一种两面针的组织培养方法

摘要

本发明涉及一种两面针的组织培养方法，属于作物种植技术领域；包括原料预处理、接种、培养、移栽、培育管理、苗木出圃六个步骤，于晴天选取生长健壮、无病虫害的优良植株，用自来水冲洗干净后在高锰酸钾溶液中浸泡6~8min，再用无菌水冲洗2~3次，在无菌条件下切成0.5~0.8cm长的带芽小段，在无菌条件下接种在培养基上，在30~35℃条件下培养4~5天；待培养完全后，将小苗在自然环境下进行炼苗3~5天，使其适应自然条件后进行移栽到基质上，在温度为25~35℃，湿度为50~70%条件下进行培育；移栽后进行浇水，保持土壤湿润，每周施肥1次，4~5个月后，待苗高长到20cm以上即可出圃种植；采用本方法种植的两面针成活率最高，达95%以上；培养方法简单，培育时间短，有利于规模化生产。

权利要求

1.一种两面针的组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）原料预处理：于晴天选取生长健壮、无病虫害的优良植株，用自来水冲洗干净后在高锰酸钾溶液中浸泡6~8min，再用无菌水冲洗2~3次，在无菌条件下切成0.5~0.8cm长的芽段；

（2）接种：将上述芽段在无菌条件下接种在培养基上；

（3）培养：将接种好的芽段在30~35℃条件下培养4~5天；

（4）移栽：待培养后，将小苗在自然环境下进行炼苗3~5天，使其适应自然条件后进行移栽到基质上，进行培育；

（5）培育管理：移栽后进行浇水，保持土壤湿润，每周施肥1次；

（6）苗木出圃：移栽4~5个月后，待苗高长到20cm以上即可出圃种植；

步骤（2）所述的培养基为MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.1mg/L +NAA 0.15mg/L + 琼脂

80mg/L +蔗糖20mg/L；

步骤（4）所述的基质是指黄心土：细沙：塘泥：过磷酸钙按重量比70:25:3:2的比例混合均匀得到；

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步骤（5）所述的施肥是指施用添加重量份5%钙镁磷的农家肥，施肥量1~2kg/m。

2.根据权利要求1所述的一种两面针的组织培养方法，其特征在于：步骤（4）的培养条件为温度为25~35℃，湿度为50~70%。

说明书

一种两面针的组织培养方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及一种具有多种功效的两面针的组织培养方法，属于作物栽培技术领域。

背景技术

[0002] 两面针Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.曾以蔓椒之名始载于《神农本草经》，列为下品,清朝赵其光《本草求原》一书将其定名为入地金牛。经本草考证为芸香科(Rumceae)花椒属(Zanthoxylum)木质藤本植物干燥根、茎，自1977年始被收入《中国药典》。两面针在我国药用历史悠久，用途广泛，且用量大，为南方地区常用中药材之一，主要分布于广西、福建、湖南、云南、台湾等地。

[0003] 两面针具有很好的功效，其根和茎皮具有驱风化湿、消肿止痛、行气之功效，主治跌打损伤、风湿痹痛、胃痛、牙痛，毒蛇咬伤；外用治汤火资伤。化学成分及药理学研究发现两面针茎皮、根和根皮中含有生物碱类、木脂素类、黄酮甘类、甾醇类、无机元素等成分，具有解痉、镇痛、抗炎、抗菌、抗癌等药理活性。目前，随着研究的深入，两面针所具有的多种药理活性，已被逐渐应用到临床，市售多种中成药和日用品均含有两面针，如风痧冲剂、金鸡系列、妇炎净胶囊、正骨水、跌打万花油、骨刺片、两面针镇国痛片以及两面针中药牙膏等。据调査，2009年两面针需求量已达到约2400吨，强大的市场需求对两面针野生资源造成了巨大压力，致使两面针野生资源逐年减少。

