一种烟草提取物中烟碱含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种烟草提取物中烟碱含量的测定方法，其特征在于采用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定萃取液中烟碱的浓度，保留时间定性，外标法定量。其步骤包括：①样品萃取：将烟草提取物样品以乙醇-水溶液超声萃取，水脂两用滤膜过滤，制得试样；②测定：采用UPLC-PDA进行分析。本发明方法可以有效萃取烟草提取物中的烟碱，并且实现烟碱含量的测定，方法快速、准确，灵敏度高，重现性好，具有推广应用价值。

权利要求

1.一种烟草提取物中烟碱含量的测定方法，其特征在于：包括以下操作步骤：①样品萃取：将烟草提取物样品以乙醇-水溶液超声萃取，水脂两用滤膜过滤，制得试样；

②测定：采用UPLC-PDA进行分析，仪器条件如下：高效液相色谱参考条件为，色谱柱：C18柱；流速：0.2～0.4 mL/min；柱温：25～35℃；

进样量：2～10 μL；流动相A为甲醇，流动相B为0.1 %的磷酸氢二钾溶液；

所述C18柱是：1.7 μm，2.1 mm×50 mm；

步骤①中的乙醇-水溶液质量比例为95%~50%，烟草提取物样品与溶液的固液比g/mL为1:50～100；

所述步骤①中超声萃取功率为60 KW，萃取时间为30 min；

其梯度洗脱条件为下表：

。

2.根据权利要求1所述的烟草提取物中烟碱含量的测定方法，其特征在于：所述步骤②中所用分析仪器为光电二极管阵列检测器，其参考检测波长为259 nm。

3.根据权利要求1所述的烟草提取物中烟碱含量的测定方法，其特征在于：所述步骤②中所用流动相B的pH为8.5~9.0。

说明书

一种烟草提取物中烟碱含量的测定方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种烟草提取物中烟碱含量的测定方法，具体涉及利用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定烟草提取物中烟碱的含量。

背景技术

[0002] 烟草提取物具有烟草本香，常用作烟草制品香原料，其香韵能够与烟香协调并使烟香浓郁，在卷烟调香中的应用非常广泛。烟草是一种复杂体系，从中鉴定出的化学成分多达数千种。烟草提取物由于其提取工艺不同，产品化学成分有所差异，而在烟草提取物中最重要也最引人关注的成分是烟碱(NICOTINE)。烟碱是烟草中最重要的生理活性物质，烟叶中烟碱含量高则劲头大，刺激性增强，产生辛辣味，含量低则劲头小，吸食淡而无味。因此烟草提取物中烟碱含量的高低，对其添加量有重要影响，是衡量烟草提取物品质、规格的重要参数，是控制烟草提取物的主要指标，对烟草提取物的应用有重要的指导意义。

[0003] 烟碱的结构式如下，由一个吡啶环和一个氢化吡咯环构成，其中含有—个不对称碳原子，属弱二级碱，最多可以捕获两个质子。因此烟碱一般以游离态、单质子态和双质子态3种形态存在，其存在形态主要由体系pH决定，

[0004]

[0005] 由于提取工艺的差别，不同溶剂对不同工艺的烟草提取物的适用性有明显差异，导致烟草提取物中烟碱的提取分离较为困难。目前烟气、烟叶中烟碱的分析方法主要是采用气相色谱法，尚未有关于烟草提取物中烟碱含量的测定方法。因此，有必要探索一种快速、准确的烟草提取物中烟碱含量的测定方法，对烟草提取物的质量控制、应用研究具有指导意义。

发明内容

[0006] 本发明目的在于针对现有技术中所存在的不足之处，提供一种烟草提取物中烟碱含量的测定方法，该方法利用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法来测定烟草提取物中的烟碱含量，能够完全萃取烟草提取物中的烟碱，并通过选择合适的流动相的pH抑制其他形态烟碱的生成，得到较好的色谱峰形，实现烟碱的检出。

[0007] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：烟草提取物中烟碱含量的测定方法包括以下操作步骤：

[0008] ①样品萃取：将烟草提取物样品以乙醇-水溶液超声萃取，水脂两用滤膜过滤，制得试样；

[0009] ②测定：采用UPLC-PDA进行分析，仪器条件如下：

[0010] 高效液相色谱参考条件为，色谱柱：C18柱或等效柱；流速：0.2～0.4 mL/min；柱温：25～35℃；进样量：2～10 μL；流动相A为甲醇，流动相B为0.1 %的磷酸氢二钾溶液；

[0011] 步骤①中的乙醇-水溶液质量比例为95%~50%，烟草提取物样品与溶液的固液比g/mL为1:50～100。

[0012] 所述步骤①中超声萃取功率为60 KW，萃取时间为30 min。

[0013] 所述步骤②中所用分析仪器为光电二极管阵列检测器，其参考检测波长为259 nm。

[0014] 所述步骤②中所用流动相B为pH为8.5~9.0的磷酸盐缓冲溶液。

[0015] 所述C18柱是：1.7 μm，2.1 mm×50 mm。

[0016] 本发明的突出优点在于：能够有效萃取烟草提取物中的烟碱，并且实现烟碱含量的测定，方法快速、准确，灵敏度高，重现性好。

附图说明

[0017] 本发明以下将结合实施例作进一步描述，但并不限制本发明。

[0018] 图1为本发明标准品色谱图。

[0019] 图2为本发明实际样品高效液相色谱图。

具体实施方式

[0020] 本发明烟草提取物中烟碱含量的测定方法包括以下操作步骤：

[0021] ①、样品萃取：将烟草提取物样品以乙醇-水溶液超声萃取，水脂两用滤膜过滤，制得试样；

[0022] ②、测定：采用UPLC-PDA进行分析，仪器条件如下：

[0023] 高效液相色谱参考条件为，色谱柱：C18柱或等效柱；流速：0.2～0.4 mL/min；柱温：25～35℃；进样量：2～10μL；流动相A为甲醇，流动相B为0.1 %的磷酸氢二钾溶液；

[0024] 步骤①中的乙醇-水溶液质量比例为95%~50%，烟草样品与溶液的固液比g/mL为1:50～100。

[0025] 所述步骤①中超声萃取功率为60 KW，萃取时间为30 min。

[0026] 所述步骤②中所用分析仪器为光电二极管阵列检测器，其参考检测波长为259 nm。

[0027] 步骤②中所用流动相B为pH为8.5~9.0的磷酸盐缓冲溶液。

[0028] C18柱是：1.7 μm，2.1 mm×50 mm。

[0029] 梯度洗脱条件见表1。

[0030] 表1 快速型高效液相色谱梯度洗脱条件，

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[0032] 实施例1

[0033] a. 称取烟草提取物样品0.2 g，置于具塞锥形瓶中，准确加入20~50 mL乙醇-水溶液（75%）超声萃取30 min，0.22 mm水脂两用滤膜过滤，制得试样；

[0034] b. 测定：采用UPLC-PDA进行分析，检测波长259 nm，操作条件如同以上技术方案。

[0035] 梯度洗脱条件为下表：

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