血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂

摘要

本发明公开了一种血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，试剂R1包括：缓冲液、界面活性剂、反应促进剂、电解质、稳定剂、抑菌剂；试剂R2包括：缓冲液2、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体、电解质、稳定剂、抑菌剂；校准品包括缓冲液、人α1-抗胰蛋白酶、电解质、稳定剂、抑菌剂。本发明的优点是：检测快速、检测灵敏率高、线性范围可达4.00g/L、准确度高、试剂稳定。

权利要求

1.血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其特征在于：所述

———试剂R1包括：pH5.0-9.0的缓冲液20-500mM、界面活性剂0.01-2.0g/L、反应促进剂0.1-12.0g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L；

———试剂R2包括：pH6.0-9.0的缓冲液20-300mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体

2.0-100.0g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L；

———校准品包括：pH6.0-9.0的缓冲液20-300mM、人α1-抗胰蛋白酶3.00-6.00g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L。

2.根据权利要求1所述的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，其特征在于：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液中的一种。

3.根据权利要求1所述的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，其特征在于：所述抗人α1-抗胰蛋白酶抗体为羊抗人多克隆抗体或兔抗人多克隆抗体。

4.根据权利要求1所述的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，其特征在于：所述界面活性剂为Tween20、Tween40、Span20、Span40、Span80、TritonX-100中的一种。

5.根据权利要求1所述的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，其特征在于：所述反应促进剂为聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种。

6.根据权利要求1所述的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，其特征在于：所述电解质为钠离子、钾离子、镁离子、钙离子中一种或多种。

7.根据权利要求1所述的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，其特征在于：所述稳定剂为牛血清白蛋白、明胶、丙三醇、蔗糖、葡萄糖中的一种。

8.根据权利要求1所述的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，其特征在于：所述抑菌剂为叠氮钠、山梨酸钾、Proclin200、Proclin300、庆大霉素中的一种。

说明书

血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂

技术领域

[0001] 本发明涉及检测试剂技术领域，尤其是涉及一种血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂。

背景技术

[0002] α1-抗胰蛋白酶(AAT)又称α1胰蛋白酶抑制剂，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员，为单链糖蛋白，由一条连接3个寡糖链的多肽链组成，分子量约为52kDa，PI值为4.8。作为人体内最重要的蛋白酶抑制物，α1-抗胰蛋白酶主要由肝细胞合成，在正常的血浆中能抑制90％以上的蛋白酶的活性，其主要能够抑制中性粒弹性蛋白酶，在所有的丝氨酸蛋白酶抑制剂中α1-抗胰蛋白酶的血管通透性较强，因此α1-抗胰蛋白酶在肺组织中的浓度比其它丝氨酸蛋白酶抑制因子要高，而且对弹性蛋白酶的专一性更强，主要抑制胰蛋白酶和嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的活性，保护正常细胞不受蛋白酶的破坏和损害，可抑制感染和炎症，起到维持机体环境稳定的作用。

[0003] α1-抗胰蛋白酶作为一种重要的急性期反应蛋白，其在正常人体内血清中浓度的参考范围是0.9-2.0g/L，在炎症反应（如：感染性疾病，类风湿疾病）、组织坏死、肿瘤及外伤这些疾病见升高，肝实质细胞炎症的发生通常伴随α1-抗胰蛋白酶的水平升高；降低见于先天性缺乏症或减少症、严重肝功能障碍、肾病综合征等疾病，研究发现α1-抗胰蛋白酶的缺乏是一种遗传性疾病，最常见的α1-抗胰蛋白酶严重缺乏的纯合基因型为PiZZ型，血清中α1-抗胰蛋白酶水平约为正常人的10%～20%，在慢性阻塞性肺病(COPD)的发病中起着重要作用。