[0004] 随着社会经济的发展，两面针应用于各个领域越来越广泛，需求量也越来越大，人工种植两面针的数量目前还较少，不能满足市场发展的需求，因此人工栽培和种植两面针成为社会发展的必要趋势。通过对两面针的培育，进行人工栽培，保证了两面针原材料的供给，稳定两面针药材市场，给我国两面针制药行业健康可持续发展提供坚强的后盾。同时减少了人为的泛滥采挖，对两面针的自然生态保护起到十分重要的作用。

[0005] 两面针苗木培育方法有种子繁殖、扦插繁殖和组织培养3种方法，文件CN101099433B公开了一种植物两面针的繁殖方法，利用扦插床，铺上沙壤，将已木质化的插条休整后直接扦插，半年到一年后进行移栽；文件CN102986437A公开了一种两面针的人工栽培方法，采用种子育苗或者营养杯育苗或扦插方式进行育苗，产量高，产品质量稳定；而对于两面针的组织培养方法研究的较少，本发明针对两面针的组织培养方法进行深入的研究，提供一种两面针人工栽培的新方法，成活率高，长势好。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种两面针的组织培养方法，采用本方法培育的两面针成活率高，生长快。

[0007] 为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下：

[0008] 一种两面针的组织培养方法，包括如下步骤：

[0009] （1）原料预处理：于晴天选取生长健壮、无病虫害的优良植株，用自来水冲洗干净后在高锰酸钾溶液中浸泡6~8min，再用无菌水冲洗2~3次，在无菌条件下切成0.5~0.8cm长的带芽小段；

[0010] （2）接种：将上述芽段在无菌条件下接种在培养基上；

[0011] （3）培养：将接种好的芽段在30~35℃条件下培养4~5天；

[0012] （4）移栽：待培养后，将小苗在自然环境下进行炼苗3~5天，使其适应自然条件后进行移栽到基质上，进行培育；

[0013] （5）培育管理：移栽后进行浇水，保持土壤湿润，每周施肥1次；

[0014] （6）苗木出圃：移栽4~5个月后，待苗高长到20cm以上即可出圃种植。

[0015] 步骤（2）所述的培养基为MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.1mg/L +NAA 0.15mg/L + 琼脂 80mg/L +蔗糖20mg/L。

[0016] 步骤（4）所述的基质是指黄心土：细沙：塘泥：过磷酸钙按重量比70:25:3:2的比例混合均匀得到。

[0017] 步骤（4）所述的培养条件为温度为25~35℃，湿度为50~70%。

[0018] 步骤（5）所述的施肥是指施用添加其重量份5%钙镁磷的农家肥，施肥量1~2kg/3
m。

[0019] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0020] （1）成活率高，生长快：采用本发明的种植方法，两面针培养成活率最高，达90% 以上，移栽后成活率达到95%以上。

[0021] （2）方法简单，培育时间短，有利于规模化生产。

具体实施方式

[0022] 下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

[0023] 实施例1

[0024] 一种两面针的组织培养方法，包括如下步骤：

[0025] （1）原料预处理：于晴天选取生长健壮、无病虫害的优良植株，用自来水冲洗干净后在高锰酸钾溶液中浸泡6min，再用无菌水冲洗2次，在无菌条件下切成0.5cm长的带芽小段；

[0026] （2）接种：将上述芽段在无菌条件下接种在培养基上，培养基配方为MS+6-BA1mg/L+IBA 0.1mg/L +NAA 0.15mg/L + 琼脂 80mg/L +蔗糖20mg/L；

[0027] （3）培养：将接种好的芽段在30℃条件下培养5天；

[0028] （4）移栽：待培养后，将小苗在自然环境下进行炼苗3天，使其适应自然条件后进行移栽到基质上在温度为25℃，湿度为70%条件下进行培育，基质为黄心土：细沙：塘泥：过磷酸钙按重量比70:25:3:2的比例混合均匀得到；

