治疗神经退行性疾病的方法和组合物转让专利
申请号 : CN201280027382.6
文献号 : CN103582478A
文献日 : 2014-02-12
发明人 : W.C.莎士比亚 , F.G.哈鲁斯卡
申请人 : 阿里亚德医药股份有限公司
摘要 :
本发明涉及通过给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物治疗和预防神经退行性疾病的方法和组合物，其中所述变量如本文所定义。
权利要求 :
1.一种在有需要的受试者中治疗或预防神经退行性疾病的方法，其包括向所述受试者给药有效量的靶向的TKI，其中所述靶向的TKI是式I化合物：或其互变异构体，或单一异构体或异构体的混合物，其中：环T是5-元杂芳环，其含有1或2个氮原子，且剩余环原子是碳，其在至少两个环原子t t上被R 基团取代，其中在相邻环原子上的至少两个R 基团与它们连接的原子一起形成饱和、部分饱和或不饱和的5-或6-元环(环E)，其含有0-3个选自O、N和S的杂原子，并任e选被1-4个R 基团取代；
a
环A是5-或6-元芳环或杂芳环且任选被1-4个R 基团取代；
环B是5-或6-元芳环或杂芳环；
1 1 1 1 1 1 1
L 选自NRC(O)、C(O)NR、NRC(O)O、NRC(O)NR 和OC(O)NR ；
a b t 4 2 2 3 2
R、R 和R 在各情况下独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R、-OR、-NRR、-C(O)YR、-OC(O)
2 2 2 2 2 2 2 2 3 2YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化3
学键、-O-、-S-或-NR-；
e 4 2 2 3 2
R 在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R、-OR、-NRR、-C(O)YR、-OC(O)
2 2 2 2 2 2 2 2 3 2YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化3
学键、-O-、-S-或-NR-；
1 2 3
R、R 和R 独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
2 3
或者，R 和R 与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
4
R 在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
m是0、1、2、3或4；
n是2或3；
p是0、1、2、3、4或5；且，
r是0、1或2；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
2.根据权利要求1的方法，其中在式I化合物中，环T是：其中环E是5-或6-元不饱和环，其包含0-3个选自O、N和S的杂原子，且s是0、1、
2、3或4。
3.根据权利要求1的方法，其中在式I化合物中，环T是选自下述的双环杂芳环：且s是0、1、2、3或4。
4.根据权利要求1的方法，其中所述靶向的TKI是式II化合物：其中：
环C是5-或6-元杂环或杂芳环，其包含碳原子和1-3个独立选自O、N和S(O)r的杂原子；
c 4 2 2 3 2
R 在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R、-OR、-NRR、-C(O)YR、-OC(O)
2 2 2 2 2 2 2 2 2 3YR、-NRC(O)YR、-Si(R)3、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 3 2 2 3YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地3
为化学键、-O-、-S-或-NR-；且，v是0、1、2、3、4或5。
5.根据权利要求4的方法，其中环T是：其中环E是5-或6-元不饱和环，其包含0-3个选自O、N和S的杂原子，且s是0、1、
2、3或4。
6.根据权利要求5的方法，其中环A和B是芳基。
7.根据权利要求5的方法，其中环C是咪唑基。
8.根据权利要求7的方法，其中所述靶向的TKI是选自式IIa、IIb或IIc的化合物：a c b
9.根据权利要求8的方法，其中s是0；m、p和v是1；R 和R 是甲基；和R 是CF3。
10.根据权利要求1的方法，其中所述靶向的TKI是式III化合物：其中：
环D表示5-、6-杂环或杂芳环，其包含碳原子和1-3个独立选自O、N和S(O)r的杂原子；
L2是(CH2)z、O(CH2)x、NR3(CH2)x、S(CH2)x或(CH2)xNR3C(O)(CH2)x，以任一方向；
Rd在各情况下独立地选自H、卤素、=O、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)YR2、-NR2C(O)YR2、-SC(O)YR2、-NR2C(=S)YR2、-OC(=S)YR2、-C(=S)YR2、-YC(=NR3)YR2、-YP(=O)(YR4)(YR4)、-Si(R2)3、-NR2SO2R2、-S(O)rR2、-SO2NR2R3和-NR2SO2NR2R3，其中每个Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR3-；
R1、R2和R3独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
或者，R2和R3与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
R4在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
p是0、1、2、3或4；
w是0、1、2、3、4或5；
x是0、1、2或3；且
z是1、2、3或4。
11.根据权利要求10的方法，其中环T具有下述结构：其中环E是5-或6-元不饱和环，其包含0-3个选自O、N和S的杂原子，且s是0、1、
2、3或4。
12.根据权利要求11的方法，其中环A和B是芳基。
13.根据权利要求11的方法，其中环T是选自下述的双环杂芳环：且s是0、1、2、3或4。
2
14.根据权利要求13的方法，其中环D是哌嗪基且L 是CH2。
15.根据权利要求14的方法，其中所述靶向的TKI是选自式IIIa、IIIb和IIIc的化合物：
16.根据权利要求15的方法，其中s是0，m是1，p是1，Ra是甲基，Rb是CF3且Rd是甲基或-CH2CH2OH。
17.根据权利要求1的方法，其中所述靶向的TKI是选自下述的化合物：N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
3-(咪 唑 并 [1,2-a]吡 啶-3- 基 乙 炔 基 )-4-甲 基-N-(3-(4-甲 基-1H- 咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
N-(5-叔丁基异 唑-3-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
4-甲基-3-((8-(4-(甲磺酰基)苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
4-甲基-3-((8-(4-氨基磺酰基苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
(R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
N-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；
3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
N-(3-环丙基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
N-(4-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；和
3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(哌嗪-1-基甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺，
或其药学上可接受的盐。
18.根据权利要求17的方法，其中所述靶向的TKI是3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。
19.根据任一前述权利要求的方法，其中所述神经退行性疾病与线粒体功能障碍相关并选自脊髓小脑性共济失调、肌萎缩侧索硬化、线粒体肌病、脑病、乳酸性酸中毒、中风(MELAS)、伴有破损性红肌纤维病的肌阵挛癫痫(MERFF)、癫痫和亨廷顿舞蹈症。
20.根据任一前述权利要求的方法，其中所述神经退行性疾病是tau病变，并选自阿尔茨海默病、进行性核上麻痹、皮克氏病、皮质基底节变性和伴有帕金森症的与染色体17相关的额颞叶痴呆。
21.根据任一前述权利要求的方法，其中所述神经退行性疾病是多发性硬化。
22.根据任一前述权利要求的方法，其中所述靶向的TKI或其药学上可接受的盐口服给药或静脉注射给药。
23.根据任一前述权利要求的方法，其中所述靶向的TKI或其药学上可接受的盐的有效量是约5mg到约80mg。
24.根据任一前述权利要求的方法，其中所述靶向的TKI或其药学上可接受的盐每周超过一天或每七天周期平均4到7次对受试者进行给药。
25.根据权利要求24的方法，其中所述靶向的TKI或其药学上可接受的盐每天对受试者进行给药。
26.根据权利要求25的方法，其中所述靶向的TKI或其药学上可接受的盐以5±2mg、
8±2mg、12±3mg、15±3mg、20±4mg、25±5mg、30±6mg、40±8mg、45±9mg、50±10mg 或
55±11mg的日平均剂量对受试者进行给药。
27.一种在有需要的受试者中治疗或预防阿尔茨海默病的方法，其包括向所述受试者给药靶向的TKI，其量足以抑制受试者脑中的γ-分泌酶，其中所述靶向的TKI是式I化合物：或其互变异构体，或单一异构体或异构体的混合物，其中：环T是5-元杂芳环，其含有1或2个氮原子，且剩余环原子是碳，其在至少两个环原子t t上被R 基团取代，其中在相邻环原子上的至少两个R 基团与它们连接的原子一起形成饱和、部分饱和或不饱和的5-或6-元环(环E)，其含有0-3个选自O、N和S的杂原子，并任e选被1-4个R 基团取代；
a
环A是5-或6-元芳环或杂芳环且任选被1-4个R 基团取代；
环B是5-或6-元芳环或杂芳环。
1 1 1 1 1 1 1
L 选自NRC(O)、C(O)NR、NRC(O)O、NRC(O)NR 和OC(O)NR ；
a b t 4 2 2 3 2
R、R 和R 在各情况下独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R、-OR、-NRR、-C(O)YR、-OC(O)
2 2 2 2 2 2 2 2 3 2YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化3
学键、-O-、-S-或-NR-；
e 4 2 2 3 2
R 在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R、-OR、-NRR、-C(O)YR、-OC(O)
2 2 2 2 2 2 2 2 3 2YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化3
学键、-O-、-S-或-NR-；
1 2 3
R、R 和R 独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
2 3
或者，R 和R 与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
4
R 在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
m是0、1、2、3或4；
n是2或3；
p是0、1、2、3、4或5；且，
r是0、1或2；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
28.一种在有需要的受试者中治疗或预防神经退行性疾病的方法，其包含有效量的靶向的TKI，其中所述靶向的TKI是式I化合物：或其互变异构体，或单一异构体或异构体的混合物，其中：环T是5-元杂芳环，其含有1或2个氮原子，且剩余环原子是碳，其在至少两个环原子t t上被R 基团取代，其中在相邻环原子上的至少两个R 基团与它们连接的原子一起形成饱和、部分饱和或不饱和的5-或6-元环(环E)，其含有0-3个选自O、N和S的杂原子，并任e选被1-4个R 基团取代；
a
环A是5-或6-元芳环或杂芳环且任选被1-4个R 基团取代；
环B是5-或6-元芳环或杂芳环。
1 1 1 1 1 1 1
L 选自NRC(O)、C(O)NR、NRC(O)O、NRC(O)NR 和OC(O)NR ；
a b t 4 2 2 3 2
R、R 和R 在各情况下独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R、-OR、-NRR、-C(O)YR、-OC(O)
2 2 2 2 2 2 2 2 3 2YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化3
学键、-O-、-S-或-NR-；
e 4 2 2 3 2
R 在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R、-OR、-NRR、-C(O)YR、-OC(O)
2 2 2 2 2 2 2 2 3 2YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化3
学键、-O-、-S-或-NR-；
1 2 3
R、R 和R 独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
2 3
或者，R 和R 与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
4
R 在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
m是0、1、2、3或4；
n是2或3；
p是0、1、2、3、4或5；且，
r是0、1或2；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物；和药学上可接受的载体。
说明书 :
治疗神经退行性疾病的方法和组合物
[0001] 相关申请数据
[0002] 本申请要求提交于2011年4月7日的美国临时申请Nos.61/472,961和提交于2011年5月5日的61/518,427的优先权，两者全部引入本文作为参考。
技术领域
[0003] 本发明涉及通过给药本发明公开的靶向的酪氨酸激酶抑制剂或其药学上可接受的盐来治疗或预防神经退行性疾病的方法。
背景技术
[0004] 虽然与神经退行性疾病潜在的发展和进程相关的生物机理的许多细节仍不清楚，但最近已经有了重要进展。例如，帕金森病(PD)和阿尔茨海默病(AD)与蛋白错折叠和聚集相关(参见Gregersen N.J Inherit Metab Dis29:456(2006),and Whatley等,Biochim Biophys Acta1782:700(2008))。这些疾病中错折叠的蛋白的累积显示了错折叠的蛋白产生和清除中的不平衡。蛋白错折叠的产生是由基因突变、环境创伤或氧化损伤所导致的(Olzmann等,Curr Med Chem15:47(2008))。对于清除这些错折叠的蛋白，泛素蛋白酶体系统和聚集体自吞噬途径显示了其在细胞防御机理抵抗有毒错折叠的蛋白累积中的重要性(Kopito RR.Trends Cell Biol10:524–530(2000);Xie等,Nat Cell Biol9:1102–1109(2007);和Levine等,Cell2008,132:27–42(2008))。认为细胞无法应付过量错折叠的蛋白是与这些临床显著疾病相关联的一般病理学机理。
[0005] 最近的研究表明帕金蛋白可起到重要作用。帕金介导的错折叠的蛋白的Lys63-连接的聚泛素化促进其螯合成聚集小体并随后通过自噬作用清除(Olzmann等,J Cell Biol178:1025(2007)；和Olzmann等,Autophagy4:85(2008))。此外，帕金的功能缺失突变是隐性递送神经退行性疾病的主要原因，如早发PD(Kitada等,Nature392:605(1998)；和Hattori等,Lancet364:722(2004))。已经有报道，帕金在靶向损伤的线粒体的自噬中起作用(Narendra等,J Cell Biol183:795(2008))，因此其与线粒体功能障碍相关的神经退行性疾病有联系。有报道帕金保护多巴胺神经元免于tau诱导的退化(Klein等,Neurosci Lett.401:130(2006))。
[0006] 帕金被认为是对抗许多不同毒素损伤的全神经保护剂，上述毒素包 括 帕 金 泛 素 化 的 底 物 表 达 升 高 (Lo Bianco 等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A101:17510(2004);Petrucelli 等 ,Neuron36:1007(2002);Yamada 等 ,Hum.Gene Ther16:262(2005);和Yang等,Neuron37:911(2003))以及其它毒素(Darios等,Hum.Mol.Genet12:517(2003)；Hyun 等 ,J.Neurosci.Res82:232(2005);Manfredsson 等 ,Mol.Therapy11(Suppl.1):24(2005)；和Staropoli 等,Neuron37:735(2003))。 增 加 的 帕金表达减少氧化损伤(Hyun等,J.Biol.Chem277:28572(2002))，而阻断帕金表达增加 了 氧 化 损 伤(Greene等,Hum.Mol.Genet14:799(2005)；和Palacino等 ,J.Biol.Chem279:18614(2004))，这解释了帕金对抗不同损伤的普遍保护作用。
[0007] PD是慢性、进行性运动系统障碍。每年大约有50,000美国人诊断患有PD。这种神经退行性疾病的主要症状是颤抖、强直、行动迟缓和丧失平衡。此外，许多PD患者具有多种其它症状，包括情感变化、记忆力丧失、语言障碍或睡眠困难。随着疾病发展，发现许多患者在行走、谈话、吞咽或执行简单任务方面日益困难。
[0008] PD是由中脑多巴胺(DA)神经元特定、进行性神经元缺失造成的。通常地，这些神经元产生多巴胺，其是负责在黑质体和纹状体之间传递信号的化学信使，可导致流畅的、有针对性的肌肉活动。然而，多巴胺的损失导致纹状体神经细胞以不可控的方式激活，使得患者在指挥和控制行动的能力受到损伤，该损伤严重并导致重度残疾。
[0009] PD不能治愈。目前的治疗严重依赖于通过给予患者口服剂量的多巴胺药物(如多巴胺前体左旋多巴(单独或结合卡比多巴/左旋多巴)或多巴胺激动剂)以补充多巴胺。这些治疗可以提供缓解，但有严重副反应增加的风险，并经常伴随治疗效果减弱从而需要增加剂量使治疗继续，以及更多的严重副反应。非常需要针对PD的其它治疗方式。
[0010] c-Abl是帕金功能的主要调节剂并将帕金在酪氨酸143上磷酸化。磷酸化抑制帕金E3泛素连接酶活性，其导致AIMP2和FBP1的累积以及帕金细胞保护功能损失和细胞死亡。已经发现一种Abl抑制剂(STI-571)可以以催化活性维持帕金并通过预防帕金磷酸化维持神经保护状态。因此，认为抑制c-Abl是治疗PD的可行途径。Ko等,PNAS,107(38),16691-16696(2010)。利用STI-571治疗PD的一种挑战是其对血脑屏障具有弱穿透性，这已经在小鼠和人类中得到了证实。因此，需要跨越血脑屏障治疗PD的Abl抑制剂。
[0011] 阿尔茨海默病的所需治疗与PD的治疗具有一些相同特征。然而，PD和AD病因学是不一样的。在AD的情况下，治疗一般针对减少淀粉样蛋白-β肽。淀粉样蛋白-β肽是淀粉样蛋白前体蛋白的代谢产物，并认为是主要的病理学决定因素。形成淀粉样蛋白-β的N和C末端的蛋白裂解分别通过β-分泌酶和γ-分泌酶催化。减少淀粉样蛋白-β而不影响Notch-1裂解的假说可证明用作开发AD治疗的基础。Netzer等,PNAS,100(21):12444-12449(2003)。即，减少淀粉样蛋白-β形成而不减少其它γ-分泌酶底物(如Notch)的裂解的γ-分泌酶抑制剂在AD的治疗中有潜在的用途。γ-分泌酶活化蛋白(GSAP)是最近确定的不与Notch相互作用的靶点，其在细胞系中浓度降低与淀粉样蛋白-β浓度降低相关。He等,Nature.,467:95-98(2010)。在脑中累积和靶向GSAP的化合物代表了开发上述AD治疗的有效方法。
