脉络宁腙及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及医药技术领域，提供了一种具有治疗心血管疾病的腙类新化合物——脉络宁腙([[5-(hydroxymethyl)-2-furanyl]methylene]hydrazone)，结构式如下：。本发明还涉及该化合物的制备方法及其该化合物具有显著抑制LPS诱导的巨噬细胞中一氧化氮(NO)的产生，具有很好的浓度依赖性。通过计算发现，脉络宁腙IC50值为21μM，可用于制备治疗心血管疾病的药物。

权利要求

1.脉络宁腙的制备方法，其特征在于以金陵药业股份有限公司生产的脉络宁注射液为原料，通过多次硅胶柱层析，经石油醚-乙酸乙酯-丙酮溶剂系统或者氯仿-甲醇溶剂系统分离，再经Sephadex LH-20柱层析，甲醇、乙醇或者甲醇-水、乙醇-水不同比例的溶液洗脱而得，其化学结构式为：

2.权利要求1所述的脉络宁腙与医学上可接受的药用辅料组成的药物制剂。

3.权利要求2所述的药物制剂，其特征在于制剂剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂和注射剂。

4.权利要求1所述的脉络宁腙在制备治疗心脑血管疾病药物方面的用途。

说明书

脉络宁腙及其制备方法和用途

一、技术领域：

[0001] 本发明涉及医药技术领域，是一种具有治疗心血管疾病的腙类新化合物——脉络宁腙([[5-(hydroxymethyl)-2-furanyl]methylene]hydrazone)的制备方法和在医药领域中的治疗心血管疾病的用途。具体涉及从脉络宁注射液中提取分离得到的一种腙类新化合物，在制备治疗心血管疾病的药物方面，该化合物显示强的抑制LPS诱导的巨噬细胞中一氧化氮(NO)的产生，具有很好的浓度依赖性。二、技术背景：

[0002] 中药复方制剂脉络宁注射液是在著名医方“四妙勇安汤”临床应用的基础上研究开发出来的、具有自立知识产权的，并于1985年正式批准生产的中药复方静脉注射剂，由中药石斛、玄参、牛膝、金银花、山银花经科学提取精制而成。具有活血化淤、行气止痛、养阴通络和补益肝肾的功效，主要用于治疗缺血性中风急性期、血栓闭塞性脉管炎、下肢深静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑梗塞、心绞痛、心肌梗死、血液循环障碍及其后遗症等疾病，总有效率可达94.5％，与同类药品比较具有见效快、疗效高、疗程短、价格低廉、副作用少、安全性高等优点。

[0003] 炎症反应包括促炎反应和抗炎反应是机体对抗外来致病因素侵袭的保护性应激反应。在炎症发生的诸多诱因中，内毒素是激发炎症反应的一种很重要的触发剂，之后多种细胞因子参与炎症反应。一氧化氮(NO)是炎症反应早期出现的一个细胞介质，在巨噬细胞和免疫细胞中受到LPS、细胞因子、一些肿瘤前体物刺激后会大量增加，而且其在炎症反应中扮演着重要的角色。NO受iNOS和COX-2的调控而产生，目前研究证实NO是炎症和细胞毒性反应中一个重要的介质。从目前研究成果看，具有抑制NO表达的药物具有潜在降低炎症的作用，并被用来作为药物筛选的评价指标之一。三、发明内容：

[0004] 本发明提供一种具有显著抑制LPS诱导的巨噬细胞中一氧化氮(NO)的产生等作用的腙类新化合物——脉络宁腙的制备方法和在医药领域中治疗心血管疾病的用途。

[0005] 本发明公开了该化合物的结构式：

[0006]

[0007] 分子式为：C12H12O4N2，不饱和度为8，分子量：248。

[0008] 命名为：脉络宁腙([[5-(hydroxymethyl)-2-furanyl]methylene]hydrazone)。

[0009] 本发明中上述化合物的制备方法如下：

[0010] 其特征在于以金陵药业股份有限公司生产的脉络宁注射液为原料，通过多次硅胶柱层析，经石油醚-乙酸乙酯-丙酮溶剂系统或者氯仿-甲醇溶剂系统分离，再经Sephadex LH-20柱层析，甲醇、乙醇或者甲醇-水、乙醇-水不同比例的溶液洗脱而得。

[0011] 本发明提供了脉络宁腙与医学上可接受的药用辅料组成的药物制剂。

[0012] 本发明提供了所述的药物制剂，其特征在于制剂剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂和注射剂。

