用于调节血清磷的治疗剂

摘要

描述了用于调节血清磷水平的方法，其中将拟钙剂给予有需要的受试者。在一个实施方案中，该化合物为cinacalcet，而在其它实施方案中，该化合物包含邻接的亚单位序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7，其中X1亚单位包含含硫醇部分和在X2-X7亚单位上的电荷分布。相对于给药前水平，当以所选的次数给予经历透析的患者时，该化合物降低血清磷水平，并且在给予后实现持久降低的水平达一段时间。

权利要求

1.组合物在制备用于治疗接受血液透析的患者中慢性肾病-矿物质和骨病症(CKD-MBD)的药物中的用途，所述组合物包含Ac-c(C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:3)；

其中评价患者的血清磷水平并且发现其高于正常范围；

其中在完成血液透析前15分钟开始和在完成血液透析后3小时结束的时间段内给予所述组合物，并且其中在透析后至少6小时的时间段内，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。

2.权利要求1的用途，其中所述化合物包含SEQ ID NO:3的药学上可接受的盐。

3.权利要求2的用途，其中所述盐为盐酸盐。

4.权利要求1-3中任一项的用途，其中在完成血液透析前15分钟开始和在血液透析后

1小时结束的时间段内给予所述化合物。

5.权利要求1-3中任一项的用途，其中在透析结束时，在回灌程序期间给予所述化合物。

6.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述患者正在用磷酸盐结合剂治疗。

7.权利要求1-3中任一项的用途，其中在透析间时间段内，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平比血液透析前的血清磷水平低至少10%。

8.权利要求1-3中任一项的用途，其中患者正在治疗继发性甲状旁腺功能亢进或原发性甲状旁腺功能亢进。

说明书

用于调节血清磷的治疗剂

技术领域

[0001] 本公开涉及一种用于治疗患有高磷酸盐血症的血液透析患者的方法，所述方法包括给予钙敏感受体(CaSR)激动剂。

[0002] 对序列表的引用

[0003] 2012年6月8日创建并且命名为“632008021US00.txt”(87,702字节)的序列表以文本文件的形式经由EFS电子提交，其内容通过引用以其整体结合到本文中。

[0004] 背景

[0005] 磷酸盐(磷)对多种生物学和细胞过程是关键的。磷酸盐以及钙为骨骼系统的主要成分，为骨提供矿物质强度。磷酸盐还是核酸以及细胞能量分子ATP的磷酸键的组成成分。磷酸盐在骨、血清和尿中起缓冲剂的作用。因此，血液中磷酸盐的生理学水平受身体中的多个器官系统精细调节。

[0006] 总身体磷酸盐的大部分(85%)在骨中，作为矿化的细胞外基质的一部分。每天约300 mg的磷酸盐进入和离开骨组织。过度失去或不能向骨中增加磷酸盐导致骨软化症。肾以及通过甲状旁腺分泌的甲状旁腺激素(PTH)通过控制磷酸盐的分泌而在磷酸盐体内平衡中起到重要的作用，而消化道和激素维生素D通过控制其从膳食的吸收也起到另一个重要的作用。

[0007] 肾对从摄取的食物中吸收的或从骨释放的过量的磷提供主要分泌路线。因此，在慢性肾病(CKD)患者中，由于肾功能恶化，血清磷的血液水平升高直接刺激通过甲状旁腺的PTH分泌，其随后可通过从骨释放更多的磷进一步加深体内平衡。由于失灵，肾不再能充分处理过量磷的负担，因此CKD患者必须控制他们的膳食以降低磷酸盐摄取。血清磷水平的增加早期起始于3期和4期的CKD疾病进展，并且当肾功能下降时可能逐步恶化。5期CKD患者(也称为末期肾病或ESRD)通常经历定期的透析以除去过量的毒素和代谢物(包括磷)，并且仍然还需要使用磷酸盐-结合剂治疗，以试图结合膳食磷酸盐，从而防止系统性吸收，作为降低血清磷至可接受的水平的方法。在美国，约90%的透析患者用磷酸盐控制产品治疗。

[0008] 升高的血清磷与甲状旁腺功能亢进、骨病(例如骨营养不良)和软组织矿化的发生和进展关联，并且与血液透析患者的死亡风险增加有关(Block等人，1998，Am J. Kidney Dis，31:607-617；Block等人，2000，Am J. Kidney Dis，35:1226-1237；Palmer等人，2011，JAMA，305:1119-1127)。严重的高磷酸盐血症(血清磷酸盐水平 > 6.5 mg/dL (>2.10 mmol/L))与在血液透析(HD)患者中总体和心血管死亡率提高直接相关(Palmer等人，2011，JAMA，305:1119-1127)，并且甚至中等的高磷酸盐血症(3.0-5.0 mg/dL)也与在这些患者中心血管风险增加有关。目前，临床指导方针推荐保持磷酸盐水平在正常的范围内(3.0-5.0 mg/dL (0.97-1.61 mmol/L))。然而，由于在HD患者中，高磷酸盐血症为独立的死亡率风险因素，并且单独的磷酸盐结合剂疗法不总是足够地降低血清磷水平，因此甚至中等至严重的高磷酸盐血症(磷酸盐，5.01-6.5 mg/dL (1.62-2.10 mmol/L))也需要解决。

[0009] 高磷酸盐血症还通过：(a)降低离子化的钙的水平；(b)干扰1,25(OH)2D3的产生；和(c)通过直接影响PTH分泌，导致继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)和PTH的血液水平升高。这些过程导致高-周转骨病和过量PTH的其它不利结果。

[0010] 目前的临床指导方针推荐保持磷酸盐水平在正常的范围内(3.0-5.0 mg/dL (0.97-1.61 mmol/L))。通常公认的是，控制血清磷将导致改进的临床结果和血液透析患者的存活率。降低血清磷的方法包括透析、膳食磷限制和口服磷酸盐结合剂。

[0011] 血清磷酸盐在透析的前1-2小时内快速下降，随后达到平稳状态，其中血清磷酸盐保持相对恒定。在透析后，血清磷浓度在前几小时内快速升高，6-8小时后通常达到接近透析前值的浓度(Haas等人，1991，Nephrol Dial Transplant，2:108-113；Sugisaki等人，1983 Trans Am Soc Artif Intern Organs，29:38-43)。该现象称为“磷酸盐回弹”。在一些情况下，磷酸盐回弹产生比开始时存在的更高的磷酸盐水平。

[0012] 在渗析的患者中，磷的控制通常保持不令人满意。因此，持续需要用于治疗血液透析患者中高磷酸盐血症的方法。具体而言，需要用于降低磷酸盐回弹的方法。

[0013] 发明概述

[0014] 在一方面，提供了一种用于治疗血液透析患者中高磷酸盐血症的方法。

[0015] 在另一方面，提供了一种用于降低血液透析患者中磷酸盐回弹的方法。

[0016] 在另一方面，治疗方法包括给予接受透析(血液透析或腹膜透析)的患者包含式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7的化合物，其中X1为包含含硫醇基团的亚单位；X5为阳离子亚单位；X6为非阳离子亚单位；X7为阳离子亚单位；和X2、X3和X4中的至少两个独立地为阳离子亚单位。在血液透析后约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时内或在完成血液透析时间前约3小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟内给予化合物，并且其中在完成透析后至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、24小时、48小时、72小时的时间段或直至下一次血液透析时间的时间，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。

[0017] 在一个实施方案中，在完成血液透析前约15分钟开始和在完成血液透析后约3小时结束的时间段内给予化合物，并且其中在完成透析后至少约6小时的时间段，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。

[0018] 在一个实施方案中，激动剂为Ac-c(C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:3)。

[0019] 在另一实施方案中，激动剂为SEQ ID NO:3的药学上的盐。一种示例性实施方案为其为SEQ ID NO:3的盐酸盐的激动剂。

[0020] 在一个实施方案中，在透析后约1小时内或在透析后约30分钟内给予激动剂。在一个优选的实施方案中，在透析结束时，在回灌程序期间给予激动剂。在另一实施方案中，每天在完成透析时间前至少约1小时，在完成透析前5小时内给予激动剂。在一个实施方案中，透析为血液透析。

[0021] 在另一实施方案中，在透析结束时，在回灌程序期间给予激动剂。

[0022] 在其它的实施方案中，患者诊断患有末期肾病或慢性肾病，并且接受本文所述的治疗。

[0023] 在其它的实施方案中，在如本文所述的治疗前和/或同时，患者正在用结合磷酸盐的药物治疗。

[0024] 在又其它的实施方案中，患者患有糖尿病相关的慢性肾病。在仍其它的实施方案中，患者患有待通过透析治疗的高血压相关的慢性肾病，并且接受本文所述的治疗。在其它的实施方案中，患者正在经由透析治疗继发性甲状旁腺功能亢进或原发性甲状旁腺功能亢进，并且接受本文所述的治疗。

[0025] 在又一方面，提供了一种方法，所述方法包括给予经历血液透析的患者钙敏感受体激动剂，其中在结束血液透析后约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时内或在完成血液透析前约3小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟内给予激动剂，并且其中在至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、24小时、48小时、72小时的时间段或直至下一次血液透析开始的时间，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。在一个优选的实施方案中，在透析结束时，在回灌程序期间给予激动剂。

[0026] 在该方面的一个实施方案中，钙敏感受体激动剂不是式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7的化合物，其中X1为包含含硫醇基团的亚单位；X5为阳离子亚单位；X6为非阳离子亚单位；X7为阳离子亚单位；和X2、X3和X4中的至少两个独立地为阳离子亚单位。