[0012] 在STI-571模型中测试STI-571的背景下，Netzer等人假设Abl激酶不是淀粉样蛋白-β生成所需的，虽然其可能不影响一些神经退行性疾病中涉及的一些其它激酶。如上的Hanger等,Trends in Mol.Med.,15(3),112-119(2009)。这些在淀粉样蛋白-β生成中可能涉及的其它激酶包括ARG、PDGFR、Src和c-kit。Netzer等,PNAS,100(21):12444-12449(2003)。尽管在体外和一些体内模式中STI-571是很有希望的，但是由于其无法穿透血脑屏障(认为穿透血脑屏障在提高治疗效果的可能性上是必需的)阻碍了其在人类临床治疗中的希望，尽管有一些对立的观点。Sutcliffe等,J.of Neuro.Res.,89:808-814(2011)。
[0013] 在靶向疗法的背景下，已经发现将微管相关蛋白(tau)整合到AD发病机制和tau病变相关障碍中。针对在神经退行性疾病中靶向tau的策略包括(i)通过抑制特殊蛋白激酶减少tau磷酸化作用；(ii)分解tau内含物；和(iii)tau免疫治疗，其中(i)是优选的方法。Hanger等,Trends in Mol.Med.,15(3),112-119(2009)。与tau磷酸化作用减少相关的特殊蛋白激酶包括糖原合酶激酶-3(GSK-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶-5(cdk5)、细胞外信号调节激酶-2(ERK2)、周期AMP依赖性蛋白激酶(PKA)、酪蛋白激酶1(CK1)、MAPK和JNK。这些激酶和与AD相关的激酶(如Fyn、Syk和c-Abl)也因与分别在Y18、Y197和Y394磷酸化tau而受到关注。如上所述。
[0014] 虽然还没有完全理解神经退行性疾病的病因学，但认为仍需要也显示出对抗其它激酶(如src、PDGFR和/或c-kit)活性的Ab1抑制剂。这些抑制剂的发展是吸引人的。申请人拥有WO2007/075869(其全部引入本文作为参考)，其中公开了一些化合物为靶向的酪氨酸激酶抑制剂。一种值得注意的靶向的TKI是普纳替尼(Ponatibnib)，目前是临床试验物质，以确定普纳替尼对慢性髓性白血病(CML)患者在慢性期(CP)、加速期(AP)或最终急变期(BP)的效果，或对Ph阳性(Ph+)的急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者的效果，这类患者对达沙替尼或尼罗替尼耐药或不耐受，或具有Bcr-Abl的T315I突变(临床试验政府识别码NCT01207440)。WO2007/075869没有明确地提及使用这些靶向的TKI治疗AD或其它神经退行性疾病。
[0015] 申请人拥有WO2011/053938(其全文引入本文作为参考)，其中公开了治疗癌症的方法，这些化合物具有广泛的激酶活性，超过了最初对Ab1抑制的关注。例如这些化合物证明有抗PDGFR、c-SRC和示于表8中的一些其它激酶的活性。
[0016] 发明概述
[0017] 已经出乎意料地发现一些靶向的TKI跨过血脑屏障并有用于抑制β-淀粉样蛋白生成，因此能治疗AD。此外，这些靶向的TKI用于靶向tau并因此治疗神经退行性疾病，包括帕金森病、阿尔茨海默病和其它本文公开的神经退行性疾病。
[0018] 一方面，本发明提供了一种在有需要的受试者中治疗或预防神经退行性疾病的方法，通过向所述受试者给药有效量的式I所示靶向的TKI：
[0019]
[0020] 或其互变异构体，或单一异构体或异构体的混合物，其中：
[0021] 环T是5-元杂芳环，其含有1或2个氮原子，且剩余环原子是碳，其在至少两个环t t原子上被R 基团取代，其中在相邻环原子上的至少两个R 基团与它们连接的原子一起形成饱和、部分饱和或不饱和的5-或6-元环(环E)，其含有0-3个选自O、N和S的杂原子，且e
任选被1-4个R 基团取代；
任选被1-4个R 基团取代；
[0022] 环A是5-或6-元芳环或杂芳环且任选被1-4个Ra基团取代；
[0023] 环B是5-或6-元芳环或杂芳环；
[0024] L1选自NR1C(O)、C(O)NR1、NR1C(O)O、NR1C(O)NR1和OC(O)NR1；
[0025] Ra、Rb和Rt在各情况下独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)2 2 2 2 2 2 2 2 2 3
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
[0026] Re在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)2 2 2 2 2 2 2 2 3 2
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
[0027] R1、R2和R3独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0028] 或者，R2和R3与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
[0029] R4在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0030] 每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
[0031] m是0、1、2、3或4；
[0032] n是2或3；
[0033] p是0、1、2、3、4或5；且，
[0034] r是0、1或2；
[0035] 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
[0036] 另一方面，本发明提供了在有需要的受试者中治疗或预防阿尔茨海默病的方法，通过向所述受试者给药靶向的酪氨酸激酶抑制剂，其量足以减少受试者脑中γ-分泌酶的活性，其中所述靶向的酪氨酸激酶抑制剂是式I化合物：
[0037]
[0038] 或其互变异构体，或单一异构体或异构体的混合物，其中：
[0039] 环T是5-元杂芳环，其含有1或2个氮原子，且剩余环原子是碳，其在至少两个环原子上被Rt基团取代，其中在相邻环原子上的至少两个Rt基团与它们连接的原子一起形成饱和、部分饱和或不饱和的5-或6-元环(环E)，其含有0-3个选自O、N和S的杂原子，且任选被1-4个Re基团取代；
[0040] 环A是5-或6-元芳环或杂芳环且任选被1-4个Ra基团取代；
[0041] 环B是5-或6-元芳环或杂芳环；
[0042] L1独立地选自NR1C(O)、C(O)NR1、NR1C(O)O、NR1C(O)NR1和OC(O)NR1；
[0043] Ra、Rb和Rt在各情况下独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)2 2 2 2 2 2 2 2 2 3
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
[0044] Re在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)2 2 2 2 2 2 2 2 3 2
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
[0045] R1、R2和R3独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0046] 或者，R2和R3与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
[0047] R4在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0048] 每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
[0049] m是0、1、2、3或4；
[0050] n是2或3；
[0051] p是0、1、2、3、4或5；且，
[0052] r是0、1或2；
[0053] 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
[0054] 另一方面，本发明提供了在有需要的受试者中治疗或预防神经退行性疾病的药物组合物，其包含有效量的靶向的酪氨酸激酶抑制剂，其中所述靶向的TKI是式I化合物：
[0055]
[0056] 或其互变异构体，或单一异构体或异构体的混合物，其中：
[0057] 环T是5-元杂芳环，其含有1或2个氮原子，且剩余环原子是碳，其在至少两个环t t原子上被R 基团取代，其中在相邻环原子上的至少两个R 基团与它们连接的原子一起形成饱和、部分饱和或不饱和的5-或6-元环(环E)，其含有0-3个选自O、N和S的杂原子，且e
任选被1-4个R 基团取代；
任选被1-4个R 基团取代；
[0058] 环A是5-或6-元芳环或杂芳环且任选被1-4个Ra基团取代；
[0059] 环B是5-或6-元芳环或杂芳环；
[0060] L1独立地选自NR1C(O)、C(O)NR1、NR1C(O)O、NR1C(O)NR1和OC(O)NR1；
[0061] Ra、Rb和Rt在各情况下独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)2 2 2 2 2 2 2 2 2 3
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
[0062] Re在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)2 2 2 2 2 2 2 2 3 2
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
[0063] R1、R2和R3独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0064] 或者，R2和R3与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
[0065] R4在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0066] 每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
[0067] m是0、1、2、3或4；
[0068] n是2或3；
[0069] p是0、1、2、3、4或5；且，
[0070] r是0、1或2；
[0071] 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物；和
[0072] 药学上可接受的载体。
[0073] 另一方面，本发明提供了试剂盒，其包括：(a)目前公开的靶向的酪氨酸激酶抑制剂，和(b)向诊断有或有发展成神经退行性疾病风险的受试者给药靶向的TKI的说明。根据本文描述的任一给药方案，将靶向的酪氨酸激酶抑制剂进行配方给药。按照最初的说明，本发明多个具体实施方案使用的靶向的酪氨酸激酶抑制剂可以是游离碱或其药学上可接受盐的形式。
[0074] 在式I化合物中的任一前述方法或药物组合物的一些具体实施方案中，所述靶向的酪氨酸激酶抑制剂选自以下化合物：
[0075] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0076] 3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0077] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0078] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0079] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0080] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0081] N-(5-叔丁基异 唑-3-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0082] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0083] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0084] 3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0085] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0086] 4-甲基-3-((8-(4-(甲磺酰基)苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0087] 4-甲基-3-((8-(4-氨基磺酰基苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0088] (R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0089] N-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；
[0090] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0091] N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0092] N-(3-环丙基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0093] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0094] N-(4-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；和
[0095] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(哌嗪-1-基甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺，
[0096] 或其药学上可接受的盐。
[0097] 本文公开的方法和药物组合物的其它特征和优点将在下面的发明详述中阐明。
[0098] 发明详述
[0099] 定义
[0100] 在阅读本文件时，除非特殊说明否则遵循下述信息和定义。
[0101] 本文中“靶向的酪氨酸激酶抑制剂”或“靶向的TKI”指的是本文公开的式I化合物，其对选自Abl、PDGFR、ARG、fyn、syk、c-kit和src中的至少一种激酶具有活性，如通过合适的体外激酶测定所确定。当靶向的TKI在体外激酶测定中有小于1μM的IC50值时，通常认为靶向的TKI对相关激酶具有活性。用于确定对Abl、PDGFR、ARG、c-kit和src活性的典型体外激酶测定描述于O'Hare等,Cancer Cell16:401-412(2009)and Supplemental Data中。
[0102] 本文中术语“普纳替尼”指的是3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)-甲基-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺(如本文实施例16中所示)并具有下述化学结构：
[0103]
[0104] 如无明确提及，术语普纳替尼仅指其游离碱，而不是药学上可接受的盐(如普纳替尼盐酸盐)。
[0105] 本文中术语“平均稳态谷浓度”指的是在一组受试者中观察到的本文公开化合物的平均血浆浓度，所述受试者作为本发明治疗的给药方案的一部分给药足以产生稳态药代动力学的一段时间(即每天给药，23天)，其中所述平均稳态谷浓度是在治疗方案的下次计划给药之前(即1小时之内)，所有受试者的平均循环浓度(如对于每天治疗方案，在给药本文公开化合物之后约24小时且在随后每天给药前测量谷浓度)。
[0106] 本文中术语“给药”或“给予”指的是本文公开化合物的给药途径。示例性的给药途径包括但不仅限于口服、静脉内、腹腔内、动脉内和肌肉内。优选的给药途径依据不同因素而改变，如包括本文公开化合物的药物组合物的组分、潜在或实际疾病的部位和疾病严重程度。虽然通常普纳替尼是口服给药，执行本发明方法也可用其它给药途径。
[0107] 本文使用的术语“单位剂量形式”指的是含有预定量的本发明化合物的适于给药的物理分散单元。示例性单位剂量形式包括但不仅限于丸剂、片剂、小胶囊、硬胶囊或软胶囊。
[0108] 本文中术语“药学上可接受的盐”指的是，在正确的医学判断范围内，适用于接触人类和低等动物组织而没有过度的毒害、刺激、过敏反应及其类似后果，并具有相称的合理收益/风险比例的盐。胺、羧酸、磷酸酯及其它类型化合物的药学上可接受的盐在本领域技术中是熟知的。例如S.M.Berge在J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19(1977)中详细描述了药学上可接受的盐，引入本文用作参考。所述盐可在分离和纯化本发明化合物的过程中原位制备，或本发明化合物的游离碱或游离酸分别与合适的碱或酸反应得到。本发明化合物的药学上可接受的无毒酸加成的盐的实例是氨基与无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)形成的盐，或与有机酸(如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用本领域技术中其它方法(如离子交换)形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等的盐。代表性的碱或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。其它药学上可接受的盐包括，当适合时，无毒铵、季铵和利用平衡离子(如卤化物、氢氧化物、羧化物、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐)形成的胺阳离子。
[0109] 本文使用的术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的佐剂”指的是与本发明化合物一起给药至患者的载体或佐剂，且其不破坏其药理活性，当以充足剂量递送治疗量的化合物时是无害的。可用于本发明组合物的药学上可接受的载体、佐剂和载剂包括但不仅限于离子交换剂、矾土、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化释药系统(SEDDS)(如D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、用于药物剂型的表面活性剂(如吐温或其它类似聚合物递送基质)，血清蛋白(如人血清白蛋白)，缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质(如鱼精蛋白硫酸盐)、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸盐、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯结构块聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊精(如u-、P-和y-环糊精)或化学改性衍生物(如羟基烷基环糊精，包括2和3-羟基丙基-环糊精或其它可溶衍生物)也可有利于提高本发明配方化合物的递送。
[0110] 本文中术语“治疗”指的是：(1)改善或稳定受试者病症或疾病或(2)预防或减轻受试者病症或疾病相关症状的发展或恶化。
[0111] 本文中术语“有效量”指的是当向受试者给药时，用于治疗疾病的本发明化合物的量对疾病的治疗足够有效。患者的任何改善都认为是充分地获得了治疗。用于治疗神经退行性疾病的本发明化合物的有效量根据给药方式、患者的年龄、体重和基本健康状况进行变化。最终，处方医生或研究者将决定适合的量和给药方案。
[0112] 本文中术语“tau病变”指的是神经退行性疾病，其特征在于细胞内内含物，如火焰状或球形神经原纤维缠结和/或神经毡线(主要在树突中发现的精细丝线结构)，其包括可溶性tau的磷酸化形式。Tau病变包括阿尔茨海默病、进行性核上麻痹、皮克氏病、皮质基底节变性和伴有帕金森症的与染色体17相关的额颞叶痴呆(FTDP-17T)。
