一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法

摘要

本发明公开一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法。该方法包括以下步骤：（1）称取待测食品，配制成样品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液进行萃取，然后过滤，将滤液蒸干；（2）用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对步骤（1）得到的蒸干物质进行萃取，然后过滤，滤液静置；（3）取下层溶液进行高效液相色谱检测。本发明所建立的方法具有很高的灵敏度、精密度和准确性。

权利要求

1.一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）称取待测食品，配制成样品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液进行萃取，然后过滤，将滤液蒸干；其中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷与甲醇的体积比为1-10；所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液与样品水溶液的体积比大于10；所述萃取是在

15℃-70℃条件下萃取15min-5h；

（2）用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对步骤（1）得到的蒸干物质进行萃取，然后过滤，滤液静置分层；其中，所述三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的配制方法为：按照三氯甲烷与甲醇的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后按照三氯甲烷和甲醇的混合溶液与水的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液；

（3）取下层溶液进行高效液相色谱检测；其中，高效液相色谱的检测条件为：采用LiChrosphere 100 diol色谱柱，流动相由A相和B相组成，进行梯度洗脱，用蒸发光散射检测器进行检测，其中，所述A相为n-正己烷:2-丙醇:乙酸:三乙胺，体积比为

820:170:10:0.8，B相为2-丙醇:纯水:乙酸:三乙胺，体积比为850: 140:10:0.8，所述梯度洗脱的条件为：0-23min，流动相中A相的体积浓度从95%降至60%，B相的体积浓度从

5%升至40%；23-28min，流动相中A相的体积浓度从60%降至0，B相的体积浓度从40%升至

100%；28-39min，流动相中A相的体积浓度从0升至95%，B相的体积浓度从100%降至5%；

39-50min，流动相中A相的体积浓度为95%，B相的体积浓度为5%。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷与甲醇的体积比为2.5-5。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述萃取是在

35℃-50℃条件下萃取30min-2h。

说明书

一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及食品检测领域。更具体地，涉及一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法。

背景技术

[0002] 磷脂酰丝氨酸（简称ps）是一种磷脂类物质，对人的脑部神经系统健康具有重要作用。目前，可以将ps作为食品原料添加到食品中服用，或者作为保健食品服用。当ps作为保健食品服用时，由于纯度高，含量高，使用一般的高效液相色谱法即可检测，不需要复杂的前处理技术，而当ps作为普通食品原料添加到食品中时，其添加量一般较少，在食品中受其他原料的干扰不易检测，尤其是以蛋白质、脂肪、淀粉等物质为主的食品中，由于蛋白质、脂肪、淀粉等物质会对ps起到一定的包埋作用，使ps不易于从这些物质中分离，从而影响ps的检测。

[0003] 由于ps的功效被人们广泛认可，越来越多的食品中添加了ps，探索建立有效检测食品中磷脂酰丝氨酸含量的新方法对于食品原料的监测具有更加重要的意义。

发明内容

[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法。该方法利用特殊的分离提取技术使得磷脂酰丝氨酸几乎可以全部从食品原料的干扰物质中提取出来，方法的回收率高、重现性好，操作简单，为磷脂酰丝氨酸在食品中的规模化使用提供了技术支持。

[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用下述技术方案：

[0006] 一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，该方法包括以下步骤：

[0007] （1）称取待测食品，配制成样品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液进行萃取，然后过滤，将滤液蒸干；

[0008] （2）用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对步骤（1）得到的蒸干物质进行萃取，然后过滤，滤液静置分层；

[0009] （3）取下层溶液进行高效液相色谱检测。

[0010] 上述方法中，所述食品包括固态制品和液态制品。由于不同食品中磷脂酰丝氨酸的添加量差别较大，配制样品水溶液时，为了检测方便，优选地控制样品水溶液中磷脂酰丝氨酸的浓度为0.1mg/mL-5mg/mL，更优选为0.1mg/mL-1.5mg/mL。

[0011] 进一步地，步骤（1）中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷与甲醇的体积比为1-10，优选为2.5-5。用三氯甲烷和甲醇的混合溶液对样品水溶液进行萃取时，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液与样品水溶液的体积比至少大于10。此外，萃取的时间和温度对于ps萃取率也有影响，通常在15℃-70℃条件下萃取15min-5h，优选为在35℃-50℃条件下萃取30min-2h。

[0012] 在本发明的一个实施方案中，步骤（1）中将滤液蒸干采用的是旋转蒸发。

[0013] 进一步地，步骤（2）中，所述三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的配制方法为：按照三氯甲烷与甲醇的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后按照三氯甲烷和甲醇的混合溶液与水的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液。用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对蒸干物质进行萃取时，三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的用量只要可以将蒸干物质充分溶解即可。

[0014] 本发明通过两步萃取有效地去除了食品中的干扰物质，通过常规的高效液相色谱就可以完成食品中的磷脂酰丝氨酸的含量检测。为了使本领域技术人员更好地实施本发明，在此提供一种优选的高效液相色谱检测方法，具体如下：