[0027] 在一个实施方案中，钙敏感受体激动剂为拟钙剂。在其它实施方案中，拟钙剂为cinacalcet盐酸盐(C22H22F3N•HCl)。

[0028] 在仍另一方面，提供用于治疗接受至少基于周期性血液透析的患者中高磷酸盐血症的方法。所述方法包括给予患者有效量的钙敏感受体(CaSR)激动剂，其中在结束血液透析后约18小时内或在完成血液透析前小于约3小时内给予激动剂，并且其中在至少约6小时的时间段，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。

[0029] 在一个实施方案中，在完成透析前小于30分钟给予激动剂。

[0030] 在一个实施方案中，激动剂为cinacalcet盐酸盐。在另一实施方案中，激动剂为式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7的化合物，其中X1为包含含硫醇基团的亚单位；X5为阳离子亚单位；X6为非阳离子亚单位；X7为阳离子亚单位；和X2、X3和X4中的至少两个独立地为阳离子亚单位。

[0031] 在一个实施方案中，激动剂为Ac-c(C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:3)或其盐。

[0032] 在其它方面，提供了用于调节接受至少基于周期性血液透析的患者中血清磷浓度的方法。所述方法包括给予患者有效量的钙敏感受体(CaSR)激动剂，其中在结束血液透析后约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时内或在完成血液透析前小于约3小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟内给予激动剂。在一个实施方案中，在至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、24小时、48小时、72小时的时间段或直至开始下一次血液透析时间的时间，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。在一个优选的实施方案中，在透析结束时，在回灌程序期间给予激动剂。

[0033] 在口服给予cinacalcet盐酸盐后，在约2-6小时内达到Cmax。因此，在另一实施方案中，所述方法包括给予患者有效量的cinacalcet盐酸盐，其中在结束血液透析后约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时内或在完成血液透析前小于约9小时、8小时、7小时、6小时、5小时、4小时、3小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟内给予cinacalcet盐酸盐。在一个实施方案中，在至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、24小时、48小时、72小时的时间段或直至开始下一次血液透析时间的时间，所述给予有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。

[0034] 在另一方面，提供了给予化合物用于治疗经历血液透析的患者中甲状旁腺功能亢进的给药方案。给药方案包含给予患者钙敏感受体激动剂，其中在结束血液透析后约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时内或在完成血液透析前小于约3小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟内给予激动剂。在一个优选的实施方案中，在透析结束时，在回灌程序期间给予激动剂。在至少约6小时的时间段，该方案有效保持血液透析后的血清磷水平低于血液透析前的血清磷水平。

[0035] 在另一方面，提供了用于治疗接受透析的受试者中高磷酸盐血症的方法，其中所述受试者用本文所述的CaSR激动剂化合物治疗。在透析时间之间的时间段(即透析间时间段)的持续时间，所述治疗有效提供透析后的血清磷水平小于透析前的血清磷水平。在一个实施方案中，在透析间时间段的持续时间，透析后的血清磷水平比透析前的血清磷水平小至少约10%、15%、20%或25%。根据本文所述的任何治疗实施方案给予CaSR激动剂化合物，例如，在完成透析时间前或在透析时间后约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时或4小时内。

[0036] 在本文提到的任何方面的实施方案中，CaSR激动剂可为包含序列carrrar (SEQ ID NO:2)的化合物。在其它实施方案中，CaSR激动剂为包含肽carrrar (SEQ ID NO:2)的缀合物，其中所述肽在其N-端残基上与Cys残基缀合。在一个优选的实施方案中，缀合物为Ac-c(C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:3)。

[0037] 附图简述

[0038] 图1为显示通过在透析后立刻静脉内注射给予SEQ ID NO:3或安慰剂后，血清完整PTH水平变化百分比的图。安慰剂，实心圆；5 mg SEQ ID NO:3，空心圆；10 mg SEQ ID NO:3，倒空心三角形；20 mg SEQ ID NO:3，倒实心三角形；40 mg SEQ ID NO:3，实心正方形；60 mg SEQ ID NO:3，空心正方形。

[0039] 图2为显示通过在透析后注射给予SEQ ID NO:3或安慰剂后，在透析间的间隔(即，在血液透析后立刻和随后约72小时，直至受试者经历血液透析的下一次时间)期间血清磷水平变化百分比的图。安慰剂，实心圆；5 mg SEQ ID NO:3，空心圆；10 mg SEQ ID NO:3，倒空心三角形；20 mg SEQ ID NO:3，倒实心三角形；40 mg SEQ ID NO:3，实心正方形；60 mg SEQ ID NO:3，空心正方形。

[0040] 图3为显示对于接受SEQ ID NO: 3 的5 mg、10 mg和20 mg剂量组，血清磷(mg/dL) (在群组内，活性物质相对安慰剂)平均差异的图(从阶段 1单位出院时的测量)。

[0041] 参考本文所包括的优选实施方案和实施例的以下详细说明，可更容易地理解本发明的主题。

[0042] 发明详述

[0043] I. 定义

[0044] 在本申请内，除非另外说明，否则术语的定义和本申请的技术的说明可在任何若干众所周知的参考文献中找到，例如：Sambrook，J.等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)；Goeddel，D. 编辑，Gene Expression Technology，Methods in Enzymology，185，Academic Press，San Diego，CA (1991)；“Guide to Protein Purification(蛋白质纯化指南)”，Deutshcer，M.P.编辑，Methods in Enzymology，Academic Press，San Diego，CA (1989)；Innis等人，PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications(PCR方案：方法和应用指南)，Academic Press，San Diego，CA (1990)；Freshney，R.I.，Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique(动物细胞的培养：基本技术手册)，第2版，Alan Liss，Inc. New York，NY (1987)；Murray，E.J.编辑，Gene Transfer and Expression Protocols(基因转移和表达方案)，第109-128页，The Humana Press Inc.，Clifton，NJ and Lewin，B.，Genes VI，Oxford University Press，New York (1997)。

[0045] 除非另外说明，否则本文使用的单数形式“a”、“an”和“the”包括复数对象。例如，调节剂肽包括一个或多个调节剂肽。

[0046] 本文使用的“氨基酸”是指天然和非天然氨基酸。二十种天然存在的氨基酸(L-异构体)通过具有前缀“L-”(甘氨酸例外，其为非手性的)的三字母编码或通过大写字母的单字母编码来命名：丙氨酸(“L-Ala”或“A”)、精氨酸(“L-Arg”或“R”)、天冬酰胺(“L-Asn”或“N”)、天冬氨酸(“L-Asp”或“D”)、半胱氨酸(“L-Cys”或“C”)、谷氨酰胺(“L-Gln”或“Q”)、谷氨酸(“L-Glu”或“E”)、甘氨酸(“Gly”或“G”)、组氨酸(“L-His”或“H”)、异亮氨酸(“L-Ile”或“I”)、亮氨酸(“L-Leu”或“L”)、赖氨酸(“L-Lys”或“K”)、蛋氨酸(“L-Met”或“M”)、苯丙氨酸(“L-Phe”或“F”)、脯氨酸(“L-Pro”或“P”)、丝氨酸(“L-Ser”或“S”)、苏氨酸(“L-Thr”或“T”)、色氨酸(“L-Trp”或“W”)、酪氨酸(“L-Tyr”或“Y”)和缬氨酸(“L-Val”或“V”)。L-正亮氨酸和L-正缬氨酸可分别表示为(NLeu)和(NVal)。具有手性的十九种天然存在的氨基酸具有相应的D-异构体，其通过具有前缀“D-”的三字母编码或通过小写字母的单字母编码来命名：丙氨酸(“D-Ala”或“a”)、精氨酸(“D-Arg”或“r”)、天冬酰胺(“D-Asn”或“a”)、天冬氨酸(“D-Asp”或“d”)、半胱氨酸(“D-Cys”或“c”)、谷氨酰胺(“D-Gln”或“q”)、谷氨酸(“D-Glu”或“e”)、组氨酸(“D-His”或“h”)、异亮氨酸(“D-Ile”或“i”)、亮氨酸(“D-Leu”或“l”)、赖氨酸(“D-Lys”或“k”)、蛋氨酸(“D-Met”或“m”)、苯丙氨酸(“D-Phe”或“f”)、脯氨酸(“D-Pro”或“p”)、丝氨酸(“D-Ser”或“s”)、苏氨酸(“D-Thr”或“t”)、色氨酸(“D-Trp”或“w”)、酪氨酸(“D-Tyr”或“y”)和缬氨酸(“D-Val”或“v”)。D-正亮氨酸和D-正缬氨酸可分别表示为(dNLeu)和(dNVal)。虽然“氨基酸残基”通常用于指肽、多肽或蛋白质的单体亚单位，而“氨基酸”通常用于指游离分子，但是在本领域中这些术语的使用重叠和多样化。术语“氨基酸”和“氨基酸残基”可互换使用，并且可指游离分子或肽、多肽或蛋白质的单体亚单位，这取决于上下文。

[0047] “阳离子氨基酸”是指在生理性pH (7.4)下具有净正电荷的氨基酸残基，通常是这样，例如，在其中侧链或“R基团”含有胺官能团或可接受质子以在生理性pH下变为带正电荷的其它官能团(例如胍或咪唑部分)的氨基酸残基中。阳离子氨基酸残基包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸、2,3-二氨基丙酸(Dap)、2,4-二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸和高精氨酸。