[0013] 本发明提供了脉络宁腙在制备治疗心脑血管疾病药物方面的用途。四、附图说明：

[0014] 以下图可作为附件材料上报。

[0015] 图1、化合物的1H-NMR谱 图2、化合物的13C-NMR谱

[0016] 图3、化合物的1H-1H COSY的谱 图4、化合物的HSQC谱

[0017] 图5、化合物的HMBC谱 图6、化合物的ROESY谱五、具体实施方式：

[0018] 结合具体实施方式对本发明作进一步说明，但本发明的内容并不仅仅限于所列举的实施方式。

[0019] 实施例1.从脉络宁注射液中分离和鉴定该新化合物

[0020] 开启脉络宁注射液700支约7000mL，经Sephadex LH-20柱(7.5×120cm)，50％乙醇洗脱，共收集10个流份，流份1、2色素重，流份3、4、5分别反复经硅胶柱、Sephadex LH-20柱、反相柱层析从脉络宁注射液中得到该单体化合物，经化学、波谱方法鉴定为脉络宁腙，经文献检索该化合物是新化合物。

[0021] 该化合物结构经核磁共振谱鉴定如下：

[0022] 黄色粉末，易溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇，254nm有斑点，I2蒸汽显褐色。香草醛-浓硫酸试剂加热显黄色，三氯化铁试剂加热显黄色。ESI-MS(m/z)：显示该化合物的准分子离+ +子峰为247(M-H)和271(M+Na)，表明其分子量为248，结合氢谱、碳谱推测该化合物存在对称结构，分子式为C12H12O4N2，不饱和度为8。

[0023] 碳谱仅显示6个碳信号，其中δC149.9是烯碳信号，δC148.2，δC118.0、δC109.4、δC159.2是呋喃环上四个烯碳信号，δC55.7是一个连氧的亚甲基碳信号。

[0024] 氢谱仅显示6个质子信号，其中δH8.44(1H，s)是1个烯氢信号，δH7.03(1H，d，J＝3.4Hz)，δH6.50(1H，d，J＝3.4Hz)是2个顺式烯质子信号，δH4.48(2H，d，J＝5.8Hz)是亚甲基的2个氢信号，δH5.39(1H，d，J＝5.8Hz)是与δH4.48的亚甲基有耦合关系的羟基氢信号。

[0025] 在1H-1H COSY相关谱中可以找到2组有相关关系的质子，即：δH7.03(1H，d，J＝3.4Hz)和δH6.50(1H，d，J＝3.4Hz)；δH4.48(2H，d，J＝5.8Hz)和δH5.39(1H，d，J＝
5.8Hz)。

[0026] 在HMBC谱中，δH8.44与 δC148.2、δC118.0有远程相关信号；δH7.03与δC148.2、δC109.4、δC159.2有远程相关信号；δH6.50与δC148.2、δC118.0、δC159.2有远程相关信号；δH4.48与δC148.2、δC109.4、δC159.2、δC118.0有远程相关信号；δH5.39与δC159.2、δC55.7有远程相关信号。

[0027] 在ROESY谱中可以发现，δH8.44的氢与δH7.03的氢空间相近，δH6.50的氢与δH4.48的氢空间相近。

[0028] 通过1H NMR、13C NMR、HMBC、HSQC、1H-1H COSY、ROESY谱的综合解析，该化合物的碳氢信号进行了全归属见下表。经文献检索为新化合物，定名为脉络宁腙。

[0029] 脉络宁腙的1DNMR和2DNMR谱图数据

[0030]

[0031] 实施例2.脉络宁腙的抗氧化实验

[0032] 1、绘制NO2-标准曲线

[0033] 为了获得实验样品中NO2-的准确浓度，每次实验时都必需测定NO2-标准曲线[0034] (1)将浓度为0.1M亚硝酸钠稀释1000倍至浓度为100μM；

[0035] (2)依次梯度稀释至浓度为50μM，25μM，12.5μM，6.25μM，3.13μM，1.56μM；

[0036] (3)每个浓度设置3个重复孔，每孔50μL亚硝酸钠溶液；

[0037] (4)加入50μL Griess试剂，室温避光温育5～10min；

[0038] (5)30min内在酶标仪上检测光吸收值，检测波长为540nm。

[0039] (6)根据读出的吸光值，以浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。

[0040] 2、测定样品中NO2-的浓度

[0041] (1)取50μL细胞培养上清液，加入96孔板中，每个样品设置3个复孔；

[0042] (2)加入50μL Griess试剂，室温避光温育5～10min；

[0043] (3)30min内在酶标仪上检测光吸收值，检测波长为540nm；

[0044] (4)根据测出的吸光值，以及上述NO2-标准曲线，算出各样品中的NO2-的浓度。

[0045] 3、实验结果

[0046]

[0047] 由上表可知，5-羟甲基糠醛、咖啡酸和脉络宁腙均可抑制LPS诱导的巨噬细胞中一氧化氮(NO)的产生，具有很好的浓度依赖性。通过计算发现，脉络宁腙IC50值为21μM，而5-羟甲基糠醛和咖啡酸分别为110μM和67μM，脉络宁腙抗炎效果最好。