抗ST2/IL-1R4抗体在制备镇痛药物中的用途

摘要

本发明涉及镇痛药物领域，具体涉及抗ST2/IL-1 R4抗体在制备镇痛药物中的应用，经实验证实，本发明的抗ST2/IL-1 R4抗体对神经病理性疼痛小鼠模型的冷痛觉过敏以及癌痛小鼠的热痛觉过敏有显著的抑制作用。可作为药物有效成分，进一步制备镇痛药物，用于临床治疗慢性痛，尤其是治疗神经病理性疼痛或癌痛。

权利要求

1.抗ST2/IL-1 R4抗体在制备治疗慢性痛药物中的用途，所述的慢性痛是神经病理性疼痛或癌痛。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的抗ST2/IL-1 R4抗体为Mouse ST2/IL-1 R4 Antibody，AF1004。

说明书

抗ST2/IL-1 R4抗体在制备镇痛药物中的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及镇痛药物领域，具体涉及抗ST2/IL-1 R4抗体在制备镇痛药物中的应用，尤其是抗ST2/IL-1 R4抗体在在制备治疗神经病理性疼痛、癌痛药物中的用途。

背景技术

[0002] 研究公开了慢性疼痛不仅仅是一种症状，而是一种疾病。临床常见的三叉神经痛、坐骨神经痛、腰腿痛、骨关节痛、癌痛等均属于慢性疼痛的范畴。所述的疼痛是一种恶性疼痛刺激，引起心理和精神改变，导致抑郁、焦虑，影响患者生活质量，造成沉重的社会经济负担。据有关统计，大约30%的成年人患有慢性疼痛，全世界每年用于慢性痛治疗的费用达数千亿美元。

[0003] “消除疼痛是患者的基本权利”。现实中患者的这中基本权利并未得到很好实现。现有技术的镇痛药物和治疗手段对慢性疼痛的镇痛效果十分有限，并由于其较高的不良反应发生率，限制了其在临床上的进一步使用。即使目前对急性痛十分有效的阿片肽类药物如吗啡，患者长期使用也会产生耐药性。因此深入研究慢性痛发生、发展的机制，寻找新的药物治疗靶点，探索更有效的治疗方法，成为医学领域亟待解决的一个要点和难点。

[0004] ST2是Toll样/IL-1受体(IL-1R)超家族成员之一，编码一种可溶性ST2 (soluable ST2, sST2) 和一种跨膜形式ST2配体（ST2 Ligand,ST2L）。两者由前mRNA选择性剪切产生，具有共同的细胞外的结构域，但sST2缺少跨膜和细胞内的Toll/IL-1受体结构域。研究表明，跨膜型ST2L和辅助蛋白(AcP)共同组成IL-33 (2005年新发现的一种炎性细胞因子)的膜表面受体。研究表明，IL-33/ST2信号途径参与Th2细胞介导的免疫应答，调节肥大细胞的发育与功能，在炎症性、自身免疫性、心血管、肿瘤等疾病过程中发挥作用。

[0005] ST2在疼痛中的研究相关报道仅有一篇。2008年，Verri WA等研究发现，小鼠抗原皮下或踝关节腔内注射后，炎症局部ST2表达增加；sST2可以抑制抗原注射引起的机械性痛觉过敏，而这一作用是通过TNF-α-IL-1β-IFNγ-ET-1-PGE2通路实现。上述结果提示外周ST2参与关节炎痛。迄今，尚未见有ST2与神经病理性疼痛和癌痛的报道，也无抗ST2抗体直接镇痛的报道，以及未见抗ST2抗体通过镇痛作用机制进行临床疼痛治疗的报道。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供抗ST2/IL-1 R4抗体的新用途，具体涉及抗ST2/IL-1 R4抗体在制备治疗慢性神经痛，癌痛的药物中的应用。

[0007] 本发明的目的通过下述技术方案实现：

[0008] 1、抗ST2抗体购自R&D公司（Mouse ST2/IL-1 R4 Antibody，AF1004）。

[0009] 2、抗ST2抗体用于治疗神经痛实验：

[0010] 选用雄性BALB/c小鼠，按常规方法建立小鼠坐骨神经分支结扎切断神经痛模型（SNI模型），造模后第7天出现显著而稳定的神经痛，鞘内注射给予抗ST2抗体，观察药物对痛行为的影响，包括冷痛觉超敏和机械性痛觉超敏的影响，

[0011] 结果证实：抗ST2抗体对神经痛模型小鼠具有显著镇痛作用。

[0012] 3、抗ST2抗体用于治疗癌痛实验：

[0013] 选用雌性BALB/c小鼠，按常规方法建立小鼠股骨癌痛模型，造模后第11天出现显著而稳定的癌痛，鞘内注射给予抗ST2抗体，观察药物对痛行为（冷痛觉超敏和机械性痛觉超敏）的影响，

[0014] 结果证实：抗ST2抗体对癌痛模型小鼠具有显著镇痛作用，鞘内给予抗ST2抗体能显著缓解神经痛和癌痛小鼠的痛行为。本发明的抗ST2/IL-1 R4抗体可作为药物有效成分，进一步制备镇痛药物，用于临床治疗慢性痛，尤其是治疗神经病理性疼痛或癌痛。

[0015] 附图说明：

[0016] 图1 神经痛小鼠模型建立，**P<0.01,与Normal组比较。

[0017] 图2 不同剂量抗ST2抗体对神经痛小鼠冷痛觉过敏和机械性痛觉过敏的作用，**P<0.01,与模型+IgG组比较。

[0018] 图3 癌痛小鼠模型建立，**P<0.01,与Normal组比较。

[0019] 图4 不同剂量抗ST2抗体对癌痛小鼠冷痛觉过敏和机械性痛觉过敏的作用，**P<0.01,与模型+IgG组比较。

[0020] 具体实施方式：

[0021] 实施例1

[0022] 1、实验动物：

[0023] 本实验采用的SPF级BALB/C小鼠（雄性用于神经痛模型制作、雌性用于癌痛模型制作），8周龄，体重16-20g（中科院实验动物中心）。饲养条件为清洁级，5-6只/笼，任意供水。实验动物用完全随机法分组。