[0004] 因此，快速准确定量检测血清中α1-抗胰蛋白酶非常重要。目前，α1-抗胰蛋白酶检测的主要方法有：血清胰蛋白酶抑制容量试验、单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和ELISA法，但均存在操作繁琐，耗时长的缺点，不适用于急诊病人和临床病人及时诊断。免疫比浊法具有操作简单、快捷、灵敏，可采用自动生化分析仪快速高通量测定的优点，因此，开发出适合大中小医院以及基层单位临床应用的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，将有助于疾病诊断、治疗和预后。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，它具有灵敏度高、稳定性好，能够适用于自动生化分析仪，且操作简单、检测快速的特点。

[0006] 本发明所采用的技术方案是：血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品，所述

[0007] ———试剂R1包括：pH5.0-9.0的缓冲液20-500mM、界面活性剂0.01-2.0g/L、反应促进剂0.1-12.0g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L；

[0008] ———试剂R2包括：pH6.0-9.0的缓冲液20-300mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体2.0-100.0g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L；

[0009] ———校准品包括：pH6.0-9.0的缓冲液20-300mM、人α1-抗胰蛋白酶3.00-6.00g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L。

[0010] 所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液中的一种。

[0011] 所述抗人α1-抗胰蛋白酶抗体为羊抗人多克隆抗体或兔抗人多克隆抗体。

[0012] 所述界面活性剂为Tween20、Tween40、Span20、Span40、Span80、TritonX-100中的一种。

[0013] 所述反应促进剂为聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种。

[0014] 所述电解质为钠离子、钾离子、镁离子、钙离子中一种或多种。

[0015] 所述稳定剂为牛血清白蛋白、明胶、丙三醇、蔗糖、葡萄糖中的一种。

[0016] 所述抑菌剂为叠氮钠、山梨酸钾、Proclin200、Proclin300、庆大霉素中的一种。

[0017] 本发明中：试剂R1提供了α1-抗胰蛋白酶抗原和抗体形成网状抗原抗体结构的液体环境，具有能使抗原抗体反应稳定平稳的特点；试剂R2具有使特定浓度抗体在2-8℃保存条件下抗原反应性稳定保存的特点。尤其是抗人α1-抗胰蛋白酶抗体能够与α1-抗胰蛋白酶抗原特异性反应，对于其他抗原无交叉反应性，而抗体为羊抗人多克隆抗体或兔抗人多克隆抗体。该校准品中人α1-抗胰蛋白酶提纯自人血浆。校准品可以为高浓度单点校准品，也可以为含系列浓度梯度的多点校准品。

[0018] 在具体使用时，该血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂采用免疫透射比浊法，反应原理为样本中的α1-抗胰蛋白酶与试剂中相应抗体（抗人α1-抗胰蛋白酶抗体）在液相中相遇，结合成抗原-抗体复合物，形成一定的浊度。该浊度的高低在足量抗体存在时与样本中AAT的浓度成比例，将吸光度变化与已知浓度的校准品比较，可以定量得出样品中血清α1-抗胰蛋白酶的含量。

[0019] 其中，血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂实验参数为：

[0020] 检测波长：340nm；

[0021] V样本:VR1:VR2=10μl:250μl:83μl；

[0022] 操作步骤：样本和试剂R1混匀后37℃孵育3-5min，读取第1读数点吸光度Α1，随即加入试剂R2，混匀后37℃孵育5min，读取第2读数点吸光度A2，计算A2-Α1差值，根据校准曲线计算样本中α1-抗胰蛋白酶含量；

[0023] 结果计算：将单点高浓度校准品倍比稀释成6个梯度（包括零点校准品）或采用多点梯度校准品定标，以梯度校准液各点的吸光度变化值(A校准-A空白)对其相应浓度做图，绘制定标曲线。根据样品的(A样品-A空白)值在定标曲线上求得样品中血清α1-抗胰蛋白酶的含量。

