一种小麦麸皮活性多糖的溶剂提取方法

摘要

本发明公开了一种从小麦麸皮中提取其中活性多糖-阿拉伯木聚糖的复合溶剂方法。该提取方法主要包括如下步骤：先用弱酸(柠檬酸)温和水解预处理小麦麸皮；再用强碱(KOH)提取目标多糖；提取液经离心、中和、浓缩及乙醇沉淀；乙醇沉淀物干燥即得目标多糖。乙醇沉淀离心上清液经浓缩干燥后可作为农用复合肥加以综合利用。本发明利用小麦麸皮这一大宗副产物资源，设计了一种复合溶剂来提取阿拉伯木聚糖这一生物活性多糖，较传统碱法提高了工作效率并减轻了环保压力。动物实验显示该多糖具有显著的免疫调节活性，功效堪与香菇多糖相比。本发明涉及目标多糖原料价格低廉，资源丰富，提取方法更加绿色、环保，未来产业化发展前景广阔。

权利要求

1.一种从小麦麸皮中提取活性多糖的复合溶剂方法，包括如下步骤：先用酸性溶剂处理小麦麸皮，得到适当酸水解的小麦麸皮，再用碱性溶剂提取、乙醇沉淀得到其中的目标多糖；

所述酸性溶剂为0.05M-0.15M的柠檬酸溶液，酸处理的温度是50.0℃-80.0℃，时间

1.0h-3.0h，所述的小麦麸皮与柠檬酸溶液的配比为1kg∶(8-12)L；

所述用碱性溶剂提取包括如下步骤：添加KOH至酸水解小麦麸皮混合溶液中，碱性溶剂浓度控制在0.01M-0.08M，提取温度40.0℃-60.0℃，时间0.5h-1.5h。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在酸性溶剂处理前，包括如下对所述小麦麸皮进行预处理的步骤：将小麦麸皮水洗、过筛；水洗次数为3-5次，小麦麸皮与水的配比为

1kg∶(15-25)L，得到脱除淀粉、相对纯净的纤维基质小麦麸皮原料。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其特征在于：在碱性溶剂提取之后，在所述乙醇沉淀前，包括如下对提取物进行离心、中和、浓缩的步骤：将碱性溶剂提取物进行离心，收集上清液，将上清液加酸调节pH至中性，真空浓缩至上清液原体积的1/5-1/10，得到浓缩提取液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在所述离心、中和、浓缩之后，调节65％的乙醇浓度来沉淀目标多糖，沉淀温度为4.0℃-25.0℃、时间12h-24h。

5.根据权利要求1-2，4中任一项所述的方法，其特征在于：乙醇沉淀后的上清液在回收乙醇之后，经真空浓缩、喷雾干燥制备富含柠檬酸钾、氯化钾的复合钾肥，无废弃排放。

6.由权利要求1-5中任一项所述方法得到的多糖。

7.根据权利要求6所述的多糖，其特征在于：所述多糖主要为阿拉伯木聚糖；所述多糖的重均分子量在5.0×104Da-10.0×104Da范围内；所述多糖具有显著的免疫增强活性。

说明书

一种小麦麸皮活性多糖的溶剂提取方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种从小麦麸皮提取的、具有免疫调节活性阿拉伯木聚糖的绿色、环保溶剂提取方法。

背景技术

[0002] 小麦麸皮是小麦制粉加工的大宗副产物，我国作为小麦主产和消费大国，每年有2000万吨左右的麸皮资源。小麦麸皮主要由小麦籽粒的种皮、糊粉层及残余胚乳等组织部位构成，其组成中近一半属于纤维基质，包括纤维素、木质素以及禾谷类作物细胞壁结构中的主要非淀粉、非纤维素多糖-阿拉伯木聚糖(或称戊聚糖)，其中阿拉伯木聚糖约占小麦麸皮纤维基质的60％以上。国内外前期大量研究表明，小麦麸皮中的阿拉伯木聚糖是一种重要的功能多糖，除了对面制品的加工功能有重要影响外，其还具有生物活性多糖常见的机体生理调节功能，如润肠通便、降血脂、免疫增强等。阿拉伯木聚糖在小麦麸皮中主要以不溶形式存在，而其功能活性需要在可溶状态下才能发挥，因此将小麦麸皮中的阿拉伯木聚糖从不溶的纤维基质中提取分离出来，转化成可溶性多糖就显得十分必要。目前在我国，小麦麸皮90％以上仍主要用作畜禽饲料、发酵培养基，缺乏高附加值产品的开发与深加工转化，尤其是像阿拉伯木聚糖这种功效明确活性组分的开发。

