一种麻疯树再生苗增根的方法

摘要

本发明属于植物无性繁殖技术领域，提供了一种麻疯树再生苗增根的方法，该方法的步骤及条件如下：（1）在组培容器底部先铺一层灭菌基质材料，然后加入增根培养基，再对其进行灭菌并干燥至增根培养基表面没有水珠；（2）将麻疯树再生苗接种到上述增根培养基中，使再生苗的根部位于增根培养基和基质材料相接部位，且不接触组培容器，然后于光照强度1500～2000Lx、光照时间12～16h/d下培养至麻疯树根系贴组培容器底部蔓延时即完成麻疯树再生苗的增根。该方法不仅稳定高效、成本低廉，且可大大提高再生苗的移栽成活率以及移栽后再生苗的长势。

权利要求

1.一种麻疯树再生苗增根的方法，其特征在于该方法的步骤及条件如下：(1)在组培容器底部先铺一层灭菌基质材料，然后加入增根培养基，再对其进行灭菌并干燥至增根培养基表面没有水珠；

(2)将麻疯树再生苗接种到上述增根培养基中，使再生苗的根部位于增根培养基和基质材料相接部位，且不接触组培容器，然后于光照强度1500～2000Lx、光照时间12～16h/d下培养至麻疯树根系贴组培容器底部蔓延时即完成麻疯树再生苗的增根；

所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.01～0.05mg、蔗糖2.0～

20.0g、琼脂5.0～7.0g组成；所述基质材料为蛭石、营养土、河沙和草炭中的至少一种；所述基质材料的添加量为增根培养基体积的10～30％；所述蛭石、营养土以及河沙的粒径≤375微米。

2.根据权利要求1所述麻疯树再生苗增根的方法，其特征在于所述基质材料的添加量为增根培养基体积的10～25％。

3.根据权利要求1或2所述麻疯树再生苗增根的方法，其特征在于所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.01～0.025mg、蔗糖2.0～10.0g、琼脂5.6～7.0g组成。

4.根据权利要求1或2所述麻疯树再生苗增根的方法，其特征在于所述增根培养基的pH值为5.8～6.0。

5.根据权利要求3所述麻疯树再生苗增根的方法，其特征在于所述增根培养基的pH值为5.8～6.0。

说明书

一种麻疯树再生苗增根的方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物无性繁殖技术领域，具体涉及一种麻疯树再生苗增根的方法。

背景技术

[0002] 麻疯树(Jatropha curcas L.)是大戟科麻疯树属植物，为落叶灌木或小乔木，其种仁的含油量可高达40％～60％，可用于柴油发动机，麻疯树是发展生物柴油最具潜力的能源植物之一。麻疯树中含有抗病毒、抗肿瘤等活性成分，目前已有关于麻疯树中抗病毒及抗肿瘤活性成分的毒理试验研究以及动物模型的初期研究。此外，麻疯树在农药、蚕制品及日化品等领域也具有实际应用价值。但麻疯树分布局限、产量较低且不稳定、良种不足，这些因素严重地限制了麻疯树资源的大规模开发。

[0003] 高效的植株再生体系能为基因转化提供良好的平台，因此以组织培养为基础，通过基因工程方法可以获得改良的麻疯树品种，改良的麻疯树品种通过组织培养能进行快速繁殖，从而能够促进麻疯树的产业化发展。目前可利用麻疯树的叶片、子叶、上胚轴、下胚轴和腋芽为外植体获得麻疯树再生苗，但麻疯树再生苗在生根阶段存在生根数量少以及生根弱小等问题，导致麻疯树的移栽成活率低，移栽后生长缓慢、长势差，很难得到具有实际应用价值的麻疯树植株。此外，利用培养基对麻疯树进行生根培养时再生根是生长在琼脂中的，由于琼脂极易染菌，导致移栽后再生苗的根部极易腐烂甚至死亡，因此在移栽再生苗前必须将残留在根上的琼脂清洗干净，但清洗附着在根上的琼脂容易对再生苗的根系造成伤害，同样会影响再生苗的移栽成活率以及移栽后再生苗的长势。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种麻疯树再生苗增根的方法，该方法不仅稳定高效、成本低廉，且可大大提高再生苗的移栽成活率以及移栽后再生苗的长势。

