粉100mg；三种组分混合即得。
[0076] 实施例8
[0077] 虫草菌粉250mg，灵芝菌粉100mg，云芝菌粉150mg；三种组分混合即得。
