一种凉茶产品的定量质量控制方法

摘要

一种凉茶产品的定量质量控制方法，所述凉茶为以仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草和甘草等为原料制成的凉茶产品，通过对产品中的三个特征成分：丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸和迷迭香酸的定量测定来达到有效控制产品质量的目的。本发明能够对该类凉茶产品和原料浸膏进行含量测定和定量质量控制，以有效地保证所生产出来的凉茶质量和稳定性，从而能够更好地保证广大消费者的安全。所述凉茶产品三成分同时定量质量控制采用高效液相色谱法，丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸或迷迭香酸三个特征成分在合格原料浸膏中含量范围分别为0.01wt%-45wt%；每一种组分在合格凉茶饮料产品中含量范围分别为0.1- 5 000μg/mL。

权利要求

1.一种凉茶产品的定量检测方法，所述凉茶产品以仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草和甘草为原料制成，其特征在于，以所述凉茶产品中丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸和迷迭香酸作为特征成分，以所述凉茶产品中的丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸和迷迭香酸的含量作为检测参数；

所述丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸或迷迭香酸三个特征成分同时定量方法为高效液相色谱法。

2.根据权利要1所述的凉茶产品的定量检测方法，其特征在于，高效液相色谱法选用C18色谱柱为分析柱；以加酸的乙腈-水或加酸的甲醇-水为流动相；选用UV检测器，检测波长为190-600 nm。

3.根据权利要求1或2所述的凉茶产品的定量检测方法，其特征在于，所述加酸的乙腈-水中，乙腈与水的体积比为5-90∶95-10，加酸的甲醇-水中，所述甲醇与水的体积比为5-90:95-10。

4.根据权利要求2所述的凉茶产品的定量检测方法，其特征在于，所述酸为磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、五氟丙酸、全氟丁酸、烷基磺酸中的一种。

5.根据权利要求3所述的凉茶产品的定量检测方法，其特征在于，所述酸为磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、五氟丙酸、全氟丁酸、烷基磺酸中的一种。

6.根据权利要求2所述的凉茶产品的定量检测方法，其特征在于，加酸量为使溶液pH为1-7。

7.根据权利要求3所述的凉茶产品的定量检测方法，其特征在于，加酸量为使溶液pH为1-7。

8.根据权利要求4所述的凉茶产品的定量检测方法，其特征在于，加酸量为使溶液pH为1-7。

说明书

一种凉茶产品的定量质量控制方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种凉茶产品定量质量控制方法的构建，尤其是涉及以仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草、甘草等为原料的凉茶产品的多特征成分同时定量质量控制方法的构建。

背景技术

[0002] 凉茶是指将药性寒凉和能消解内热的中草药煎水制成的饮料，以消除夏季人体内的暑气，或治疗冬日干燥引起的喉咙疼痛等疾患。凉茶具有清热解毒、清肺润燥解暑等诸多功效，是富有中国特色的一种饮料产品。我国凉茶从古代发展到现在，已经成为一种大众饮料，并已成为饮料产业的一支新秀。

[0003] 目前，市场上出售的各种品牌的凉茶不胜枚举，凉茶销量也保持持续快速增长趋势。凉茶产品已远销50多个国家和地区。然而，目前国内外对凉茶产品的质量控制多局限于感官指标、微生物指标、理化指标（金属元素含量）等，缺乏一个能从本质上反映其有效活性成分的质量控制标准，这对于消费者的权益保障及具体品牌凉茶产品的市场推广都是极为不利的。

[0004] 凉茶是由一种或数种中草药配制而成的产品，具有化学成分复杂多样的特点。中药的整体作用及多成分、多靶点的特点，决定了任何一个单一成分作为指标都不能准确反映凉茶的质量。

发明内容

[0005] 本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种凉茶产品的定量质量控制方法，使用该方法，可以对该凉茶产品的质量进行有效控制。

[0006] 一种凉茶产品的定量质量控制方法，所述凉茶为以仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草和甘草等为原料制成的凉茶产品，以所述凉茶产品中丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)和迷迭香酸作为特征成分，以所述凉茶产品中的丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)和迷迭香酸的含量作为控制所述凉茶产品质量的参数。

[0007] 所述丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)或迷迭香酸三个特征成分在合格原料浸膏中含量范围分别为0.01wt% - 45wt%；丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)和迷迭香酸在合格凉茶饮料产品中的含量范围分别为0.1- 5 000 μg/mL；丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)和迷迭香酸的含量同时测定方法采用高效液相色谱测定方法。

[0008] 夏枯草中含有丹参素和迷迭香酸，对原料中含夏枯草的浸膏，可对丹参素和迷迭香酸进行含量测定来进行定量质量控制。

[0009] 鸡蛋花中含有 (α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)，对原料中含鸡蛋花的浸膏，可对(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)进行含量测定来进行定量质量控制。

[0010] 仙草中含有迷迭香酸，对原料中含仙草的浸膏，可对迷迭香酸进行含量测定来进行定量质量控制。

[0011] 所述丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)、迷迭香酸的CAS号分别为76822-21-4、1309362-77-3、20283-92-5，结构式分别为