[0005] 本发明提供的麻疯树再生苗增根的方法，该方法的增根步骤及条件如下：

[0006] (1)在组培容器底部先铺一层灭菌基质材料，然后加入增根培养基，再对其进行灭菌并干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0007] (2)将麻疯树再生苗接种到上述增根培养基中，使再生苗的根部位于增根培养基和基质材料相接部位，且不接触组培容器，然后于光照强度1500～2000Lx、光照时间12～16h/d下培养至麻疯树根系贴组培容器底部蔓延时即完成麻疯树再生苗的增根；

[0008] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.01～0.05mg、蔗糖2.0～20.0g、琼 脂5.0～7.0g组成；所述基质材料为蛭石、营养土、河沙或者草炭中的至少一种。

[0009] 上述方法中，所述基质材料的添加量为增根培养基体积的10～30％，优选10～25％。

[0010] 上述方法中，所述蛭石、营养土以及河沙的粒径≤375微米。

[0011] 上述方法中，所述增根培养基的组成优选为在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.01～0.025mg、蔗糖2.0～10.0g、琼脂5.6～7.0g。

[0012] 上述方法中，所述增根培养基的pH值为5.8～6.0。

[0013] 上述方法中，步骤(2)中的培养温度为24～26℃，相对湿度为60～90％。

[0014] 上述方法中，所述麻疯树再生苗可通过宗桦等报道的方法(宗桦,王胜华.等,麻疯树叶片高效再生体系与不定芽起源,应用与环境生物学报[J],2010,16(6):789～793.)获得，也可通过中国专利CN101574058B公开的方法获得，但是麻疯树再生苗的获得不局限于上述方法。

[0015] 本发明具有以下有益效果：

[0016] 1、由于本发明提供的方法在增根培养基的底部添加了一层基质材料，因而不仅可增加麻疯树再生苗根部生长环境的透气和疏松性，有助于根的生长，且基质材料还能促进根吸收的营养量，保证麻疯树再生苗的长势良好。

[0017] 2、由于本发明提供的方法在接种麻疯树再生苗时，再生苗的根部是位于培养基和基质相接部位中，因而既使再生苗的基部能方便的吸收增根培养基提供的必要营养元素和糖类物质，又能使增根时麻疯树的根系能顺利的生长在基质材料中，避免增长的根系与培养基中琼脂直接接触，省去了移栽增根再生苗时清洗附着在根系上琼脂的工序，也避免了清洗琼脂对根系造成伤害，大大提高了移栽成活率及移栽后再生苗的长势。

[0018] 3、由于本发明提供的方法在增根培养基进行灭菌后对其表面多余的水分进行了干燥操作，因而既能使其中的水分含量满足麻疯树再生苗增根过程中对水分的需求，又能避免增根培养基水分含量过高而出现根腐烂的情况。

[0019] 4、由于本发明提供的方法中所采取的种种匹配技术措施对麻疯树再生苗进行增根后，不仅根的长度增加、根茎粗壮，且主根的平均数目至少能增加1倍，因而使增根后再生苗的移栽成活率可高达100％，完全克服了现有技术中再生苗移栽成活率低的不足。

[0020] 5、由于本发明提供的方法中采用的基质材料以及增根培养基均为常见普通材料，因而不仅材料来源广泛，且成本低廉。

[0021] 6、由于本发明提供的方法操作简单，易于掌握，因而便于推广应用，能促进麻疯树良种的产业化发展。

附图说明

[0022] 图1为麻疯树再生苗在对比例1不含有基质材料的增根培养基中增根后的照片。

[0023] 图2为麻疯树再生苗在本发明实施例2同时含有基质材料营养土和增根培养基中增根后的照片。

[0024] 图3为麻疯树再生苗在对比例2中含有基质材料营养土和吲哚丁酸浓度为0.1mg/L的增根培养基中增根后的照片。

[0025] 图4为麻疯树再生苗在本发明实施例4中含有体积比1:1的草炭和营养土以及增根培养基中增根后的照片。

[0026] 图5为麻疯树再生苗在本发明实施例5中含有蛭石以及增根培养基中增根后的照片。

具体实施方式

[0027] 以下通过实施例对本发明所述方法作进一步说明。有必要指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述发明内容对本发明做出一些非本质的改进和调整。

[0028] 值得说明的是，以下各实施例中，所用的麻疯树再生苗是利用茎段快繁或者子叶愈伤组织诱导的方法获得的；其中，利用子叶愈伤组织诱导麻疯树再生苗的方法可参见：宗桦,王胜华.等,麻疯树叶片高效再生体系与不定芽起源,应用与环境生物学报[J],2010,16(6):789～793；利用茎段快繁获得麻疯树再生苗的方法可参见中国专利CN101574058B公开的方法。