[0113] 本文中术语“神经退行性疾病”和“神经退行性障碍”在本文中可交换使用，指任何神经系统(如中枢神经系统或外周神经系统)的疾病，其特征在于非正常细胞死亡。神经退行性疾病的实例包括阿尔茨海默病、唐氏综合症、额颞叶痴呆、进行性核上麻痹、皮克氏病、尼曼-皮克氏病、帕金森病、亨廷顿舞蹈症(HD)、齿状核红核苍白球丘脑下核萎缩、肯尼迪病(也称作脊髓延髓萎缩症)和脊髓小脑性共济失调(如1型、2型、3型(也称作马-约病)、6型、7型和17型))、脆性X染色体(雷特氏)综合症、脆性XE智力迟钝、弗里德共济失调、营养不良性肌强直、8型脊髓小脑性共济失调和12型脊髓小脑性共济失调、亚历山大病、阿尔珀斯病、肌萎缩侧索硬化、运动失调性毛细血管扩张症、巴藤病(也称作斯皮尔梅伊尔-沃格特-肖格伦-巴藤病)、卡纳万病、科凯恩综合症、皮质基底节变性、克雅氏病、缺血中风、克拉伯病、路易体痴呆、多发性硬化、多系统萎缩、佩-梅二氏病、皮克氏病、原发性侧索硬化、雷夫叙姆病、桑德霍夫氏病、席尔德病、脊髓损伤、脊髓性肌萎缩、斯蒂尔-理查森-奥尔谢夫斯基病和脊髓痨。
[0114] 本文中术语“与线粒体功能障碍相关的神经退行性疾病”指的是神经退行性疾病，其特征在于或与线粒体功能障碍相关。与线粒体功能障碍相关的示例性神经退行性疾病包括但不仅限于脊髓小脑性共济失调、肌萎缩侧索硬化、线粒体肌病、脑病、乳酸性酸中毒、中风(MELAS)、伴有破损性红肌纤维病肌阵挛癫痫(MERFF)、癫痫、帕金森病、阿尔茨海默病和亨廷顿舞蹈症。
[0115] 术语“受试者”和“患者”在本文中可交换使用。指的是人类或其它哺乳动物(如小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、羊、马或灵长类动物)，其患有或易患疾病或障碍(例如AD)，但可以有也可以没有疾病或障碍。在一些具体实施方案中，受试者是人类。
[0116] 本文中术语“烷基”，指的是包括直链(即非支链或非环的)、支链、环状或多环状非芳香烃基，其任选被一个或多个官能团取代。如果没有其它说明，“烷基”基团包含1至8个，并优选1至6个碳原子。C1-6烷基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基基团。低级烷基指的是含有1至6个碳原子的烷基。烷基的实例包括但不仅限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、戊基、异戊基、叔戊基、环戊基、己基、异己基、环己基等。烷基被取代或不被取代。说明性的取代烷基包括但不仅限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、羟基甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、苄基、取代的苄基、苯乙基、取代的苯乙基等。
[0117] 本文中术语“烷氧基”指的是烷基子集，其中如上述定义的具有指定数目的碳原子的烷基通过氧桥连接。例如，“烷氧基”指的是-O-烷基，其中烷基含有1至8个直链、支链、环状结构的碳原子。“烷氧基”的实例包括但不仅限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基、正丁氧基、仲戊氧基等。
[0118] 本文中术语“卤烷基”指的是包括具有支链和直链饱和烃，其中一个或多个碳原子被卤素取代。卤烷基的实例包括但不仅限于三氟甲基、三氯甲基、全氟乙基等。
[0119] 本文中术语“烯基”指的是包括直链、支链或环状结构的烃链，在链或环的任一稳定位置具有一个或多个不饱和碳-碳键。如无其它说明，“烯基”指的是具有2至8个，一般是2至6个碳原子的基团。例如，“烯基”可指丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、2-甲基丙-2-烯基、己-2-烯基、己-5-烯基、2,3-二甲基丁-2-烯基等。此外，烯基可以是取代或未取代的。
[0120] 本文中术语“炔基”指的是既包括直链也包括支链结构的烃链，在链或环的任何稳定位置具有一个或多个碳-碳叁键。如无其它说明，“炔基”指的是具有2至8个，一般是2至6个碳原子的基团。“炔基”实例包括但不仅限于丙-2-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、己-2-炔基、己-5-炔基等。此外，炔基是取代或未取代的。
[0121] 本文中术语“环烷基”是烷基的子集，包含3至13个碳原子的任何稳定的环状或多环状烃基，且是饱和的。这些环烷基的实例包括但不仅限于环丙基、降冰片基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等，在其它烷基部分的情况下，其可任选被取代。术语“环烷基”与术语“碳环”可交换使用。
[0122] 本文中术语“环烯基”是烯基的子集，包含3至13个碳原子(优选5至8个碳原子)的任何稳定的环状或多环状烃基，其包含沿着环的任何位置的一个或多个不饱和碳-碳双键。环烯基的实例包括但不仅限于环戊烯基、环己烯基等。
[0123] 本文中术语“环炔基”是炔基的子集，包含5至13个碳原子的任何稳定的环状或多环状烃基，其包含沿着环的任一位置的一个或多个不饱和碳-碳叁键。在其它烯基和炔基部分的情况下，环烯基和环炔基可任选被取代。
[0124] 本文中术语，“杂环”、“杂环基”或“杂环的”指的是具有5至14个(优选5至10个)环原子的非芳香环系，其中一个或多个(优选1至4个)环碳原子，各被杂原子(如N、O或S)替换。杂环的非限制性实例包括3-1H-苯并咪唑-2-酮、(1-取代的)-2-氧代-苯并咪唑-3-基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉基、3-吗啉基、4-吗啉基、2-硫吗啉基、3-硫吗啉基、4-硫吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、
3-吡咯烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷基、二唑酮基、N-取代的二唑酮基、1-肽内酰胺(phthalimidinyl)、苯并氧杂环己烷基、苯并吡咯烷基、苯并哌啶基、苯并氧杂环戊烷基、苯并硫杂环戊烷基和苯并噻烷基。本文使用的还包括在术语“杂环基”或“杂环”的范围中的是含杂原子的非芳香环与一个或多个芳香或非芳香环稠合的基团，如吲哚啉基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接部分或点在含杂原子的非芳香环上。术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”，无论是饱和或部分饱和的，还指的是任选取代的环。
3-吡咯烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷基、二唑酮基、N-取代的二唑酮基、1-肽内酰胺(phthalimidinyl)、苯并氧杂环己烷基、苯并吡咯烷基、苯并哌啶基、苯并氧杂环戊烷基、苯并硫杂环戊烷基和苯并噻烷基。本文使用的还包括在术语“杂环基”或“杂环”的范围中的是含杂原子的非芳香环与一个或多个芳香或非芳香环稠合的基团，如吲哚啉基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接部分或点在含杂原子的非芳香环上。术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”，无论是饱和或部分饱和的，还指的是任选取代的环。
[0125] 本文中术语“芳基”，其单独使用或作为“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基-烷基”中较大的部分，指的是具有6至14个环原子的芳香环，如苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。“芳基”环可含有一个或多个取代基。术语“芳基”可与术语“芳基环”相互替换。
“芳基”还包括稠合的多芳香环系，其中芳环与一个或多个环稠合。有用的芳基环基团的非限制性实例包括苯基、羟基苯基、卤苯基、烷氧基苯基、二烷氧基苯基、三烷氧基苯基、亚烷基二氧基苯基、萘基、菲基、蒽基、菲基等，以及1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。本文使用的还包括在术语“芳基”范围内的是芳环与一个或多个非芳香环稠合的基团，例如茚满基、菲啶基或四氢萘基，其中连接部分或点在芳香环上。
“芳基”还包括稠合的多芳香环系，其中芳环与一个或多个环稠合。有用的芳基环基团的非限制性实例包括苯基、羟基苯基、卤苯基、烷氧基苯基、二烷氧基苯基、三烷氧基苯基、亚烷基二氧基苯基、萘基、菲基、蒽基、菲基等，以及1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。本文使用的还包括在术语“芳基”范围内的是芳环与一个或多个非芳香环稠合的基团，例如茚满基、菲啶基或四氢萘基，其中连接部分或点在芳香环上。
[0126] 本文中术语“杂芳基”指的是具有5至14个环原子的稳定的杂环和多杂环芳香部分。杂芳基可以是取代的或未取代的，并可包含一个或多个环。典型的杂芳环的实例包括5元单环基团，如噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、异噻唑基、呋咱基、异 唑基、噻唑基等；6元单环基团，如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等；和多环杂环基团，如苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、异苯并呋喃基、色烯基、 吨基、苯并氧硫杂环己烯基、吲嗪基、异吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并噻唑基、苯并咪唑、四氢喹啉基、噌嗪基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌二氮苯基(perimidinyl)、菲咯啉基、吩嗪基、异噻唑基、吩噻嗪基、吩 嗪基等(参见如Katritzky,Handbook of Heterocycle Chemistry)。杂芳环的其它具体实例包括2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异 唑基、4-异 唑基、5-异 唑基、2- 二唑基、5- 二唑基、2- 唑基、4- 唑基、5-唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、5-四唑基、2-三唑基、5-三唑基、
2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并 唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吖啶基或苯并异 唑基。杂芳基还包括杂芳香环稠合到一个或多个芳香或非芳香环上的基团，连接部分或连接点在杂芳香环上。实例包括四氢喹啉、四氢异喹啉和吡啶并[3,4-d]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪基、吡唑并[1,5-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,5-a]嘧啶基、吡唑并[1,5-b][1,2,4]三嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、咪唑并三嗪基、吡咯并[2,3-d]嘧啶基、三唑并嘧啶基、吡啶并吡嗪基。术语“杂芳基”还指代任选取代的环。术语“杂芳基”与术语“杂芳环”或术语“杂芳香的”相互替换。
2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并 唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吖啶基或苯并异 唑基。杂芳基还包括杂芳香环稠合到一个或多个芳香或非芳香环上的基团，连接部分或连接点在杂芳香环上。实例包括四氢喹啉、四氢异喹啉和吡啶并[3,4-d]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪基、吡唑并[1,5-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,5-a]嘧啶基、吡唑并[1,5-b][1,2,4]三嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、咪唑并三嗪基、吡咯并[2,3-d]嘧啶基、三唑并嘧啶基、吡啶并吡嗪基。术语“杂芳基”还指代任选取代的环。术语“杂芳基”与术语“杂芳环”或术语“杂芳香的”相互替换。
[0127] 方法
[0128] 在脑中化合物累积到药理学相关水平的能力是一系列因素的函数。所述因素的部分列表包括化合物从结合在血中的蛋白中扩散出去的能力、穿过血脑屏障进入脑中的能力、避免被p-糖蛋白外流泵主动除去的能力，以及免于脑中的代谢或其它清除机理失活的能力。那些各个特征不能基于给定化合物的化学结构以有用的精密度和置信度进行预测，更不用说其净累积的净效应，因此只能凭经验确定。在任一那些特种中的不利行为可除去脑中的有效累积。
[0129] 在啮齿动物中的药代动力学试验中，我们已经发现潜在的靶向的酪氨酸激酶抑制剂，普纳替尼，不仅到达脑并累积，而且实际上在脑中累积的水平是在血液中的2到3倍。这是令人意外的偶然发现。普纳替尼在脑中非常有利的累积结合其对激酶(如Ab1、PDGFR、c-kit和src)的显著抑制能力，使得药理学相对浓度的药物递送到脑，如在脑中以有效抑制β-淀粉样蛋白生成或调节tau磷酸化的水平，所述β-淀粉样蛋白生成或tau磷酸化与神经退行性障碍包括AD相关。对于普纳替尼的激酶抑制性质，包括尤其以IC50低于50nM抑制的激酶和以IC50低于10nM抑制的激酶的部分列表，请参见O'Hare等,Cancer Cell16:401-412(2009)(Supplemental Data)和本发明公开的实施例。虽然未限制本发明为任何一种作用机理，但是该潜在药物在脑中累积的能力使得普纳替尼成为治疗神经退行性疾病包括AD的非常有吸引力的药物。
[0130] 如本文所讨论的，本发明提供了一种通过向有需要的患者给药有效量的式I化合物(如普纳替尼或其药学上可接受的盐)来治疗神经退行性障碍的方法。
[0131] 在一些具体实施方案中，本发明提供了一种治疗或抑制神经退行性障碍包括阿尔茨海默病发展的方法，包括下述步骤：(a)提供患有神经退行性障碍包括阿尔茨海默病或有患其风险的受试者；和(b)向受试者给药有效量的式I化合物来治疗或抑制神经退行性障碍包括阿尔茨海默病的发展。
[0132] 在一些具体实施方案中，本发明提供了一种治疗或抑制阿尔茨海默病发展的方法，包括下述步骤：(a)提供患有阿尔茨海默病或有患其风险的受试者；和(b)向受试者给药式I化合物或其药学上可接受的盐，其量足以降低受试者脑中γ-分泌酶的活性。
[0133] 在任一上述方法中，所述神经退行性疾病为帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化或本文公开的任一其它神经退行性疾病。在具体实施方案中，神经退行性疾病与线粒体功能障碍相关(如脊髓小脑共济失调、肌萎缩侧索硬化、线粒体病、脑病、乳酸性酸中毒、中风(MELAS)、伴有破损性红肌纤维病肌阵挛癫痫(MERFF)、癫痫或亨廷顿舞蹈症)。在一些实施方案中，神经退行性疾病是tau病变(如进行性核上麻痹、皮克氏病、皮质基底节变性和伴有帕金森症的与染色体17相关的额颞叶痴呆)。
[0134] 治疗
[0135] 本发明的治疗可在患者家中、医生办公室、诊所、医院门诊部或其它地方进行。治疗一般在医院开始，以便医生能直接观察治疗效果并根据需要做出调整。治疗的持续时间取决于患者的年龄和状态、患者神经退行性疾病的阶段以及患者对治疗的反应。此外，具有更大风险发展成神经退行性疾病的人(如有遗传因素的人)可接受普纳替尼治疗来抑制或延缓疾病的发作、进展或症状。
[0136] 本发明的方法可用于治疗与线粒体功能障碍相关的神经退行性疾病。许多进行性神经疾病通过线粒体细胞凋亡与神经元破坏相关。脊髓小脑共济失调产生于共济失调基因的遗传缺陷，其涉及线粒体中铁的传输(Babcock等,Science276:1709(1997))；人类耳聋张力障碍是由于一小部分线粒体蛋白进入装置中的缺陷(Koehler等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA96:2141(1999))；肌萎缩侧索硬化的一个熟知原因是Cu-Zn超氧化物岐化酶的缺乏，其位于线粒体膜间腔以及细胞质中(Deng等,Science261:1047(1993))。发现数种环境毒素通过抑制呼吸复合体I并促进活性氧物质的生成引起帕金森病，这种发现使得帕金森病研究的基础集中于该复合体(Dawson等,Science302:819(2003))。最近，PINK1编码的线粒体蛋白已经在线粒体和帕金森病之间提供了直接联系(Valente等,Science304:1158(2004))。阿尔茨海默病也通过线粒体蛋白ABAD(淀粉样蛋白的靶点)联系到线粒体毒性(Lustbader等,Science304:448(2004))。亨廷顿舞蹈症与能量代谢(其广泛存在)的缺陷相关，其影响脑和外周组织，并由线粒体功能障碍引起(Leegwater-Kim等,NeuroRx1:128(2004))。
[0137] 本发明的方法可用于治疗神经退行性病症，其特征在于错折叠的蛋白的累积，包括但不局限于帕金森病、阿尔茨海默病和tau病变。
[0138] 阿尔茨海默病
[0139] AD的特征在于认知功能的进行性减退。所述疾病的神经病理学包括纤维缠结的累积、含斑块的β-淀粉样蛋白、营养障碍神经炎，和突触以及神经元的丧失 (Selkoe,D. 等 ,Alzheimer's Disease,Ed2.Terry R. 等 ,eds.pg.293-310,1999.Philadelphia:Lippincott,Williams和Wilkins)，但这些病症先于空间和长期记忆产生的缺陷(Vitolo等,Proc NatlAcad Sci USA.99:13217(2002))。AD可偶发，也可为家族遗传性形式。虽然偶发形式更普遍，但是家族性AD的研究可对偶发性AD提供参考，因为两者的病理是相似的。家族性AD是由于早老素基因，即γ-分泌酶酶复合体的主要组成部分的突变；或淀粉样蛋白前体蛋白，即γ-分泌酶的底物和β-淀粉样蛋白的前体。这些突变导致β-淀粉样蛋白斑块在患病个体的脑中累积。
[0140] AD诊断的一套标准包括：(i)通过检查和客观测试确定的痴呆；(ii)在两个或多个认知区域中的缺陷；(iii)记忆和其它认知功能的进行性恶化；(iv)意识不清；和(v)在40和90岁之间发作。
[0141] 帕金森病
[0142] 存在一种或多种下述症状可用作PD诊断的一部分：震颤，如一只胳膊或一条腿无意地、有节奏震颤；肌肉强直、坚硬或不适；任何日常生活活动中的普遍性缓慢，如运动不能或运动过慢；行走、平衡或摆姿势困难；书写改变；情感变化；记忆丧失；说话问题；和难以入睡。检查患者症状、活动、药物治疗、并存的医疗问题或可能的有毒的暴露在诊断PD中都是有用的。此外，可以检测患者是否存在或不存在可以表征具有或发展成神经退行性疾病可能性增加的基因突变。例如，NURR1、α-突触核蛋白、帕金、MAPT、DJ-1、PINK1、SNCA、NAT2或LRRK2基因中存在一种或多种特定突变或多态性可用于诊断患有帕金森病或有患其风险。参见如美国专利申请公开Nos.2003-0119026和2005-0186591；Bonifati,Minerva Med.96:175-186,2005；和Cookson等,Curr.Opin.Neurol.18:706-711,2005，每篇文献全部引入本文作为参考。
[0143] 式I化合物
[0144] 如本文所讨论的，已经发现一些靶向的TKI，由于具有抑制一些酪氨酸激酶(如PDGFR、src和c-kit)和跨越血脑屏障的能力，因此可适用于治疗神经退行性病症。一类这样的靶向的TKI包括公开于WO2007/075869中的化合物。
[0145] 适于本发明公开的方法和药物组合物的靶向的TKI是式I化合物：
[0146]
[0147] 或其互变异构体，或单一异构体或异构体的混合物，其中：
[0148] 环T是5-元杂芳环，其包含有1或2个氮原子，且剩余环原子是碳，至少两个环原t t子被R 基团取代，其中在相邻环原子上的至少两个R 基团与它们连接的原子一起形成饱和、部分饱和或不饱和的5-或6-元环(环E)，其含有0-3个选自O、N和S的杂原子，且任e
选被1-4个R 基团取代；
选被1-4个R 基团取代；
[0149] 环A是5-或6-元芳环或杂芳环且任选被1-4个Ra基团取代；
[0150] 环B是5-或6-元芳环或杂芳环；
[0151] L1选自NR1C(O)、C(O)NR1、NR1C(O)O、NR1C(O)NR1和OC(O)NR1；
[0152] Ra、Rb和Rt在各情况下独立地选自卤素、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)2 2 2 2 2 2 2 2 2 3