[0048] “阳离子亚单位”是指在生理性pH (7.4)下具有净正电荷的亚单位。

[0049] 本文使用的“保守氨基酸取代”为不导致所选的多肽或蛋白质的活性或三级结构显著变化的取代。这样的取代通常包括用具有类似的物理化学性质的不同的氨基酸残基置换所选的氨基酸残基。通过物理化学性质使氨基酸和氨基酸残基分组为本领域技术人员已知的。例如，在天然存在的氨基酸中，本领域已定义具有类似侧链的氨基酸残基的族，并且包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、β-支化的侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

[0050] 本文使用的“化学交联”是指两种或更多种分子的共价键合。

[0051] 如果肽或肽片段具有与亲本肽或多肽邻接的至少五个氨基酸残基(更优选八个氨基酸残基)的序列相同或同源的氨基酸序列，则所述肽或肽片段“衍生自”所述亲本肽或多肽。

[0052] 本文所述的化合物可为药学上可接受的盐形式。药学上可接受的盐包括酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、丙酮酸盐、草酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐等；和碱加成盐，例如钠、钾、钙、镁、锂、铝、锌、铵、乙二胺、精氨酸、哌嗪等。

[0053] 除非另外说明，否则本文使用的术语“甲状旁腺功能亢进”是指原发性、继发性和三发性甲状旁腺功能亢进。

[0054] 当通过重组体DNA技术产生或化学合成时通过化学前体或其它化学物质产生时，本文使用的“分离的”或“纯化的”多肽或其生物学活性部分不含一些细胞材料。语言“基本上不含细胞材料”包括其中多肽与细胞的一些细胞组分分离的多肽制备物，所述多肽在所述细胞中天然或重组产生。当多肽或其生物学活性部分重组产生时，其还优选基本上不含培养基，即，培养基小于多肽制备物体积的约20%，更优选小于约10%，最优选小于约5%。语言“基本上不含化学前体或其它化学物质”包括其中多肽与化学前体或其它化学物质分离的多肽制备物，所述化学前体或其它化学物质涉及所述多肽的合成。在一个实施方案中，语言“基本上不含化学前体或其它化学物质”包括具有小于化学前体或其它化学物质的约
30% (按干重计)的多肽制备物，优选小于化学前体或其它化学物质的约20%，更优选小于化学前体或其它化学物质的约15%，还更优选小于化学前体或其它化学物质的约10%，最优选小于化学前体或其它化学物质的约5%。在优选的实施方案中，分离的多肽或其生物学活性部分缺乏来自结构域多肽所源自的同一有机体的污染多肽。

[0055] “非阳离子氨基酸”是指在生理性pH (7.4)下不具有电荷或具有净负电荷的氨基酸残基，通常是这样，例如，在其中侧链或“R基团”为中性(中性极性和中性非极性)和酸性的氨基酸残基中。非阳离子氨基酸包括具有R基团的那些残基，所述R基团为烃烷基或芳族部分(例如，缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸)；中性极性R基团(天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸)；或中性非极性R基团(甘氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)。具有酸性R基团的非阳离子氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。

[0056] “聚合物”是指通过共价键连接的两种或更多种相同或不相同亚单位的线性链。

[0057] 本文使用的“肽”和“多肽”是指由通过肽键连接的氨基酸残基的链组成的任何聚合物，与其尺寸无关。虽然“蛋白质”通常用于指相对大的多肽，并且“肽”通常用于指小的多肽，在本领域中这些术语的使用重叠和多样化。因此，为了简化，本文使用术语“肽”，但是在一些情况下，本领域可将相同的聚合物称为“多肽”。除非另外说明，否则肽的序列按照从氨基端到羧基端的顺序给出。

[0058] 本文使用的“含硫醇基团”或“含硫醇部分”是指包含硫-氢键(-SH)的官能团，并且其在生理性条件下能与另一个硫醇反应以形成二硫键。能与另一个硫醇形成二硫键的硫醇在本文中称为“反应性硫醇”。在一个优选的实施方案中，含硫醇基团远离化合物的骨架小于6个原子。在一个更优选的实施方案中，含硫醇基团具有结构(-SH-CH2-CH2-C(O)-O-)-。

[0059] 本文使用的“受试者”是指人受试者或动物受试者。同样，“患者”是指人患者或动物患者。

[0060] “亚单位”是指与超过一个其它的单体单位结合以形成聚合化合物的单体单位，其中亚单位为在聚合化合物中元素的最短重复模式。示例性亚单位为氨基酸，当其连接时形成聚合物化合物，例如在本领域中称为肽、多肽或蛋白质的那些。

[0061] 本文使用的“治疗有效量”为产生期望的治疗效果所需的量。

[0062] 除非另外指定，否则本文涉及的所有参考文献通过引用以其整体予以结合。

[0063] II. 治疗方法

[0064] 在一方面，提供了用于治疗有需要的受试者中高磷酸盐血症的方法。在其它方面，提供调整、调节和/或降低透析患者中血清磷水平的方法。在其它方面，提供改进接受至少周期性透析的患者的治疗的方法。在另一方面，提供了一种用于降低和/或减弱经历透析的受试者中磷酸盐回弹的方法。现在描述这些方面和所述方面的实施方案。

[0065] 如在实施例1中所述，进行研究以支持本文所述的治疗方法，其中接受血液透析的患有末期肾病(ESRD)的受试者用拟钙剂治疗。研究中的患者诊断患有继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)，并且需要定期的血液透析时间。选择用于研究的示例性试剂为具有下文所述的化学式的钙敏感受体激动剂化合物，并且具有鉴定为SEQ ID NO:3的序列。在患者随机分成治疗组后，在血液透析后立即以5、10、20、40或60 mg的剂量向患者通过静脉内注射给予化合物。在使用化合物治疗后三天，评价完整PTH和磷的血液浓度。结果示于图1-2。

[0066] 如图1所见，在透析后注射SEQ ID NO:3后，在血液中完整PTH的水平存在快速的60-80%下降，接着在接下来的48小时期间，剂量朝向基线依赖性返回。血清钙存在伴随的小的(10-16%)降低。如图2所见，通过透析降低的血清磷水平在前8小时快速上升至平稳状态，随后在剩余的透析间间隔期间较缓慢地提高。在安慰剂受试者(实心圆)中，在给药后的开始约36小时期间，平均血清磷快速提高，之后在出院时，在基线水平上方84%处，磷水平趋向平稳状态。令人惊讶地，通过给予SEQ ID NO:3，显著改变磷返回至平稳状态水平的速率。大于约5 mg (空心圆)的激动剂化合物的剂量提供显著减弱或降低在透析后血清磷的上升。在出院时，在接受20-60 mg鉴定为SEQ ID NO:3的激动剂的受试者中，血清磷从基线的平均百分比增加在23%-60%范围，并且比安慰剂低至少约24个百分点。

[0067] 该数据显示，在完成血液透析时间后，血清磷浓度在前几小时内快速升高。也就是，在血液透析后血清磷回弹，并且在完成透析后的开始约10小时内返回至透析前值，并且在完成透析后约18小时，达到透析后基线水平上方约80%的平稳状态。表1阐明在血液透析后不久(2小时内)但在通过静脉内注射给予SEQ ID NO:3或安慰剂前(“给药前”)，ESRD受试者的PTH和磷的平均基线治疗前值。在完成透析后的前3-10小时期间，接受安慰剂的ESRD受试者的血清磷水平非常快速地提高(回弹)。不希望受理论束缚，认为在透析后血清磷80-100%回弹可由于来自细胞内空间和/或来自骨的磷酸盐的活动造成，或者响应经透析的磷酸盐去除和可能由其所诱导，可能通过从消化道吸收的磷酸盐的刺激造成。

[0068] 表1

[0069]

[0070] 发现，如果在与透析治疗关联的某一时间段内给予患者CaSR激动剂，可降低磷回弹。如图2所示，以大于5 mg的剂量静脉内给予CaSR激动剂(SEQ ID NO:3)显著减弱血清磷水平的透析后回弹。恰好在完成透析前或在透析后不久给予10、20、40或60 mg剂量的CaSR激动剂(例如，SEQ ID NO:3)显示在前3-4小时仅稍微提高磷，并且在透析后4-18小时内显著减弱或钝化血清磷水平的提高，使得在随后的18-72小时透析后时间段中，存在很少至适度的血清磷提高，如通过透析后基线水平的百分比提高所测量。令人惊讶地，这些数据显示，在透析后的前18小时内使用CaSR激动剂或拟钙剂治疗ESRD患者显著减弱或降低血清磷浓度的透析后回弹。这些数据揭示，许多血清磷回弹在透析后的前8-10小时内发生，并且出人意料地显示，存在时限(window)，在此期间在透析后的前8-10小时内给予ESRD患者CaSR激动剂可提供显著减弱或钝化血清磷的回弹。

