一种紫色马勃液体菌种的制作方法

摘要

本发明公开了一种紫色马勃液体菌种的制作方法，它是由紫色马勃子实体，马铃薯，胰蛋白胨，碳酰二胺，葡萄糖，牛肉浸膏，玉米粒，维生素B1，磷酸氢二钾，硫酸镁，氯化钙等制作特定紫色马勃液体培养基，经培养基灭菌、接种、菌种培养而得。本发明与现有技术相比具有十分突出的特点，本发明紫色马勃液体菌种的制作方法简单；可使生产成本降低20%以上；菌种污染可降低30%以上；菌丝体生物量（125.55mg/kg）比传统方法提高20mg/kg以上，菌种对林木的感染强度（62%）可比传统方法提高15%以上。本发明专利的方法可实现紫色马勃液体菌种的规模化、产业化生产，为贵州山区农民打开一条致富之路。

权利要求

1.一种紫色马勃液体菌种的制作方法，其特征在于：包括以下步骤

（1）培养基制作：按重量份数计算，将成熟紫色马勃子实体150-200份切成块状，去皮马铃薯150-200份切成块状，将块状紫色马勃子实体和块状马铃薯加入1000份水中，煮沸30～40min，用纱布滤去紫色马勃子实体和土豆残渣得滤液，在滤液中加入胰蛋白胨

5-8份，碳酰二胺0.45-0.50份，葡萄糖8-10份，牛肉浸膏0.55-0.65份，玉米粒8-10份，维生素B10.000031-0.000033份，磷酸氢二钾0.50-0.70份，硫酸镁0.50-0.60份，氯化钙

0.60-0.70份，加水定容至1000份，控制pH值为5.5-6.5；

（2）培养基灭菌：将培养基分装于三角瓶内，每瓶150-200ml，用棉塞盖上，在

110-130℃下用压力为0.1～0.15Mpa的高压蒸汽灭菌25-35min，然后置于24～28℃恒温培养箱培养24h，无菌生长的紫色马勃液体培养基留存备用；

（3）接种：将灭菌培养基及接种工具放入超净工作台中，采用紫外灯灭菌30-40min后，在超净工作台中用棉花蘸75%的酒精将紫色马勃子实体整体擦试一遍，然后点燃酒精灯，将接种刀置酒精灯外焰灼烧1s，在酒精灯外焰前上方5-6cm处用灼烧后的接种刀将紫色马勃子实体划成3-4辨，取菌盖与菌柄相接处紫色马勃子实体组织1-1.5份放入无菌生长的紫色马勃液体培养基中；

（4）菌种培养：将接种好的培养基置于25-28℃、120-140r／min的菌种培养摇床中培养6～8d，待培养基中长满白色菌丝即可进行下一步的接种栽培。

说明书

一种紫色马勃液体菌种的制作方法

技术领域

[0001] 本发明涉及食药用菌菌种制作技术领域，特别是涉及一种紫色马勃液体菌种的制作方法。

背景技术

[0002] 紫色马勃（Calvatia lilacina (Mont. et Berk.) Lloyd. ）子实体陀螺形，较小，直径通常5～12厘米，上部扁圆形产孢子，下部不育，成一个长圆柱状的柄，又称有柄马勃；孢子老熟后，上部全破失，只剩杯状不育基部。孢子球形，直径4～5.5微米，上有小刺；孢丝很长，分枝，有横隔，互相交织，色淡，粗2～5微米。与林木共生，能提高林木抗逆性，促进林木的生长发育。

[0003] 紫色马勃含磷酸钠、马勃素（gemmatein，C17H12O7）、麦角甾醇、亮氨酸（leucine）、酪氨酸（tyrosine）等氨基酸及尿素、类脂质等。具有机械性止血作用，对口腔出血有明显的止血作用，疗效不亚于淀粉海绵或明胶海绵，其水浸剂对奥杜盎氏小芽胞癣菌、铁锈色小芽胞癣菌等皮肤真菌均有不同程度的抑制作用。

[0004] 紫色马勃作为一种外生菌根真菌，既具有重要的经济作用，也具有重要的生态功能。紫色马勃子实体带有种类较多的真菌和数量庞大的细菌，由于受到菌种培养技术的制约，紫色马勃引种驯化工作一直没有得到突破性进展，其开发利用仅限于野生资源。导致紫色马勃资源开发利用基本上处于“自然生长，自由采集，自发贸易”的状态，每到采收季节，采菌的人们掠夺式地采集紫色马勃，严重损害了紫色马勃赖于生存、生长的自然环境，紫色马勃产量逐年减少，在某些区域甚至面临濒危灭绝的境地。

发明内容

[0005] 本发明所要解决的技术问题是克服现有紫色马勃菌种污染率高、生长周期长、工艺复杂的问题，提供一种新的紫色马勃液体菌种制作方法，使得制成的紫色马勃菌种工艺简便、菌种纯、污染少、操作简单、周期短（6～8d）。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