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
[0153] Re在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)2 2 2 2 2 2 2 2 3 2
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)YR、-YP(=O)
4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地为化
3
学键、-O-、-S-或-NR-；
[0154] R1、R2和R3独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0155] 或者，R2和R3与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
[0156] R4在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0157] 每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
[0158] m是0、1、2、3或4；
[0159] n是2或3；
[0160] p是0、1、2、3、4或5；且，
[0161] r是0、1或2；
[0162] 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
[0163] 下述部分公开了式I化合物的多种子集。除非明确提及，在每个子集中，没有明确提及的变量具有上述方案所定义的意义。
[0164] 在式I的一些具体实施方案中，环T是：
[0165]
[0166] 其中环E是5-或6-元不饱和环，其包含0-3个选自O、N和S的杂原子，且s是0、1、2、3或4。
[0167] 用于本文公开的方法和药物组合物的化合物包括具有下述结构环T的化合物：
[0168]
[0169] 环E是5-或6-元不饱和环(如上所述，由两个Rt基团与其连接的环T原子一起形成)且s是0、1、2、3或4。这些通过式I化合物说明，其中稠合的环T环系是下述之一e(其中描述了任选的R 取代基之一)：
[0170]
[0171] 在式I化合物中的一些具体实施方案中，环T是选自下述的双环杂芳环：
[0172]
[0173] 且s是0、1、2、3或4。
[0174] 对于前述化合物的大类和亚类，作为本发明的所有化合物，环A和环B如前述所定义。
[0175] 在一些具体实施方案中，环A选自：
[0176]
[0177] 在式I化合物的一些具体实施方案中，环B是如本文定义的5或6-元芳基或杂芳环。
[0178] 在一些具体实施方案中，环B是：
[0179]
[0180] 在式I化合物中的一些具体实施方案中，环A和B是芳基。
[0181] 在式I化合物中的一些具体实施方案中，Rb取代基之一是5-或6-元环(环C)，其可以是杂芳基或杂环，包含碳原子和1-3个独立选自O、N和S(O)r的杂原子，且环C任选在碳或杂原子上被1至5个取代基Rc取代。
[0182] 在一些具体实施方案中，所述靶向的TKI是式II化合物：
[0183]
[0184] 其中：
[0185] 环C是5-或6-元杂环或杂芳基环，其包含碳原子和1-3个选自O、N和S(O)r的杂原子；
[0186] Rc在各情况下独立地选自卤素、=O、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)2 2 2 2 2 2 2 2 2 3
YR、-NRC(O)YR、-Si(R)3、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地
3
为化学键、-O-、-S-或-NR-；且
YR、-NRC(O)YR、-Si(R)3、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个Y独立地
3
为化学键、-O-、-S-或-NR-；且
[0187] v是0、1、2、3、4或5。
[0188] 在一些具体实施方案中，环C选自：
[0189]c
[0190] 其中R 和v如上述所定义。
[0191] 在环C存在的式I化合物的一些具体实施方案中，环A和B是芳基。
[0192] 在环C存在的式I化合物的一些具体实施方案中，环T是：
[0193]
[0194] 其中环E是5-或6-元不饱和环，其包含0-3个选自O、N和S中的杂原子，且s是0、1、2、3或4。
[0195] 式I化合物的说明性子集包括下述结构：
[0196]
[0197] 具体化为以下述非限制性说明实施例：
[0198]
[0199] 其中描述了数个说明性–[环A]–[L1]–[环B]–[环C]–部分。
[0200] 在一些式I化合物的具体实施方案中，环C是咪唑基。其中感兴趣的化合物，式II化合物中环C是咪唑环，任选被一个或多个Rc基团取代。其中对环C具有单一低级烷基(如甲基)Rc基的亚类化合物特别感兴趣。
[0201] 在一些环C是咪唑基的具体实施方案中，所述靶向的TKI是选自式IIa、IIb或IIc的化合物：
[0202]
[0203] 在这些具体实施方案的一些具体实施方案中，s是0；m、p和v是1；Ra和Rc是甲基；和Rb是CF3。
[0204] 在式I化合物的一些具体实施方案中，所述靶向的TKI是下式所示的化合物：
[0205]
[0206] 其中：
[0207] 环D表示5-、6-杂环或杂芳环，其包含碳原子和1-3个独立选自O、N和S(O)r的杂原子；
[0208] L2是(CH2)z、O(CH2)x、NR3(CH2)x、S(CH2)x或(CH2)xNR3C(O)(CH2)x，在任一方向；
[0209] Rd在各情况下独立地选自H、卤素、=O、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)2 2 2 2 2 2 2 2 2 3
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
YR、-OC(O)YR、-NRC(O)YR、-SC(O)YR、-NRC(=S)YR、-OC(=S)YR、-C(=S)YR、-YC(=NR)
2 4 4 2 2 2 2 2 3 2 2 3
YR、-YP(=O)(YR)(YR)、-Si(R)3、-NRSO2R、-S(O)rR、-SO2NRR 和-NRSO2NRR，其中每个
3
Y独立地为化学键、-O-、-S-或-NR-；
[0210] R1、R2和R3独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0211] 或者，R2和R3与它们连接的原子一起形成5-或6-元饱和、部分饱和或不饱和环，其任选被取代并含有0-2个选自N、O和S(O)r的杂原子；
[0212] R4在各情况下独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基；
[0213] 每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环和杂芳基部分任选被取代；
[0214] p是0、1、2、3或4；
[0215] w是0、1、2、3、4或5；
[0216] x是0、1、2或3；且
[0217] z是1、2、3或4。
[0218] 在环D存在的一些具体实施方案中，环T具有下述结构：
[0219]
[0220] 其中环E是5-或6-元不饱和环，其包含0-3个选自O、N和S的杂原子，且s是0、1、2、3或4。
[0221] 这些化合物的非限制性实例包括下述结构：
[0222]
[0223] 如下述实例所说明：
[0224]
[0225]
[0226] 在一些环D存在的具体实施方案中，环A和B是芳基。
[0227] 在一些环D存在的具体实施方案中，环T是选自下述的双环杂芳环：
[0228]
[0229] 且s是0、1、2、3或4。
[0230] 其中式III化合物中的–[环B]–[L2]–[环D]部分的非限制性、说明性实例包括：
[0231]
[0232] 在式I化合物的具体实施方案中，感兴趣的化合物包括环D是哌嗪环且在氮原子d d上被R 取代的式III化合物。其中对R 是取代的或未取代的低级(即1-6个碳)烷基的化合物特别感兴趣，如在部分下述实施例中N-甲基哌嗪部分所述。
[0233] 在一些环D存在的具体实施方案中，环D是哌嗪基且L2是CH2。在一些具体实施方案中，所述靶向的TKI是选自式IIIa、IIIb和IIIc的化合物：
[0234]
[0235] 在这些实施方案中的具体实施方案中，s是0，m是1，p是1，Ra是甲基，Rb是CF3和Rd是甲基或-CH2CH2OH。
[0236] 在式II和式III化合物的具体实施方案中，环T是任意6/5稠合的杂芳环系，任选被最多三个Re基团取代。对s是0的化合物特别感兴趣。还感兴趣的是，s是1-3且至少一个Re是卤素、低级烷基、烷氧基、氨基、-NH-烷基、-C(O)NH-烷基、-NHC(O)-烷基、-NHC(O)NH-烷基、-NHC(NH)-烷基、-NHC(NH)NH2、-NH(CH2)x-杂芳基、-NH(CH2)x-杂环、-NH(CH2)x-芳基或-(CH2)xC(O)NH2，其中x是0、1、2或3，且“烷基”包括直链(即支链和非环的)、支链和环烷基，且其中芳基、杂芳基、杂环基环是任选被取代的混合物。前述说明性、非限制性实例包括式II和式III的化合物，其中环T是下述之一：
[0237]
[0238] 在式II和式III化合物的具体实施方案中，环T是任选取代的咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,2-b]哒嗪、咪唑并[1,2-a]吡嗪、吡唑并[1,5-a]嘧啶、吡唑并[1,5-a]吡啶、吡唑并[1,5-c]嘧啶和吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪。
[0239] 在式II和式III化合物的一些具体实施方案中，环A和B是芳基。
[0240] 该亚类的说明性、非限制性实例包括式IIa、IIb、IIc、IIIa、IIIb和IIIc化合物：
[0241]
[0242]
[0243] 其中所述变量(如Ra、Rb、Rc、Rd、Re、m和p)如前述定义，且s是从0至4的整数。
[0244] 在式IIa、IIb和IIc化合物的具体实施方案中，s是0；m、p和v是1；且Ra是CH3，b cR 是CF3和R 是甲基。
[0245] 在式IIIa、IIIb、IIIc化合物的具体实施方案中，s是0；m和p是1；且Ra是CH3，b dR 是CF3和R 是CH3或CH2CH2OH。
[0246] 在一些具体实施方案中，所述靶向的TKI选自：
[0247] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0248] 3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0249] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0250] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0251] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0252] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0253] N-(5-叔丁基异 唑-3-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0254] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0255] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0256] 3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0257] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0258] 4-甲基-3-((8-(4-(甲磺酰基)苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0259] 4-甲基-3-((8-(4-氨基磺酰基苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺；
[0260] (R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0261] N-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；
[0262] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0263] N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0264] N-(3-环丙基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；
[0265] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺；
[0266] N-(4-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺；和
[0267] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(哌嗪-1-基甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺，
[0268] 或其药学上可接受的盐。
[0269] 特别感兴趣的用于本发明方法和药物组合物的靶向的TKI是3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。该化合物(普纳替尼)的特别感兴趣的药学上可接受的盐是其盐酸盐。
[0270] 在式I化合物的一些具体实施方案中，所述靶向的酪氨酸激酶抑制剂是下式所述化合物：
[0271]
[0272] 其中：
[0273] L1是NR1C(O)或C(O)NR1；
[0274] 环D是5-或6-元杂环或杂芳环，其包含碳原子和1-3个独立选自O、N和S(O)r的杂原子；
[0275] 环C是5-或6-元杂环基或杂芳环，其包含碳原子和1-3个独立选自O、N和S(O)r的杂原子；
[0276] L2是-(CH2)z-；
[0277] Ra在各情况下独立地选自卤素、烷基和环烷基；
[0278] Rb在各情况下独立地选自卤素、烷基和环烷基；
[0279] Rc在各情况下独立地选自卤素、烷基和环烷基；
[0280] Rd在各情况下独立地选自卤素、烷基、环烷基和-NR2R3；
[0281] Re在各情况下独立地选自卤素、烷基、环烷基、-NR2R3、烷氧基、氨基、-NH-烷基、-C(O)NH- 烷 基、-NHC(O)- 烷 基、-NHC(O)NH- 烷 基、-NHC(NH)- 烷 基、-NHC(NH)NH2、-NH(CH2)x-杂芳基、-NH(CH2)x-杂环基、-NH(CH2)x-芳基和-(CH2)xC(O)NH2，其中x是0、1、2或3；
[0282] R1、R2和R3在各情况下独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳2 3 2 3
基、杂环基和杂芳基，或R 和R 以及至少有一个R 和R 连接的氮原子一起形成5-或6-元杂环基或杂芳环；
基、杂环基和杂芳基，或R 和R 以及至少有一个R 和R 连接的氮原子一起形成5-或6-元杂环基或杂芳环；
[0283] 每个烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基和杂环基部分是未取代的或被选自下述一个或多个取代基取代：氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羟基、烷氧基、酰氧基、卤烷氧2 3 2 2 2
基、=O、=S、=NH、=NNRR、=NNHC(O)R、=NNHCO2R 和=NNHSO2R，每个芳基和杂芳基部分是未取代的或被选自下述的一个或多个基团取代：氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羟基、烷氧基、酰氧基和卤烷氧基;
基、=O、=S、=NH、=NNRR、=NNHC(O)R、=NNHCO2R 和=NNHSO2R，每个芳基和杂芳基部分是未取代的或被选自下述的一个或多个基团取代：氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羟基、烷氧基、酰氧基和卤烷氧基;
[0284] m是0、1、2、3或4；
[0285] p是0、1、2、3或4；
[0286] r是0、1或2；
[0287] s是0、1、2或3；
[0288] v是0、1、2、3、4或5；
[0289] w是0、1、2、3、4或5；且
[0290] z是1、2、3或4；
[0291] 或其药学上可接受的盐。
[0292] 制剂、剂量和给药
[0293] 式I化合物可配制成包含式I化合物(作为活性药物成分)或其药学上可接受的盐和药学上可接受载体的药物组合物。类似地，普纳替尼或其药学上可接受的盐(如单盐酸盐)，可配制用于给药(如口服给药)，其利用任一原料和有用的方法达成该目的。
[0294] 含有适于给药的式I化合物的药学上可接受的组合物可利用熟知的多种常规材料和方法进行配制。虽然组合物可为溶液、悬浮液或乳液形式，但是用于治疗PD特别感兴趣的是固体口服剂型，如胶囊、片剂、明胶胶囊、小胶囊等。本领域技术中制备制剂包括前述单元剂型的熟知方法，例如在“Remington:The Science and Practice of Pharmacy”(20th ed.,ed.A.R.Gennaro,2000,Lippincott Williams&Wilkins)中。在胶囊中可仅含式I化合物(如普纳替尼或其药学上可接受的盐)，或与一种或多种可选的药学上可接受的赋形剂(如填充剂、粘合剂、稳定剂、防腐剂、助流剂、崩解剂、着色剂、薄膜包衣等，如下所述)组合。
[0295] 例如，制备的白色不透明胶囊含有名义上的2mg普纳替尼游离碱，其以盐酸盐形式提供，没有赋形剂。制备的白色不透明胶囊也可以含有5mg、15mg或20mg普纳替尼游离碱，其以盐酸盐形式提供，混和有常规赋形剂。在说明性胶囊混合物中用作赋形剂的惰性组分包括一种或多种填充剂、助流剂、润滑剂和崩解剂。例如，胶囊混合物可制备成5、15和20mg胶囊，其包含普纳替尼盐酸盐，以及胶体二氧化硅(约0.3%w/w，助流剂)、无水乳糖(约44.6%w/w，填充剂)、硬脂酸镁(约0.5%w/w，润滑剂)、微晶纤维素(约44.6%w/w，填充剂)和淀粉羟乙酸钠(约5%w/w，崩解剂)。胶囊壳含有明胶和二氧化钛。
[0296] 配制方法使用常规混和和包囊方法以及机械。将普纳替尼的盐酸盐和除了硬脂酸镁的所有赋形剂混合物在V-混和器中混和并通过筛磨磨成粉。加入硬脂酸镁并再次混和材料。从V-混和器中取样以确定混和均匀度。检测混合物的堆密度、振实密度、流动性和粒径分布。根据单位剂型的强度，然后将混合物包囊入“3”号、“4”号或“1”号胶囊壳。
[0297] 利用常规的药物赋形剂(包括以下一种或多种：填充剂或填充剂的混合物、崩解剂、助流剂、润滑剂、薄膜包衣，和类似较高强度胶囊中所用的包衣溶剂的混合物)将普纳替尼配制成片剂。例如，可利用下述相对量和比例(重量/重量)制备片剂：普纳替尼(90g，以盐酸盐形式提供，15.0%w/w)、胶体二氧化硅(1.2g,0.2%w/w)、乳糖单水合物(240.9g,40.15%w/w)、硬脂酸镁(3g,0.5%w/w)、微晶纤维素(240.9g,40.15%w/w)和淀粉羟乙酸钠(24g,4.0%w/w)，其中基于使用的药物量调节乳糖单水合物的量。
[0298] 可使用与胶囊的情况下使用的同种类的机械和操作混和普纳替尼和赋形剂。然后通过常规方法将所得的均匀混合物压制成片剂，如旋转压片机调节目标片剂重量，如300mg用于45mg片剂或100mg用于15mg片剂；如45mg片剂的平均硬度为13kp，15mg片剂的平均硬度为3kp；和脆度不超过1%。这样产生的片剂核心可利用常规薄膜包衣材料(如II White悬浮溶液)喷雾，产生如相对于片剂中心重量～2.5%的重量增长。
[0299] 在与适合的药学上可接受载体配制成所需剂型后，本发明公开的组合物可通过口服、直肠、胃肠外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(通过透皮贴剂、粉剂、软膏或滴剂)、舌下给药、含服、口或舌喷雾或其类似方式给药于人类和其它动物。
[0300] 根据本发明的方法、试剂盒和药物组合物，治疗一般由经过一段时间给药的多剂量的式I化合物组成。给药可以每天、每周(或以其它多天间隔)一次或多次，或以间隔时间表，且该循环重复给定次数(如2-10次循环)或不定次数。