[0003] 国内公开专利中，多是以小麦麸皮为原料制备麦麸膳食纤维，如“麦麸的多功能转化-膳食纤维的提取方法(200410006552.x)”、“多酶分步法制备小麦麸膳食纤维粉的方法(200510019123.0)”、“一种从小麦麸中提取多功能膳食纤维的方法(200610024903.9)”、“一种利用超声波辅助酶解制备麦麸膳食纤维的方法(200710135501.0)”、“一种麦麸膳食纤维的制备方法(201010185365.8)”、“一种利用小麦麸皮制备膳食纤维的方法(201110152252.2)”等，产品多是不溶性的膳食纤维。也有一些专利涉及利用酶解工艺从小麦麸皮中提取阿拉伯木聚糖(或称戊聚糖)或低聚木糖，如“一种小麦麸皮戊聚糖的分离制备方法和应用(200410014376.4)”、“一种酶解小麦麸皮制备阿魏酰低聚糖的方法(200610037952.6)”、“一种酶解小麦麸皮制备低聚木糖的方法(200610037953.0)”、“一种利用挤压辅助酶解小麦麸皮制备低聚木糖的方法(200710135300.0)”、“小麦麸皮酶工程法转化戊聚糖和膳食纤维的方法(200910064898.8)”、“一种发酵麦麸制备阿魏酰低聚糖的方法(201110060123.0)”、“一种从小麦麸皮中提取木聚糖的方法(201210371793.9)”等多项专利，主要采用能够降解目标多糖-阿拉伯木聚糖的木聚糖酶或戊聚糖酶；此外，酶解目标还包括去除小麦麸皮中的淀粉、蛋白质、纤维素等杂质。在我们前期的研究工作中发现，淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶的作用主要在于提高阿拉伯木聚糖的纯度，对于提高目标多糖溶解性的影响作用并不十分显著。另外，木聚糖或戊聚糖酶虽然能够直接作用于目标多糖，使其发生降解而达到增溶目的，但实际应用中，受到与目标多糖共存的纤维素、木质素等组分的束缚与空间阻碍作用，实际的酶解增溶效果并不显著，且酶作用时间通常较长，达到二十小时以上乃至数天(如“一种酶解小麦麸皮制备阿魏酰低聚糖的方法(200610037952.6)”、“一种酶解小麦麸皮制备低聚木糖的方法(200610037953.0)”、“一种生物降解麦麸阿拉伯木聚糖的方法(200810071343.1)”)。酸法降解多糖虽然效果较好，但控制不当很容易把多糖水解成小分子糖(木寡糖)甚至单糖(木糖、阿拉伯糖)，而使其失去多糖应有的生物活性。

[0004] 目前在国内外研究中，提取小麦麸皮中的阿拉伯木聚糖比较常见的是采用碱性溶剂法，如氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钙(Ca(OH))2)、氨水(NH3)等或强或弱的碱液，在室温至较高温度下(60-90℃)提取，其中最常用的是NaOH碱剂。本研究团队在前期研究中亦探知，在控制较高NaOH浓度(0.1N)、提取温度(88℃)以及充分提取时间(2h)的条件下，麸皮阿拉伯木聚糖的提取率可达到70％以上(78.5％)。但是，在未来的产业化应用中，高NaOH浓度、高温提取会带来生态环保问题。NaOH中和后生成的钠盐，如果直接排放会对环境造成严重污染，回收又缺乏经济可行性。因此，选取切实、可行的方法提取小麦麸皮中的阿拉伯木聚糖是解决其出路的必要前提。

[0005] 经过前期大量研究，在传统碱法提取的基础上，本专利提出了一种新型复合溶剂提取法，即弱酸前处理加碱剂后提取的方法。弱酸前处理是为替代生物酶对多糖链的轻度水解以增强后期碱提取的效果；所用碱为相对绿色环保的碱剂，经过中和反应后的产物可回收作为农用化肥使用，由此可避免未来产业化的环保压力，因此可称为绿色、环保溶剂提取方法。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种从小麦麸皮中提取具有免疫调节活性阿拉伯木聚糖的复合溶剂提取方法。