[0029] （5）培育管理：移栽后进行浇水，保持土壤湿润，每周施肥1次，施用含5%重量份3
钙镁磷的农家肥，施肥量1kg/m；

[0030] （6）苗木出圃：移栽4个月后，待苗高长到20cm以上即可出圃种植。

[0031] 实施例2

[0032] 一种两面针的组织培养方法，包括如下步骤：

[0033] （1）原料预处理：于晴天选取生长健壮、无病虫害的优良植株，用自来水冲洗干净后在高锰酸钾溶液中浸泡8min，再用无菌水冲洗3次，在无菌条件下切成0.8cm长的带芽小段；

[0034] （2）接种：将上述芽段在无菌条件下接种在培养基上，培养基配方为MS+6-BA1mg/L+IBA 0.1mg/L +NAA 0.15mg/L + 琼脂 80mg/L +蔗糖20mg/L；

[0035] （3）培养：将接种好的芽段在35℃条件下培养4天；

[0036] （4）移栽：待培养后，将小苗在自然环境下进行炼苗5天，使其适应自然条件后进行移栽到基质上在温度为35℃，湿度为50%条件下进行培育，基质为黄心土：细沙：塘泥：过磷酸钙按重量比70:25:3:2的比例混合均匀得到；

[0037] （5）培育管理：移栽后进行浇水，保持土壤湿润，每周施肥1次，施用含5%重量份3
钙镁磷的农家肥，施肥量2kg/m；

[0038] （6）苗木出圃：移栽5个月后，待苗高长到20cm以上即可出圃种植。

[0039] 实施例3

[0040] 一种两面针的组织培养方法，包括如下步骤：

[0041] （1）原料预处理：于晴天选取生长健壮、无病虫害的优良植株，用自来水冲洗干净后在高锰酸钾溶液中浸泡7min，再用无菌水冲洗3次，在无菌条件下切成0.6cm长的带芽小段；

[0042] （2）接种：将上述芽段在无菌条件下接种在培养基上，培养基配方为MS+6-BA1mg/L+IBA 0.1mg/L +NAA 0.15mg/L + 琼脂 80mg/L +蔗糖20mg/L；

[0043] （3）培养：将接种好的芽段在33℃条件下培养4天；

[0044] （4）移栽：待培养后，将小苗在自然环境下进行炼苗4天，使其适应自然条件后进行移栽到基质上在温度为28℃，湿度为60%条件下进行培育，基质为黄心土：细沙：塘泥：过磷酸钙按重量比70:25:3:2的比例混合均匀得到；

[0045] （5）培育管理：移栽后进行浇水，保持土壤湿润，每周施肥1次，施用含5%重量份3
钙镁磷的农家肥，施肥量1.5kg/m；

[0046] （6）苗木出圃：移栽5个月后，待苗高长到20cm以上即可出圃种植。

[0047] 实施例4

[0048] 一种两面针的组织培养方法，包括如下步骤：

[0049] （1）原料预处理：于晴天选取生长健壮、无病虫害的优良植株，用自来水冲洗干净后在高锰酸钾溶液中浸泡8min，再用无菌水冲洗3次，在无菌条件下切成0.6cm长的带芽小段；

[0050] （2）接种：将上述芽段在无菌条件下接种在培养基上，培养基配方为MS+6-BA1mg/L+IBA 0.1mg/L +NAA 0.15mg/L + 琼脂 80mg/L +蔗糖20mg/L；

[0051] （3）培养：将接种好的芽段在32℃条件下培养4天；

[0052] （4）移栽：待培养后，将小苗在自然环境下进行炼苗5天，使其适应自然条件后进行移栽到基质上在温度为30℃，湿度为70%条件下进行培育，基质为黄心土：细沙：塘泥：过磷酸钙按重量比70:25:3:2的比例混合均匀得到；

[0053] （5）培育管理：移栽后进行浇水，保持土壤湿润，每周施肥1次，施用含5%重量份3
钙镁磷的农家肥，施肥量2kg/m；