[0301] 最佳给药取决于给药途径。有效剂量可根据体重或体表面积计算。本领域技术人员根据人类临床试验中观测到的药代动力学数据很容易得到最佳合适剂量。最终给药方案由主治医师确定，同时考虑改变药物作用的多种因素，如药物特殊活性、损伤的严重程度和受试者的反应能力、年龄、症状、体重、受试者性别和饮食及其它临床因素。
[0302] 在具体实施方案中，式I化合物以5–80mg(如从5至10mg、10至25mg、25至35mg、35至50mg、50至60mg或60至80mg)的单位剂量给药。在一些具体实施方案中，单位剂量是5–45mg或15–45mg。普纳替尼的优选剂量强度包括但不仅限于15mg、30mg和45mg。
[0303] 本发明不同具体实施方案中特别感兴趣的是口服给药，包括按上述提及的以每天时间表或以间隔时间表并以上述剂量水平口服给药。通过非限制性实例的方式，每天口服给药5–80mg普纳替尼，并在一些实例中，5–45mg普纳替尼是目前特别感兴趣的。在具体实施方案中，以每日为基础，口服给药5、10、15、30或45mg普纳替尼(如普纳替尼盐酸盐)。
[0304] 可选择或调节在本发明任一实施方案中给药的普纳替尼的量和给药时间表，以产生在血浆中普纳替尼从5到200nM的平均稳态谷浓度(如5±2nM、8±3nM、12±3nM、15±3nM、20±5nM、30±5nM、40±5nM、50±10nM、60±10nM、80±20nM、100±20nM、
120±20nM、150±25nM、175±25nM或200±25nM的普纳替尼平均稳态谷浓度)。
120±20nM、150±25nM、175±25nM或200±25nM的普纳替尼平均稳态谷浓度)。
[0305] 可选择或调节在本发明任一实施方案中给药的普纳替尼的量和给药时间表，以有效地显著减少受试者脑中所需的相关激酶活性和/或β-淀粉样蛋白。
[0306] 在具体实施方案中，以平均每天剂量为3±1mg、5±2mg、8±2mg、12±3mg、15±3mg、20±4mg、25±5mg、30±6mg、40±8mg、45±9mg、50±10mg或55±11mg的剂量将式I化合物给药至受试者。
[0307] 在具体实施方案中，向受试者给药式I化合物，每周一天或多天，在部分情况下包括每天、每两天、每三天以及以时间表，如QDx6、QDx5、QDx4、QDx3和QDx2(即分别以每周6、5、4、3或2天)。在某一天里，药物在一天之中可以以一个剂量或分成两个或三个剂量(即每日一次，每日两次或每日三次)进行给药。
[0308] 因为式I化合物具有口服生物利用度，式I化合物(如普纳替尼)可口服以及胃肠外(如i.v.)给药，或通过其它药学上可接受的给药途径。因此本发明的活性化合物可配制成口服、含服、鼻内、胃肠外(如静脉内、肌内或皮下)、直肠给药，以吸入或吹入给药的形式，或配制活性化合物用于局部给药。
[0309] 对于口服给药，药物组合物可采取的形式如通过常规方法与药学上可接受的赋形剂制备片剂或胶囊，可接受的赋形剂如粘合剂(如预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(如乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(如土豆淀粉或淀粉羟乙酸钠)或湿润剂(如十二烷基硫酸钠)。片剂可通过本领域技术中熟知的方法进行包衣。用于口服给药的液体制剂可采取的形式如溶液、糖浆剂或悬浮液，或它们可存在为干燥产品用于在使用前用水或其它适合载剂配制。这些液体制剂可与药学上可接受的添加剂以常规方式进行制备，药学上可接受的添加剂如悬浮剂(如山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用脂)；乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水载剂(如杏仁油、油酯或乙醇)；和防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。
[0310] 对于含服给药，组合物可以常规方式配制成片剂或锭剂形式。
[0311] 对于鼻内给药或吸入给药，本发明的活性化合物可以以溶液或悬浮液的形式从由患者方便地挤压或泵送的泵式喷雾器中递送，或以气雾剂的形式从加压容器或喷雾器中递送，所述加压容器或喷雾器使用适合的推进剂，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在加压喷雾器的情况下，可通过提供递送计量量的阀来确定剂量单位。加压容器或喷雾器可含有活性化合物的溶液或悬浮液。用于吸入器或吹入器中的胶囊和药筒(如由明胶制备)可配制为含本发明化合物与适合粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
[0312] 本发明的活性化合物可配制用于胃肠外注射给药，包括使用常规导管插入技术或输注。胃肠外给药途径还包括静脉内、肌肉内和皮下给药。用于注射的制剂可以以单位剂量的形式存在，如与其它防腐剂在安瓿或多剂量容器中。组合物可采取的形式如油或水载剂中的悬浮液、溶液或乳剂，并可含有配方剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性组分可以以粉末形式用于在使用前用合适的载剂(如灭菌无热原水)重构。
[0313] 本发明活性化合物也可以配制为直肠组合物，例如含有常规栓剂基质(如可可脂或其它甘油酯)的栓剂或灌肠剂。
[0314] 对于局部给药，本发明的化合物可配制为软膏或乳膏。
[0315] 适合的给药模式也包括但不仅限于经皮、阴道内和眼内。
[0316] 式I化合物的合成
[0317] WO2007/075,869已经报道了式I化合物的合成。为了读者的方便，合成反应式随后再现于下述内容中。
[0318] 本发明的化合物可根据反应式I到反应式XIX概括的并通过本领域技术人员已知的方法进行制备。
[0319] 钯催化的Sonogashira偶联反应用于连接“顶端”环T到“底部”[环A]–[L1]–[环B]部分，如反应式I和II所说明的。在反应式I中，炔“顶端”环T和存在活性基团W的已1
经活化的“底部”[环A]–[L]–[环B]部分进行Sonogashira偶联反应，W为I、Br或其
1
它可以进行所需偶联反应的基团。W–[环A]–[L]–[环B]中的变量如前述定义，环A和a b
B分别被允许的R 和R 基团取代。
经活化的“底部”[环A]–[L]–[环B]部分进行Sonogashira偶联反应，W为I、Br或其
1
它可以进行所需偶联反应的基团。W–[环A]–[L]–[环B]中的变量如前述定义，环A和a b
B分别被允许的R 和R 基团取代。
[0320]
[0321] 反应式ISonogashira偶联反应
[0322] 可选的偶联反应描述于反应式II中，其中在类似的钯催化偶联条件下，环T“活1
化”为存在活性基团W(如I或Br)并偶联到“底部”炔[环A]–L–[环B]。
化”为存在活性基团W(如I或Br)并偶联到“底部”炔[环A]–L–[环B]。
[0323]
[0324] 反应式II:可选的Sonogashira偶联反应
[0325] 描述于反应式I和II中的Sonogashira偶联条件适用于所有双环杂芳环T并用于合成本发明的化合物。
[0326] 制备炔环T部分的多种说明性全合成方法，基于已知的转换，在下述反应式III到VIII中进行说明：
[0327]
[0328] 反应式III:3-乙炔基咪唑并[1，2-a]吡嗪的制备
[0329]
[0330] 反应式IV:C-8取代的3-乙炔基咪唑并[1，2-a]吡嗪的制备
[0331]
[0332] 反应式V:3-乙炔基咪唑并[1，2-a]吡啶或3-乙炔基咪唑并[1，2-b]哒嗪的制备[0333]
[0334] 反应式VI:C-8氨基取代的3-乙炔基咪唑并[1，2-a]吡啶的制备
[0335]
[0336] 反应式VII:C-8取代的3-乙炔基咪唑并[1，2-a]吡啶的制备
[0337]
[0338] 反应式VIII:C-6和C-8取代的3-乙炔基咪唑并[1，2-a]吡啶的制备
[0339] 对于偶联步骤，参见Malleron,J-L.,Fiaud,J-C.,Legros,J-Y.Handbook of Palladium Catalyzed Organic Reactions.San Diego:academic Press,1997。
[0340] 本领域一般技术人员将理解，制备不同取代的炔环T基团的这些方法可广泛适用于多种未显示出的其它稠合双环系。1
[0341] 下述反应式IX到XIII描述了式W-[环A]–[L]–[环B]化合物的合成，所述化合物用作反应式I和II中偶联反应的中间体。
[0342] 应该明白的是，特别感兴趣的是下式中间体：
[0343]
[0344] 因为它们与“顶端”杂芳环偶联反应产生本发明化合物。可变基团A、L1和B如前所述并任选按本文描述取代，且W是I或可允许进行所需偶联反应的可选活性基团。
[0345] 这些说明性中间体包括下述结构中的那些结构：
[0346]a b c d a
[0347] 其中的变量(如R、R、R 和R)如前所述。例如在一些实施方案中，R 选自F或b烷基，如Me，和在一些实施方案中，R 选自Cl、F、Me、叔丁基、–CF3或–OCF3。具有多种可
1
接受取代基的式W-[环A]–[L]–[环B]的那些和其它化合物可用于制备相应的本发明化合物，如在多种式、类和亚类中定义的化合物。
1
接受取代基的式W-[环A]–[L]–[环B]的那些和其它化合物可用于制备相应的本发明化合物，如在多种式、类和亚类中定义的化合物。
[0348] 用于制备试剂和代表性中间体的部分说明性合成路径如下所示：1
[0349] 反应式IX描述了W-[环A]–[L]–[环B]的说明性合成，其中环A和B是苯基1
和L 是NHC(O)。
和L 是NHC(O)。
[0350]
[0351] 反应式X描述了前述变型的合成，其中环B是2-吡啶且L1是C(O)NH(即在其它方向)。
[0352]1
[0353] 下述反应式XI和XII说明了W-[环A]–[L]–[环B]的合成，其中环A和B是苯基且环C是杂芳环。这些中间体用于制备式II化合物。
[0354] 更具体地，反应式XI公开了中间体的制备，其中环C是咪唑环。
[0355]
[0356] 反应式XII描述了中间体的制备，其中环C是吡咯或 唑环。
[0357]
[0358] 反应式XIII说明了W-[环A]–[L1]–[环B]的合成，其中环A和B是苯基且Rb2
取代基是–L–[环D]。这些中间体用于制备式III化合物，其中环D是含有1个或2个杂原子的5或6-元杂环。
取代基是–L–[环D]。这些中间体用于制备式III化合物，其中环D是含有1个或2个杂原子的5或6-元杂环。
[0359]
[0360] 在该反应式中，环B上取代基Rb的非限制性实例是卤素(如Cl)；低级烷基(如异丙基)；和取代的低级烷基(如–CF3)；和环D的非限制性实例是N,N-二甲基吡咯烷、N-(2-羟乙基)哌嗪和N-甲基哌嗪。
[0361] 中间体W-[环A]–[L1]–[环B]，如存在于上述多种合成反应式中的那些，可利用描述于一般反应式I中的Sonogashira偶联条件与炔环T反应。
[0362] 一个实例描述于反应式XIV中，其中环T部分在Sonogashira偶联步骤之后进一步衍生化以生成多种感兴趣的取代的本发明类似物。
[0363]
[0364] 或者，W-[环A]–[L1]–[环B]可在Sonogashira条件下与三甲基硅烷基乙炔反应，然后与碘-或溴-活化的环T偶联，如描述于一般反应式II中。
[0365] 一个实例描述于反应式XV中：
[0366]
[0367] 在其它具体实施方案中，按不同顺序进行各步骤。例如，Sonogashira偶联反应可2
用于环T到环A，然后连接那部分到环B和/或[环B]–[L]–[环D]和/或[环B]–[环C]，如反应式XVI所示。
用于环T到环A，然后连接那部分到环B和/或[环B]–[L]–[环D]和/或[环B]–[环C]，如反应式XVI所示。
[0368]
[0369] 在非限制性实例中，其中环A和环B是苯基且L1是CONH，反应式XVII描述了炔环T与3-碘-4-甲基苯甲酸(环A部分)进行Sonogashira偶联以产生[环T]–[环A]中间体，其然后与任选取代的环B部分进行酰胺偶联：
[0370]
[0371] 该方法在反应式XVIII中进行说明，其描述了炔环T(即3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪)与取代的W-[环A](即3-碘-4-甲基苯甲酸)偶联，然后所得[环T]–[环A]–COOH中间体与H2N–[环B]–L2–[环C]部分(即4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基苯胺)进行酰胺偶联：
[0372]
[0373] 或者，作为本领域技术人员组装选项的范围的其它说明，在Sonogashira反应中，3-碘-4-甲基苯甲酸环A中间体可与三甲基硅烷基乙炔反应，其在硅烷基脱保护之后，与活化环T进行第二Sonogashira偶联反应，如反应式XIX说明。
[0374]
[0375] 用如前述的合成方法，结合下述实施例、本文提供的其它信息以及常规方法和原料，本领域技术人员可制备本发明整个范围内的化合物。
[0376] 除了上述公开的一般合成方法，普纳替尼游离碱和普纳替尼盐酸盐的合成已经明确公开于申请人自己的WO2011/053,938中，在此引入作为参考。为了读者方便，合成反应式直接如下再现。
[0377] 普纳替尼合成：反应式1
[0378]
[0379] 普纳替尼合成：反应式2
[0380]
[0381] 普纳替尼的单盐酸盐已经用于临床试验。进一步鉴定的普纳替尼的信息包括：
[0382] 化学名：3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺，盐酸盐；
[0383] USAN：普纳替尼；
[0384] USANM：普纳替尼盐酸盐；
[0385] CAS登记号：1114544-31-8(HCl盐)和943319-70-8(游离碱)；
[0386] CAS索引名：苯甲酰胺，3-(2-咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]-盐酸盐(1:1)；
[0387] 分子式：C29H28ClF3N6O(盐酸盐)和C29H27F3N6O(游离碱)(无手性中心)；和[0388] 分子量：569.02g/mol(盐酸盐)和532.56g/mol(游离碱)。
[0389] 示例性式I的化合物
[0390] 下述实施例中公开的部分化合物已经转化成盐酸盐。生成盐酸盐的一般步骤如下所述：
[0391] 向最终产物中加入足量的用氢氯酸(g)饱和的MeOH进行溶解，经过0.5-1小时冷却至0℃，过滤，用冰冷的MeOH然后用Et2O洗涤固体，所得固体在真空干燥器中干燥，在大多数实施例中得到三盐酸盐。
[0392] 实施例1
[0393] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0394]
[0395] 咪唑并[1，2-a]吡嗪:将氨基吡嗪(1g，10.5mmol)和氯乙醛(50%wt在H2O中；1.98g,12.6mmol)在1.6mL EtOH中的溶液在90℃的密封管中加热5小时。冷却到室温，浓缩反应混合物并用二氯甲烷(DCM)稀释。有机相用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后用MgSO4干燥并浓缩。粗产物用硅胶快速色谱纯化(10%MeOH/DCM洗脱)，得到0.8g产品。
[0396] 3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡嗪：将3-溴咪唑并[1,2-a]吡 嗪 (0.15g,0.76mmol; 根 据 J.Bradac 等 ,J.Org.Chem.(1977),42,4197–4201 制备)、0.09g(0.91mmol) 的 乙 炔 基 三 甲 基 硅 烷、0.044g(0.038mmol) 的Pd(PPh3)4、0.014g(0.076mmol)的CuI和0.26mL(1.52mmol)的二异丙基乙胺在3.8mL DMF中的混合物在50℃氮气气氛下加热过夜。冷却到室温，浓缩反应混合物，粗产物用硅胶快速色谱纯化(50%EtOAc/己烷洗脱)，得到0.15g产物：216m/z(M+H)。
[0397] 3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡嗪：在室温，向3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡嗪(0.15g,0.7mmol)在3.5mL THF中的溶液中加入1.05mL(1.05mmol)的四丁基氟化铵(1.0M在THF中)。搅拌溶液15分钟，浓缩，粗产物用硅胶快速色谱纯化(50%EtOAc/己烷洗脱)，得到0.078g产物。
[0398] 3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺：将3-氨基-5-溴三氟甲苯(4.0g,0.0167mol)、8-羟 基 喹 啉 (0.362g,0.0025mol)、CuI(0.476g,0.025mol)、咪 唑(1.36g,0.0199mol)和碳酸钾(2.52g,0.0183mol)的17mL DMSO(用氩气除气10分钟)中的混合物在120℃氩气气氛下加热15小时；HPLC指示没有起始原料。将14%的氢氧化铵水溶液加入到冷却的混合物中，室温搅拌1小时。加入水(50mL)和EtOAc(200mL)，用EtOAc(3x30mL)萃取水层。合并的有机层用Na2SO4干燥并浓缩。粗产物用硅胶快速色谱纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到2.51g产物。
[0399] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺：向3-碘-4-甲基苯甲酸(3.07g,0.0117mol)中加入亚硫酰氯(10mL)并回流2小时。小心除去过量的亚硫酰氯，所得酰氯真空干燥2小时。然后将残余物溶于DCM(无水，25mL)中并冰浴冷却。向冷却的溶液中加入在DCM中的3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺
5(3.46g,0.0152mol)，然后滴加二异丙基乙胺(8.2mL,0.047mol)。在室温搅拌21小时。
过滤分离白色固体，用水洗涤并干燥得到4.65g产物。将过滤得到的额外产物浓缩并用EtOAc/己烷的硅胶快速色谱纯化。
5(3.46g,0.0152mol)，然后滴加二异丙基乙胺(8.2mL,0.047mol)。在室温搅拌21小时。
过滤分离白色固体，用水洗涤并干燥得到4.65g产物。将过滤得到的额外产物浓缩并用EtOAc/己烷的硅胶快速色谱纯化。
[0400] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺：将3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡嗪(0.075g,0.52mmol)、0.245g(0.52mmol)的N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺、0.030g(0.026mmol)的Pd(PPh3)4、0.007g(0.039mmol)的CuI和0.14mL(0.78mmol)的二异丙基乙胺在3.0mL DMF中的混合物在室温氮气气氛下搅拌过夜。浓缩反应混合物且粗产物用硅胶快速色谱纯化(用10%EtOAc/己烷，然后用100%EtOAc，然后用10%MeOH/EtOAc洗脱)，得到0.090g固体产物：487m/z(M+H)。
[0401] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺的可选合成：
[0402] 3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡嗪如前述进行制备。在一种变形中，反应用THF替代DMF进行。粗产物也能用硅胶垫式色谱进行纯化(乙酸乙酯/己烷洗脱)，用活性炭(Darco)进行简单处理有助于减少同聚偶联产物。
[0403] 3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡嗪：在室温，向3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡嗪(1.39mol)在10倍体积乙酸乙酯和1.5倍体积甲醇的溶液中加入2.5当量的碳酸钾，搅拌溶液1小时。过滤碳酸钾，用水和饱和氯化钠溶液洗涤有机物(两次或多次)。合并水相并用乙酸乙酯再萃取。然后合并有机物并在真空中浓缩至约0.5L。通过浓缩使固体沉淀。冷却浆液至约如至5℃，储存过夜，过滤并用约0.3L冷乙酸乙酯洗涤。然后真空干燥固体。