[0071] 因此，在第一方面，在完成透析时间后约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时内或在完成透析时间前约3小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟内，用CaSR激动剂化合物治疗接受透析的患者。在一个优选的实施方案中，在透析结束时，在回灌程序期间给予CaSR激动剂化合物。如技术人员所理解，透析是指血液透析或腹膜透析。血液透析时间通常为3-5小时长，并且本文中提及“透析时间”或“血液透析时间”是关于持续时间TD的透析程序，其中TD可为1小时或更多、2小时或更多、2.5小时或更多、3小时或更多、3.5小时或更多、4小时或更多、4.5小时或更多、5小时或更多，或者在备选的实施方案中为1-10小时、或2-8小时、或2-6小时、或3-5小时。TD可分成第一部分和第二部分，其中第一部分相应于总持续时间TD的前一半，而第二部分相应于总持续时间TD的后一半。在一个实施方案中，在持续时间TD的透析时间的第二部分给予透析患者激动剂化合物。在另一实施方案中，将TD分成三个或四个同分部分(三分之一和四分之一)，并且在持续时间TD的后三分之一透析时间或在持续时间TD的最后四分之一透析时间给予透析患者激动剂化合物。例如，在一个实施方案中，在3小时TD的透析时间中，当将TD分成三分之一时，在透析时间的最后1小时内给予激动剂，或者当将TD分成四分之一时，在透析时间的最后的45分钟内给予激动剂。在优选的实施方案中，在完成持续时间TD的透析时间前30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟或
1分钟给予激动剂。

[0072] 在其它实施方案中，当完成持续时间TD的透析时间后立即给予血液透析患者激动剂，或者在完成持续时间TD的透析时间后至少18小时内、15小时内、10小时内、8小时内、5小时内、3小时内、2小时内、1小时内、30分钟内、20分钟内、10分钟内或5分钟内给予血液透析患者激动剂。在一个实施方案中，在完成血液透析后小于2小时、小于3小时、小于
4小时、小于5小时、小于6小时、小于7小时、小于8小时、小于9小时、小于10小时、小于
18小时或小于20小时给予受试者CaSR激动剂。在另一实施方案中，在透析后30-60分钟、
1-2小时、2-3小时、3-5小时、5-8小时、8-10小时、10-15小时、15-18小时给予受试者化合物。

[0073] 在一个优选的实施方案中，在透析结束时或在透析后实用的情况下尽可能快快地给予CaSR激动剂。在一些实施方案中，在透析期间或者在透析结束前小于3小时、小于2小时、小于1小时或小于30分钟给予CaSR激动剂。

[0074] 如图3所示，以10 mg和20 mg或以上的剂量静脉内给予CaSR激动剂(SEQ ID NO:3)可显著减弱透析后血清磷水平提高或回弹，并且这可解释为在单一剂量后血清磷酸盐平均降低0.5 mg/dL-1 mg/dL或更多。预期慢性给药CaSR激动剂可进一步增强这些效果，其中与每一次透析时间(使用血液透析，通常一周发生三次)一起给予治疗并且始终在透析期间或在透析后立刻给予治疗，以减弱或钝化透析后的血清磷回弹。

[0075] 在一个实施方案中，在透析后的前1小时，患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，在透析后的前2小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在一个实施方案中，在透析后的前3小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，在透析后的前4小时患者的血清磷提高小于10%、小于
20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，在透析后的前5小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，在透析后的前6小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，在透析后的前7小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。

[0076] 在一个实施方案中，患者已经历或正经历血液透析，并且在给予CaSR激动剂后的前3小时或6小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，患者已经历或正经历血液透析，并且在给予CaSR激动剂后的前4小时或6小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于
60%。在另一实施方案中，患者已经历或正经历血液透析，并且在给予CaSR激动剂后的前5小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，患者已经历或正经历血液透析，并且在给予CaSR激动剂后的前6小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。在另一实施方案中，患者已经历或正经历血液透析，并且在给予CaSR激动剂后的前7小时患者的血清磷提高小于10%、小于20%、小于30%、小于40%、小于50%或小于60%。

[0077] 在一个实施方案中，给予患者的CaSR激动剂的剂量为约10 mg-约20 mg、约10 mg-约30 mg、约20 mg-约30 mg、约20 mg-约40 mg、约30 mg-约50 mg、约40 mg-约60 mg或约50 mg-约80 mg。在另一实施方案中，给予患者的CaSR激动剂的剂量为约10 mg、约20 mg、约30 mg、约40 mg、约50 mg、约60 mg、约70 mg或约80 mg。

[0078] 在一个实施方案中，给予患者的CaSR激动剂的剂量为10-20 mg、10-30 mg、20-30 mg、20-40 mg、30-50 mg或40-60 mg。在另一实施方案中，给予血液透析患者的CaSR激动剂的剂量小于10 mg、小于20 mg、小于30 mg、小于40 mg、小于50 mg、小于60 mg、小于70 mg或小于80 mg。

[0079] 在一个实施方案中，患者用磷酸盐结合剂治疗。然而，在另一实施方案中，患者不使用磷酸盐结合剂治疗。

[0080] 在一个实施方案中，单独的常规血液透析治疗不足以控制患者的血清磷水平。

[0081] 在一个实施方案中，常规的血液透析治疗与给予磷酸盐结合剂组合不足以控制患者的血清磷水平。

[0082] 在一个实施方案中，常规的血液透析治疗与膳食限制组合不足以控制患者的血清磷水平。

[0083] 在一个实施方案中，常规的血液透析治疗与磷酸盐结合剂和膳食限制组合不足以控制患者的血清磷水平。

[0084] 在一个实施方案中，患者还正在服用维生素D或维生素D类似物。

[0085] 高磷酸盐血症的其它起因包括在早产新生儿中由富磷的牛奶引起的外源性磷载3
荷或吸收提高、静脉内磷补充、白磷烧伤、含PO4的灌肠剂或急性磷中毒。由于肿瘤溶解综合征、横纹肌溶解症、肠梗塞、恶性高热症、热中风、酸-碱失调、有机酸中毒、乳酸中毒、酮酸中毒、呼吸性酸中毒或慢性呼吸性碱中毒，高磷酸盐血症可由提高的内源性载荷引起。高磷酸盐血症可通过减少的尿排泄引起，其由肾衰竭、甲状旁腺功能减退、假性甲状旁腺功能
2+
减退、维生素D中毒、生长激素、胰岛素-样生长因素-1、糖皮质激素退缩、Mg 缺乏、肿瘤钙质沉着、二磷酸盐疗法或低磷酸酯酶症引起。应理解的是，本文公开的给予方法可用于治疗诊断患有由上述起因中的任何一种或多种引起的高磷酸盐血症的受试者。

[0086] 本文公开的治疗方法可用于治疗多个患者群体。例如，提供了一种用于治疗具有伴随的高磷酸盐血症的血液透析患者的方法，用于治疗单独的常规血液透析治疗不足以控制血清磷酸盐水平的患者。在一个备选的方面，提供了一种用于治疗吃磷限制膳食的血液透析患者的方法。还提供了一种用于治疗正给予磷酸盐结合剂和/或正服用维生素D并且正经历伴随的血清磷提高的血液透析患者的方法。

[0087] 在本文所述的方面或实施方案的任一个中，预期将CaSR激动剂中的任一种或多种单独从本文公开的待给予的化合物范围中排除或除去。在某些实施方案中，将通过SEQ ID NOs: 162-182中任一个或多个鉴定的肽单独地或以任何组合从要求保护的方法中排除。

[0088] 例如，在一方面，提供了一种用于治疗患有例如SHPT或CKD或ESRD的透析患者的方法，其中在结束透析(优选血液透析)后约18小时内或在结束透析(优选血液透析)后约6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、30分钟、20分钟、10分钟或9、8、7、6、5、4、3、2或1分钟内给予CaSR激动剂。在至少6小时的时间段，更优选24小时的时间段，还更优选36、48、60或72小时的时间段内，以这种方式给予CaSR有效保持透析后的血清磷水平低于透析前的血清磷水平。在一个实施方案中，在透析时间之间的持续时间(也称为透析间时间段)内，患者的透析后的血清磷水平保持低于透析前的血清磷水平。在该方法的一个实施方案中，CaSR激动剂不是式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7的化合物，其中所述X亚单位如本文所定义。

[0089] 在另一方面，提供了一种用于治疗接受透析的受试者中高磷酸盐血症的方法，其中受试者用本文所述的CaSR激动剂化合物治疗。治疗有效提供在透析间时间段的持续时间内，透析后的血清磷水平小于透析前的血清磷水平。在一个实施方案中，在透析间时间段的持续时间内，透析后的血清磷水平比透析前的血清磷水平小至少约10%或25%。根据本文所述的治疗实施方案中任一个给予CaSR激动剂化合物，例如，在完成透析时间前或在透析时间后约2、4、6、10或18小时内。

[0090] III. 钙敏感受体激动剂化合物和组合物

[0091] 本文所述的方法包括给予受试者CaSR激动剂。所述激动剂描述于美国专利号6,011,068和6,031,003和美国专利公布号2011/0028394和2009/0023652(其通过引用以其整体结合到本文中)。

[0092] 意外地发现，给予罹患CKD和需要透析的受试者这些化合物导致抑制或降低在透析后血清磷的蓄积。

[0093] 在一个实施方案中，所述方法包括给予患者CaSR激动剂。在一个实施方案中，CaSR激动剂为拟钙剂。在另一实施方案中，CaSR激动剂为变构激动剂。在另一实施方案中，CaSR激动剂为cinacalcet盐酸盐。在另一实施方案中，CaSR激动剂为包含下式的化合物：

[0094] X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7

[0095] 其中X1为包含含硫醇基团的亚单位；X5为阳离子亚单位；X6为非阳离子亚单位；X7为阳离子亚单位；和X2、X3和X4中的至少两个独立地为阳离子亚单位。