[0007] 1、一种紫色马勃液体菌种的制作方法，其特征在于：包括以下步骤

[0008] （1）培养基制作：按重量份数计算，将成熟紫色马勃子实体150-200份切成块状，去皮马铃薯150-200份切成块状，将块状紫色马勃子实体和块状马铃薯加入1000份水中，煮沸30～40min，用纱布滤去紫色马勃子实体和土豆残渣，向滤液中加入胰蛋白胨5-8份，碳酰二胺0.45-0.50份，葡萄糖8-10份，牛肉浸膏0.55-0.65份，玉米粒8-10份，维生素B10.000031-0.000033份，磷酸氢二钾0.50-0.70份，硫酸镁0.50-0.60份，氯化钙
0.60-0.70份，加水定容至1000份，控制pH值为5.5-6.5；

[0009] （2）培养基灭菌：将配制的培养基分装于三角瓶内，每瓶150-200ml，用棉塞盖上，在110-130℃下用压力为0.1～0.15Mpa的高压蒸汽灭菌25-35min，然后置于24～28℃恒温培养箱培养24h，无菌生长的紫色马勃液体培养基留存备用；

[0010] （3）接种：将灭菌培养基及接种工具放入超净工作台中，采用紫外灯灭菌30-40min后，在超净工作台中用棉花蘸75%的酒精将紫色马勃子实体整体擦试一遍，然后点燃酒精灯，将接种刀置酒精灯外焰灼烧1s，在酒精灯外焰前上方5-6cm处用灼烧后的接种刀将紫色马勃子实体划成3-4辨，取菌盖与菌柄相接处紫色马勃子实体组织1-1.5份放入无菌生长的紫色马勃液体培养基中；

[0011] （4）菌种培养：将接种好的培养基置于25-28℃、120-140r／min的菌种培养摇床中培养6～8d，待培养基中长满白色菌丝即可进行下一步的接种栽培。

[0012] 本发明紫色马勃液体菌种的制作方法，在紫色马勃液体菌种培养基中加入少许玉米粒，在摇床中培养过程中，菌丝附着生长在玉米粒周围，从而缩短培养时间。

[0013] 本发明与现有技术相比具有十分突出的特点，本发明紫色马勃液体菌种的制作方法简单；可使生产成本降低20%以上；菌种污染可降低30%以上；菌丝体生物量（125.55mg/kg）比传统方法提高20 mg/kg以上，菌种对林木的感染强度（62%）可比传统方法提高15%以上。本发明专利的方法可实现紫色马勃液体菌种的规模化、产业化生产，为贵州山区农民打开一条致富之路。

[0014] 具体实施方式，

[0015] 实施例1：

[0016] 1、一种紫色马勃液体菌种的制作方法，其特征在于：包括以下步骤

[0017] （1）培养基制作：按重量份数计算，将成熟紫色马勃子实体150份切成块状，去皮马铃薯150份切成块状，将块状紫色马勃子实体和块状马铃薯加入1000份水中，煮沸30min，用纱布滤去紫色马勃子实体和土豆残渣得滤液，在滤液中加入胰蛋白胨5份，碳酰二胺0.45份，葡萄糖8份，牛肉浸膏0.55份，玉米粒8份，维生素B10.000031份，磷酸氢二钾0.50份，硫酸镁0.50份，氯化钙0.60份，加水定容至1000份，控制pH值为5.5-6.5；

[0018] （2）培养基灭菌：将配制的培养基分装于三角瓶内，每瓶150ml，用棉塞盖上，在110℃下用压力为0.1～0.15Mpa的高压蒸汽灭菌25min，然后置于24℃恒温培养箱培养
24h，无菌生长的紫色马勃液体培养基留存备用；

[0019] （3）接种：将灭菌培养基及接种工具放入超净工作台中，采用紫外灯灭菌30min后，在超净工作台中用棉花蘸75%的酒精将紫色马勃子实体整体擦试一遍，然后点燃酒精灯，将接种刀置酒精灯外焰灼烧1s，在酒精灯外焰前上方5cm处用灼烧后的接种刀将紫色马勃子实体划成3辨，取菌盖与菌柄相接处紫色马勃子实体组织1份放入无菌生长的紫色马勃液体培养基中；

[0020] （4）菌种培养：将接种好的培养基置于25℃、120-140r／min的菌种培养摇床中培养6d，待培养基中长满白色菌丝即可进行下一步的接种栽培。

[0021] 实施例2：

[0022] 1、一种紫色马勃液体菌种的制作方法，其特征在于：包括以下步骤

[0023] （1）培养基制作：按重量份数计算，将成熟紫色马勃子实体200份切成块状，去皮马铃薯200份切成块状，将块状紫色马勃子实体和块状马铃薯加入1000份水中，煮沸40min，用纱布滤去紫色马勃子实体和土豆残渣得滤液，在滤液中加入胰蛋白胨8份，碳酰二胺0.50份，葡萄糖10份，牛肉浸膏0.65份，玉米粒10份，维生素B10.000033份，磷酸氢二钾0.70份，硫酸镁0.60份，氯化钙0.70份，加水定容至1000份，控制pH值为5.5-6.5；