[0404] 3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸按类似于上述公开的Sonogashira反应进行制备。3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡嗪和3-碘-4-甲基苯甲酸用作偶联试剂。或者，用乙酸乙酯替换溶剂(DMF)，并用三乙胺替换碱(Hunig碱)。过滤粗反应混合物来分离产物。滤饼用溶剂如乙酸乙酯然后用水连续洗涤，然后在真空烘箱中干燥。通过将固体在加入浓盐酸调节至pH3的水中浆化进行纯化。过滤和用水洗涤之后，在真空烘箱中干燥产品。
[0405] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺：将3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸(18mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中。向该溶液中加入3当量的4-甲基吗啉(NMM)，然后加入1.05当量的草酰氯。室温搅拌30分钟之后，加入0.8当量3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(如上制备)以及5mole%的DMAP。室温下开始搅拌之后，回流并搅拌混合物过夜。16小时之后，加入额外的0.2当量苯胺，使得总加入量至1当量。然后混合物再搅拌2小时，用水淬灭，分层。水层用二氯甲烷萃取(2X50mL)，合并的萃取物用水洗涤。然后蒸发合并的二氯甲烷层，残余物溶于100mL乙酸乙酯(20mL)中。静置1小时之后，产品结晶。
冷却混合物，如至0℃，过滤，并用冷乙酸乙酯洗涤固体产物。
冷却混合物，如至0℃，过滤，并用冷乙酸乙酯洗涤固体产物。
[0406] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺单盐酸盐：
[0407] 将N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺(0.94mmol)悬浮于MeCN(10ml)中，并在搅拌下加热至45至55℃(热板温度)。加入盐酸(1.1当量1M EtOH溶液)使之溶解。在几分钟内，形成沉淀。
冷却悬浮液至室温，然后过滤并用MeCN(1x1.5ml溶液+1x1.5ml新鲜)洗涤。固体在50℃的真空中干燥至恒重。
冷却悬浮液至室温，然后过滤并用MeCN(1x1.5ml溶液+1x1.5ml新鲜)洗涤。固体在50℃的真空中干燥至恒重。
[0408] 实施例2
[0409] 3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺
[0410]
[0411] 按类似于实施例1公开的方式，由3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡嗪和3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺合成目标化合物。得到固体产物：533m/z(M+H)。
[0412] 1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯：将2-甲基-5-硝基三氟甲苯(3.90g,19mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS,3.56g,20mmol)、2,2’-氮杂双(2-甲基丙腈)(AIBN,94mg,0.6mmol)在CCl4(40mL)中的悬浮液在氮气气氛下回流16小时。HPLC指示约
50%转化。再加入NBS(10mmol)和AIBN(0.6mmol)，混合物再回流14小时。HPLC指示约80%转化。冷却反应混合物，过滤固体并用EtOAc洗涤。合并的滤液用NaHCO3洗涤，Na2SO4干
1
燥，过滤，用旋转蒸发仪浓缩并在真空中进一步干燥。H NMR显示所需产物与未反应的2-甲基-5-硝基三氟甲苯的比例是75:25。不经纯化直接用于下一步。
50%转化。再加入NBS(10mmol)和AIBN(0.6mmol)，混合物再回流14小时。HPLC指示约80%转化。冷却反应混合物，过滤固体并用EtOAc洗涤。合并的滤液用NaHCO3洗涤，Na2SO4干
1
燥，过滤，用旋转蒸发仪浓缩并在真空中进一步干燥。H NMR显示所需产物与未反应的2-甲基-5-硝基三氟甲苯的比例是75:25。不经纯化直接用于下一步。
[0413] 1-甲基-4-(4-硝基-2-(三氟甲基)苄基)哌嗪：向粗1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三 氟 甲 基) 苯(13.33mmol,75%纯 度) 在DCM(10mL)中 的 溶 液 中 加 入Et3N(1.4mL,10mmol)和1-甲基哌嗪(1.1mL,10mmol)。室温搅拌3小时之后，加入NaHCO3水溶液，用DCM萃取混合物。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，所得残余物用硅胶色谱纯化(10%MeOH/DCM洗脱)，得到2.21g淡黄色油状产物。
[0414] 4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺：将1-甲基-4-(4-硝基-2-(三氟甲基)苄基)哌嗪(1.23g,4mmol)和次硫酸钠(7.0g,85%纯，购自Aldrich，
40mmol)在丙酮和水(1:1,20mL)中的悬浮液回流3小时。冷却后，用旋转蒸发仪除去挥发组分(主要是丙酮)，过滤所得混合物。固体用EtOAc彻底洗涤。合并的滤液用n-BuOH(4x)萃取，合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，所得残余物用硅胶色谱纯化(5%MeOH/DCM洗脱，MeOH用氨气预饱和)，得到0.71g淡黄色固体产物。
40mmol)在丙酮和水(1:1,20mL)中的悬浮液回流3小时。冷却后，用旋转蒸发仪除去挥发组分(主要是丙酮)，过滤所得混合物。固体用EtOAc彻底洗涤。合并的滤液用n-BuOH(4x)萃取，合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，所得残余物用硅胶色谱纯化(5%MeOH/DCM洗脱，MeOH用氨气预饱和)，得到0.71g淡黄色固体产物。
[0415] 3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺：将由3-碘-4-甲基苯甲酸和SOCl2反应(如前所述)制备得到的3-碘-4-甲基苯甲酰氯(0.48g,1.7mmol)加至4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺(0.47g,1.7mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.26g,2.0mmol)和催化量DMAP在THF(10mL)中的溶液中。在室温搅拌2小时后，用水淬灭反应。加入EtOAc，分层。将合并的有机层浓缩至干，硅胶色谱纯化(5%MeOH/DCM洗脱，用氨气预饱和MeOH)，得到0.51g灰白色固体产物。
[0416] 3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺的可选合成：可以以类似于实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺(如上所述)制备3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺及其单盐酸盐。
[0417] 实施例3
[0418] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0419]
[0420] 类似于实施例1所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡嗪和N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺合成目标化合物。得到固体产物：544m/z(M+H)。
[0421] 1-(1H-咪唑-2-基)-N,N-二甲基甲胺：向配有回流冷凝器和恒压加料漏斗的双颈圆底烧瓶中加入2-咪唑甲醛(6g,62.5mmol)在MeOH(60mL)中的溶液。以快速滴加速率(20分钟)，向悬浮液(室温)中加入二甲胺(40%水溶液，60mL)。加入完成之后，经45分钟小心地分次加入固体硼氢化钠(7g,186.8mmol)。每次加入之后出现泡沫，内部温度维持在～50℃，不需要外部冷却。然后反应混合物经3小时加热至65℃，过夜冷却至室温。真空浓缩反应物，EtOAc(2×30mL)溶解所得残余物，用盐水和CHCl3(4×100mL)洗涤。弃去EtOAc萃取物。干燥CHCl3萃取物(Na2SO4)，过滤，真空浓缩得到3.7g蜡状固体所需产物。
[0422] 3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺：将3-氨基-5-溴三氟甲苯(6g,25mmol)和1-(1H-咪唑-2-基)-N,N-二甲基甲胺(3.7g,29.6mmol)溶于无水DMSO(25mL)中。向其中加入CuI(0.95g,7.5mmol)、8-羟基喹啉(0.72g,7.5mmol)和K2CO3(6.9g,50mmol)。剧烈搅拌混合物并用氮气脱气15分钟。然后将烧瓶配以冷凝器并在120℃加热18小时。将所得非均相混合物冷却至室温，倒入14%NH4OH(100mL)水溶液，用EtOAc(3×300ml)萃取。合并的萃取物用Na2SO4干燥并真空浓缩。残余物用硅胶色谱柱，MeOH/DCM(5:95)洗脱，得到3.5g棕褐色所需产物：285m/z(M+H)。
[0423] N-(3-(2-((二甲 基 氨基)甲 基)-1H-咪 唑-1-基)-5-( 三氟 甲基) 苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺：在约5℃，将3-碘-4-甲基苯甲酰氯(2.2g,7.88mmol)溶于无水THF(13mL)中，将其滴加至3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(1.5g,5.5mmol)、DIPEA(2.1mL,11.8mmol)在THF(30mL)中的溶液中。所得溶液在室温搅拌过夜。真空除去溶剂，粗残余物溶于CH2Cl2中，并用1N NaOH洗涤。有机层然后用水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，真空浓缩。然后在己烷/DCM混合物中磨碎棕色残余物，沉淀得到1.4g灰白色粉末所需产物：529m/z(M+H)。
[0424] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺可选合成：类似于实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(如上述制备)制备N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺及其单盐酸盐。
[0425] 实施例4
[0426] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺
[0427]
[0428] 3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶：向密封试管中的3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶(5g,0.0254mol)在乙腈(50mL)中的溶液中加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)
(0.445g,0.634mmol)、CuI(0.17g,0.89mmol)、二环己基胺(5.6mL,0.028mol)和乙炔基三甲基硅烷(7.2mL,0.051mol)。溶液用氩气吹扫15分钟，密封并在80℃加热3h。此时，HPLC显示没有任何初始溴化物。浓缩溶剂，并向残余物中加入水和二氯甲烷(每次25mL)。分离有机层，用二氯甲烷(3X20mL)重复萃取水相。干燥合并的有机物(Na2SO4)，并浓缩(在1/1己烷/乙酸乙酯中的Rf为0.47)。所得残余物溶于THF(100mL)中，并用水(5mL)中的一水合四丁基氟化铵(8.3g,0.032mol)处理，混合物在室温搅拌2h。浓缩溶剂，所得残余物在水(25mL)和二氯甲烷(150mL)之间分层。水相用二氯甲烷(2X30mL)萃取。将合并的有机相干燥(Na2SO4)，浓缩。所得残余物通过combiflash在硅胶上利用己烷/乙酸乙酯纯化。所+
需产物用50/50己烷/乙酸乙酯洗脱并分离为灰白色固体：MS(M+H)200。
(0.445g,0.634mmol)、CuI(0.17g,0.89mmol)、二环己基胺(5.6mL,0.028mol)和乙炔基三甲基硅烷(7.2mL,0.051mol)。溶液用氩气吹扫15分钟，密封并在80℃加热3h。此时，HPLC显示没有任何初始溴化物。浓缩溶剂，并向残余物中加入水和二氯甲烷(每次25mL)。分离有机层，用二氯甲烷(3X20mL)重复萃取水相。干燥合并的有机物(Na2SO4)，并浓缩(在1/1己烷/乙酸乙酯中的Rf为0.47)。所得残余物溶于THF(100mL)中，并用水(5mL)中的一水合四丁基氟化铵(8.3g,0.032mol)处理，混合物在室温搅拌2h。浓缩溶剂，所得残余物在水(25mL)和二氯甲烷(150mL)之间分层。水相用二氯甲烷(2X30mL)萃取。将合并的有机相干燥(Na2SO4)，浓缩。所得残余物通过combiflash在硅胶上利用己烷/乙酸乙酯纯化。所+
需产物用50/50己烷/乙酸乙酯洗脱并分离为灰白色固体：MS(M+H)200。
[0429] 3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺：在压力管中的3-溴-5-(三氟甲基)苯胺(4.8g,20mmol)、4-甲基咪唑(1.97g,24mmol)、碳酸钾(3.04g,22mmol)、CuI(0.57g,3mmol)和8-羟基喹啉(0.44g,3mmol)在干燥DMSO(20mL)中的悬浮液以鼓泡氮气将悬浮液脱气10分钟，并伴随搅拌。完全密封该管。混合物在120℃(油浴温度)加热15小时。混合物冷却至45-50℃并加入14%NH4OH水溶液(20mL)。将混合物在该温度保持
1小时。冷却至室温之后，加入水和乙酸乙酯。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用短硅胶柱除去大部分绿/蓝色铜盐。硫酸钠干燥滤液并用旋转蒸发仪浓缩。粗产物用EtOAc/己烷重结晶，得到纯的淡黄色针状晶体。浓缩母液，用硅胶柱纯化残余物(5%甲醇/二氯甲烷)，得到第二批淡黄色针状晶体。
1小时。冷却至室温之后，加入水和乙酸乙酯。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用短硅胶柱除去大部分绿/蓝色铜盐。硫酸钠干燥滤液并用旋转蒸发仪浓缩。粗产物用EtOAc/己烷重结晶，得到纯的淡黄色针状晶体。浓缩母液，用硅胶柱纯化残余物(5%甲醇/二氯甲烷)，得到第二批淡黄色针状晶体。
[0430] 3-碘-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺：将3-碘-4-甲基苯甲酸(2.62g,10mmol)在SOCl2(10mL)中回流1小时。用旋转蒸发仪除去挥发组分，残余物溶于苯(10mL)中，用旋转蒸发仪浓缩至干燥并进一步真空干燥。将所得酰氯加至3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(2.46g,10.2mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.56g,12mmol)和催化量DMAP在THF(20mL)中的溶液中。室温搅拌2小时之后，用水淬灭反应。加入EtOAc并分层。将合并的有机层浓缩至干，不经纯化直接用于下一步。
[0431] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺：向密封管中的3-碘-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺(0.11g,0.22mmol)在DMF(1mL)
中的溶液中加入Pd[(PPh3)4](0.013g,0.011mmol)、CuI(3mg,0.016mmol)、二乙基异丙胺(0.057mL,0.33mmol)，然后加入3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶(0.040g,0.28mmol)。混合物用氩气吹扫15分钟，密封并在室温搅拌28小时。浓缩溶剂，残余物用二氯甲烷(50mL)处理。有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发留下棕色残余物，combiflash纯化(己烷/乙+
酸乙酯/甲醇)，得到所需材料：MS(M+H)500。
中的溶液中加入Pd[(PPh3)4](0.013g,0.011mmol)、CuI(3mg,0.016mmol)、二乙基异丙胺(0.057mL,0.33mmol)，然后加入3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶(0.040g,0.28mmol)。混合物用氩气吹扫15分钟，密封并在室温搅拌28小时。浓缩溶剂，残余物用二氯甲烷(50mL)处理。有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发留下棕色残余物，combiflash纯化(己烷/乙+
酸乙酯/甲醇)，得到所需材料：MS(M+H)500。
[0432] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺的可选合成：类似于实施例1的可选合
成，由3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和3-(4-甲基-1H-咪
唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(如上述制备)制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺及其单盐酸盐。类似于实施例1所述的方法，用3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
成，由3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和3-(4-甲基-1H-咪
唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(如上述制备)制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺及其单盐酸盐。类似于实施例1所述的方法，用3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0433] 实施例5:
[0434] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0435]
[0436] 根据实施例1，用N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺和3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶制备目标化合物：MS(M+H)+486。也可根据实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(如实施例1制备)制备目标化合物。类似于实施例1所述的方法，用3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0437] 实施例6:
[0438] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺
[0439]
[0440] 根据实施例1，用3-碘-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺和+3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶制备目标化合物：MS(M+H)421.39。
[0441] 实施例7:
[0442] N-(5-叔丁基异 唑-3-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0443]
