一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法

摘要

一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法，将鮰鱼皮胶原蛋白配制成底物浓度为1％～3％的溶液，调pH至7.0～8.0，用α-胰凝乳蛋白酶在40℃～50℃酶解10～20min，加酶量为1000～3000U/g，酶解结束后，沸水浴灭酶，将反应混合液的pH调至8.0～9.0，用Alcalase酶在50℃～60℃酶解20～30min，加酶量为2000～3000U/g，酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液。首次利用鮰鱼皮制备胶原蛋白ACE抑制肽，实现了鮰鱼皮资源的高效利用。克服了单酶水解位点不足，混合酶水解相互干扰的缺点，提高了酶解产物的ACE抑制活性，其IC50值为0.33～0.86mg/mL。

权利要求

1.一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法，其特征在于步骤为：将鮰鱼皮胶原蛋白配制成底物浓度为2％，其是质量体积比，单位为g/L的溶液，调pH至7.5，用来源牛胰的α-胰凝乳蛋白酶在45℃酶解15min，加酶量为2000U/g，酶解结束后，沸水浴灭酶，将反应混合液的pH调至8.5，用诺维信食品级alcalase 2.4L 碱性蛋白酶在55℃酶解25min，加酶量为2500U/g，酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液，将上清液pH调至中性，用真空浓缩装置浓缩至固型物含量10％，其是质量体积比，单位为g/L，在进风温度195℃和出风温度100℃下进行喷雾干燥，即得到粉状鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽产品。

说明书

一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及食品生物化学领域，可作为功能性添加剂用于食品、化妆品和药物，具体涉及一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法。

背景技术

[0002] 食源ACE抑制肽因具有安全无副作用的优点，已成为科研工作者研究热点领域之一。现已从草鱼（Liu X,Zhang MS,Jia AR,et al.Purification and characterization of angiotensin I converting enzyme inhibitory peptides from jellyfish Rhopilema esculentum[J].Food Research International,2013,50(1):339-343）、海 蜇（Ishiguro K,Sameshima Y,Kume T,et al.Hypotensive effect of a sweetpotato protein digest in spontaneously hypertensive rats and purification of angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides[J].Food Chemistry,2012,131(3):774-779）等水产品的酶解产物中分离得到高活性ACE抑制肽。随着水产品加工业的发展，伴随着大量水产副产物产生，这些副产物堆积容易引起环境污染，而且处理成本极高，因此，水产副产物的深加工是水产加工业面临的紧迫问题。鱼皮作为水产加工中的大宗副产物，一直处于待开发状态。现有研究表明，鱼皮含有大量的胶原蛋白，且胶原蛋白制备较动物组织的方便和简单，深受科研工作者喜爱。胶原蛋白因具有制备高活性抗氧化肽的潜力已被高度关注，并已有专利报道，如：中国发明专利CN101824071A（申请公布号）中公开了一种源自胶原蛋白的抗氧化肽及其用途，从胶原蛋白中开发出了2～5个氨基酸的抗氧化肽，这些肽活性高，易吸收。

[0003] 此外，胶原蛋白被发现还适宜制备ACE抑制肽，现已有专利报道，如：中国发明专利CN101457249A（公开号）中公开了一种难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽的制备方法，利用嗜热菌蛋白酶和碱性蛋白酶从海洋水产胶原蛋白中制备出ACE抑制肽；中国发明专利CN102516358A（申请公布号）公开了一种利用鱼鳞胶原蛋白制备ACE抑制肽的方法，动物实验结果表明此肽有明显的降血压效果。中国发明专利CN1858230A（公开号）中公开了一种利用茄参胶原蛋白制备ACE抑制肽的方法。尽管胶原蛋白ACE抑制肽的研究报道较多，然而由于不同来源胶原蛋白的结构及氨基酸组成存在差别，因此，它们的酶解产物ACE抑制活性各不相同，寻找适宜的胶原蛋白原料以及酶解工艺仍然是目前胶原蛋白开发的热点领域。迄今为止，尚未见关于鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的研究报道。

发明内容

[0004] 解决的技术问题：本发明的目的是提供一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法。

[0005] 技术方案：一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法，将鮰鱼皮胶原蛋白配成溶液，用α-胰凝乳蛋白酶和Alcalase酶分别在其适宜酶解条件下进行分步酶解，酶解产物经浓缩和喷雾干燥后，即为粉末状鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽产品。