[0024] 综上，本发明所具有的优点是：1、检测快速：采用自动生化分析仪操作，可与其他检测项目同时进行，每个样本检测时间缩短到10min内，检测快速简便。2、检测灵敏率高：试剂缓冲液、界面活性剂等成分的配比提高了反应的灵敏度，对于α1-抗胰蛋白酶缺乏的样本尤为重要。3、线性范围可达4.00g/L，正常人群参考范围为0.9-2.0g/L，满足临床需要。4、准确度高：采用优化的试剂配比，并且采用多点定标制定校准曲线，测定样本值准确度高。5、试剂稳定：试剂各成分配比优化，试剂在2-8℃密闭条件下可稳定18个月。

具体实施方式

[0025] 实施例1

[0026] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。具体的：

[0027] 试剂R1包括：pH5.0的缓冲液20mM、界面活性剂0.01g/L、反应促进剂0.1g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0028] 试剂R2包括：pH6.0的缓冲液20mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体2.0g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂缓冲液0.1g/L。

[0029] 校准品包括：pH6.0的缓冲液20mM、人α1-抗胰蛋白酶3.00g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0030] 其中，缓冲液采用磷酸盐缓冲液、界面活性剂采用Tween20、反应促进剂采用聚乙二醇1500、电解质采用钠离子、稳定剂采用牛血清白蛋白、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用羊抗人多克隆抗体、抑菌剂采用叠氮钠。

[0031] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0032] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入2.40g NaH2PO4，以NaOH调节至pH5.0，依次加入2.92gNaCl、0.1g牛血清白蛋白、0.1g聚乙二醇1500、0.1g叠氮钠、0.01g Tween20，以纯化水定容至1L。

[0033] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入0.341g Na2HPO4和2.11g NaH2PO4，搅拌溶解后，依次加入2.92gNaCl、0.1g牛血清白蛋白、0.1g叠氮钠、2.0g抗人α1-抗胰蛋白酶抗体，以纯化水定容至1L。

[0034] 校准品配制：配制容器中加入80mL纯化水，加入0.0341g Na2HPO4和0.211g NaH2PO4，搅拌溶解后，依次加入0.292g NaCl、0.010g牛血清白蛋白、0.010g叠氮钠、0.300g人α1-抗胰蛋白酶，以纯化水定容至100mL。

[0035] 本实施例的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂使用方法如下：

[0036] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为3.00g/L、2.25g/L、1.50g/L、0.75g/L、0.38g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0037] 2）测定方法：

[0038] 仪器：日立7170自动生化分析仪；

[0039] 测定方法：二点终点法；

[0040] 检测波长：340nm；

[0041] 反应方向：上升反应；

[0042] V样本:VR1:VR2=10μl:250μl:83μl；

[0043] 定标及校准方式：系列浓度校准品定标后采用Spline校准；

[0044] 操作步骤：样本和试剂R1混匀后37℃孵育3-5min，读取第1读数点吸光度Α1，随即加入试剂R2，混匀后37℃孵育5min，读取第2读数点吸光度A2；

[0045] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）（采用市售SIEMENS品牌）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERMDA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表1。

[0046] 表1：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0047]

[0048] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，

[0049] 具有更好的准确度和精密度。

[0050] 实施例2

[0051] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0052] 具体的：

[0053] 试剂R1包括：pH6.0的缓冲液30mM、界面活性剂0.05g/L、反应促进剂2.0g/L、电解质100mM、稳定剂5.0g/L、抑菌剂2.0g/L。

[0054] 试剂R2包括：pH7.0的缓冲液40mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体10.0g/L、电解质100mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0055] 校准品包括：pH7.0的缓冲液40mM、人α1-抗胰蛋白酶4.00g/L、电解质100mM、稳定剂5.0g/L、抑菌剂1.0g/L。

[0056] 其中，缓冲液采用磷酸盐缓冲液、界面活性剂采用Tween40、反应促进剂采用聚乙二醇2000、电解质采用钾离子、稳定剂采用明胶、抑菌剂采用山梨酸钾、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用兔抗人多克隆抗体。