[0444] 根据实施例1，用N-(5-叔丁基异 唑-3-基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺和3-乙+炔基咪唑并[1,2-a]吡啶制备目标化合物：MS(M+H)399。
[0445] 实施例8:
[0446] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺
[0447]
[0448] 将3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶(37mg,0.26mmol)、3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺(103.4mg,0.2mmol)(如实施例2制备)、Pd[(PPh3)4](11.6mg,5mol%)和CuI(2.9mg,7.5mmol%)置于具有橡胶隔片的烧瓶中。混合物经真空/氮气吹扫循环3次，并加入DMF(1.5ml)和N,N-二异丙基乙胺(53mL,0.3mmol)。混合物在室温搅拌16小时，水淬灭反应。加入EtOAc和更多的水进行萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，硅胶色谱纯化所得残余物(洗脱：5%MeOH在二氯甲烷中，氨气预饱和MeOH)，得到灰白色固体的目标化合物(53%,56mg):MS(M+H)+532。
[0449] 3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺的可选合成：类似于实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺(如实施例2制备)制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺及其单盐酸盐。类似于实施例1所描述的方法，用3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0450] 实施例9:
[0451] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0452]
[0453] 向3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶(0.032g,0.22mmol)在无水DMF(1.26mL)中的溶液加入N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺(如实施例3制备)、Pd(PPh3)4(0.013g,0.011mmol)、CuI(0.0032mg,0.0165mmol)和DIPEA(0.064mL,0.44mmol)。溶液用氩气脱气15分钟，然后室温搅拌过夜。除去溶剂，所得残余物过硅胶色谱柱，首先用EtOAc，然后用甲醇/二氯甲烷+
(5:95)洗脱得到所需产物：(0.07g,59%)MS(M+H)542。
(5:95)洗脱得到所需产物：(0.07g,59%)MS(M+H)542。
[0454] N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺的可选合成：类似于实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(如实施例3制备)制备N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺及其单盐酸盐。类似于实施例1所描述的方法，利用3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0455] 实施例10:
[0456] 3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺
[0457]
[0458] N-(3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)乙酰胺：类似于实施例1A，由N-(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)乙酰胺(E.Smakula Hand and William W.Paudler,J.Org.Chem.,1978,43,2900-2906)合成N-(3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)乙酰胺。分离+得到灰白色固体目标化合物，Rf,0.6(己烷/乙酸乙酯50/50):MS(M+H)200。
[0459] 3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺：根据实施例1，用3-碘-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺和N-(3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)乙酰胺制备目标化合物：+
MS(M+H)478.4。
MS(M+H)478.4。
[0460] 实施例11:
[0461] N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-((8-乙酰胺基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0462]
[0463] 根据实施例10，用N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺和N-(3-乙炔基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)乙酰胺制备目标化合物：MS(M+H)543。
[0464] 实施例12:
[0465] 4-甲基-3-((8-(4-(甲磺酰基)苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺
[0466]
[0467] 8-(苄基氧基)-3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶：将在密封管中的2-氨基-3-苄基氧基吡啶(25.0g,124.9mmol)和氯乙醛(50重量%在水中;16.7mL,131.2mmol)在250mL EtOH中的溶液中加热回流19小时。冷却到室温后，浓缩反应混合物，所得棕色油加入125mL1N NaOH，然后用二氯甲烷(DCM)萃取。合并的有机层用水洗涤，Na2SO4干燥，浓缩。浓缩溶液后，过滤形成的褐色固体并干燥得到25.8g粗产物。
[0468] 在室温氮气气氛下，向粗8-(苄基氧基)咪唑并[1,2-a]吡啶(8.73g,38.9mmol)在100mL EtOH中的溶液中滴加4.8mL(46.7mmol)1:1Br2/H2O溶液。在室温，搅拌深橙色悬浮液30分钟，加入60mL1N NaOH，用DCM萃取反应混合物。合并的有机层用Na2SO4干燥，浓缩。粗产物用硅胶快速色谱纯化(30%EtOAc/己烷洗脱)，得到7.04g产物。
[0469] 8-(苄基氧基)-3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡啶：将8-(苄基氧基)-3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶(10.0g,33.0mmol)、9.39mL(66.0mmol)乙炔基三甲基硅烷、0.580g(0.825mmol)Pd(PPh3)2Cl2、0.230g(1.19mmol)CuI和5.09mL(36.3mmol)二异丙胺在100mL乙腈中的混合物在氮气气氛下加热回流3小时。冷却到室温，浓缩反应混合物和粗产物用硅胶快速色谱纯化(20-50%EtOAc/己烷洗脱)，得到6.74g产物：321m/z(M+H)。
[0470] 3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基三氟甲磺酸酯：在氮气气氛下，通过管子向冷却的(0℃)8-(苄基氧基)-3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡啶(3.44g,10.7mmol)在400mL DCM中的溶液中加入100mL(100mmol)三氯化硼(1.0M己烷溶液)。反应溶液在0℃/N2搅拌30分钟，加入(0℃)200mL H2O，然后用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。粗产物用硅胶快速色谱纯化(用30%EtOAc/己烷，然后用10%MeOH/DCM洗脱)，得到2.32g脱保护的产物：231m/z(M+H)。
[0471] 在氮气气氛下，用注射器向冷却的(-78℃)8-(羟基)-3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡啶(2.32g,10.1mmol)和1.63mL(20.1mmol)吡啶在50mL DCM中的溶液中加入2.03mL(12.1mmol)三氟甲磺酸酐。除去冷却浴，室温下(N2)搅拌反应溶液2小时。反应混合物倾入100mL1.0N HCl的搅拌溶液中，分层，连续用1.0N HCl、H2O、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。有机层用Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶小塞过滤粗产物(30%EtOAc/己烷洗脱)，浓缩并在真空中进一步干燥得到3.63g产物：363m/z(M+H)。
[0472] N-(4-(甲磺酰基)苯基)-3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-胺：在80℃氮气气氛下，将3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡
啶-8-基三氟甲磺酸酯(0.329g,0.91mmol)、0.186(1.09mmol)4-(甲磺酰基)苯胺、
0.083g(0.091mmol)Pd2(dba)2、0.087g(0.181mmol)2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯和0.385g(1.81mmol)磷酸钾在8mL DME中的混合物在密封管中加热过夜。冷却到室温，浓缩反应混合物和粗产物用硅胶快速色谱纯化(三乙胺处理的硅胶；用0-80%EtOAc/己烷洗脱)，得到0.058g产物：384m/z(M+H)。
啶-8-基三氟甲磺酸酯(0.329g,0.91mmol)、0.186(1.09mmol)4-(甲磺酰基)苯胺、
0.083g(0.091mmol)Pd2(dba)2、0.087g(0.181mmol)2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯和0.385g(1.81mmol)磷酸钾在8mL DME中的混合物在密封管中加热过夜。冷却到室温，浓缩反应混合物和粗产物用硅胶快速色谱纯化(三乙胺处理的硅胶；用0-80%EtOAc/己烷洗脱)，得到0.058g产物：384m/z(M+H)。
[0473] 3-乙炔基-N-(4-(甲磺酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-胺：在室温，向N-(4-(甲磺酰基)苯基)-3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-胺(0.058g,0.15mmol)在1.5mL THF中的溶液中加入0.23mL(0.23mmol)四丁基氟化铵(1.0M THF)。溶液搅拌15分钟，浓缩，用硅胶快速色谱纯化粗产物(三乙胺处理的硅胶；用
100%DCM，然后用5%MeOH/DCM洗脱)，得到定量产率的(0.047g)产物：312m/z(M+H)。
100%DCM，然后用5%MeOH/DCM洗脱)，得到定量产率的(0.047g)产物：312m/z(M+H)。
[0474] 4-甲基-3-((8-(4-(甲磺酰基)苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺：将3-乙炔基-N-(4-(甲磺酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-胺5(0.048g,0.154mmol)、0.069g(0.170mmol)3-碘-4-甲基-N-(4-( 三 氟 甲 基 )吡 啶 -2- 基) 苯 甲 酰 胺、0.009g(0.008mmol)Pd(PPh3)4、
0.002g(0.012mmol)CuI和0.04mL(0.23mmol)二异丙基乙胺在0.8mLDMF中的混合物在室温氮气气氛中搅拌。浓缩反应混合物和粗产物用硅胶快速色谱纯化(三乙胺处理的硅胶；用
10%EtOAc/己烷至100%EtOAc洗脱)，得到0.047g固体产物：590m/z(M+H)。
0.002g(0.012mmol)CuI和0.04mL(0.23mmol)二异丙基乙胺在0.8mLDMF中的混合物在室温氮气气氛中搅拌。浓缩反应混合物和粗产物用硅胶快速色谱纯化(三乙胺处理的硅胶；用
10%EtOAc/己烷至100%EtOAc洗脱)，得到0.047g固体产物：590m/z(M+H)。
[0475] 实施例13:
[0476] 4-甲基-3-((8-(4-氨基磺酰基苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙炔基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺
[0477]
[0478] 类似于实施例12所描述的方法，由3-乙炔基-N-(4-氨磺酰苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-胺和3-碘-4-甲基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺合成目标化合物。得到固体产物：591m/z(M+H)。
[0479] 实施例14:
[0480] (R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0481]
[0482] 3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-b]哒嗪：将3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪(36.78g,0.186mol;根据Stanovnik,B.等Synthesis(1981),12,987-989制备)、乙炔基三甲基硅烷(21.89g,0.223mol)、Pd(PPh3)4(10.73g,9.29mmol)、CuI(5.30g,0.028mol)和二异丙基乙胺(32.4mL,0.279mol)在150mL DMF中的混合物在室温氮气气氛中搅拌1小时。浓缩反应混合物和粗产物用硅胶快速色谱纯化(用0-5%MeOH/DCM洗脱)，得到28.46g产物。
[0483] 3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪：在室温，向3-((三甲基硅烷基)乙炔基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(28.46g,0.132mol)在200mL THF中的溶液中加入145mL(0.145mol)四丁基氟化铵(1.0M在THF中)。搅拌溶液15分钟，浓缩，硅胶快色色谱纯化粗产物(用0-5%MeOH/DCM洗脱)，得到17.84g产物。
[0484] 1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯：将2-甲基-5-硝基三氟甲苯(3.90g,19mmol)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS,3.56g,20mmol)和2,2’-氮杂双(2-甲基丙腈)(AIBN,0.094g,0.6mmol)在40mL CCl4中的悬浮液在氮气气氛中回流加热16小时。HPLC指示约50%转化。加入额外的NBS(10mmol)和AIBN(0.6mmol)，混合物再回流加热14小时。
HPLC指示约80%转化。将反应混合物冷却至室温，过滤固体并用EtOAc洗涤。合并滤液用
1
NaHCO3水溶液洗涤，Na2SO4干燥，过滤，用旋转蒸发仪浓缩并进一步真空干燥。H NMR显示所需产物与未反应2-甲基-5-硝基三氟甲苯的比例为75:25。不经纯化直接用于下一步。
HPLC指示约80%转化。将反应混合物冷却至室温，过滤固体并用EtOAc洗涤。合并滤液用
1
NaHCO3水溶液洗涤，Na2SO4干燥，过滤，用旋转蒸发仪浓缩并进一步真空干燥。H NMR显示所需产物与未反应2-甲基-5-硝基三氟甲苯的比例为75:25。不经纯化直接用于下一步。
[0485] (R)-N,N-二甲基-1-(4-硝基-2-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-3-胺：向粗1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(17.5mmol,75%纯度)在40mL DCM中的溶液中加入Et3N(2.69mL,19.3mmol)和(R)-(+)-3-(二甲基氨基)吡咯烷(2.0g,17.5mmol)。在室温氮气气氛搅拌过夜，浓缩反应溶液后，加入NaHCO3(100mL)水溶液，所得混合物用DCM(4x50mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，所得残余物通过硅胶色谱纯化(用0-10%MeOH/DCM洗脱)，得到3.35g黄色油状产物。
[0486] (R)-1-(4-氨基-2-(三氟甲基)苄基)-N,N-二甲基吡咯烷-3-胺：向(R)-N,N-二甲基-1-(4-硝基-2-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-3-胺(1.20g,3.79mmol)在20mL湿EtOH中的溶液中加入0.26g Pd/C(10%Pd/C)，在巴氏设备(用氢气完全吹扫且压力自始至终在45psi)中摇动混合物2-3小时。通过小块硅藻土垫过滤反应混合物，用EtOAc洗涤，合并的浓缩有机物得到定量产率的浅黄色油。不经纯化直接用于下一步。
[0487] (R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺：在氮气气氛，向冷却的(0℃)(R)-1-(4-氨基-2-(三氟甲基)苄基)-N,N-二甲基吡咯烷-3-胺(3.79mmol)在14mL DCM中的溶液中加入3-碘-4-甲基苯甲酰氯(1.17g,4.17mmol;CAS#52107-98-9，由3-碘-4-甲基苯甲酸和SOCl2反应制备)，然后滴加N,N-二异丙基乙胺(2.64mL,15.2mmol)。在室温搅拌超过1.5小时后，浓缩反应混合物，用硅胶色谱纯化粗产物(用0-8%MeOH/DCM洗脱；氨气预饱和MeOH)，得到0.71g深黄色油状产物。
[0488] (R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺：将3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.051g,0.34mmol)、0.150g(0.28mmol)(R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺、0.016g(0.014mmol)Pd(PPh3)4、0.004g(0.021mmol)CuI和0.09mL(0.51mmol)N,N-二异丙基乙胺在3.5mL DMF中的混合物在室温氮气气氛搅拌3天(用额外当量的试剂并加热至80℃促使反应完成)。浓缩反应混合物，硅胶色谱纯化粗产物(0-10%MeOH/DCM洗脱；氨气预饱和MeOH)，得到0.020g固体产物：547m/z(M+H)。
[0489] (R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺可选地合成：
[0490] 类似于实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和(R)-1-(4-氨基-2-(三氟甲基)苄基)-N,N-二甲基吡咯烷-3-胺(如上述制备)制备(R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺及其单盐酸盐。类似于实施例1所描述的方法，利用3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0491] 实施例15
[0492] N-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺
[0493]
[0494] 类似于实施例14所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和N-(3-碘-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺制备目标化合物。得到固体产物：533m/z(M+H)。
[0495] N-(3-碘-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺：向含有1.0g(2.67mmol)4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸(CAS#859027-02-4；根据Asaki,T.等,Bioorg.Med.Chem.Lett.(2006),16,1421-1425制备)、0.62g(2.67mmol)3-碘-4-甲基苯胺、0.77g(4.0mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)和0.43g(3.2mmol)一水合N-羟基苯并三唑(HOBt·H2O)的烧瓶中加入5mL DCM和5mL三乙胺。在室温氮气气氛搅拌溶液3天，浓缩，用硅胶色谱纯化粗产物(100%EtOAc，然后用10%MeOH/EtOAc洗脱)，得到0.69g白色固体产物。
[0496] 实施例16:
[0497] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺
[0498]
[0499] 类似于实施例14所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺(如实施例2所述制备)制备目标化合物。得到固体产物：533m/z(M+H)。
[0500] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺的可选合成:
[0501] 类似于实施例1所描述的方法，由3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺(如实施例2制备)制备3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺及其单盐酸盐。类似于实施例1所描述的方法，用3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0502] 实施例17:
[0503] N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0504]
[0505] 根据实施例14所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺制备目标化合物。得到固体产物：499m/z(M+H)。
[0506] 1-(溴甲基)-2-氯-4-硝基-苯：将2-氯-4-硝基甲苯(10.0g,58.3mmol)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS,10.9g,61.2mmol)和2,2’-氮杂双(2-甲基丙腈)(AIBN,0.29g,1.75mmol)在120mL CCl4中的悬浮液在氮气气氛中加热回流12小时。反应混合物冷却至室温，过滤固体并用EtOAc洗涤。合并的滤液用NaHCO3水溶液洗涤，Na2SO4干燥，过滤，用旋转蒸发仪浓1
缩，进一步真空干燥。H NMR指示所需产物与未反应的2-氯-4-硝基甲苯的比例为50:50。
不经纯化直接用于下一步。
缩，进一步真空干燥。H NMR指示所需产物与未反应的2-氯-4-硝基甲苯的比例为50:50。
不经纯化直接用于下一步。
[0507] 1-(2-氯-4-硝基苄基)-4-甲基哌嗪：向粗1-(溴甲基)-2-氯-4-硝基-苯(29.1mmol;50%纯度)在30mL DCM中的溶液中加入Et3N(4.2mL,30mmol)和1-甲基哌嗪(3.4mL,30mmol)。室温搅拌3小时后，加入NaHCO3水溶液，DCM萃取混合物。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，所得残余物用硅胶色谱纯化(用5%MeOH/DCM洗脱)，得到6.80g深黄色油状产物。
[0508] 3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺：向1-(2-氯-4-硝基苄基)-4-甲基哌嗪(0.96g,3.6mmol)在MeOH/水(4:1,50mL)中的溶液中加入1.80g(33.7mmol)NH4Cl和1.47g(26.3mmol)Fe粉，在氮气气氛中加热回流混合物2小时(HPLC指示没有进行)。向其中加入4mL冰醋酸，混合物再回流加热2小时。反应混合物冷却至室温，过滤，浓缩滤液。残余物在EtOAc和饱和NaHCO3水溶液之间分层，用EtOAc萃取分离的水层，用盐水洗涤合并的有机层，Na2SO4干燥。浓缩，硅胶色谱纯化粗产物(5-7%MeOH/DCM洗脱；用1%三乙胺/DCM灭活的硅胶)，得到0.53g产物。
[0509] N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺可选地合成：类似于实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(如上述制备)制备N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺及其单盐酸盐。类似于实施例1所描述的方法，利用
3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备
3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备
3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0510] 实施例18:
[0511] N-(3-环丙基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0512]
[0513] 类似于实施例14所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和N-(3-环丙基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺合成目标化合物(类似于实施例17进行硝基还原；0.25M在MeOH/10%AcOH中)。得到固体产物：505m/z(M+H)。
[0514] 1-(2-环丙基-4-硝基苄基)-4-甲基哌嗪：将1-(2-溴-4-硝基苄基)-4-甲基哌 嗪(0.94g,3.0mmol)、0.77g(9.0mmol)环 丙基 硼酸、0.067g(0.30mmol)Pd(OAc)2、2.87g(13.5mmol)K3PO4和0.168g(0.60mmol)三环己基膦在18mL甲苯/水(5:1)中的混合物在氮气气氛加热回流19小时。浓缩反应混合物，硅胶色谱纯化粗产物(5%MeOH/DCM洗脱；
氨气预饱和MeOH)，得到0.80g产物。
氨气预饱和MeOH)，得到0.80g产物。
[0515] 实施例19:
[0516] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺
[0517]
[0518] 类似于实施例14所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和3-碘-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺制备目标化合物。得到固体产物：519m/z(M+H)。
[0519] 类似于实施例1的可选合成，由3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸和4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺(如实施例2制备)制备目标化合物。类似于实施例1所描述的方法，用3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和3-碘-4-甲基苯甲酸作为Sonogashira偶联原料制备3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酸。
[0520] 实施例20:
[0521] N-(4-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺
[0522]
[0523] 类似于实施例14所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和N-(4-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺合成目标化合物。得到固体产物：563m/z(M+H)。
[0524] 实施例21:
[0525] 3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-(哌嗪-1-基甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺
[0526]
[0527] 类似于实施例14所描述的方法，由3-乙炔基咪唑并[1,2-b]哒嗪和4-(4-(3-碘-4-甲基苯甲酰胺)-2-(三氟甲基)苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯合成目标化合物。用饱和MeOH/HCl(g)脱保护，得到三盐酸盐产物：519m/z(M+H)。
[0528] 代表性的生物学数据：
[0529] 本发明的化合物用多种方法进行评价来确定其生物活性。例如，检测本发明化合物抑制多种感兴趣的蛋白激酶的能力。检测的部分化合物显示出对抗下述激酶的纳摩尔活性：Abl、Abl T315I、Src、PDGFR、c-kit和FGFR。此外，筛选数种化合物在感染有野生型Bcr-Abl或Bcr-Abl T315I突变型的BaF3细胞中的抗增殖活性，并证明活性在1-100nM范围内。
[0530] 也可评价所述化合物对于感兴趣的肿瘤细胞的细胞毒性或生长抑制效果，如更详细地公开于下并如上文部分代表性化合物所示。参见如WO03/000188，115–136页，全部内容引入本文作为参考。
[0531] 部分代表性化合物如下所示。
[0532]
[0533]
[0534]
[0535]
[0536]
[0537]
[0538]
[0539]
[0540]
[0541]
[0542]
[0543]
[0544] 列于下表的化合物也显示出对多种感兴趣的蛋白激酶具有抑制活性。
[0545]
[0546]
[0547]
[0548] 激酶抑制
[0549] 更具体地，筛选了本发明化合物的如下所示的激酶抑制活性。适用于下述方案中的激酶包括但不仅限于“靶向的TKI”定义中确定的那些激酶。
[0550] 激酶表达为与E.coli或杆状病毒-高五表达体系中的谷胱甘肽S-转移酶(GST)或多组氨酸标记的融合蛋白融合的激酶域或全长结构。通过如前所述(Lehr等,1996;Gish等,1995)的亲和色谱将其纯化至接近同质性(homogeneity)。在一些情况下，激酶是共表达的或与纯的或部分纯的调节性多肽混和，然后测量活性。
[0551] 通过确立的方案(参见如Braunwalder等,1996)测量激酶活性和抑制。在该情况下，使用33P04从ATP转移到连接到微滴定板的生物活性表面的合成底物多(Glu,Tyr)4:1或多(Arg,Ser)3:1作为酶活性的测量。在培养期之后，首先通过用0.5%磷酸洗涤板，加入液体闪烁剂，然后在液体闪烁检测器中计数来测量转移的磷酸酯的量。IC50确定为使得掺入连接到板上的底物的33P量减少50%的化合物浓度。
[0552] 在一种方法中，在含有或不含本发明化合物的情况下，将活化的激酶与生物素化的底物肽(含tyr)一起培养。激酶测定培养期后，加入过量的激酶抑制剂与铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Eu-Ab)和别藻蓝蛋白-链亲和素(SA-APC)中止激酶反应。溶液中的生物素化的底物肽(含有或不含磷酸化的酪氨酸)通过生物素-亲和素连接到SA-APC。Eu-Ab仅结合至具有磷酸化的酪氨酸的底物。当溶液在615nm被激发时，从铕到APC发生能量转移(当它们接近时，即连接到生物素化的和磷酸化的底物肽的相同分子上)。然后APC发出2
波长为665nm的荧光。激发和发射发生在Wallac VictorV板计数器上，其中使用荧光测定法读板并记录在615和665nm的吸光度。然后将这些数据通过Excel板处理程序处理，其通过将荧光转化为得到的磷酸化的底物的量计算测试化合物的IC50，并确定抑制50%磷酸化的底物出现所需的测试化合物的浓度(IC50)。
波长为665nm的荧光。激发和发射发生在Wallac VictorV板计数器上，其中使用荧光测定法读板并记录在615和665nm的吸光度。然后将这些数据通过Excel板处理程序处理，其通过将荧光转化为得到的磷酸化的底物的量计算测试化合物的IC50，并确定抑制50%磷酸化的底物出现所需的测试化合物的浓度(IC50)。
[0553] 其它依赖于磷酸酯转移至溶液中或固定的(即固相)肽或多肽底物(含有酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸或组氨酸本身，或者相互组合，或者与其它氨基酸组合)的方法也是可用的。
[0554] 例如，也可利用闪烁接近法、荧光偏振法或均相时间分辨荧光法检测磷酸酯转化至肽或多肽。或者，利用基于抗体的方法测量激酶活性，其中抗体或多肽用作检测磷酸化的靶多肽的试剂。
[0555] 对于测定方法的其它背景信息请参见如Braunwalder等,1996,Anal.Biochem.234(l):23;Cleaveland 等 ,1990,Anal Biochem.190(2):249Gish 等 (1995).Protein Eng.8(6):609Kolb 等 (1998).Drug Discov.Toda V.3:333Lehr 等 (1996).Gene169(2):27527-87Seethala等(1998).Anal Biochem.255(2):257Wu等(2000)。
[0556] 靶向的TKI活性：
[0557] 根据公开于O’Hare等(本文引用)的操作，利用多个重组激酶结构域与和肽底物评价普纳替尼的体外效力和选择性。所得数据在随后的下表中显示：
[0558] 普纳替尼对天然的ABL、ABLT315I和所选的激酶的激酶抑制性质
[0559]
[0560] 从上述数据可以证明普纳替尼对多种激酶(包括Abl、PDGFR、src和c-kitin)在低纳摩尔范围内具有抑制活性，如其IC50。更具体地，除了抑制Abl(IC50：0.37nM)和AblT315I(IC50：2.0nM)，普纳替尼被确定为src(IC50：5.4nM)、PDGFR(IC50：1.1nM)和c-kit(IC50：12.5nM)的有效抑制剂。
[0561] 为了确定普纳替尼的选择性，根据公开于O’Hare等(本文引用)的操作，在更广泛的体外激酶测定板中进行了检测。所得数据示于随后的下表中：
[0562] 普纳替尼激酶板筛选数据
[0563]
[0564] 从上表可以看出，普纳替尼不仅是本发明公开的方法中感兴趣的激酶(如PDGFR、src、c-kit)的有效抑制剂，而且根据其对最右栏中确定的激酶(如ALK、RON等)相对缺乏活性可以看出，其为选择性激酶抑制剂。该数据展示了令人意外的发现：普纳替尼能穿越血脑屏障并累积；研发普纳替尼用于治疗神经退行性疾病是意料不到的。
[0565] 基于细胞的测定
[0566] 本发明的具体化合物也证明对肿瘤和其它癌症细胞系具有细胞毒性或生长抑制作用，因此可用于癌症和其它细胞增殖疾病的治疗。利用本领域技术人员熟知的体内和体外测定测试化合物的抗肿瘤活性。通常，为了确定备选抗癌药物的化合物初始筛选在细胞中进行。然后在整个生物体中，测定在该基于细胞的测定中确定的具有抗增殖活性的化合物的抗肿瘤活性和细胞毒性。通常来说，基于细胞的测定相对于整个生物体的测定更加迅速且成本更低。对于本发明而言，术语“抗肿瘤”和“抗癌”可交换使用。
[0567] 基于细胞的测定的实例如下所示。测定中使用的细胞系是Ba/F3，鼠类pro-B细胞系，其已经用全长野生型Bcr-Abl或具有多种激酶结构域点突变(包括T351I、Y253F、E255K、H396P、M351T等)结构的Bcr-Abl稳定地转染。亲代Ba/F3细胞系作为对照。这些细胞系获自Brian J.Druker(Howard Hughes Medical Institute,Oregon Health and Science University,Portland,Oregon,USA)。将表达Bcr-Abl或Bcr-Abl突变株的Ba/F3细胞保持在PRMI1640生长培养基中，所述培养基含有200μM L-谷酰胺、10%FCS、青霉素(200U/ml)、和链霉素(200μg/ml)。亲代Ba/F3细胞在添加有10ng/ml IL-3的相同培养基中培养。
[0568] 亲代Ba/F3细胞(添加有IL-3)或表达WT或突变株Bcr-Abl的Ba/F3细胞以1x104个细胞/孔一式两份接种在培养基中具有不同浓度的化合物的96孔板中。首先将化合物溶解并稀释在DMSO中，制备4倍稀释液；接着将等体积的含DMSO的化合物转移至培养基中，然后转移到细胞板上。最终化合物浓度为10μM到6nM。相同百分比的DMSO用作对照。化合物与细胞培养3天之后，利用CellTiter96AQueous One Solution Cell Proliferation测定试剂盒按照试剂盒说明书来测量活细胞的数量。基本上，将四唑盐加入到培养的细胞中，通过活细胞进行酶转化为可检测的产物。处理细胞，并通过测量甲瓒衍生物的量来确定细胞的光密度。由双份的孔产生平均值+/-SD，并报道为对照的百分吸光度。利用Microsoft Excel-拟合软件在最佳拟合曲线中计算IC50。
[0569] 普纳替尼在脑组织中的分布
[0570] 在25mM pH2.75的柠檬酸盐缓冲液中配制普纳替尼，并以5mg/kg(和5mL/kg)口服给药(单一剂量)至大鼠。在给定的时间点(1、2、4、6、24和48小时)，通过二氧化碳窒息将动物麻醉，从后眶窦神经网状组织收集血液样品。收集血液后，将大鼠安乐死并通过钝器解剖取出大脑。清洗脑部，干燥剥离并置于50mL尖底离心管中并在干冰上冷冻。一旦冷冻完成，即从管中取出大脑并称重。大脑储存在-20℃直至分析，如果需要，将血液样品储存在4℃，然后以15,000rpm离心15分钟。取出血浆并在-80℃储存，然后分析。通过LC/MS/MS分析样品。
[0571] 在给药后的初始2小时内，血浆浓度(ng/mL)高于大脑中的浓度(ng/gm)，在4小时大脑和血浆中的Tmax相同。这显示大脑吸收具有与血浆相同的药代动力学，且普纳替尼没有延迟地到达大脑组织。得到下述数据：
[0572] 表1
[0573]
[0574] 这些结果显示，在这些实验中，普纳替尼在脑中的暴露是血液中的2.79倍(基于曲线下面积(AUC))，基于最大观察浓度(Cmax)则是2.26倍。观察到的消除半衰期，在脑中也长于在血液中。这些结果与前述研究一致，所述研究对雌性大鼠连续七次给药口服剂量的普纳替尼(10mg/kg)，最终24-小时脑/血浆比例是2.27。因此，用普纳替尼或其盐治疗，导致脑组织中普纳替尼的浓度是血清中测得的浓度的两倍。
[0575] 临床研究
[0576] 在具有复发性血液癌症的患者中进行了I期临床试验，以评估普纳替尼盐酸盐的安全性。设计了该多中心、连续剂量升高的研究，以确定口服普纳替尼的安全性和耐受性，及其药代动力学(在患者中的药物行为)和药效学(在患者细胞中的药物效果)。
[0577] 受试者接受下述剂量水平：2mg(3名受试者)、4mg(6名受试者)、8mg(7名受试者)、15mg(8名受试者)、30mg(7名受试者)、45mg(13名受试者)和60mg(13名受试者)。在这些受试者中，确定45mg为进一步研究的最大耐受剂量(MTD)。允许患者内剂量升高。
[0578] 初步的安全性数据如下所示：对于2到30mg组：未观察到剂量限制性毒性(DLT)；对于45mg组：在一个患者身上看到可逆的疹；和对于60mg组：四个患者出现了与DLT相关的可逆胰腺副作用(胰腺炎)。任何级别的最普遍的与药物相关的副作用(AE)是血小板减少(25%)、贫血、脂肪酶增加、恶心和疹(12%每组)和关节痛、疲劳和胰腺炎(11%每组)。
[0579] 药代动力学数据证明普纳替尼的半衰期是19-45小时。剂量≥30mg时，半衰期是18小时。在30mg剂量时，第1天的Cmax约为55nM。在重复给药后，在可评价的患者中，观察到1.5到3倍的累积。
[0580] 每天给药60mg普纳替尼的患者的药代动力学数据于表2所示。
[0581] 表2以60mg(ng/mL)口服给药普纳替尼的情况
[0582]