[0006] 一种鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的制备方法，将鮰鱼皮胶原蛋白配制成底物浓度为1％～3％（w/v，g/mL）的溶液，调pH至7.0～8.0，用α-胰凝乳蛋白酶（来源牛胰）在40℃～50℃酶解10～20min，加酶量为1000～3000U/g，酶解结束后，沸水浴灭酶，将反应混合液的pH调至8.0～9.0，用Alcalase酶在50℃～60℃酶解20～30min，加酶量为
2000～3000U/g，酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液。

[0007] 再将离心收集的上清液pH调至中性，用真空浓缩装置浓缩至固型物含量10％（w/v，g/mL），在进风温度180℃-210℃和出风温度90℃-110℃下进行喷雾干燥，即得到粉状鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽产品。

[0008] 有益效果：

[0009] 1）首次利用鮰鱼皮制备胶原蛋白ACE抑制肽，实现了鮰鱼皮资源的高效利用。

[0010] 2）克服了单酶水解位点不足，混合酶水解相互干扰的缺点，在本发明中，胶原蛋白经α-胰凝乳蛋白酶第一步酶解后，其酶解产物的IC50值为1.35～1.72mg/mL，经Alcalase第二步酶解后，其酶解产物的IC50值降止0.33～0.86mg/mL，显著提高了酶解产物的ACE抑制活性。

[0011] 3）鮰鱼皮为水产副产品，价格低，且来源广泛。

附图说明

[0012] 图1制备鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的工艺流程图。

具体实施方式

[0013] 以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。

[0014] 若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

[0015] 利用乙 酸乙酯 萃取— 比色法 测定ACE抑制 活性（Muguerza B,Ramos M,Sánchez E,et al.Antihypertensive activity of milk fermented by Enterococcus faecalis strains isolated from raw milk[J].International Dairy Journal,2006,16(1):61-69.），按下式计算ACE抑制活性：

[0016] I＝（A－C）/（A－B）×100%

[0017] 式中，I—ACE抑制率；A—空白组的吸光度；B—反应体系中没有加入ACE时的吸光度；C—反应体系中有ACE和样品时的吸光度。

[0018] 实施例1

[0019] 将鮰鱼皮胶原蛋白配制成底物浓度为1％（w/v，g/mL）的溶液，调pH至7.0，用α-胰凝乳蛋白酶（来源牛胰）在40℃酶解10min，加酶量为1000U/g，酶解结束后，沸水浴灭酶，将反应混合液的pH调至8.0～9.0，用Alcalase（诺维信食品级alcalase2.4L）在50℃酶解20min，加酶量为2000U/g，酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液，将上清液pH调至中性，用真空浓缩装置浓缩至固型物含量10％（w/v，g/mL）左右，在进风温度180℃和出风温度90℃下进行喷雾干燥，即得到粉状鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽产品，利用乙酸乙酯萃取—比色法测定不同浓度鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的活性，经线性回归确定鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的IC50值为0.86mg/mL。

[0020] 实施例2

[0021] 将鮰鱼皮胶原蛋白配制成底物浓度为2％（w/v，g/L）的溶液，调pH至7.5，用α-胰凝乳蛋白酶（来源牛胰）在45℃酶解15min，加酶量为2000/g，酶解结束后，沸水浴灭酶，将反应混合液的pH调至8.5，用Alcalase（诺维信食品级alcalase2.4L）在55℃酶解25min，加酶量为2500U/g，酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液，将上清液pH调至中性，用真空浓缩装置浓缩至固型物含量10％（w/v，g/mL）左右，在进风温度195℃和出风温度100℃下进行喷雾干燥，即得到粉状鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽产品，利用乙酸乙酯萃取—比色法测定不同浓度鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的活性，经线性回归确定鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的IC50值为0.33mg/mL。

[0022] 实施例3

[0023] 将鮰鱼皮胶原蛋白配制成底物浓度为3％（w/v，g/L）的溶液，调pH至8.0，用α-胰凝乳蛋白酶（来源牛胰）在50℃酶解20min，加酶量为3000U/g，酶解结束后，沸水浴灭酶，将反应混合液的pH调至9.0，用Alcalase（诺维信食品级alcalase2.4L）在60℃酶解30min，加酶量为3000U/g，酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液，将上清液pH调至中性，用真空浓缩装置浓缩至固型物含量10％（w/v，g/mL）左右，在进风温度210℃和出风温度110℃下进行喷雾干燥，即得到粉状鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽产品，利用乙酸乙酯萃取—比色法测定不同浓度鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的活性，经线性回归确定鮰鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的IC50值为0.62mg/mL。