[0007] 本发明所提供的提取多糖的复合溶剂方法，主要包括如下步骤：先用酸性溶剂处理小麦麸皮，得到适当酸水解的小麦麸皮；再用碱性溶剂提取其中的目标多糖。

[0008] 上述过程中，所述用酸性溶剂处理小麦麸皮具体包括如下步骤：将所述小麦麸皮、水与酸性溶剂混合，进行酸水解反应；所述酸性溶剂为含有0.05M-0.15M的柠檬酸溶液，酸水解的温度为50.0℃-80.0℃，作用时间为1.0h-3.0h，所述小麦麸皮与柠檬酸的配比为1kg∶(8-12)L。

[0009] 上述过程中，所述用碱性溶剂提取其中的目标多糖具体包括如下步骤：将前述经过酸水解的小麦麸皮混合溶液，添加强碱调整溶液碱剂浓度；所述强碱为氢氧化钾(KOH)，碱剂浓度控制在0.01M-0.08M，碱剂提取的温度为40.0℃-60.0℃，提取时间为0.5h-1.5h。

[0010] 上述过程中，在所述酸性溶剂处理前，所述方法还可包括如下对所述小麦麸皮进行脱除胚乳淀粉的预处理步骤，得到相对纯净的纤维基质小麦麸皮原料。

[0011] 所述脱除胚乳淀粉的方法可具体包括如下步骤：将所述商品小麦麸皮进行多次水洗、过筛；水洗次数为3-5次；所述商品小麦麸皮与水的配比可为1kg∶(15-25)L。

[0012] 上述过程中，在所述碱性溶剂提取之后，所述方法还可包括如下纯化步骤：将所述提取物离心，收集上清液；中和，浓缩；浓缩物采用乙醇沉淀；离心、收集醇沉物。

[0013] 所述离心步骤中，离心力为3000g-5000g，离心时间为15min-30min，收集所述离心上清液；

[0014] 所述中和步骤中，中和上清液所用酸剂为盐酸，盐酸浓度为2M-4M；

[0015] 所述浓缩步骤中，采取低温真空浓缩工艺，温度为45.0℃-55.0℃，真空度为0.003MPa-0.005MPa，所述浓缩液体积控制在所述离心上清液体积的1/5-1/10；

[0016] 所述乙醇沉淀步骤中，所述沉淀温度为4.0℃-25.0℃，沉淀时间为12h-24h，最终乙醇浓度控制为65％。

[0017] 在经历以上所述过程之后，离心、收集所述醇沉物，采用真空干燥法使其水分降至8％-10％以下，即得到所述目标多糖。

[0018] 在所述醇沉、离心，收集所述醇沉物之后，离心上清液采用真空浓缩法回收乙醇，并将浓缩液最终干燥，得到所述复合钾肥。

[0019] 在上述浓缩液的干燥中，所述浓缩液的最终浓缩浓度应达到35％以上；

[0020] 在上述浓缩液的干燥中，所用干燥方法为喷雾干燥法；

[0021] 在上述浓缩液的干燥中，所述复合钾肥的最终水分含量应降至5％以下。

[0022] 上述过程中，凡是涉及小麦麸皮与某物质的配比，均是指未经任何处理的原始小麦麸皮的量。

[0023] 上述任一所述方法得到的多糖也属于本发明的保护范围。

[0024] 所述目标多糖主要成分为阿拉伯木聚糖；所述多糖的重均分子量应在5.0×104Da-10.0×104Da。

[0025] 本发明的主要目的是以小麦麸皮为原料获取一种具有增强机体免疫功能的多糖类产品。

[0026] 上述多糖产品在制备增强机体免疫功能药物中的应用也属于本发明的保护范围。

[0027] 本发明的另一目的是利用弱酸-强碱复合溶剂提取目标多糖之后的副产物仍能有效得以利用而不会带来环保压力。

[0028] 本发明以商品小麦麸皮为原料，通过脱淀粉、弱酸(柠檬酸)-强碱(KOH)复合溶剂处理、中和、醇沉、真空干燥等工艺步骤，获得目标多糖，该多糖得率在15.0％以上(产品与商品小麦麸皮的质量百分比)，其中阿拉伯木聚糖含量为75.0％以上(以干基中戊聚糖含量计)。