[0029] 1、通过子叶愈伤组织诱导麻疯树再生苗的步骤如下：

[0030] (1)外植体的获得

[0031] 将成熟的麻疯树种子的外壳去除获得种仁，将种仁用蒸馏水浸泡4.5～5h，然后在超净工作台上用70％(V/V)酒精浸泡30s，取出种仁用灭菌的蒸馏水清洗2次，再放入质量浓度为0.1％的氯化汞水溶液中浸泡10min，取出种仁用灭菌的蒸馏水清洗4次，最后将种仁倒于灭菌的滤纸上，吸干种仁表面的水分。用解剖刀沿纵轴切开胚乳，用镊子轻轻取出完整的两片子叶，接种于MS培养基中，在培养温度为24～26℃，16/8h光暗交替培养，光照强度为1500～2000Lx的条件下培养20天，取其幼嫩的子叶作为外植体。

[0032] (2)愈伤组织的诱导及继代培养

[0033] 将步骤(1)所得无菌苗子叶切成1cm2的小块，避开叶脉，随后转入愈伤诱导培养基(MS+2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.02mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH＝5.80)于暗处愈伤诱导25天，将获得的愈伤组织接种到生芽培养基(MS+0.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/L 6-糠氨基嘌呤+0.1mg/L 3-吲哚丁酸+0.1mg/L赤霉素+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH＝5.96)中进行芽诱导。

[0034] (3)根诱导

[0035] 当步骤(2)中的不定芽伸长至2cm时，将芽转移至生根培养基(MS+3-吲哚丁酸0.2mg/L，pH＝5.80)中进行生根，20天后得到再生苗，选取主根数量为2根，颜色洁白，主根长度约为11.00mm的再生苗进行增根。

[0036] 2、通过茎段快繁获得麻疯树再生苗的步骤如下：

[0037] (1)灭菌

[0038] 将成熟的麻疯树种子的去壳后用蒸馏水冲洗4～5次并用蒸馏水浸泡3h，然后移入超净工作台在75％酒精(V/V)中浸泡30s、再放入质量浓度为0.1％的氯化汞水溶液中浸泡15min，最后用无菌水冲洗2～3次。

[0039] (2)种子萌发

[0040] 将步骤(1)灭菌后的种子接种到培养基(MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH＝5.8)上，并在温度为25±2℃、光照时间为12h/d、光照强度为2000Lx的温室中培养。

[0041] (3)增殖培养

[0042] 将萌发后形成的芽苗剪为单芽茎段，接入增殖培养基(MS+6-苄氨基腺嘌呤0.45mg/L+3-吲哚丁酸0.15mg/L+30g/L蔗糖+5g/L琼脂)中培养，接种10天后诱导出丛生芽。切下的新增芽再继续按上述方式增殖培养。1个带芽茎段一个半月后能增殖出8个新芽。

[0043] (4)生根

[0044] 当丛生芽生长到2～3cm时，将其剪下接入生根培养基(MS+萘乙酸0.1mg/L+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH＝5.8)中培养产生根系，15天后得到再生苗，选取主根数量为3根，颜色洁白，主根长度约为11.00mm的再生苗进行增根。

[0045] 所述蛭石、营养土和草炭均是购买自四川营养泥炭开发有限公司。

[0046] 实施例1

[0047] 本实施例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0048] (1)将河沙于40℃烘干后，过60目分样筛(粒径≤250微米)，然后放在高温灭菌锅中于121.1℃灭菌20min，再冷却至室温。

[0049] (2)分别在20个240mL组培瓶的底部平铺一层灭菌处理过的河沙，然后分别向其中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中，于121.1℃下灭菌20min，再放入50℃烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0050] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.01mg、蔗糖10g、琼脂5.0g组成，增根培养基的pH值为6.00；河沙的添加量为增根培养基体积的25％。

[0051] (3)将通过麻疯树子叶愈伤组织获得的再生苗按每个组培瓶中接种2颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，使再生苗的根部位于增根培养基和河沙相接部位且不接触组培瓶，然后于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h/d的条件下培养20天，麻疯树根系即贴组培瓶底部蔓延，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为2根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根的平均数目增加了1倍，主根的平均长度为24.78mm。