[0096] 在一个实施方案中，CaSR激动剂为包含序列carrrar (SEQ ID NO:2)的化合物。在另一实施方案中，CaSR激动剂为包含肽carrrar (SEQ ID NO:2)的缀合物，其中肽在其N-端残基上与Cys残基缀合。在一个优选的实施方案中，缀合物为Ac-c(C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:3)。虽然可按照某些优选的实施方案(例如SEQ ID NO:3)描述本发明，本领域技术人员应理解的是，本公开亦适用于其它CaSR激动剂，包括在美国专利号6,011,068和6,031,003和美国专利公布号2011/0028394和2009/0023652 (其通过引用以其整体结合到本文中)中描述的化合物和缀合物。同样，虽然可依照某些优选的实施方案(例如血液透析)描述本发明，本领域技术人员应理解的是，本公开亦适用于其它形式的透析(例如腹膜透析)和其它方法(例如每日血液透析)。

[0097] 在一个实施方案中，CaSR激动剂作为CaSR激动剂化合物和药学上可接受的赋形剂的组合物给予。在一些实施方案中，赋形剂为缓冲剂或盐水，使得当给予患者时组合物为溶液形式。在一个实施方案中，激动剂化合物作为冻干的产品提供，将复溶成溶液或混悬液，用于根据本文所述的方法给予。在一个实施方案中，冻干的产品为激动剂产品的盐形式，例如cinacalet盐酸盐或式SEQ ID NO:3的肽的盐酸盐形式。

[0098] 肽化合物和结构-活性关系

[0099] 合成若干化合物用于测试它们对降低血清磷和对高磷酸盐血症的影响。这些化合物列举于下表2。在表1及整个说明书中，以大写字母提供的残基为L-氨基酸，而小写字母表示D-氨基酸。“Ac”表示乙酰基帽化基团，“NH2”表示酰胺帽化基团，“Ac-bAla”为乙酰化的β-丙氨酸，“GSH”表示还原型谷胱甘肽，“GS”表示氧化型谷胱甘肽，“PEG”表示聚乙二醇，“PEG2”和“PEG5”分别指2kDa和5kDa的聚乙二醇部分，和“Mpa”指巯基丙酸。括号括起来的基团表示该基团或部分与前面的亚单位或氨基酸残基的侧链连接。

[0100] 表2

[0101]

[0102] *在括号中显示的粗体字体表示相应的含硫醇缀合基团。GS= 氧化型谷胱甘肽；dHcy=D-高半胱氨酸；Mpa= 巯基丙酸；PEG= 聚乙二醇。

[0103] 这些化合物包括(i) Ac-crrrr-NH2 (SEQ ID NO:4)、(ii) Ac-crrrrr-NH2 (SEQ ID NO:5)、(iii) Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)和(iv) Ac-crrrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:7)。在前面的研究中，鉴定为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的化合物各自通过30-分钟IV灌注给予1K1C模型动物并且导致作为给药前(基线)水平的百分比的血浆PTH水平降低。以3 mg/kg给药的所有四种化合物产生显著降低血浆PTH，但是效力和PTH降低的持续时间上的差异表明净正电荷和PTH-降低的活性之间的关系。
例如，与分别含有四个和五个阳离子(精氨酸)亚单位的化合物Ac-crrrr-NH2 (SEQ ID NO:4)和Ac-crrrrr-NH2 (SEQ ID NO:5)相比，具有六个阳离子(精氨酸)亚单位的化合物Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)具有提高的效力以及作用持续时间。令人惊讶地，与具有七个阳离子(精氨酸)残基的化合物Ac-crrrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:7)相比，具有六个阳离子(精氨酸)亚单位的化合物Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)具有提高的作用持续时间，表明化合物的活性或效力不仅与化合物提高的阳离子电荷有关。也就是，具有七个阳离子亚单位(精氨酸残基)的化合物Ac-crrrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:7)产生与具有较少阳离子残基的化合物类似的PTH初始降低，但是在给药后24小时期间不如Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)和Ac-crrrrr-NH2 (SEQ ID NO:5)有效。在24小时时间点，这后两种化合物分别产生约40%和60%的平均PTH降低。应注意到，在该研究中的化合物以相同的mg/kg剂量给予，但是由于分子量的差别，实际上给予了不同摩尔数的每一种化合物。因此，基于每摩尔，Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)比Ac-crrrr-NH2 (SEQ ID NO:4)和Ac-crrrrr-NH2 (SEQ ID NO:5)显著更有效。

[0104] 进行进一步研究以探讨化合物的结构-活性关系。通过在每一个亚单位位置X2-X7上用丙氨酸残基序贯置换精氨酸残基，修饰化合物Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)。在体外人钙-敏感受体(CaSR)测定中表征化合物，其中表达人钙-敏感受体的HEK 293细胞用于测量示例性化合物的活性。

[0105] 化 合 物 Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)、Ac-carrrrr-NH2 (SEQ ID NO:8) 和Ac-crrarrr-NH2 (SEQ ID NO:10)相当有效，如通过在正常大鼠中在单一IV给予后体内测量的降低百分比PTH至低于检测限度或基本为零所证明。在Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)的2、3、4或7位上取代阳离子(精氨酸)残基导致体外效力上约两倍损失。在5位上取代以产生化合物Ac-crrrarr-NH2 (SEQ ID NO:11)产生体外效力上5-10倍降低，但是45%的体内百分比PTH AUC降低对于临床疗法可足够具有活性。令人惊讶地，在6位阳离子精氨酸残基被不带电荷的(丙氨酸)残基取代实际上改进效力。数据表明，在不同的位置上阳离子和不带电荷的残基不全等同，并且由于化合物结构变化而导致存在活性变化。

[0106] 为了进一步评价活性变化随化合物结构变化的结果，产生含有双氨基酸取代的Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)的另一系列类似物，其中两个阳离子(精氨酸)残基被不带电荷的(丙氨酸)残基置换，并且测试效力。意外地，这表明电荷的位置以及总阳离子电荷可影响化合物对降低PTH的效力。数据表明对于PTH-降低活性，SEQ ID NO:6的阳离子残基基本上在5位和7位，但是不需要在6位。

[0107] 在表达人钙-敏感受体的HEK 293细胞中，使用体外细胞测定法进行进一步结构-活性关系研究。通过测量反映IP3产生的肌醇单磷酸盐(IP1)的蓄积，确定肽Ac-carrrar-NH2 (SEQ ID NO:26)和Ac-arrrar-NH2 (SEQ ID NO:29)活化人CaSR的能力。与SEQ ID NO:26相比，SEQ ID NO:29的N-端D-半胱氨酸残基的缺失显著降低化合物活化CaSR的能力。也就是，由于肽Ac-carrrar-NH (SEQ ID NO:26)和Ac-arrrar-NH2 (SEQ ID NO:29)的差别仅在于存在或缺失N-端D-半胱氨酸，因此N-端半胱氨酸残基的消除显著降低化合物的功效。

[0108] 在体内研究中还研究化合物(例如，在某些施方案中，化合物为N-端残基上的肽)的X1亚单位中含硫醇基团的贡献。体内评价鉴定为SEQ ID NO:26 (Ac-carrrar-NH2)和SEQ ID NO:29 (Ac-arrrar-NH2)的肽的PTH-降低活性。在给药后，0.5 mg/kg剂量的肽Ac-carrrar-NH2 (SEQ ID NO:26)降低PTH血液浓度至非可检测的水平长达4小时。与此相反，具有含硫醇基团的缺乏N-端残基的肽Ac-arrrar-NH2 (SEQ ID NO:29)不降低PTH浓度，即使在相当较高的剂量(即，9 mg/kg)下。

[0109] 通过制备具有不同X1亚单位的化合物，进一步分析化合物的X1亚单位中含硫醇基团的结构-活性关系。在正常的大鼠中体内测试化合物降低PTH的活性。数据显示，含硫醇X1亚单位可变化。测试在N-端残基上具有以下的化合物：D-半胱氨酸(cys)、D-青霉胺(dPen)、d-高半胱氨酸(dHcy)和巯基丙酸(Mpa)。此外，天然或非天然氨基酸(例如β-丙氨酸)可与N-端含硫醇残基缀合。数据显示，在X1亚单位中含有不同的含硫醇基团的阳离子化合物例如Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)有效体内降低PTH。用不含硫醇基团的蛋氨酸取代N-端半胱氨酸残基，产生具有非常差的体内PTH-降低活性的化合物。

[0110] 基于上述研究，具有邻接的亚单位序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7的化合物具有降低甲状旁腺激素水平的活性，其中X1为包含含硫醇基团的亚单位。在一个实施方案中，在X1亚单位上的含硫醇基团选自含硫醇氨基酸残基和有机含硫醇部分。在另一实施方案中，含硫醇基团能在生理性pH和温度下与另一个硫醇基团反应。在其中含硫醇残基为氨基酸残基的某些实施方案中，X1亚单位可为半胱氨酸、谷胱甘肽、巯基-丙酸、正乙酰化半胱氨酸和聚乙二醇化半胱氨酸中的任一个。在其中含硫醇基团在非氨基酸残基亚单位(例如具有含硫醇基团的有机小分子)上的实施方案中，X1亚单位可为硫醇-烷基或硫代酰基部分，例如3-巯基丙基或3-巯基丙酰基残基。在一个实施方案中，硫醇不是高半胱氨酸。

[0111] 进行另外的结构活性研究，以进一步评价在化合物中每一个亚单位的性质对其治疗活性的影响。基于PTH-降低骨架Ac-c(C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:3)，制备具有L-氨基酸残基取代D-氨基酸残基的一系列化合物。将化合物给予受试者，并且在给药前和在给药后1、2、3和4小时评价血浆PTH水平。