[0029] 本发明方法利用小麦麸皮这一农副产品资源，通过预处理和溶剂提取可大量获取以阿拉伯木聚糖(或称戊聚糖)为主的多糖产品。另动物实验显示该多糖具有显著的免疫调节功能，功效堪与市售药用真菌多糖(香菇多糖)相媲美。本目标多糖原料价格低廉、来源丰富，较药用真菌多糖更具市场竞争优势，在解决了提取工艺的环保压力后，未来产业化发展前景将更加广阔。

附图说明

[0030] 图1小麦麸皮活性多糖提取的流程图。

具体实施方式

[0031] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0032] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0033] 小麦麸皮可以从小麦面粉加工企业(如北京古船面粉集团)购买获得。

[0034] 实施例1、小麦麸皮活性多糖的溶剂法提取

[0035] 一、多糖提取：多糖提取的流程图如图1所示。

[0036] 1)小麦麸皮预处理

[0037] 称取小麦麸皮100g，分散于500mL水中，于室温下搅拌30min，过60目筛，收集筛上物；重复此过程3-5次，至水清，得到脱胚乳淀粉的小麦麸皮。

[0038] 2)酸解

[0039] 将脱除淀粉的小麦麸皮分散至800mL浓度为0.15M的柠檬酸溶液中，置于50.0℃保温罐中搅拌反应3.0h，得到酸解小麦麸皮混合溶液。

[0040] 3)碱剂提取

[0041] 向酸解小麦麸皮混合溶液中添加KOH，调整碱溶液浓度至0.08M；置于40.0℃下搅拌提取，提取时间为1.0h。

[0042] 4)离心、浓缩

[0043] 将冷却至室温的碱剂提取混合液离心(3000rpm，30min)，收集上清液；将上清液用2M盐酸溶液调节pH值至中性；将中和液在45.0℃下真空浓缩，真空度为0.003MPa，将溶液体积浓缩至160mL左右停止(即浓缩至原体积的1/5左右)，得到的产物记作浓缩液。

[0044] 5)乙醇沉淀

[0045] 向浓缩液中搅拌添加适量95％食用乙醇，调节体系乙醇浓度达到65％(搅拌状态下缓慢加入乙醇，尽量避免添加过快造成局部浓度过高而带来非目标物沉淀)，形成絮凝沉淀，4℃下静置12h；离心(3000rpm，30min)，收集醇沉物。

[0046] 6)干燥

[0047] 将所得乙醇沉淀物在真空条件下干燥，至物料水分含量降至10％；粉碎，过100目筛，得到最终多糖产品。

[0048] 7)提取液回收

[0049] 收集离心上清液，真空条件下浓缩，回收乙醇；继续浓缩，至浓缩液固形物含量达到35％；喷雾干燥至物料水分含量降至5％以下，得到以柠檬酸钾、氯化钾为主要成分的复合钾肥。

[0050] 以上实验重复2次。

[0051] 二、多糖组分分析与鉴定

[0052] 1)基本组成检测

[0053] 产品中水分含量检验按GB/T 21305-2007谷物及谷物制品水分的测定常规法执行，戊聚糖含量按地衣酚-盐酸法执行，具体步骤如下：

[0054] ①标准曲线的绘制

[0055] 准确称量木糖(分析纯，Sigma公司，产品目录号95729)0.100g，用蒸馏水定容至100mL，从中移取10ml于100ml容量瓶中、定容，配制成100μg/ml木糖标准溶液。

[0056] 分别移取木糖标准溶液0ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml和2.0ml，依次加入6支试管中，用蒸馏水补加体积至3.0ml，依次再分别加入0.3ml质量分数为1％的地衣酚(Aldrich公司，产品目录号447420)无水乙醇溶液和3.0ml质量分数为0.1％的FeCL3(分析纯，国药集团化学试剂北京有限公司)浓盐酸溶液，混合均匀，沸水浴30min，取出迅速冷却至室温，用未加木糖溶液的空白管作对照，于670nm、580nm波长下比色，所得吸光值为二波长吸光值的差值(ΔA＝A670-A580)，以ΔA为纵坐标，以对应木糖溶液的质量为横坐标，绘制标准曲线。