[0052] (4)打开组培瓶的瓶盖，置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的质量比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％；最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为100％。

[0053] 对比例1

[0054] 本对比例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0055] (1)分别向20个240mL组培瓶中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中于121.1℃下灭菌20min，再放入50℃烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0056] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.01mg、蔗糖10g、琼脂5.0g组成，增根培养基的pH值为6.00；

[0057] (2)将通过麻疯树子叶愈伤组织获得的再生苗按每个组培瓶中接种2颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，然后于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h/d的条件下培养20天，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为2根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根数目仍为2根、主根的平均长度为16.27mm，如图1所示；

[0058] (3)打开组培瓶的瓶盖，将其置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的体积比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％；最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为50％。

[0059] 由实施例1及对比例1可知，在增根培养基的底部添加一层河沙后，麻疯树再生苗的增根效果更好，移栽后成活率明显增加。

[0060] 实施例2

[0061] 本实施例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0062] (1)将营养土于40℃烘干后粉碎，过60目分样筛(粒径≤250微米)，然后在高温灭菌锅中于121.1℃灭菌20min，再冷却至室温。

[0063] (2)分别在20个240mL组培瓶的底部平铺一层灭菌处理过的营养土，然后分别向其中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中，于121.1℃下灭菌20min，再放入50℃烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0064] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.05mg、蔗糖2.0g、琼脂6.0g组成，增根培养基的pH值为5.9；营养土的添加量为增根培养基体积的10％。

[0065] (3)将通过麻疯树茎段快繁方式获得的再生苗按每个组培瓶中接种2颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，使再生苗的根部位于增根培养基和营养土相接部位且不接触组培瓶，然后于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h/d的条件下培养20天，麻疯树根系即贴组培瓶底部蔓延，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为3根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根的平均数目增加了1.5倍，主根的平均长度为25.72mm，如图2所示。

[0066] (4)打开组培瓶的瓶盖，将其置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的体积比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％。最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为100％。

[0067] 对比例2

[0068] 本对比例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0069] (1)将营养土于40℃烘干后粉碎，过60目分样筛(粒径≤250微米)，然后在高温灭菌锅中于121.1℃灭菌20min，再冷却至室温。

[0070] (2)分别在20个240mL组培瓶的底部平铺一层灭菌处理过的营养土，然后分别向其中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中，于121.1℃下灭菌20min，再放入50℃烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0071] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.1mg、蔗糖2.0g、琼脂6.0g组成，增根培养基的pH值为5.9；营养土的添加量为增根培养基体积的10％。

[0072] (3)将通过麻疯树茎段快繁方式获得的再生苗按每个组培瓶中接种2颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，使再生苗的根部位于增根培养基和营养土相接部位且不接触组培瓶，然后 于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h/d的条件下培养20天，麻疯树根系即贴组培瓶底部蔓延，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为3根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根的平均数目增加了1.5倍，但主根的平均长度仅为15.28mm，如图3所示。

[0073] (4)打开组培瓶的瓶盖，将其置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的质量比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％；最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为33.3％。

[0074] 由实施例2和对比例2可知，增根培养基中吲哚丁酸的添加量过高时，增根后麻疯树的主根会出现严重的愈伤化现象，这会严重阻碍根系的伸长，从而导致增根后的再生苗的移栽成活率大大降低。

[0075] 实施例3

[0076] 本实施例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0077] (1)将蛭石于40℃烘干后粉碎，过60目分样筛(粒径≤250微米)，然后在高温灭菌锅中于121.1℃灭菌20min，再冷却至室温。

[0078] (2)分别在20个240mL组培瓶的底部平铺一层灭菌处理过的蛭石，然后分别向其中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中，于121.1℃下灭菌20min，再放入40℃烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0079] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.05mg、蔗糖20.0g、琼脂6.0g组成，增根培养基的pH值为5.8；蛭石的添加量为增根培养基体积的30％。

[0080] (3)将通过麻疯树子叶愈伤组织获得的再生苗按每个组培瓶中接种1颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，使再生苗的根部位于增根培养基和蛭石相接部位且不接触组培瓶，然后于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下培养20天，麻疯树根系即贴组培瓶底部蔓延，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为2根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根的平均数目增加了1倍，但主根的平均长度仅为18.68mm。

[0081] (4)打开组培瓶的瓶盖，将其置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的体积比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照 时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％；最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为86.7％。