[0057] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0058] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入0.511g Na2HPO4和3.167g NaH2PO4，搅拌溶解后，依次加入7.455g KCl、5.0g明胶、2.0g聚乙二醇2000、2.0g山梨酸钾、0.05g Tween40，以纯化水定容至1L。

[0059] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入3.276g Na2HPO4和2.03g NaH2PO4，搅拌溶解后，依次加入7.455g KCl、0.1g明胶、0.1g山梨酸钾、10.0g抗人α1-抗胰蛋白酶抗体，以纯化水定容至1L。

[0060] 校准品配制：配制容器中加入80ml纯化水，加入0.3276g Na2HPO4和0.203g NaH2PO4，搅拌溶解后，依次加入0.7455g KCl、0.5g明胶、0.1g山梨酸钾、0.4g人α1-抗胰蛋白酶，以纯化水定容至100mL。

[0061] 本实施例的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂使用方法如下：

[0062] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为4.00g/L、3.00g/L、2.00g/L、1.00g/L、0.50g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0063] 2）测定方法：

[0064] 相同于实施例1。

[0065] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表2。

[0066] 表2：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0067]

[0068] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，具有更好的准确度和精密度。

[0069] 实施例3

[0070] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0071] 具体的：

[0072] 试剂R1包括：pH7.5的缓冲液150mM、界面活性剂1.0g/L、反应促进剂6.0g/L、电解质250mM、稳定剂10.0g/L、抑菌剂5.0g/L；

[0073] 试剂R2包括：pH8.0的缓冲液150mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体50.0g/L、电解质250mM、稳定剂10.0g/L、抑菌剂5.0g/L；

[0074] 校准品包括：pH7.5的缓冲液150mM、电解质250mM、稳定剂10.0g/L、4.50g人α1-抗胰蛋白酶、抑菌剂5.0g/L。

[0075] 其中，缓冲液采用Tris缓冲液、界面活性剂采用Triton X-100、反应促进剂采用聚乙二醇4000、电解质采用钠离子和镁离子、稳定剂采用牛血清白蛋白、抑菌剂采用Proclin300、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用兔抗人多克隆抗体。

[0076] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0077] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入21.171g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至7.5，依次加入14.61g NaCl、10.0g牛血清白蛋白、6.0g聚乙二醇4000、5.0g Proclin300、1.0g Tween40，以纯化水定容至1L。

[0078] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入21.171g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至8.0，依次加入50.825g六水合氯化镁、10.0g牛血清白蛋白、5.0g Proclin300、50.0g抗人α1-抗胰蛋白酶抗体，以纯化水定容至1L。

[0079] 校准品配制：配制容器中加入80ml纯化水，加入2.1171g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至7.5，依次加入1.461g NaCl、1.0g牛血清白蛋白、0.5gProclin300、0.45g人α1-抗胰蛋白酶，以纯化水定容至100mL。

[0080] 本实施例的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂使用方法如下：

[0081] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为4.50g/L、3.38g/L、2.25g/L、1.13g/L、0.56g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0082] 2）测定方法：

[0083] 相同于实施例1。

[0084] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表3。

[0085] 表3：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0086]

[0087] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，具有更好的准确度和精密度。

[0088] 实施例4

[0089] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0090] 具体的：

[0091] 试剂R1包括：pH9.0的缓冲液500mM、界面活性剂2.0g/L、反应促进剂12.0g/L、电解质500mM、稳定剂20.0g/L、抑菌剂10.0g/L；

[0092] 试剂R2包括：pH9.0的缓冲液300mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体100.0g/L、电解质500mM、稳定剂20.0g/L、抑菌剂10.0g/L；

[0093] 校准品包括：pH9.0的缓冲液300mM、电解质500mM、稳定剂20.0g/L、6.00g人α1-抗胰蛋白酶、抑菌剂10.0g/L。

[0094] 其中，缓冲液采用Tris缓冲液、界面活性剂采用Tween20、反应促进剂采用聚乙二醇6000、电解质采用钠离子、稳定剂采用牛血清白蛋白、抑菌剂采用Proclin200、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用兔抗人多克隆抗体。