[0057] ②样品的测定

[0058] 取适量(0.010-0.050g)提取多糖样品，加入20ml 2M HCl溶液，于密封试管内100℃水浴中水解3h，冷却后用滤纸过滤；把水解液适当稀释后准确移取1ml于具塞试管中，依次加入2ml蒸馏水、0.3ml质量分数1％的地衣酚无水乙醇溶液、3.0ml质量分数0.1％的FeCL3浓盐酸溶液，混合均匀，沸水浴30min；迅速冷却至室温，于670nm、580nm波长下测定吸光度，其它同①。计算公式：

[0059] 戊聚糖含量(％)＝C*n*0.88*100/m/106

[0060] 式中C表示由标准曲线得到木糖质量(μg)；n为稀释倍数；m为样品干重(g)。

[0061] 产品得率计算公式：得率(％)＝所得产品干基质量(g)/用于提取的小麦麸皮干基质量(g)×100％；其中，某物质干基质量：是指将某物质中的水分去除后，该物质的重量。

[0062] 对每次提取得到的多糖产品的组成鉴定均重复3次，结果取平均数。

[0063] 实验结果表明，本发明方法所得目标多糖得率为16.5％，其中戊聚糖含量为78.7％(以木糖计)。

[0064] 2)单糖组成分析：高效液相色谱(HPLC)法

[0065] 取10.0mg本发明所得多糖固体产品，在20ml、1M H2SO4溶液中100℃水解3h；冷却，加入BaCO3中和至pH7.0；过滤、收集滤液；微滤(φ0.45μm)，滤液备用。

[0066] HPLC条件：Sugar pakl、6.8×300mm色谱柱(Waters公司)；流动相为超纯水；流速0.5mL/min；柱温85℃；池温30℃；进样量10μL；检测器为示差折光检测器。

[0067] 葡萄糖标准品购自Sigma公司，产品目录号为G5400；木糖标准品购Sigma公司，产品目录号为95729；阿拉伯糖标准品购自Sigma公司，产品目录号为10860。

[0068] 在如上色谱条件下，葡萄糖标准品的保留时间为13.023min；木糖标准品的保留时间为15.008min；阿拉伯糖标准品的保留时间为16.285min。

[0069] 实验设双平行重复。经测定本发明所得多糖产品中糖水解产物分别为：葡萄糖、木糖、阿拉伯糖；葡萄糖在三种糖中的质量百分含量为3.06％，木糖在三种糖中的质量百分含量为62.18％，阿拉伯糖在三种糖中的质量百分含量为34.76％；结果表明，本发明所得多糖产品的糖单元组成中95％以上是木糖和阿拉伯糖这两种五碳糖，葡萄糖含量很低，判定本发明产品为一种阿拉伯木聚糖(或戊聚糖)产品。

[0070] 3)产物分子量分布测定：多角度激光光散射-高效凝胶过滤色谱法(MALLS-HPSEC)[0071] 将本发明产品配制成多糖浓度为5mg/mL的溶液，溶剂为0.01M、pH7.2磷酸缓冲液；微滤(φ0.45μm)，滤液备用。

[0072] 测定条件：DAWN-EOS多角度激光散射仪(美国Wyatt公司)，HPLC系统(Waters公司)，TSK-gel G4000 HHR柱(日本TOSOH公司)，流动相0.01M、pH7.2磷酸缓冲液，流速0.5mL/min，色谱柱温为室温，激光波长690.0nm，运行时间30min。数据处理采用Astra软件。