[0012] 、 、

[0013] 。

[0014] 本发明之凉茶产品的定量质量控制选用高效液相色谱法同步测定三个特征成分，并用外标法测定浸膏原料和凉茶饮料产品中三个特征成分的含量，进行多指标定量质量控制。相关条件及操作方法如下：

[0015] 色谱条件与系统适用性试验：选用C18色谱柱为分析柱；以加酸的乙腈-水或加酸的甲醇-水为流动相；选用UV检测器，检测波长为190-600 nm。

[0016] 所述加酸的乙腈-水中，乙腈与水的体积比为5-90∶95-10，加酸的甲醇-水中，所述甲醇与水的体积比为5-90:95-10。

[0017] 所述酸为磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、五氟丙酸、全氟丁酸、烷基磺酸中的一种。

[0018] 加酸量为，使溶液pH为1-7。

[0019] 对照品溶液的配制：精密称取丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)、迷迭香酸对照品适量，加入溶剂（所述溶剂为甲醇、水的至少一种或色谱流动相），在功率≥20 W、频率≥25 KHz条件下超声提取3-30 min，制成对照品溶液。

[0020] 供试品溶液的配制：

[0021] ①浸膏原料

[0022] 取夏枯草浸膏等凉茶原料，按料液比0.05-100 mg/mL加入甲醇或水或甲醇与水任意配比的混合溶液或色谱流动相，称重，功率≥20 W、频率≥25 KHz条件下超声提取1-3次，每次超声10-60 min，取出静置放凉后补重，3 000-13 000 rpm条件下离心5-15 min，合并上清液，过微孔滤膜，备用。

[0023] ②凉茶饮料

[0024] 取凉茶饮料，-40 ℃以下冷冻干燥或55-100 ℃下热蒸发干燥至干，取所得固体，加入甲醇，所加甲醇与原所取凉茶饮料体积比为1-9:3，在功率≥20 W、频率≥25 KHz条件下超声提取1-3次，每次超声10-60 min，3 000-13 000 rpm条件下离心5-15 min，合并上清液，N2吹干，加入体积相当于原凉茶饮料体积1/2-1/30的甲醇或色谱流动相，超声或振荡提取复溶，过微孔滤膜，备用。

[0025] 本发明三个特征成分的分离纯化方法如下：

[0026] 依次用大孔吸附树脂法、制备液相色谱法对凉茶浸膏中三个特征成分进行分离纯化，减压蒸发或冷冻干燥法获得固态的三个特征成分。

[0027] 本发明三个特征成分的结构鉴定过程如下：

[0028] 将分离纯化得到的三个特征成分用核磁共振、红外、紫外、质谱、元素分析等手段进行结构鉴定，分别确定三个特征成分的结构。

[0029] 研究表明，丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)或迷迭香酸三个特征成分在合格原料浸膏中含量范围分别为0.01wt% - 45wt%；每一种组分在合格凉茶饮料产品中含量范围分别为0.1- 5 000 μg/mL。

[0030] 本发明着力于构建一种多个特征成分同时定量的质量控制方法来更好地控制凉茶产品的质量，主要用于仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草、甘草等为原料的凉茶产品的多特征成分同时定量质量控制。

[0031] 使用本发明构建的凉茶产品定量质量控制方法精密度高（RSD≤0.21%）、重现性好（RSD≤0.87%），能有效地对凉茶产品进行整体而精准的质量控制，填补了目前凉茶产品质量控制上只有原辅材料要求、感官指标、卫生指标而无多特征化学成分定量质量控制指标的方法学空白。

[0032] 本发明不仅可用于由仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草和甘草等原料制成的凉茶产品。凡含有仙草、鸡蛋花、夏枯草成分的其它凉茶产品的质量控制，稍加调整，也可使用。

附图说明

[0033] 图1为实施例1使用的丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)、迷迭香酸对照品及凉茶饮料的HPLC谱图，其中1为丹参素对照品的HPLC谱图，其中2为(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸(cerberic acid B)对照品的HPLC谱图，其中3为迷迭香酸对照品的HPLC谱图，其中4为凉茶饮料待测品的HPLC谱图；

[0034] 图2为实施例2使用的丹参素、迷迭香酸对照品及夏枯草浸膏的HPLC谱图，其中5为丹参素对照品的HPLC谱图，其中6为迷迭香酸对照品的HPLC谱图，其中7为夏枯草浸膏待测品的HPLC谱图。

具体实施方式

[0035] 实施例1

[0036] 本实施例为以特征成分丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)、迷迭香酸的含量为指标对凉茶饮料进行定量质量控制。

[0037] （1）对照品溶液的配制：

[0038] 精密称取丹参素对照品11.25 mg于25 mL容量瓶中，加入体积比为1:1的甲醇-水，150 W、40 KHz条件下超声提取20 min使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成450 μg/mL的丹参素对照品溶液。

[0039] 精密称取(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)对照品5.1 mg于10 mL容量瓶中，加入甲醇，150 W、40 KHz条件下超声提取20 min使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成510 μg/mL的(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B) 对照品溶液。

