一种用于铜绿微囊藻的培养基及其应用

摘要

本发明涉及一种用于铜绿微囊藻的培养基。采用的技术方案是：培养基由NaCl、K2HPO4、MgSO4·7H2O、Ca(NO3) 2、柠檬酸、FeCl3、柠檬酸三铵、EDTANa2、Na2CO3、A5储备液和水组成。采用本发明的培养基及培养方法，不仅缩短培养时间，且培养过程中藻液不会变黄，所培养的铜绿微囊藻到达生长稳定期时的藻细胞数可达9×106个/mL。

权利要求

1.一种铜绿微囊藻的培养方法，其特征在于：将培养基经120-125℃灭菌20-30min，室温冷却后，将铜绿微囊藻按2-7％的体积比接种于培养基中，于光照培养箱中培养，每天摇晃2-3次，设置光照培养箱的光照强度为1000lx～1500lx，暖光，光暗比为14h:10h，光室培养温度为30℃，暗室为25℃；其中，所述的培养基的组成如下：所述的A5储备液的组成如下：H3BO32-3g/L、MnSO41-2g/L、ZnSO4·7H2O 0.1-0.3g/L、NaMoO4·2H2O 0.1-0.5g/L、CuSO4·5H2O 0.05-0.1g/L、水余量，pH值7.2～7.4。

2.如权利要求1所述的铜绿微囊藻的培养方法，其特征在于培养基的组成如下：

3.如权利要求1所述的铜绿微囊藻的培养方法，其特征在于：所述的A5储备液的组成如下：H3BO32.86g/L、MnSO41.59g/L、ZnSO4·7H2O 0.22g/L、NaMoO4·2H2O 0.39g/L、CuSO4·5H2O 0.08g/L、水余量，pH值7.2～7.4。

说明书

一种用于铜绿微囊藻的培养基及其应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)的培养方法，包括铜绿微囊藻培养基改良和培养条件优化。

背景技术

[0002] 随着工业、农业的迅速发展，向环境中排放的营养物质日趋增多，水体的富营养化现象日益加剧，由此造成的有害藻类水华爆发也日趋频繁，不仅破坏了水域生态系统的平衡，在水体中占主导地位的藻类，如微囊藻(Microcystis)等还会产生大量藻毒素等代谢产物对公众健康、牲畜和水源供给带来负面影响。有害藻类水华在我国及世界范围的爆发频率有逐年增加的趋势。

[0003] 为了探索行之有效的抑制藻类水华暴发的途径，更好的了解藻类水华爆发的自然条件，就需要进行大量的实验室模拟培养。但是作为水华爆发的主要藻类，微囊藻的实验室纯培养比较困难，特别是现有的培养基及培养条件很难达到实验室纯培养铜绿微囊藻的要求。

发明内容

[0004] 为解决铜绿微囊藻实验室纯培养较困难的问题，本发明提供一种利于铜绿微囊藻生长的培养基及培养条件。

[0005] 本发明采用的技术方案是：一种用于铜绿微囊藻的培养基，其组成如下：

[0006] NaCl 1.0-1.5 g/L、 K2HPO4 0.02-0.06 g/L、 MgSO4·7H2O 0.05-0.1 g/L、[0007] Ca(NO3) 2 0.05-0.1 g/L、柠檬酸 0.004-0.008 g/L、 FeCl3 0.004-0.008 g/L、[0008] 柠檬酸三铵0.003-0.008 g/L、 EDTANa2 0.001-0.003 g/L、 Na2CO3 0.01-0.03g/L、[0009] A5储备液 1-2mL/L、 水 余量。

[0010] 优选的，培养基的组成如下：

[0011] NaCl 1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4·7H2O 0.075g/L、

[0012] Ca(NO3) 2 0.077g/L、柠檬酸 0.006g/L、FeCl3 0.006g/L、[0013] 柠檬酸三铵 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO3 0.02g/L、[0014] A5储备液 1mL/L、 水 余量。

[0015] 所述的A5储备液的组成如下：H3BO3 2-3 g/L、MnSO4 1-2 g/L、ZnSO4·7H2O0.1-0.3g/L、NaMoO4·2H2O 0.1-0.5 g/L、CuSO4·5H2O 0.05-0.1g/L、水 余 量，pH 值
7.2~7.4。

[0016] 优选的，A5储备液的组成如下：H3BO3 2.86g/L、MnSO4 1.59g/L、ZnSO4·7H2O0.22g/L、NaMoO4·2H2O 0.39g/L、CuSO4·5H2O 0.08g/L、水 余量，pH值7.2~7.4。

[0017] 一种铜绿微囊藻的培养方法如下：将上述的培养基经120-125℃灭菌20-30min，室温冷却后，将铜绿微囊藻按2-7%的体积比接种于培养基中，于光照培养箱中培养，每天摇晃2-3次，设置光照培养箱的光照强度为1000lx~1500lx，暖光，光暗比为14h:10h，光室培养温度为30℃，暗室为25℃。

[0018] 本发明的有益效果是：采用本发明的培养基及培养方法，不仅缩短培养时间，且培6
养过程中藻液不会变黄，所培养的铜绿微囊藻到达生长稳定期时的藻细胞数可达9×10个/mL。

附图说明

[0019] 图1是铜绿微囊藻生长曲线。

具体实施方式

[0020] 实施例1 一种铜绿微囊藻的培养方法

[0021] （一）用于铜绿微囊藻的培养基

[0022] 1.A5储备液的组成如下：H3BO3 2.86g/L，MnSO4 1.59g/L，ZnSO4·7H2O 0.22g/L，NaMoO4·2H2O 0.39g/L，CuSO4·5H2O 0.08g/L、水 余量，pH值7.2~7.4。

[0023] 方法：按上述的配比，量取H3BO3，MnSO4，ZnSO4·7H2O，NaMoO4·2H2O和CuSO4·5H2O，用水定溶至1升，pH值7.2~7.4。

[0024] 2.培养基的组成如下：

[0025] NaCl 1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4·7H2O 0.075g/L、

[0026] Ca(NO3) 2 0.077g/L、柠檬酸 0.006g/L、FeCl3 0.006g/L、[0027] 柠檬酸三铵 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO3 0.02g/L、[0028] A5储备液 1mL/L、水 余量。

[0029] 方法：按上述的配比，量取NaCl、K2HPO4、MgSO4·7H2O、Ca(NO3) 2、柠檬酸、FeCl3、柠檬酸三铵、EDTANa2、Na2CO3和A5储备液，用水定溶至1升。

[0030] （二）铜绿微囊藻的培养方法

[0031] 将上述的培养基经120-125℃灭菌20-30min，培养基冷却到室温后，将铜绿微囊藻按5%的体积比接种于装有培养基的三角瓶中，于光照培养箱中培养，每天摇晃2-3次。设置光照培养箱的光照强度为1000lx~1500lx，暖光，光暗比为14h:10h，光室培养温度为
30℃，暗室为25℃。

[0032] （三）培养结果

[0033] 每天在无菌条件下，取藻液，用血球计数板在显微镜下观察计数，计算藻细胞密度，绘制生长曲线，结果见图1。

[0034] 从图1可以看出，0~3d为铜绿微囊藻生长的延滞期，3~11d为对数生长期，11~15d6
为稳定期，15d之后逐渐进入衰亡期。达到稳定期时藻细胞数为9.03×10个/mL。