[0112] 示于表1的示例性化合物可在N-端和C-端二者上进行化学修饰，如通过Ac和NH2名称所示。通过一次用一个L-氨基酸置换一个亚单位，将其中所有亚单位为D-氨基酸残基的七个亚单位carrrar (SEQ ID NO:3)的序列进行修饰。X1亚单位为经由二硫键与L-Cys残基缀合的D-Cys残基(或在SEQ ID NO:34中的L-Cys残基)，如通过括号中的名称(C)所示。前面的研究已显示，Arg和Ala的手性影响化合物的活性。在一个实施方案中，序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7的化合物是预期的，其中至少鉴定为X4和X7的亚单位为D-氨基酸残基亚单位。在另一实施方案中，鉴定为X4、X5、X6和X7的亚单位为D-氨基酸残基亚单位。在一个优选的实施方案中，鉴定为X3、X4、X5、X6和X7的亚单位为D-氨基酸残基亚单位。在最优选的实施方案中，鉴定为X2、X3、X4、X5、X6和X7的亚单位为D-氨基酸残基亚单位，和所有的亚单位X1、X2、X3、X4、X5、X6和X7为D-氨基酸残基亚单位。

[0113] 在其它研究中，还发现具有所有L-氨基酸的肽用所有D-氨基酸取代不降低所测试的肽的体外活性；实际上，完全由D-氨基酸组成的肽似乎增强CaSR的活化效力。还显示，相对于半胱氨酸残基，在特定位置上的一些阳离子(精氨酸)残基可被不带电荷的(丙氨酸)残基取代，对CaSR的活性影响最小。

[0114] 为了进一步表征结构与针对CaSR的活性之间的关系，使用HEK-293体外细胞测定法测试具有不同数量(4-8)的精氨酸残基(均含有N-端半胱氨酸)的多种阳离子肽。在阳离子亚单位的数量和化合物的效力之间发现正相关，其中效力由活化CaSR的能力证明。将阳离子(例如，精氨酸)亚单位的数量从5降低至4导致效力的最大偏移(>10倍)，表明在具有这些净电荷的化合物之间可能存在活性拐点，对于活性，优选在亚单位X5的阳离子亚单位。因此，结构X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7的化合物是预期的，其中X5为阳离子亚单位。在某些实施方案中，X1为包含在生理性条件下能与另一个硫醇基团反应的硫醇基团的亚单位(“反应性硫醇”，是指在pH 7.4和体温的生理性条件下与另一个硫醇反应的硫醇(例如，半胱氨酸与半胱氨酸)。

[0115] 出乎意料地，当体内评价时，比起具有八个阳离子残基的Ac-crrrrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:41)，具有六个阳离子残基的Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)显示更大和更持久的活性。这与在体外细胞测定法中SEQ ID NO:41在活化CaSR方面更有效的观察结果相反。不希望受理论束缚，认为Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)体内优良的性能可能源自Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)的较好的药代动力学性质，因为预期Ac-crrrrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:41)借助其细胞-渗透特性在细胞中被吸收，并因此从附近除去到达CaSR的活性部分。

[0116] 为了进一步探讨Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)的结构-活性关系，一些阳离子(精氨酸)残基被不带电荷的(丙氨酸)残基置换。发现在亚单位X2和X4位置换阳离子(精氨酸)残基产生在活化CaSR方面具有显著降低的体外效力的化合物(SEQ ID NO:15)。与此相反，在亚单位X2和X6位置换阳离子(精氨酸)残基产生保持大部分效力与Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)一致的化合物(SEQ ID NO:26)。这些结果表明在化合物中带电荷的残基的位置对效力有贡献，并且在一些实施方案中，可超过肽的总正电荷的贡献。还似乎在某些位置例如亚单位X5位的阳离子(精氨酸)残基不相称地对效力有贡献。

[0117] 发现存在N-端半胱氨酸显著增强肽活化CaSR的效力。CaSR为具有大的胞外域的7-跨膜G-蛋白质-偶联的受体，其起同型二聚受体的作用。在胞外域中存在18个半胱氨酸残基，其中的一些已通过多态现象或突变分析显示对于受体活性是重要的。特别注意的是胞外域的环2区的半胱氨酸129和131。认为半胱氨酸129和131在受体复合物的两个单体之间形成分子间二硫桥，其为闭合构型或内向(inhibited)构型。半胱氨酸129的突变活化CaSR，大量其它突变亦是如此，包括环2区的全部删除。在所所述的化合物中由N-端半胱氨酸残基提供的增强的效力可因与CaSR的胞外域的半胱氨酸残基中的一个或多个特定相互作用引起。

[0118] 为了进一步评价氨基酸取代的手性对体外CaSR活性的影响，产生在多个位置含有L-氨基酸或非手性氨基酸(甘氨酸)取代的Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)的一系列类似物，并且测试对CaSR的效力。测试的类似物包括Ac-cGrrrGr-NH2 (SEQ ID NO:42)、(ii) Ac-cArrrAr-NH2 (SEQ ID NO:43)和(iii) Ac-CaRrRaR-NH2 (SEQ ID NO:44)。所有前述类似物具有比Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)显著更低的效力，范围从从SEQ ID NO:44 (三种类似物中最有效的)的10倍差异到SEQ ID NO:43 (三种类似物中最少有效)的超过2000倍差异。Ac-carrrar-NH2 (SEQ ID NO:26)，其中在SEQ ID NO:6的2位和6位上的阳离子D-氨基酸残基(D-精氨酸残基)被不带电荷的D-氨基酸残基(D-精氨酸残基)置换，活性变化小得多(约3倍差异)。因此，令人惊讶地发现，用两种或更多种L-氨基酸残基中断Ac-crrrrrr-NH2 (SEQ ID NO:6)的所有D-氨基酸残基导致显著降低效力。还令人惊讶的是，与当中断残基是不带电荷的L-氨基酸残基(L-丙氨酸残基)相比，当中断残基为不带电荷的非手性氨基酸残基(甘氨酸残基)时，效力降低超过80倍。

[0119] 还令人惊讶的是，将Ac-carrrar-NH2 (SEQ ID NO:26)的两个不带电荷的D-氨基酸残基(D-丙氨酸残基)用它们的L-配对物(SEQ ID NO:43)置换，导致大于600倍的效力降低，而它们用不带电荷的非手性氨基酸残基(甘氨酸残基) (SEQ ID NO:42)置换导致小于8倍的效力降低；并且将Ac-carrrar-NH2 (SEQ ID NO:26)的三个阳离子D-氨基酸残基(D-精氨酸残基)用它们的L-配对物(SEQ ID NO:44)置换，导致效力上小于4倍差异。

[0120] 在结构活性关系的另一个研究中，通过制备在肽Ac-carrrar-NH2 (SEQ ID NO:26)和在肽Ac-crrarar-NH2 (SEQ ID NO:153)的多个位置上取代的具有多个D-氨基酸残基或甘氨酸或具有位阻的非天然氨基酸的一系列肽，评价非阳离子氨基酸对肽效力的贡献。以0.5 mg/kg的剂量，按IV推注将肽给予正常的Sprague Dawley大鼠。盐水的静脉内(IV)推注用作对照。在给药前和在给药后1、2、3和4小时评价血浆PTH水平。结果表明：1)在Ac-carrrar-NH2肽(SEQ ID NO:26)的6位上优选小的氨基酸(例如丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸)，和2)在Ac-carrrar-NH2 (SEQ ID NO:26)的2位上的丙氨酸更加允许取代，并且可被疏水性天然氨基酸(例如，D-Val、D-Leu)、芳族天然氨基酸(例如，D-Phe)或极性天然氨基酸(例如，D-Ser、D-Gln)以及非天然大体积疏水性氨基酸(例如，dNle、dNva)取代，但不能被酸性氨基酸取代，和3)在Ac-crrarar-NH2 (SEQ ID NO:25)肽的4位上的丙氨酸残基也非常允许取代，并且可适应大多数类型的天然氨基酸以及非天然大体积疏水性氨基酸(例如，dNle、dNva)，但是不允许影响二级构象的氨基酸，即甘氨酸或脯氨酸或具有酸性侧链的氨基酸。

[0121] 测试了多种肽和缀合物的活性对人CaSR的影响。通过测量在表达人CaSR的HEK293细胞中IP1的产生进行这些研究。结果呈现于下表3。

[0122] 表3

[0123]

[0124] 本文公开的化合物通常包含一个或多个硫醇部分，优选一个或多个反应性硫醇部分。具有硫醇基团的亚单位包括具有硫醇基团的非氨基酸化合物和具有硫醇基团的氨基酸。含硫醇的亚单位的硫醇基团可为缀合形式(例如，经二硫键至缀合基团)或非缀合形式(即，作为还原的硫醇)。在一个优选的实施方案中，当硫醇基团为非缀合形式或缀合形式时，其能与含硫醇基团形成二硫键。含硫醇的残基可位于肽链的任何位置，包括氨基端、羧基端或一些其它位置。在一个优选的实施方案中，含硫醇的残基或亚单位可位于氨基端。在其它实施方案中，含硫醇的残基或亚单位可位于羧基端或在肽序列内。

[0125] 含硫醇的残基的一些代表性实例包括但不限于半胱氨酸、巯基丙酸、高-半胱氨酸和青霉胺。当含硫醇残基含有手性中心时，其可呈L-或D-构型。在一个优选的实施方案中，含硫醇的残基为半胱氨酸。

