4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体

摘要

本发明涉及医药领域，具体是一种4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体，是由下列重量百分比的原料制成的，4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮0.5～2.5%，磷脂6～12%，胆固醇0.8～1.4%，吐温-80 1.1～2.3%，抗氧化剂0.5～1.5%，其余为浓度0.05mol/L、pH6～8的缓冲液；所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液。本发明所述MBB脂质体，其包封率至少为90%以上，符合脂质体包载药物的特点，脂质体在储存期间包封率的变化不明显，相对于MBB化合物，其降解明显减慢，稳定性提高，而且对关节炎有确切的治疗作用。

权利要求

1.4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体，其特征在于，是由下列重量百分比的原料制成的，4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮0.5～2.5%，磷脂6～12%，胆固醇0.8～1.4%，吐温-80 1.1～2.3%，抗氧化剂0.5～1.5%，其余为浓度0.05mol/L、pH6～8的缓冲液；所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体，其特征在于，所述抗氧化剂选自维生素E、抗坏血酸、叔丁基对羟基茴香醚、半胱氨酸、焦亚硫酸钠。

说明书

4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域，具体是一种4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体。

背景技术

[0002] 关节炎(arthritis)是以关节滑膜慢性炎症为主要表现的一种自身免疫性疾病，炎性细胞因子在关节局部破坏中起主导作用，最终导致关节的慢性、对称性、侵蚀性关节炎以及关节外血管炎的表现。目前主张早期、联合治疗，延缓甚至逆转关节的损害。解热镇痛抗炎药物仍是临床治疗该类疾病的常用药物，其通过抑制环氧酶的活性来抑制可引起发炎，疼痛反应的前列腺素（PG）类和一些相关炎症介质的产生，例如常用药物阿司匹林，吲哚美辛，塞来昔布等。然而该类药物所引起的胃肠道反应与肾毒性制约着其临床应用，因此探索新的高效低毒的解热镇痛药物应用于关节炎疾病的治疗具有重要的临床意义。

[0003] 化合物4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮 [4-(2-methylphenylsulfonyloxy)-2(3H)-benzoxazolone，MBB]是一个具有较好抗炎镇痛活性、且毒性极低的新型结构化合物，然而由于其溶解度小，体内消除速率较快，生物利用度较低，而使得其生物活性受到了一定程度的影响，达不到临床给药的要求。因此，选择合适的剂型，增加其溶解度，减慢体内消除速率，提高其生物活性，具有重要的意义。脂质体是解决上述问题首选的一类药物传递系统。

[0004] 一般而言，脂质体是一种以磷脂等物质作为膜材而构成的，具有封闭囊泡结构的药物载体。构成脂质体的磷脂分子中既含有极性的磷酸基团，又含有非极性的碳氢链。在特定浓度条件下，磷脂的极性头部与极性头部相结合，非极性尾部与非极性尾部相结合，形成一个稳定的双分子层结构。因此脂质体既可以包裹亲脂性药物，又可以包裹亲水性药物，是一种优良的药物载体。脂质体作为药物载体，因其磷脂可生物降解、无毒、无免疫原性，生物相容性非常好，且结构上自我封闭，具有保护药物生物活性、有效的控制药物释放，从而达到延长半衰期、提高疗效等作用；并且脂质体具有类细胞结构，进入体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中蓄积，从而提高药物的治疗指数、减少药物的剂量和降低药物的毒性。目前脂质体在治疗疾病的过程中显示了明显的优越性。因此将MBB制成脂质体给药，可以提高药物的溶解度与稳定性、适当延缓药物的释放、延长半衰期，具有重要的现实和临床意义。

发明内容

[0005] 本发明为了解决化合物4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮（MBB）因缺乏合适的剂型导致达不到临床给药要求的问题，提供了一种4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体。

[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的：4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮脂质体，是由下列重量百分比的原料制成的，4-邻甲苯磺酰氧基苯并噁唑酮0.5～2.5%，磷脂6～12%，胆固醇0.8～1.4%，吐温-80 1.1～2.3%，抗氧化剂0.5～1.5%，其余为浓度0.05mol/L、pH6～8的缓冲液；所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液。

[0007] 本发明中所述的磷脂可以为医药脂质体领域任意的磷脂，包括天然提取的磷脂、全合成、半合成的磷脂。本发明中磷脂的加入量为6～12%，若加入量小于6%，形成的脂质膜不足以包封药物，造成药物的浪费；若加入量大于12%，则脂质材料成膜难，且形成的薄膜厚度不均匀。