[0095] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0096] 试剂R1配制：配制容器中加入600ml纯化水，加入60.57g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至9.0，依次加入29.22g NaCl、20.0g牛血清白蛋白、12.0g聚乙二醇6000、10.0g Proclin200、2.0g Tween20，以纯化水定容至1L。

[0097] 试剂R2配制：配制容器中加入600ml纯化水，加入36.342g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至9.0，依次加入29.22g NaCl、20.0g牛血清白蛋白、100.0g抗人α1-抗胰蛋白酶抗体、10.0g Proclin200，以纯化水定容至1L。

[0098] 校准品配制：配制容器中加入60ml纯化水，加入3.6342g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至9.0，依次加入2.922g NaCl、2.00g牛血清白蛋白、0.6g人α1-抗胰蛋白酶、1.00g Proclin200，以纯化水定容至100mL。

[0099] 本实施例的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂使用方法如下：

[0100] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为6.00g/L、4.50g/L、3.00g/L、1.50g/L、0.75g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0101] 2）测定方法：

[0102] 相同于实施例1。

[0103] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表4。

[0104] 表4：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0105]

[0106] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，具有更好的准确度和精密度。

[0107] 实施例5

[0108] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。具体的：

[0109] 试剂R1包括：pH8.0的缓冲液50mM、界面活性剂0.5g/L、反应促进剂4.0g/L、电解质150mM、稳定剂3.0g/L、抑菌剂0.8g/L；

[0110] 试剂R2包括：pH8.0的缓冲液30mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体30.0g/L、电解质150mM、稳定剂1.0g/L、抑菌剂0.9g/L；

[0111] 校准品包括：pH8.0的缓冲液30mM、电解质150mM、稳定剂5.0g/L、5.00g/L人α1-抗胰蛋白酶、抑菌剂0.9g/L。

[0112] 其中，缓冲液采用Tris缓冲液、界面活性剂采用Tween20、反应促进剂采用聚乙二醇6000、电解质采用钠离子、稳定剂采用牛血清白蛋白、抑菌剂采用叠氮钠、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用兔抗人多克隆抗体。

[0113] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0114] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入6.057g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至8.0，依次加入8.766g NaCl、3.0g牛血清白蛋白、4.0g聚乙二醇6000、0.8g叠氮钠、0.5g Tween20，以纯化水定容至1L。

[0115] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入3.6342g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至8.0，依次加入8.766g NaCl、1.0g牛血清白蛋白、30.0g抗人α1-抗胰蛋白酶抗体、0.9g叠氮钠，以纯化水定容至1L。

[0116] 校准品配制：配制容器中加入80ml纯化水，加入0.3634g Tris，搅拌溶解后以HCl调节pH至8.0，依次加入0.8766g NaCl、0.5g牛血清白蛋白、0.5g人α1-抗胰蛋白酶、0.09g叠氮钠，以纯化水定容至100mL。

[0117] 本实施例的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂使用方法如下：

[0118] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为5.00g/L、3.75g/L、2.50g/L、1.25g/L、0.63g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0119] 2）测定方法：

[0120] 相同于实施例1。

[0121] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表5。

[0122] 表5：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0123]

[0124] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，具有更好的准确度和精密度。

[0125] 实施例6：

[0126] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0127] 具体的：

[0128] 试剂R1包括：pH7.5的缓冲液50mM、界面活性剂0.3g/L、反应促进剂6.0g/L、电解质200mM、稳定剂1.0g/L、抑菌剂0.8g/L；

[0129] 试剂R2包括：pH8.0的缓冲液20mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体30.0g/L、电解质150mM、稳定剂0.5g/L、抑菌剂0.9g/L；