[0073] 实验做双平行重复。

[0074] 检测结果显示：本发明目标多糖主要组分为一种重均分子量在7.123×104Da、由阿拉伯糖和木糖组成的阿拉伯木聚糖(或称戊聚糖)。

[0075] 实施例2、小麦麸皮活性多糖的溶剂法提取

[0076] 一、多糖提取：多糖提取的流程图如图1所示。

[0077] 1)小麦麸皮预处理

[0078] 称取小麦麸皮1000g，分散于6L水中，于室温下搅拌30min，过60目筛，收集筛上物；重复此过程4次，至水清，得到脱胚乳淀粉的小麦麸皮。

[0079] 2)酸解

[0080] 将脱除淀粉的小麦麸皮分散至10L浓度为0.05M的柠檬酸溶液中，置于80.0℃保温罐中搅拌反应1.0h，得到酸解小麦麸皮混合溶液。

[0081] 3)碱剂提取

[0082] 向酸解小麦麸皮混合溶液中添加KOH，调整碱溶液浓度至0.05M；置于50.0℃下搅拌提取，提取时间为0.5h。

[0083] 4)离心、浓缩

[0084] 将冷却至室温的碱剂提取混合液离心(3000rpm，15min)，收集上清液；将上清液用4M盐酸溶液调节pH值至中性；将中和液在55.0℃下真空浓缩，真空度为0.005MPa，将溶液体积浓缩至1L左右停止(即浓缩至原体积的1/10左右)，得到的产物记作浓缩液。

[0085] 5)乙醇沉淀

[0086] 向浓缩液中搅拌添加适量95％食用乙醇，调节体系乙醇浓度达到65％(搅拌状态下缓慢加入乙醇，尽量避免添加过快造成局部浓度过高而带来非目标物沉淀)，形成絮凝沉淀，4℃下静置24h；离心(3000rpm，20min)，收集醇沉物。

[0087] 6)干燥

[0088] 将所得乙醇沉淀物在真空条件下干燥，至物料水分含量降至8％；粉碎，过100目筛，得到最终多糖产品。

[0089] 7)提取液回收

[0090] 收集离心上清液，真空条件下浓缩，回收乙醇；继续浓缩，至浓缩液固形物含量达到36％；喷雾干燥至物料水分含量降至5％以下，得到以柠檬酸钾、氯化钾为主要成分的复合钾肥。

[0091] 以上实验重复2次。

[0092] 二、多糖组分分析与鉴定

[0093] 1)基本组成检测

[0094] 方法同实施例1中所述一致。

[0095] 实验结果表明，本发明方法所得目标多糖得率为17.1％，其中戊聚糖含量为75.3％(以木糖计)。

[0096] 2)单糖组成分析：高效液相色谱(HPLC)法

[0097] 方法同实施例1中所述一致。

[0098] 经测定本发明所得多糖产品中糖水解产物分别为：葡萄糖、木糖、阿拉伯糖，三种单糖的质量百分含量依次为3.06％、60.15％、36.79％。本发明所得多糖产品的糖单元组成中95％以上是木糖和阿拉伯糖这两种五碳糖，葡萄糖含量很低，由此判定本发明产品为一种阿拉伯木聚糖(或戊聚糖)产品。

[0099] 3)产物分子量分布测定：多角度激光光散射-高效凝胶过滤色谱法(MALLS-HPSEC)[0100] 方法同实施例1中所述一致。

[0101] 检测结果显示：本发明目标多糖主要组分为一种重均分子量在5.218×104Da、由阿拉伯糖和木糖组成的阿拉伯木聚糖(或称戊聚糖)。

[0102] 实施例3、小麦麸皮活性多糖的溶剂法提取

[0103] 一、多糖提取：多糖提取的流程图如图1所示。

[0104] 1)小麦麸皮预处理

[0105] 称取小麦麸皮10kg，分散于4.5L水中，于室温下搅拌30min，过60目筛，收集筛上物；重复此过程5次，至水清，得到脱胚乳淀粉的小麦麸皮。

[0106] 2)酸解

[0107] 将脱除淀粉的小麦麸皮分散至120L浓度为0.10M的柠檬酸溶液中，置于60.0℃保温罐中搅拌反应2.4h，得到酸解小麦麸皮混合溶液。

[0108] 3)碱剂提取

[0109] 向酸解小麦麸皮混合溶液中添加KOH，调整碱溶液浓度至0.01M；置于60.0℃下搅拌提取，提取时间为1.0h。

[0110] 4)离心、浓缩

[0111] 将冷却至室温的碱剂提取混合液离心(3000rpm，20min)，收集上清液；将上清液用2.5M盐酸溶液调节pH值至中性；将中和液在50.0℃下真空浓缩，真空度为0.004MPa，将溶液体积浓缩至15L左右停止(即浓缩至原体积的1/8左右)，得到的产物记作浓缩液。

[0112] 5)乙醇沉淀

[0113] 向浓缩液中搅拌添加适量95％食用乙醇，调节体系乙醇浓度达到65％(搅拌状态下缓慢加入乙醇，尽量避免添加过快造成局部浓度过高而带来非目标物沉淀)，形成絮凝沉淀，4℃下静置15h；离心(3000rpm，15min)，收集醇沉物。