[0008] 本发明中所述的胆固醇的加入量为0.8～1.4%，胆固醇是一种良好的膜流动性调节剂，若加入量小于0.8%，膜流动性差；若加入量大于1.4%，则脂质材料不易形成薄膜，而且形成的脂质膜脆弱、容易破损。

[0009] 本发明中所述的抗氧化剂可以为医药领域任意的抗氧化剂，优选的可采用维生素E、抗坏血酸、叔丁基对羟基茴香醚、半胱氨酸或焦亚硫酸钠。上述优选的抗氧化剂相比于其他抗氧化剂，使用范围广，易于得到。本发明中所述的抗氧化剂的加入量为0.5～1.5%，若加入量小于0.5，会导致抗氧化的效果不好，制备的脂质体易腐败；若加入量大于1.5%，抗氧化的效果提高的不多，且副作用较大。

[0010] 本发明所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液，上述缓冲液相对于其他缓冲液，制备的脂质体较稳定，包封率高。

[0011] 本发明所述脂质体采用本领域公知脂质体制备方法即可，例如薄膜分散法、逆向蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法、机械法（包括使用匀质机、乳匀机、挤出仪、纳米机、匀浆机、高压微射流等各种机械设备）。脂质体制备过程中需要加入有机溶剂来溶解脂质材料（磷脂、胆固醇），但是随后处理中除去了有机溶剂。上述制备方法中有机溶剂的类别、加入量和加入步骤为本领域公知常识。

[0012] 本发明所述脂质体可与药学上可接受的载体结合制成注射液、冻干粉、输液脂质体制剂、纳米脂质体等，来具体应用于临床。

[0013] 本发明所述MBB脂质体，其包封率至少为90%以上，符合脂质体包载药物的特点，脂质体在储存期间包封率的变化不明显，相对于MBB化合物，其降解明显减慢，稳定性提高，而且对关节炎有确切的治疗作用。

[0014] 实验一：MBB脂质体包封率的测定

[0015] 包封率是脂质体一项重要的考察指标，建立方便准确的包封率测定方法至关重要，本实验采用反相高效液相法测定MBB脂质体的包封率。

[0016] 色谱柱：ThermoC18(250 mm×4.6 mm，5 µm)；流动相：甲醇-水(55:45)；流速：0.8mL/min；检测波长273nm；柱温：30℃；进样量：10 µL。

[0017] 检测结果：本发明所述脂质体的包封率均大于90%，包封率较高，符合脂质体包载药物的特点。

[0018] 实验二：MBB脂质体渗透率的测定

[0019] 渗漏率体现的是脂质体在储存期间包封率的变化情况，是衡量载药脂质体质量标准的一项重要指标。

[0020] 4℃条件下储存本发明所述脂质体，2周内每隔7d定期取样，测定包封率，与储存前包封的药量比较，按公式计算渗漏率。L= (Ea-Eb)/Ea×100% （L表示渗漏率，Ea表示储藏前的包封率，Eb为储藏一定时间后测的包封率），具体结果见表1。

[0021] 表1 MBB脂质体渗漏率的测定

[0022]样品 Ea (%) Eb-7d（%） Eb-14d（%）
1 94.37 89.51 83.22
2 94.76 89.35 82.75
3 95.82 89.91 83.54
94.98±0.75 89.59±0.80 83.17±0.41
渗漏率（L） 5.68 12.44

[0023] 检测结果：MBB脂质体在4℃的环境下储存2周后，没有出现沉淀和絮凝现象，储存一周，渗漏率平均为5.68%，储存两周渗漏率为12.44%，包封率改变不明显。

[0024] 实验三：MBB脂质体初步稳定性实验

[0025] 稳定性试验的目的是考察药物制剂在不同温度、湿度、光照条件下随时间变化的规律。

[0026] 分别于4℃和25℃条件下放置1周、2周、3周、4周、5周、6周，观察MBB脂质体是否有沉淀、分层等现象，并测定粒径及包封率，具体结果见表2。

[0027] 表2 MBB脂质体稳定性试验

[0028]