[0130] 校准品包括：pH6.5的缓冲液30mM、电解质150mM、稳定剂2.0g/L、5.00g/L人α1-抗胰蛋白酶、抑菌剂0.9g/L。

[0131] 其中，缓冲液采用磷酸盐缓冲液、界面活性剂采用Tween20、反应促进剂采用聚乙二醇4000、电解质采用钠离子、稳定剂采用牛血清白蛋白、抑菌剂采用叠氮钠、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用兔抗人多克隆抗体。

[0132] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0133] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入5.998g Na2HPO4和0.930g NaH2PO4，依次加入11.688g NaCl、1.0g牛血清白蛋白、6.0g聚乙二醇4000、0.8g叠氮钠、0.3g Tween20，以纯化水定容至1L。

[0134] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入2.646g Na2HPO4和0.163g NaH2PO4，依次加入8.766g NaCl、0.5g牛血清白蛋白、30.0g抗人α1-抗胰蛋白酶抗体、0.9g叠氮钠，以纯化水定容至1L。

[0135] 校准品配制：配制容器中加入80ml纯化水，加入0.1499g Na2HPO4和0.2332g NaH2PO4，依次加入0.8766g NaCl、0.2g牛血清白蛋白、0.5g人α1-抗胰蛋白酶、0.09g叠氮钠，以纯化水定容至100mL。

[0136] 本实施例的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂使用方法如下：

[0137] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为5.00g/L、3.75g/L、2.50g/L、1.25g/L、0.63g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0138] 2）测定方法：

[0139] 相同于实施例1。

[0140] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表6。

[0141] 表6：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0142]

[0143] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，具有更好的准确度和精密度。

[0144] 实施例7

[0145] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0146] 具体的：

[0147] 试剂R1包括：pH7.8的缓冲液120mM、界面活性剂0.06g/L、反应促进剂0.3g/L、电解质50mM、稳定剂0.5g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0148] 试剂R2包括：pH8.0的缓冲液80mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体5.0g/L、电解质50mM、稳定剂0.5g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0149] 校准品包括：pH8.0的缓冲液80mM、人α1-抗胰蛋白酶3.00g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0150] 其中，缓冲液采用HEPES缓冲液、界面活性剂采用Span20、反应促进剂采用聚乙二醇4000、电解质采用钙离子、稳定剂采用丙三醇、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用羊抗人多克隆抗体、抑菌剂采用庆大霉素。

[0151] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0152] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入28.596g HEPES free acid，以NaOH调节至pH7.8，依次加入5.549gCaCl2、0.5g丙三醇、0.3g聚乙二醇4000、0.1g庆大霉素、0.06g Span20，以纯化水定容至1L。

[0153] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入18.424g HEPES free acid，以NaOH调节至pH8.0，依次加入5.549gCaCl2、0.5g丙三醇、0.1g庆大霉素、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体5.0g/L，以纯化水定容至1L。

[0154] 校准品配制：配制容器中加入80mL纯化水，加入18.424g HEPES free acid，以NaOH调节至pH8.0，依次加入5.549g CaCl2、0.1g丙三醇、0.1g庆大霉素、0.300g人α1-抗胰蛋白酶，以纯化水定容至100mL。

[0155] 本实施例的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂使用方法如下：

[0156] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为3.00g/L、2.25g/L、1.50g/L、0.75g/L、0.38g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0157] 2）测定方法：

[0158] 相同于实施例1。

[0159] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表7。

[0160] 表7：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0161]

[0162] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，具有更好的准确度和精密度。

[0163] 实施例8

[0164] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0165] 具体的：

[0166] 试剂R1包括：pH7.0的缓冲液80mM、界面活性剂0.06g/L、反应促进剂0.3g/L、电解质50mM、稳定剂0.5g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0167] 试剂R2包括：pH7.0的缓冲液80mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体5.0g/L、电解质50mM、稳定剂0.5g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0168] 校准品包括：pH7.0的缓冲液80mM、人α1-抗胰蛋白酶4.00g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0169] 其中，缓冲液采用PIPES缓冲液、界面活性剂采用Span40、反应促进剂采用聚乙二醇4000、电解质采用钾离子和钙离子、稳定剂采用蔗糖、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用羊抗人多克隆抗体、抑菌剂采用叠氮钠。