[0024] 2、制作模型

[0025] ①小鼠坐骨神经分支结扎切断神经痛模型（SNI模型）：小鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后，于小鼠后肢上缘切开皮肤，纵行分离肌肉，暴露坐骨神经主干及其下的分支——胫神经、腓总神经和腓肠神经，结扎并剪断胫神经和腓总神经，保留细小的腓肠神经，同时避免任何损伤。将肌肉、皮肤逐层缝合，然后腹腔注射抗生素作抗菌预防。假手术组动物除不进行神经结扎和切断外，其余操作均与手术组相同。

[0026] ②小鼠股骨癌痛模型：按Schwei 等报道的方法，建立小鼠股骨癌痛模型。动物麻醉后，膝关节处沿着股直肌肌腱方向切一长0.5-1.0 cm 的皮肤切口，小心暴露髌骨，先用一次性无菌 1 mL 注射器针头在髌骨沿股骨长轴方向穿刺打孔，然后换上 10 uL 微量4
进样器进入股骨骨髓腔，缓慢注入4 uL 含1×10 个4T1小鼠乳腺癌细胞的细胞悬浮液
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（2.5×10个/ml）（中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心）至股骨。注射完毕后用明胶海绵封住针孔，无菌棉签蘸生理盐水清洗创口，敷少量青霉素粉末，皮肤缝合。对照组注射等量PBS或者等量热灭活死细胞，其余操作均与手术组相同。

[0027] 3、痛行为评价

[0028] ① 机械性痛觉超敏（mechanical allodynia）：根据Dixon介绍的up-and-down法，采用von Frey 细丝（Stoelting, Wood Dale, Illinois, USA）刺激引起的缩脚反应作为机械性痛觉超敏指标。

[0029] ② 冷痛觉超敏（cold allodynia）：采用装有钝性针头的注射器每次注射50ul的丙酮（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）到小鼠脚掌外侧腓肠神经支配的皮肤处，观察记录注射丙酮后抬足/舔足的时间作为冷痛觉超敏的指标。

[0030] ③ 热痛觉过敏（thermal hyperalgesia）：安静环境中，室温22士1℃，将小鼠置于底为金属恒温平板的圆柱形空间内，金属恒温板通过电子反馈系统维持温度在50士0.5℃，记录其从足部放入装置开始到出现舔后爪或跳出金属恒温板计时结束这一段时间内的舔爪反应潜伏期作为热痛觉过敏潜伏期指标。

[0031] 4、给药方法

[0032] ① 鞘内给药:小鼠用异氟烷麻醉后，沿L5、L6棘突正中间垂直插入微量进样针，进入蛛网膜下腔有明确的突破感，并可见尾巴甩动。

[0033] ② 药物干预：在神经痛小鼠造模后第7天鞘内给予抗ST2抗体，观察给药后0.5,1.5，3，5，7，9，12 h小鼠痛行为的变化。在癌痛小鼠造模后第11天鞘内给予抗ST2抗体，观察给药后1，2，3，4，6，8，24 h小鼠痛行为的变化。

[0034] 实验数据以均数±标准误（mean ± SE）表示，应用SPSS16.0软件进行统计，采用单因素方差分析（one way ANOVA）。以P < 0.05认为差异有显著性。

[0035] 结果显示：

[0036] 1）神经痛小鼠模型建立：小鼠坐骨神经分支结扎切断后第1天即出现显著的冷痛觉超敏和机械性痛觉超敏，疼痛状态于第7天开始稳定，并可以持续到第14天观察结束，而假手术组痛行为没有显著变化（如图1所示）；

[0037] 2）抗ST2抗体对神经痛小鼠的镇痛作用：在造模后第7天鞘内注射给予抗ST2抗体30 ng，100 ng，300ng，结果显示，300ng给药后0.5小时，小鼠的冷痛阈即显著上升，该作用于5小时达高峰，9小时时仍有镇痛效果，第12小时作用消失；而10ng抗ST2抗体给药后3-7小时也呈现一定的镇痛作用；抗ST2抗体给药后呈现剂量依赖性镇痛作用（如图2所示）；

[0038] 3）癌痛小鼠模型建立：小鼠股骨注射4T1乳腺癌细胞后第2天出现显著的热痛觉超敏和机械性痛觉超敏，疼痛状态于第10天开始稳定，持续到第14天观察结束，而PBS和死细胞（Heat killed group）对照组痛行为没有显著变化（如图3所示），[0039] 4）抗ST2抗体对癌痛小鼠的镇痛作用：在造模后第11天鞘内注射给予抗ST2抗体100 ng，200 ng，400ng，结果显示，400ng抗ST2抗体给药后2小时，小鼠的热痛阈显著上升，该作用于3小时达高峰，9小时时仍有镇痛效果，第12小时作用消失，而10ng抗ST2抗体给药后3-7小时也呈现一定的镇痛作用；抗ST2抗体给药后呈现剂量依赖性镇痛作用（如图4所示）。

[0040] 实验结果表明，鞘内给予抗ST2抗体能显著缓解神经痛和癌痛小鼠的痛行为。本发明的抗ST2/IL-1 R4抗体可作为药物有效成分，进一步制备镇痛药物，用于临床治疗慢性痛，尤其是治疗神经病理性疼痛或癌痛。