[0029] 初步稳定性试验表明，MBB包裹于脂质体后，4℃的环境下保存，其降解明显减慢，稳定性提高。

[0030] 实验四：MBB脂质体对大鼠诱导性关节炎的药理作用

[0031] SD大鼠，雌性，体重（160-180）g，饲养过程中自由摄食及水。初次免疫：5%的水合氯醛（5mL/kg）麻醉大鼠，剪去背部皮毛，酒精消毒去毛部位及双后足掌，关节炎模型组给予含有牛Ⅱ型胶原 1mg/mL 的乳化液 0.5mL，分 5个点（背部三点、尾根部、及任一后足掌）皮内注射免疫混合物各 0.1mL。加强免疫：初次免疫动物1周后，给予实验组大鼠背部腹腔注射含有牛Ⅱ型胶原1mg/mL的乳化液免疫复合物 0.2mL/鼠(含Ⅱ型胶原 0.2mg)，步骤及方法基本同上。将24只造模成胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠，于造模后第2周完全随机分为3组，每组8只，分别为造模对照组、保泰松阳性药对照组（50mg/kg），MBB脂质体组（50mg/kg），另选取 8只正常大鼠为空白对照组，分笼饲养。各组药物经口给药，给药剂量为1mL/100g/d，连续给药3周，并进行给药观察与测定，具体结果见表3。

[0032] 表3 MBB脂质体对CIA大鼠的药理作用

[0033]

[0034] 注：*表示与模型组相比有明显的差异，P<0.05

[0035] 由上表可见，MBB脂质体对大鼠胶原诱导性关节炎有确切的治疗作用（P<0.05），且与保泰松阳性药相当。给药后动物行为和体重变化基本与空白对照组接近，无明显的毒副作用。

具体实施方式

[0036] 实施例1

[0037] 称取0.5gMBB、7.0g卵磷脂、1.1g胆固醇、1.5g半胱氨酸和2.0g 吐温-80完全溶于48mL的无水乙醇中，在40℃的水浴条件下真空旋转除去无水乙醇，形成均匀的薄膜，加入87.9g浓度为0.05mol/L、 pH7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）洗膜，并在60℃下恒温搅拌半个小时，用BPT匀质机高速剪切三次，每次剪切用时一分钟，最后用高压微射流处理上述所得到的溶液，压力140MPa下微流化处理三次后制得MBB脂质体。制成的脂质体为较透明的淡黄色的液体，包封率为95.73%，粒径为45.64nm，Zate电位为-68.52mV。

[0038] 实施例2

[0039] 称取1.0gMBB、9.0g二棕榈酰磷脂酰胆碱、0.5g抗坏血酸、1.3g胆固醇和2.3g 吐温-80完全溶于48mL的无水丙醇中，在40℃的水浴条件下真空旋转除去无水丙醇，形成均匀的薄膜，加入85.9g浓度为0.05mol/L、 pH6的枸橼酸盐缓冲液洗膜，并在60℃下恒温搅拌半个小时，用BPT匀质机高速剪切三次，每次剪切用时一分钟，最后用高压微射流处理上述所得到的溶液，压力140MPa下微流化处理三次后得到MBB脂质体。制成的脂质体为较透明的淡黄色的液体，包封率为96.81%，粒径为49.17nm，粒径基本成正态分布，Zate电位为-65.15mV。

[0040] 实施例3

[0041] 称取1.5gMBB原料药、10g二硬脂酰磷脂酰胆碱、0.8g焦亚硫酸钠、1.4g胆固醇和1.1g Tween-80完全溶于48mL的无水丙醇中，在40℃的水浴条件下真空旋转除去无水丙醇，形成均匀的薄膜，加入85.2g浓度为0.05mol/L、pH8的碳酸盐缓冲液洗膜，并在60℃下恒温搅拌半小时，用BPT匀质机高速剪切三次，每次剪切用时一分钟，最后用高压微射流处理上述所得到的溶液，压力140MPa下微流化处理三次后得到MBB脂质体。制成的脂质体为较透明的淡黄色的液体，包封率为93.97%，粒径为48.65nm，Zate电位为-62.53mV。

[0042] 实施例4

[0043] 称取2.0gMBB、12g二硬脂酰磷脂酰甘油、1.0 g叔丁基对羟基茴香醚、0.8g胆固醇和1.5g Tween-80完全溶于96mL的无水乙醇中，在40℃的水浴条件下真空旋转除去无水