[0170] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0171] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入24.19g PIPES，以NaOH调节至pH7.0，依次加入3.728gKCl、0.5g蔗糖、0.3g聚乙二醇4000、0.1g叠氮钠、0.06g Span40，以纯化水定容至1L。

[0172] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入24.19g PIPES，以NaOH调节至pH7.0，依次加入5.549gCaCl2、0.5g蔗糖、0.1g叠氮钠、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体5.0g/L，以纯化水定容至1L。

[0173] 校准品配制：配制容器中加入80mL纯化水，加入2.419g PIPES，以NaOH调节至pH7.0，依次加入0.373gKCl、0.01g丙三醇、0.01g叠氮钠、0.400g人α1-抗胰蛋白酶，以纯化水定容至100mL。

[0174] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为4.00g/L、3.00g/L、2.00g/L、1.00g/L、0.50g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0175] 2）测定方法：

[0176] 相同于实施例1。

[0177] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表8。

[0178] 表8：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0179]

[0180] 结果显示，本发明实施例试剂与对照试剂（A）相比，偏差和不精密更低，准确度更高。即，本发明血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂与对照试剂相比，具有更好的准确度和精密度。

[0181] 实施例9

[0182] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0183] 具体的：

[0184] 血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。

[0185] 具体的：

[0186] 试剂R1包括：pH5.0的缓冲液20mM、界面活性剂0.01g/L、反应促进剂0.1g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0187] 试剂R2包括：pH6.0的缓冲液20mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体2.0g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0188] 校准品包括：pH6.0的缓冲液20mM、人α1-抗胰蛋白酶4.5g/L、电解质50mM、稳定剂0.1g/L、抑菌剂0.1g/L。

[0189] 其中，缓冲液采用磷酸盐缓冲液、界面活性剂采用Span80、反应促进剂采用聚乙二醇4000、电解质采用钠离子、钾离子、镁离子和钙离子、稳定剂采用葡萄糖、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体采用羊抗人多克隆抗体、抑菌剂采用叠氮钠。

[0190] 该试剂R1、试剂R2和校准品的配制如下：

[0191] 试剂R1配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入2.40g NaH2PO4，以NaOH调节至pH5.0，依次加入1.461g NaCl、0.7455g KCl、2.033g MgCl2·6H2O、0.5549g CaCl2、0.1g葡萄糖、0.1g聚乙二醇4000、0.1g叠氮钠、0.01g Span80，以纯化水定容至1L。

[0192] 试剂R2配制：配制容器中加入800ml纯化水，加入0.341g Na2HPO4和2.11g NaH2PO4，搅拌溶解后，依次加入2.92gNaCl、0.1g葡萄糖、0.1g叠氮钠、2.0g抗人α1-抗胰蛋白酶抗体，以纯化水定容至1L。

[0193] 校准品配制：配制容器中加入80mL纯化水，加入0.0341g Na2HPO4和0.211g NaH2PO4，搅拌溶解后，依次加入0.292g NaCl、0.010g葡萄糖、0.01g叠氮钠、0.450g人α1-抗胰蛋白酶，以纯化水定容至100mL。

[0194] 1）校准品稀释：将配制好的校准品以校准品缓冲液稀释配制成含浓度为4.50g/L、3.38g/L、2.25g/L、1.13g/L、0.56g/L、0.00g/L的系列校准品。

[0195] 2）测定方法：

[0196] 相同于实施例1。

[0197] 3）本实施例所制试剂与对照试剂（A）进行比对试验，对照试剂按照说明书设置参数，分别使用各自检测系统，对ERM DA470k/IFCC中α1-抗胰蛋白酶定量检测，结果如表9。

[0198] 表9：本发明试剂与对照试剂ERM DA470k/IFCCα1-抗胰蛋白酶检测结果[0199]