[0126] 在一些实施方案中，在化合物的X1位上的含硫醇亚单位和含硫醇的缀合基团之间的交联键可裂解和/或与其它含硫醇的缀合基团例如半胱氨酸体内交换(例如，通过还原二硫键)，以得到生物学活性形式的化合物。采用这种方式，缀合物可用作化合物的前药。缀合基团还可用于改变所述化合物的物理化学、药代动力学和/或药效学性质(例如，经由二硫键与大的聚乙二醇化部分缀合，以增强药代动力学)。

[0127] 在一些实施方案中，化合物为包含氨基酸序列(Xaa1)-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEQ ID NO:155)的肽，其中(Xaa1)为含硫醇的氨基酸残基，(Xaa2)为非阳离子氨基酸残基，(Xaa3)为任何氨基酸残基，(Xaa4)为任何氨基酸残基，(Xaa5)为阳离子氨基酸残基，(Xaa6)为非阳离子残基，和(Xaa7)为任何氨基酸残基。肽可在N-端、C-端或二者上被修饰。在一个优选的实施方案中，肽分别通过乙酰化和酰胺化在N-端和C-端二者上被修饰。

[0128] 在一些实施方案中，肽包含氨基酸序列(D-Cys)-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEQ ID NO:156)，其中(Xaa2)为非阳离子氨基酸残基，(Xaa3)为任何氨基酸残基，(Xaa4)为任何氨基酸残基，(Xaa5)选自D-Arg、L-Arg、D-Lys和L-Lys，(Xaa6)为非阳离子残基，和(Xaa7)为任何氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。

[0129] 在一些实施方案中，肽包含氨基酸序列(D-Cys)-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEQ ID NO:157)，其中(Xaa2)、(Xaa3)和(Xaa4)独立地为任何氨基酸残基(但是，在一个优选的实施方案中，它们独立地选自D-Ala、D-Val、D-Leu、D-NorVal和D-NorLeu)，(Xaa5)和(Xaa7)独立地为任何阳离子氨基酸残基(但是，在一个优选的实施方案中，它们独立地选自D-Arg、L-Arg、D-Lys和L-Lys)，(Xaa6)为非阳离子氨基酸残基(在一个优选的实施方案中，其选自D-Ala、D-Val、D-Leu、D-NorVal和D-NorLeu)。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。

[0130] 在一些实施方案中，肽包含氨基酸序列(D-Cys)-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEQ ID NO:158)，其中(Xaa2)为非阳离子氨基酸残基，(Xaa3)为任何氨基酸残基，(Xaa4)为任何氨基酸残基，(Xaa5)选自D-Arg、L-Arg、D-Lys和L-Lys，(Xaa6)为非阳离子残基，和(Xaa7)为任何氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。

[0131] 在一些实施方案中，肽包含氨基酸序列(D-Cys)-(D-Ala)-(Xaa3)-(Xaa4)-(D-Arg)-(D-Ala)-(Xaa7) (SEQ ID NO:159)，其中(Xaa3)为任何阳离子氨基酸残基，(Xaa4)为任何阳离子氨基酸残基，和(Xaa7)为任何阳离子氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。

[0132] 在一些实施方案中，肽包含氨基酸序列(D-Cys)-(Xaa2)-(Xaa3)-(D-Ala)-(D-Arg)-(D-Ala)-(Xaa7) (SEQ ID NO:160)，其中(Xaa2)、(Xaa3)和(Xaa7)独立地为任何阳离子氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。

[0133] 另一个实施方案为包含通过肽键连接的氨基酸序列的拟钙肽，其中所述序列包含5-10个氨基酸残基，并且其中所述序列包含氨基端、羧基端、至少一个含硫醇的残基和3-9个带正电荷的残基。在一个实施方案中，所述至少一个含硫醇的残基为半胱氨酸残基。在另一方面，所述半胱氨酸残基位于肽的氨基端。在某些实施方案中，半胱氨酸残基为L-Cys残基、D-Cys残基或L-或D-高Cys残基。在其它实施方案中，肽的氨基酸残基为D-氨基酸或L-氨基酸。

[0134] 在要求保护的化合物的范围内还包括包含约七个亚单位的拟肽分子，其中至少一个亚单位含有硫醇部分，优选反应性硫醇部分，并且其它亚单位为多个非阳离子亚单位和1-4个带正电荷的亚单位。这样的拟肽分子可包含在两个或更多个亚单位之间的非肽键。
上文所述的化合物的多种特征通常适用于拟肽分子。例如，如上文所述，用于构建分子的亚单位可为天然存在的氨基酸或具有非天然侧链的残基，模块的末端可以上文所述的方式帽化或非帽化。类似地，分子的氨基酸残基可为L-或D-氨基酸残基。同样如上文所述，含硫醇的残基可为还原形式或氧化形式，具有上文所述的任何含硫醇的部分。

[0135] 已开发许多拟肽框架和用于它们合成的方法(Babine，R. E.；Bender，S. L.，Chem. Rev.，97:1359，1997；Hanessian，S.；等 人，Tetrahedron，53:12789，1997；Fletcher，M. D.；Cambell，M. C.，Chem. Rev.，98:763，1998)；Peptidomimetics Protocols；Kazmierski W.M.编辑；Methods in Molecular Medicine Series，第23卷；
Humana Press，Inc.；Totowa，N.J. (1999)。

[0136] 缀合物

[0137] 在一些实施方案中，经由化合物的硫醇和来自缀合基团的硫醇之间的二硫键，化合物与含硫醇的缀合基团化学交联。含硫醇的缀合基团可为小分子(例如半胱氨酸)或大分子(例如含有半胱氨酸残基的多肽)。合适的含硫醇的缀合基团的实例包括半胱氨酸、谷胱甘肽、硫代烷基、例如硫代苄基等部分、巯基丙酸、N-乙酰化的半胱氨酸、半胱酰胺、N-乙酰基半胱酰胺、高半胱氨酸、青霉胺和聚(乙二醇) (PEG)修饰的(称为“聚乙二醇化的”)硫醇例如聚乙二醇化的半胱氨酸或化合物的重复(即，以形成通过二硫键连接的同型二聚体)。在一个优选的实施方案中，含硫醇的缀合基团为半胱氨酸。其它半胱氨酸同系物亦预期单独地或包含在较大的缀合基团中用作含硫醇的缀合基团。类似地，半胱氨酸、高半胱氨酸和半胱酰胺的立体异构体适合用作含硫醇的部分。缀合基团可用于改进化学稳定性，和由此改进药物产品的储存期限。在某些实施方案中，含硫醇的缀合基团和肽相同(即，缀合物为二聚物)，与异源缀合基团(例如半胱氨酸)相比，其出人意料地显示非常良好的化学稳定性。不受理论束缚，推测当含硫醇的缀合基团和肽相同时，则任何歧化作用(例如，混杂缀合基团)将重新构成初始的二聚物化合物。与此相反，具有异源缀合基团(例如半胱氨酸)的化合物的歧化作用可导致形成肽的同型二聚物加上胱氨酸的同型二聚物(半胱氨酸-半胱氨酸同型二聚体)加上残余的亲本化合物。由于在全身循环中高浓度的还原型半胱氨酸，肽的同型二聚物(即，缀合基团和肽相同)将体内转化为肽的半胱氨酸缀合形式。

[0138] 在一些实施方案中，教导包括含硫醇缀合基团和包含氨基酸序列(Xaa1)-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEQ ID NO:155)的肽的二硫化物缀合物，其中(Xaa1)为具有含硫醇部分的氨基酸残基，(Xaa2)为非阳离子氨基酸残基，(Xaa3)为任何氨基酸残基，(Xaa4)为任何氨基酸残基，(Xaa5)为阳离子氨基酸残基，(Xaa6)为非阳离子残基，和(Xaa7)为任何氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合基团选自D-Cys、L-Cys、含有D-Cys的肽和含有L-Cys的肽。当含硫醇缀合物基团为氨基酸或肽时，其可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合物基团具有N-端帽和C-端帽二者。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团本身为包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团和肽相同(即，缀合物为二聚物)。

[0139] 在一些实施方案中，教导包括含硫醇缀合基团和包含氨基酸序列(D-Cys)-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEQ ID NO:156)的肽的缀合物，其中(Xaa2)为非阳离子氨基酸残基，(Xaa3)为任何氨基酸残基，(Xaa4)为任何氨基酸残基，(Xaa5)选自D-Arg、L-Arg、D-Lys和L-Lys，(Xaa6)为非阳离子残基，和(Xaa7)为任何氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合基团选自D-Cys、L-Cys、含有D-Cys的肽和含有L-Cys的肽。当含硫醇缀合物基团为氨基酸或肽时，其可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合物基团具有N-端帽和C-端帽二者。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团本身为包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团和肽相同(即，缀合物为二聚物)。

[0140] 在一些实施方案中，教导包括含硫醇缀合基团和包含氨基酸序列(L-Cys)-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEQ ID NO:183)的肽的缀合物，其中(Xaa2)为非阳离子氨基酸残基，(Xaa3)为任何氨基酸残基，(Xaa4)为任何氨基酸残基，(Xaa5)选自D-Arg、L-Arg、D-Lys和L-Lys，(Xaa6)为非阳离子残基，和(Xaa7)为任何氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合基团选自D-Cys、L-Cys、含有D-Cys的肽和含有L-Cys的肽。当含硫醇缀合物基团为氨基酸或肽时，其可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合物基团具有N-端帽和C-端帽二者。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团本身为包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团和肽相同(即，缀合物为二聚物)。