[0082] 对比例3

[0083] 本实施例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0084] (1)将蛭石于40℃烘干后粉碎，过60目分样筛(粒径≤250微米)，然后在高温灭菌锅中于121.1℃灭菌20min，再冷却至室温。

[0085] (2)分别在20个240mL组培瓶的底部平铺一层灭菌处理过的蛭石，然后分别向其中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中，于121.1℃下灭菌20min，再放入40℃烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0086] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.05mg、蔗糖20.0g、琼脂5.0g组成，增根培养基的pH值为5.8；蛭石的添加量为增根培养基体积的4％。

[0087] (3)将通过麻疯树子叶愈伤组织获得的再生苗按每个组培瓶中接种1颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，使再生苗的根部位于增根培养基和蛭石相接部位且不接触组培瓶，然后于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下培养20天，麻疯树根系即贴组培瓶底部蔓延，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为2根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根的平均数目未增加，主根的平均长度为19.75mm，但根较细。

[0088] (4)打开组培瓶的瓶盖，将其置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的体积比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％；最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为73.3％。

[0089] 由实施例3和对比例3可知，基质材料的添加量过少时，增根后，麻疯树的主根数量未增加，虽然主根有所增长，但根均较细，导致增根后的再生苗的移栽成活率有所降低。

[0090] 实施例4

[0091] 本实施例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0092] (1)将草炭和营养土分别于40℃烘干后，将营养土粉碎过60目分样筛(粒径≤250微米)，然后将等体积混合均匀在高温灭菌锅中于121.1℃灭菌20min，再冷却至室温。

[0093] (2)分别在20个240mL组培瓶的底部平铺一层灭菌处理过的蛭石，然后分别向其中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中，于121.1℃下灭菌20min，再放入40℃ 烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0094] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.01mg、蔗糖5.0g、琼脂5.6g组成，增根培养基的pH值为6.0；草炭和营养土的添加量为增根培养基体积的15％。

[0095] (3)将通过麻疯树子叶愈伤组织获得的再生苗按每个组培瓶中接种1颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，使再生苗的根部位于增根培养基和基质材料相接部位且不接触组培瓶，然后于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间14h/d的条件下培养20天，麻疯树根系即贴组培瓶底部蔓延，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为2根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根的平均数目增加了1.5倍，主根的平均长度为26.48mm，如图4所示。

[0096] (4)打开组培瓶的瓶盖，将其置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的体积比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％；最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为100％。

[0097] 实施例5

[0098] 本实施例给出的麻疯树再生苗增根的方法的步骤及条件如下：

[0099] (1)将蛭石于40℃烘干后粉碎，过40目分样筛(粒径≤375微米)，然后在高温灭菌锅中于121.1℃灭菌20min，再冷却至室温。

[0100] (2)分别在20个240mL组培瓶的底部平铺一层灭菌处理过的蛭石，然后分别向其中加入增根培养基100mL，盖好瓶盖放入高压灭菌锅中，于121.1℃下灭菌20min，再放入40℃烘箱干燥至增根培养基表面没有水珠；

[0101] 所述增根培养基是在每升MS培养基中添加吲哚丁酸0.025mg、蔗糖10.0g、琼脂7.0g组成，增根培养基的pH值为5.8；蛭石的添加量为增根培养基体积的10％。

[0102] (3)将通过麻疯树子叶愈伤组织获得的再生苗按每个组培瓶中接种1颗再生苗分别接种于上述组培瓶中，使再生苗的根部位于增根培养基和蛭石相接部位且不接触组培瓶，然后于24～26℃、相对湿度为60～90％、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d的条件下培养20天，麻疯树根系即贴组培瓶底部蔓延，完成麻疯树再生苗的增根；增根前，麻疯树再生苗的主根数目均为2根、主根长度约为11.00mm，增根完成后，其主根的平均数目增加了1倍，主根的平均长度为24.75mm，如图5所示。

[0103] (4)打开组培瓶的瓶盖，将其置于24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间16h/d 的条件下炼苗3天，然后将再生苗移栽至盛有营养土和蛭石的花盆中(营养土与蛭石的体积比为1:1)，放置在温室中培养，温室条件为：温度24～26℃、光照强度1500～2000Lx、光照时间12h，夜间温度为8～12℃，湿度为50～80％；最初4天套袋保湿，第5天去除保湿袋并开始每天喷水保湿，在花盆中培养一个月，移栽成活率为100％。