[0015] 高效液相色谱的检测条件为：采用LiChrosphere100diol色谱柱，流动相由A相和B相组成，进行梯度洗脱，流速1.5mL/min，柱温25℃-30℃，用蒸发光散射检测器进行检测，其中，所述A相为n-正己烷:2-丙醇:乙酸:三乙胺的体积比为820:170:10:0.8，B相为2-丙醇:纯水:乙酸:三乙胺的体积比为850:140:10:0.8。

[0016] 优选的梯度洗脱条件为：0-23min，流动相中A相的体积浓度从95%降至60%，B相的体积浓度从5%升至40%；23-28min，流动相中A相的体积浓度从60%降至0，B相的体积浓度从40%升至100%；28-39min，流动相中A相的体积浓度从0升至95%，B相的体积浓度从100%降至5%；39-50min，流动相中A相的体积浓度为95%，B相的体积浓度为5%。

[0017] 根据上述检测条件，对前处理后的样品，即步骤（2）中获得的下层溶液，进行检测。一般情况，检测前还要使用三氯甲烷或甲醇定容，在高效液相色谱中获取磷脂酰丝氨酸的峰面积，通过标准曲线校正方程计算磷脂酰丝氨酸的浓度。

[0018] 根据本发明的检测方法，从保护仪器并减少测试过程中干扰的角度出发，在对所述样品的溶液进行检测之前优选对该样品溶液进行过滤，从而除去该样品溶液中的不溶物。所述过滤可以为本领域技术人员熟知的各种方法，优选采用微孔滤膜对所述样品的溶液进行过滤。所述微孔滤膜的孔径可以为0.1-0.45μm，优选为0.2μm。

[0019] 本发明的有益效果如下：

[0020] 基于本发明的检测方法，磷脂酰丝氨酸的浓度在1.08-127.9μg/μL范围内线性良好，可以稳定分析ps的含量。并且方法线性范围较宽，适合于不同ps添加量的食品的分析；方法检出限为0.54μg/μL，方法定量限为1.8μg/μL。本发明的方法检出限低，灵敏度高、可以检测添加了微量ps的食品；方法平均回收率为在97.0%-101.0%之间，方法准确度高。

附图说明

[0021] 图1磷脂酰丝氨酸标准品的高效液相色谱图。

[0022] 图2实施例2中样品检测的高效液相色谱图。

具体实施方式

[0023] 为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

[0024] 实施例1

[0025] 将ps标准品配制成浓度为50mg/100mL，即0.5μg/μL，按照色谱检测条件分别进样10μL（ps含量5μg）、30μL（ps含量15μg）、50μL（ps含量25μg）、80μL（ps含量40μg），以ps含量为横坐标，峰面积为纵坐标，求得的直线回归方程即为标准曲线，回归方程为y=4132.3x-2956.2，R2=0.9919。

[0026] HPLC分析条件：

[0027] 磷脂酰丝氨酸（ps）标准样品：sigma公司，产品名称：L-A-PHOSPHATIDYL-SERINE FROM SOYBEAN

[0028] 仪器：Shimatzu HPLC10VP series

[0029] 柱型号：LiChrosphere100diol（Merck）：4mm（内径）×125mm（柱长）（Merck），粒径：5μm

[0030] 预柱：LiChrosphere diol pre cartridge

[0031] 柱温：35℃

[0032] 检测器参数：ELSD2000，ALLTECH，U.S.A

[0033] Drift tube100℃

[0034] Nebulizer gas flow rate:2.0SLPM

[0035] 流速：1.5mL/min

[0036] 梯度洗脱条件：

[0037]时间 A流动相 B流动相
0min 95% 5%
23min 60% 40%
28min 0 100%
39min 95% 5%
50min 95% 5%

[0038] 洗脱液A（2.5L）：

[0039] n-正己烷/2-丙醇/乙酸/三乙胺=820/170/10/0.8(体积比)

[0040] 洗脱液B（2.5L）：

[0041] 2-丙醇/纯水/乙酸/三乙胺=850/140/10/0.8(体积比)

[0042] 实施例2

[0043] 称取20g奶粉，用40mL纯水溶解，向溶液中加入950mL的三氯甲烷和甲醇的混合溶液，该混合溶液中CHCl3:MeOH=1（体积比），在温度15℃的条件下萃取5h，全部溶液用0.2μm的滤膜过滤后，旋转蒸发至干燥。然后，用三氯甲烷、甲醇和纯水的混合溶液对蒸干物质进行萃取（三氯甲烷、甲醇和纯水混合溶液的配制：按照三氯甲烷与甲醇的体积比为1的比例配成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后取该混合溶液30mL与30mL的纯水混合配成三氯甲烷、甲醇和纯水的混合溶液），全部溶液再用0.2μm的滤膜过滤，滤液静置分层，分为上下两层溶液，用三滤甲烷或者甲醇溶液将下层溶液定容到50mL，用于HPLC的检测分析。
该奶粉中的磷脂酰丝氨酸的实际添加量为150mg/100g，检出142.5mg/100g。