[0114] 6)干燥

[0115] 将所得乙醇沉淀物在真空条件下干燥，至物料水分含量降至7％；粉碎，过100目筛，得到最终多糖产品。

[0116] 7)提取液回收

[0117] 收集离心上清液，真空条件下浓缩，回收乙醇；继续浓缩，至浓缩液固形物含量达到35.5％；喷雾干燥至物料水分含量降至5％以下，得到以柠檬酸钾、氯化钾为主要成分的复合钾肥。

[0118] 以上实验重复2次。

[0119] 二、多糖组分分析与鉴定

[0120] 1)基本组成检测

[0121] 方法同实施例1中所述一致。

[0122] 实验结果表明，本发明方法所得目标多糖得率为15.8％，其中戊聚糖含量为78.6％(以木糖计)。

[0123] 2)单糖组成分析：高效液相色谱(HPLC)法

[0124] 方法同实施例1中所述一致。

[0125] 经测定本发明所得多糖产品中糖水解产物分别为：葡萄糖、木糖、阿拉伯糖，三种单糖的质量百分含量依次为2.54％、61.02％、35.14％。本发明所得多糖产品的糖单元组成中95％以上是木糖和阿拉伯糖这两种五碳糖，葡萄糖含量很低，由此判定本发明产品为一种阿拉伯木聚糖(或戊聚糖)产品。

[0126] 3)产物分子量分布测定：多角度激光光散射-高效凝胶过滤色谱法(MALLS-HPSEC)[0127] 方法同实施例1中所述一致。

[0128] 检测结果显示：本发明目标多糖主要组分为一种重均分子量在6.744×104Da、由阿拉伯糖和木糖组成的阿拉伯木聚糖(或称戊聚糖)。

[0129] 实施例4、小麦麸皮活性多糖免疫调节功能实验

[0130] 实验程序参照《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003年)的方法对昆明种小鼠进行免疫调节功能测定。检测指标包括①免疫器官脏/体重比值；②绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠DTH(足跖增厚法)迟发型变态反应(DTH)；③血凝法测定血清溶血素抗体积数(血凝法)；④小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)测定吞噬率及吞噬指数。具体方法和计算公式可见上述规范。

[0131] 采用实施例1所制备多糖开展功能实验。将多糖按照50、100、150mg/kg的低、中、高剂量加入到基础日粮中。实验小鼠分为5组，每组10只，作为对照组、阳性对照组(香菇多糖，100mg/kg，浙江普洛康裕天然药物有限公司)、低剂量组(50mg/kg)、中剂量组(100mg/kg)、高剂量组(150mg/kg)，分别饲喂基础日粮和不同多糖剂量的试验日粮。

[0132] 所有实验数据经SPSS8.0统计软件处理后用 表示，组间比较采用t检验。结果如表1-表4所示。

[0133] 表1小麦麸皮多糖对小鼠胸腺和脾脏/体重的影响

[0134]

[0135] 注：与对照组相比的差异显著性，*p＜0.05，**p＜0.01。

[0136] 表2小麦麸皮多糖对小鼠迟发型变态反应(DTH)

[0137]

[0138] 注：与对照组相比的差异显著性，*p＜0.05，**p＜0.01。

[0139] 表3小麦麸皮多糖对小鼠血清溶血素抗体积数的影响

[0140]

[0141] 注：各剂量组有增高趋势，但差异未达到显著水平。

[0142] 表4小麦麸皮多糖对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响

[0143]

[0144] 注：与对照组相比的差异显著性，*p＜0.05，**p＜0.01。

[0145] 由上述结果显示，与对照组相比，小麦麸皮多糖中、高剂量组均可显著提高小鼠的胸腺指数和脾脏指数、增强迟发型变态反应(DTH)及单核巨噬细胞吞噬功能(p＜0.05，p＜0.01)；且高剂量组与市售香菇多糖(阳性对照组)功能活性相当，由此可判断由本发明方法所制备小麦麸皮多糖具有免疫调节功能。

[0146] 因实施例2和3所制备目标多糖与实施例1产品无原料、方法以及产品含量与组成上的显著差异，可认为功能与实施例1产品无显著差异，即同样具有免疫调节功能。