[0141] 在一些实施方案中，教导包括含硫醇缀合基团和包含氨基酸序列(D-Cys)-(D-Ala)-(Xaa3)-(Xaa4)-(D-Arg)-(D-Ala)-(Xaa7) (SEQ ID NO:161)的肽的缀合物，其中(Xaa3)为任何氨基酸残基，(Xaa4)为任何氨基酸残基，和(Xaa7)为任何氨基酸残基。肽可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，肽具有N-端帽和C-端帽二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合基团选自D-Cys、L-Cys、含有D-Cys的肽和含有L-Cys的肽。当含硫醇缀合物基团为氨基酸或肽时，其可具有N-端帽、C-端帽或二者。在一个优选的实施方案中，含硫醇缀合物基团具有N-端帽和C-端帽二者。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团本身为包含SEQ ID NO:161的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团和肽相同(即，缀合物为二聚物)。

[0142] 示例性化合物

[0143] 在一个优选的实施方案中，含硫醇的缀合物基团具有N-端帽和C-端帽二者。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团本身为包含SEQ ID NO:161的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团和肽相同(即，缀合物为二聚物)。

[0144] 在另一实施方案中，化合物为缀合物形式，其中在X1位的含硫醇亚单位通过二硫键与L-Cys残基连接。这些化合物具有以下结构：

[0145]

[0146] 在本文使用的符号中，在X1亚单位中与含硫醇部分连接的化合物通过括号确定，其中在这些示例性缀合物中，化合物L-Cys用(C)表示，其与X1亚单位中含硫醇部分连接：Ac-c(C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:3)和Ac-c(Ac-C)arrrar-NH2 (SEQ ID NO:141)。

[0147] 当所述的激动剂作为药物给予人和动物时，它们可单独给予或作为含有例如0.1-99%(更优选，10-30%)的活性成分与药学上可接受的载体的组合的药物组合物给予。
在其它实施方案中，药物组合物可含有0.2-25%，优选0.5-5%或0.5-2%的活性成分。可将这些化合物给予人和其它动物，用于通过任何合适的给予途径的疗法，包括，例如，口服、皮下注射、皮下储存、静脉内注射、静脉内输注或皮下输注。

[0148] 可将这些激动剂给予人和其它动物，用于通过任何合适的给予途径的疗法。

[0149] 如上所述，使用方法可单独使用或与其它药剂和/或药征组合使用。所述其它药剂和/或药征包括但不限于膳食磷酸盐限制、透析、磷酸盐结合剂(例如，氢氧化铝、碳酸钙、乙酸钙、镁盐、盐酸司维拉姆、碳酸镧、多核铁制备物)。在组合方案中采用的疗法(药剂和/或药征)的具体组合考虑到所需疗法和/或程序的相容性和所需的待实现的治疗效果。还应理解的是，采用的疗法对于相同的病症可实现所需的效果(例如，本发明的化合物可与用于治疗相同病症的另一种药剂同时给予)，或者它们可实现不同的效果(例如，控制任何不利的作用)。本文使用的通常给予以治疗或预防具体的疾病或病况的另外的治疗剂称为“适用于在治疗的疾病或状况”。

[0150] 在一个实施方案中，以足以降低血液透析患者中磷回弹的剂量给予所述化合物。在另一实施方案中，在停止透析后给予剂量。

[0151] 通过同时、序贯或单独给予所述治疗的单个组分，可实现本文定义的本发明的组合治疗。实施例

[0152] 提供以下实施例来说明而不是限制本文所述的化合物和方法。在不偏离本文所述的主题的真实精神和范围下，技术人员可进行各种修改。

[0153] 实施例1

[0154] 对患有SHPT的血液透析的ESRD患者进行初始阶段1随机的、双盲的、安慰剂-对照的、单一-剂量、剂量-逐步上升、两阶段交叉研究。进行研究，以部分评价在健康的男性志愿者中静脉内(IV)给予SEQ ID NO:3的安全性、耐受性、药代动力学和药效学和获悉对该方案的剂量选择。该研究为在患有SHPT的血液透析受试者中的阶段1b研究。

[0155] 对28名血液透析患者给予单一剂量的SEQ ID NO:3或安慰剂。在两期交叉设计中研究接受5、10或20 mg剂量的群组，而接受40或60 mg剂量的受试者随机分为SEQ ID NO:3组或安慰剂组，每组8名受试者。

[0156] 在血液透析后立即接纳受试者阶段1单位，并观察3天。在血液透析后2小时进行基线实验室测试。在透析后在注射SEQ ID NO:3后，完整PTH的水平存在快速60-80%降低，接着在接下来的48小时期间朝向基线剂量依赖性返回(图1)。血清钙存在关联的小的(10-16%)降低。

[0157] 通过透析降低的血清磷水平在前8小时期间快速上升至平稳状态，随后在剩余的透析间间隔期间较缓慢地提高(图2)。在安慰剂受试者中，在给药后的开始约36小时期间，平均血清磷快速提高，随后在出院时在基线水平上方84%处磷水平倾向于平稳状态(图2)。令人惊讶地，通过给予SEQ ID NO:3显著改变磷返回至平稳状态水平的速率。5 mg剂量具有最低效果，但是较高剂量显著降低血清磷的上升。在出院时，在接受20-60 mg SEQ ID NO:3的受试者中，血清磷距基线的平均百分比增加在23%-60%范围，并且比安慰剂低至少约24个百分点。

[0158] 实施例2

[0159] 阶段2研究作为双盲的、随机的安慰剂-对照的、多个上升剂量研究完成。该研究为单臂、开放标记、12周、剂量调整研究，具有4周后续观察阶段，以研究在患有慢性肾病-矿物质和骨病症(CKD-MBD)的血液透析受试者中，SEQ ID NO:3在治疗SHPT中的效果。该研究的主要目的是在患有CKD-MBD的血液透析受试者中评价每周三次IV给予SEQ ID NO:3在治疗SHPT中的效果，如在效力时间段期间通过iPTH距基线的百分比变化所评价。此外，第二目的是评价血清cCa(校正的钙)和磷距基线的变化。

[0160] SEQ ID NO:3的起始剂量为5 mg。调整SEQ ID NO:3的剂量至标靶150 ≤ 300 pg/mL。在第5周和第9周期间对于SEQ ID NO:3剂量的提高来评价受试者。如果受试者最近的cCa ≥ 8.0 mg/dL并且不存在妨碍剂量提高的正在进行的不良事件，则如下调整SEQ ID NO:3的剂量：如果iPTH ≤ 300 pg/mL，则剂量无变化；如果iPTH > 300 pg/mL，则在第5周期间剂量提高5 mg (即，从5 mg到10 mg)或在第9周期间提高5 mg (即，iPTH ≥
300 pg/mL和≤ 450 pg/mL)或10 mg (iPTH > 450 pg/mL)。

[0161] 32名受试者(87%)完成12周治疗时间段。5名受试者(13/5%) 在结束治疗时间段前撤出。在完成12周治疗时间段的32名受试者中，30名受试者进入开放标记延期研究，2名受试者完成4周后续观察时间段。

[0162] 主要终点是在效力评价期结束时，iPTH距基线的百分比变化。基线iPTH水平定义为在第一次给药3周内并且在第一剂量的SEQ ID NO:3前得到的三个iPTH结果的平均值。效力评价期为在最后剂量的SEQ ID NO:3之前的14天到之后的3天。次要终点包括在效力评价期期间iPTH距基线≥ 30%降低的受试者的比例和iPTH ≥ 300 pg/mL的受试者的比例。此外，评价了SEQ ID NO:3对cCa和磷平均变化的影响。

[0163] 总的来说，平均基线iPTH为853.4 pg/mL。SEQ ID NO:3治疗与在治疗期结束时iPTH距基线的53%平均降低相关(95% 置信区间(-60.8，-46.3)。在iPTH亚组中结果类似(基线iPTH ≤ 700 pg/mL或>700 pg/mL)，表明响应独立于基线iPTH值。

[0164] 当相对时间作图时，在12周治疗期期间，SEQ ID NO:3治疗显示渐进的持久降低透析前iPTH。在二级响应分析中，89%的受试者实现≥ 30% iPTH降低；在患有严重疾病的受试者(即，iPTH > 700 pg/mL)中，该比例仅稍低。总的来说，在治疗期结束时，56%的受试者实现iPTH ≤ 300 pg/mL。对低于4.0 g/dL的白蛋白水平，用下等式调节血清钙水平：校正的钙(cCa) =(测量的Ca，以mg/dL计) + [4-(白蛋白，以g/dL计)]*0.8。平均基线cCa为10.1 mg/dL，并且在治疗期结束时降低15%。在患有严重疾病的受试者中观察到更显著的血清cCa下降。

[0165] 在方案指定的评价日中在透析前获得磷测量。总的来说，平均基线磷为5.7 mg/dL，更严重的基线iPTH亚组具有更高的基线水平。在效力治疗期结束时，血清磷距基线的平均百分比变化为-10.5%，在患有更严重疾病的受试者中经历更大的降低(表3)。

[0166] 表3

[0167]

[0168] 总的来说，除了在较低iPTH亚组中一个磷平均百分比变化之外，所有预先设定的主要和次要终点分析显示，横跨两个亚组，显著降低iPTH、cCa和磷。