[0040] 精密称取迷迭香酸对照品10.4 mg于50 mL容量瓶中，加入甲醇，150 W、40 KHz条件下超声提取20 min使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成208 μg/mL的迷迭香酸对照品溶液。

[0041] （2）供试品溶液的配制：

[0042] 取凉茶饮料8 mL，-40 ℃条件下冷冻干燥至干，在所得固体残渣中加入4 mL甲醇，150 W、40 KHz条件下超声提取两次，每次超声30 min，10 000 rpm条件下离心10 min，合并上清液，N2吹干，往所得残渣中加入1 mL甲醇，150 W、40 KHz条件下超声复溶，所得溶液过0.45 μm有机膜，备用。

[0043] （3）外标法测定凉茶饮料中三个特征成分的含量：

[0044] 将丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)、迷迭香酸对照溶液稀释成一系列浓度，通过高效液相色谱依次分析，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，作标准曲线。丹参素线性关系方程为y = 69994.5x + 2010568.4， = 0.9990；cerberic acid B线性关系方程为y = 118593x + 154240， = 0.9996；迷迭香酸线性关系方程为y =97098x + 169135， = 0.999。结果表明丹参素进样量在0.9-5.4 μg范围内、cerberic acid B进样量在0.204-2.04 μg范围内、迷迭香酸进样量在0.208-4.16 μg范围内线性关系良好。

[0045] 高效液相色谱法分析步骤(2)中所得样品，所得峰面积带入上述标准曲线的线性关系方程中，计算得到供试品溶液中丹参素的浓度为70.5 μg/mL、cerberic acid B的浓度为52.3 μg/mL、迷迭香酸的浓度为46.7 μg/mL，即原凉茶饮料中丹参素含量为8.8 μg/mL、cerberic acid B含量为6.5 μg/mL、迷迭香酸含量为5.8μg/mL。

[0046] 上述高效液相色谱条件如下：

[0047] 仪 器：HPLC-UV

[0048] 色 谱 柱：

[0049] 检测波长：205 nm

[0050] 流 动 相：A. 0.1%磷酸水 B. 0.1%磷酸乙腈

[0051] 流 速：1 mL/min

[0052] 进样体积：20 μL

[0053] 洗脱程序：

[0054]

[0055] 丹参素、(α)-3-羧基-α-羟基苯丙酸 (cerberic acid B)、迷迭香酸对照品及凉茶饮料的HPLC谱图见图1。

[0056] 实施例2

[0057] 本实施例为以特征成分丹参素、迷迭香酸的含量为指标对原料夏枯草浸膏进行定量质量控制。

[0058] （1）对照品溶液的配制：

[0059] 精密称取丹参素对照品11.25 mg于25 mL容量瓶中，加入体积比为1:1的甲醇-水，150 W、40 KHz条件下超声提取20 min使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成450 μg/mL的丹参素对照品溶液。

[0060] 精密称取迷迭香酸对照品10.4 mg于50 mL容量瓶中，加入甲醇，150 W、40 KHz条件下超声提取20 min使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成208 μg/mL的迷迭香酸对照品溶液。

[0061] （2）供试品溶液的配制：

[0062] 取夏枯草浸膏0.1467 g，加入15 mL水，称重，150 W、40 KHz条件下超声提取30 min，取出静置放凉后补重，10 000 rpm条件下离心10 min，取上清液过0.45 μm有机膜，备用。

[0063] （3）外标法测定夏枯草浸膏中两个特征成分的含量：

[0064] 将丹参素、迷迭香酸对照溶液稀释成一系列浓度，高效液相色谱依次分析，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，作标准曲线。丹参素线性关系方程为y = 69994.5x +2010568.4， = 0.9990；迷迭香酸线性关系方程为y = 97098x + 169135， = 0.999。
结果表明丹参素进样量在0.9-5.4 μg范围内、迷迭香酸进样量在0.208-4.16 μg范围内线性关系良好。

[0065] 高效液相色谱法分析（2）中所得样品，所得峰面积带入上述标准曲线的线性关系方程中，计算得到供试品溶液中丹参素的浓度为97.3 μg/mL、迷迭香酸的浓度为55.3 μg/mL，即原夏枯草浸膏中丹参素含量为0.995wt%、迷迭香酸含量为0.566wt%。

[0066] 所述高效液相色谱条件如下：

[0067] 仪 器：HPLC-UV

[0068] 色 谱 柱：

[0069] 检测波长：205 nm

[0070] 流 动 相：A. 0.1%磷酸水 B. 0.1%磷酸乙腈

[0071] 流 速：1 mL/min

[0072] 进样体积：20 μL

[0073] 洗脱程序：

[0074]

[0075] 丹参素、迷迭香酸对照品及夏枯草浸膏的HPLC谱图见图2。

[0076] 以上所述实施例不得用于对本发明保护范围的限制。在不脱离本发明基本思路的情况下，本发明技术方案显然还可以作出许多修改和变化，这些修改和变化均属于本发明的保护范围。