[0044] HPLC分析条件实施例1。

[0045] 实施例3

[0046] 称取20g面包，用40mL纯水溶解，向溶液中加入950mL的三氯甲烷和甲醇溶液，CHCl3：MeOH=10（体积比），在温度70℃的条件下萃取15min，全部溶液用0.2μm的滤膜过滤后，旋转蒸发至干燥。然后，用三氯甲烷、甲醇、纯水的混合溶液对蒸干物质进行萃取（三氯甲烷、甲醇和纯水混合溶液的配制：按照三氯甲烷与甲醇的体积比为3的比例配成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后取该混合溶液30mL与10mL的纯水混合配成三氯甲烷、甲醇和纯水的混合溶液），全部溶液用0.2μm的滤膜过滤，滤液静置分层，分为上下两层溶液，用三滤甲烷或者甲醇溶液将下层溶液定容到50mL，用于HPLC的检测分析。该面包中的磷脂酰丝氨酸的实际添加量为100mg/100g，检出98.8mg/100g。

[0047] HPLC分析条件同实施例1。

[0048] 实施例4

[0049] 称取20g酸奶，用40mL纯水溶解，向溶液中加入950mL的三氯甲烷和甲醇溶液，CHCl3：MeOH=5（体积比），在温度50℃的条件下萃取1h，全部溶液用0.2μm的滤膜过滤后，旋转蒸发至干燥。然后，用三氯甲烷、甲醇和纯水的混合溶液对蒸干物质进行萃取（三氯甲烷、甲醇和纯水混合溶液的配制：按照三氯甲烷与甲醇的体积比为2的比例配成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后取该混合溶液40mL与20mL的纯水混合配成三氯甲烷、甲醇和纯水的混合溶液），全部溶液用0.2μm的滤膜过滤，滤液静置分层，分为上下两层溶液，用三滤甲烷或者甲醇溶液将下层溶液定容到50mL，用于HPLC的检测分析。该奶粉中的磷脂酰丝氨酸的实际添加量为120mg/100g，检出119.3mg/100g。

[0050] HPLC分析条件同实施例1。

[0051] 实施例5

[0052] 实验选用的两种市售添加了ps的奶粉产品进行精密度试验。按本发明方法进行处理，每个样品平行操作6次，测定精密度。结果见表1。

[0053] 表1精密度试验结果

[0054]

[0055]

[0056] 从测定结果可以看出，RSD%＜2，说明方法的精密度较高，不同批次间检测结果相差很小。

[0057] 实施例6

[0058] 取一个未添加ps原料的奶粉产品，分别向其中添加ps原料，制成ps含量为50mg/100g、60mg/100g、80mg/100g、100mg/100g的奶粉产品，按本发明方法处理样品，每组做6个平行进行回收率试验，结果见表2。

[0059] 表2回收率试验结果

[0060]

[0061] 注：未添加ps原料的奶粉产品ps含量本底值为0mg/100g。

[0062] 从结果可以发现，回收率RSD%＜2，说明本发明方法回收率高，表明ps在方法处理过程中几乎没有损失，方法前处理工艺稳定。

[0063] 对比例1

[0064] 待测样品同实施例2（该奶粉中的磷脂酰丝氨酸的实际添加量为150mg/100g），样品的前处理方法仅有萃取温度和萃取时间不同（具体条件参见表3），通过HPLC（分析条件同实施例1）检测分析样品中ps的添加量，结果如表3所示。

[0065] 表3：

[0066]

[0067] 对比例2

[0068] 待测样品同实施例4（该奶粉中的磷脂酰丝氨酸的实际添加量为120mg/100g），样品的前处理方法中仅是三氯甲烷和甲醇的体积比不同（具体条件参见表4），通过HPLC（分析条件同实施例1）检测分析样品中ps的添加量，结果如表4所示。

[0069] 表4：

[0070]

[0071] 对比例3

[0072] 待测样品及样品的前处理方法同实施例2，HPLC的条件不同，测定结果为：该奶粉中的磷脂酰丝氨酸的实际添加量为150mg/100g，检出130.5mg/100g。

[0073] HPLC分析条件：

[0074] 标准样品：sigma公司，产品名称：L-A-PHOSPHATIDYL-SERINE FROM SOYBEAN[0075] 仪器：Shimatzu HPLC10VP series

[0076] 柱型号：LiChrosphere100diol（Merck）：4μm×125mm（Merck）[0077] 预柱：LiChrosphere diol pre cartridge

[0078] 柱温：35℃

[0079] 检测器参数：ELSD2000，ALLTECH，U.S.A

[0080] Drift tube100℃

[0081] Nebulizer gas flow rate:2.0SLPM

[0082] 流速：1.5mL/min

[0083] 梯度洗脱条件：

[0084]TIME A流动相 B流动相
0min 95% 5%
23min 40% 60%
28min 0 100%
39min 95% 5%
50min 95% 5%

[0085] 洗脱液A（2.5L）：

[0086] n-正己烷/2-丙醇/乙酸/三乙胺=820/170/10/0.8(体积比)

[0087] 洗脱液B（2.5L）：

[0088] 2-丙醇/纯水/乙酸/三乙胺=850/140/10/0.8(体积比)

[0089] 显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。