一种氧化损伤体外检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种氧化损伤检测方法及检测试剂盒。所述方法包括以下步骤：（1）采集尿样作为检验样品；（2）向检验样品中加入磷酸盐缓冲溶液，使得溶液pH值在3.7至3.9之间或4.5至5之间；（3）加入品红显色剂，使得品红浓度在0.04g/L至1.4g/L之间，静置3～5min，根据溶液颜色深浅或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。所述试剂盒包括磷酸盐缓冲液制备的缓冲剂、品红显色剂和比色卡；所述比色卡包括5种颜色分别对应无损伤、轻度损伤、中度损伤、重度损伤和极重损伤。本发明提供的检测方法及检测试剂盒，稳定性好，灵敏准确，储存方便。

权利要求

1.一种氧化损伤检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采集尿样作为检验样品；

(2)向检验样品中加入pH值在3至5之间的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得混合液pH值在3.7至3.9之间或4.5至5之间；

(3)向步骤(2)中的混合液，加入品红显色剂，混合均匀后使得品红在最终混合液中浓度在0.04g/L至1.4g/L之间，静置3～5min，根据最终混合液颜色深浅或348nm吸光值，按照最终混合液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中磷酸盐缓冲溶液的浓度为4mol/L至6mol/L。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)品红显色剂，pH值在1.0至

4.0之间，每升包括碱性品红0.5g至15g和亚硫酸盐0.03mol至0.35mol。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)显色剂，其制备步骤包括：(a)每称取0.1g-3g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液；

(b)向碱性品红溶液中加入亚硫酸盐0.006mol至0.07mol，溶解后用强酸调节pH值在

1.0至4.0；

(c)向步骤(b)得到的溶液中，按照质量比例0.5％至30％逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)显色剂的制备方法步骤(b)中的强酸为浓硫酸、浓硝酸和/或浓盐酸。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)当溶液颜色在无色至微黄之间时，确定氧化损伤程度为无损伤，溶液颜色在微黄至浅红之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤，溶液颜色在浅红至红色之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤，溶液颜色在红色至深红之间时，确定氧化损伤程度为重度损伤，溶液颜色在深红至紫色之间时，确定氧化损伤程度为极重损伤。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)当溶液348nm处吸光值在0-

0.2之间时，确定氧化损伤程度为无损伤，当溶液348nm处吸光值在0.2-0.4之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.4-0.6之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.6-0.8之间时，确定氧化损伤程度为重度损伤，当溶液

348nm处吸光值在0.8-1.0之间时，确定氧化损伤程度为极重损伤。

8.一种应用如权利要求1至7任意一项所述检测方法的氧化损伤检测试剂盒，其特征在于，包括缓冲剂、显色剂和比色卡；所述缓冲剂为pH值在3.0至5.0之间，浓度在4mol/L至

6mol/L的磷酸盐缓冲液；所述显色剂为无色的碱性品红溶液，所述品红溶液包括，0.5g/L至

15g/L的碱性品红，0.03mol/L至0.35mol/L的亚硫酸盐，pH值在1.0至4.0之间；所述比色卡包括5种颜色分别对应无损伤、轻度损伤、中度损伤、重度损伤和极重损伤。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲剂和显色剂的体积比为1:0.1-2。

10.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述比色卡对应无损伤的颜色为无色至微黄，对应轻度损伤的颜色为微黄至浅红，对应中度损伤的颜色为浅红至红色，对应重度损伤的颜色为红色至深红，对应极重损伤的颜色为深红至紫色。

说明书

一种氧化损伤体外检测方法及检测试剂盒

技术领域

[0001] 本发明属于医学检测领域，更具体地，涉及一种氧化损伤体外检测方法及检测试剂盒。

背景技术

[0002] 随着社会步伐的加快，人们的生活节奏的加快、工作压力和竞争压力的增大，导致大部分人群处于亚健康状态。现在出现的许多慢性疾病和发病率逐年上升的疾病如心血管疾病、心脏病和糖尿病等都跟人体产生自由基水平的多少密切相关，而自由基会通过对人体的氧化还原反应导致人体的氧化损伤。现代社会生活中人们健康意识的逐渐增强和科技日新月异，在家庭中可以广泛使用的快速诊断技术方兴未艾，所以及时检测和了解人体氧化损伤程度，并指导人们及时诊治或通过改变不良的生活习惯和调节不好的饮食习惯，从而时刻处于健康状态。基于以上原因，亟需一种氧化损伤体外快速检测方法和产品。

[0003] 现本领域内的主要专利有美国专利NO.6165797、有罗伯特·D·埃布尔斯发明及梅迪-泰克控股公司申请的“用于检测丙二醛的试剂、制备该试剂的方法以及使用该试剂的试剂盒”的公开番号为WO2004/01191国际专利和日本申请的公开番号为WO2004/11635A1的国际专利，申请号为03818036.7的中国专利。因美国专利NO.6165797为单组分，未能控制好pH值的影响而易出现假阳性，美国和日本申请的两项国际专利大同小异，其用0.9～1.1mL的实验样品比约0.1～0.2mL的检测试剂混合，实验样品为晨尿中段尿，检测试剂是由10g焦亚硫酸钠、10mL浓缩的磷酸、5g碱性品红、约1000mL水组成的pH=1.88的溶液，约2～5分钟后观察颜色生成。

[0004] 现有技术有两方面问题：其主要存在有以下两种问题：1.尿液的pH变化范围较大，而检测试剂缓冲能力不够，导致反应pH值有较大的变化，结果易受pH值的影响从而出现较大偏差。2.选择反应的pH值较高，在此pH值下显色剂自身显色且底色较深，会掩盖尿液中醛类与检测试剂产生的颜色反应，影响结果的准确性，甚至出现假阳性。

发明内容

[0005] 针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种氧化损伤体外检测方法及检测试剂盒，其目的在于采用缓冲液和显色剂双组份试剂，两个步骤的测试方法，由此解决检测试剂缓冲能力不够、反应pH值较高导致结果准确性低的技术问题。

[0006] 为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种氧化损伤检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

[0007] （1）采集尿样作为检验样品；

[0008] （2）向检验样品中加入pH值在3至5之间的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH值在3.7至3.9之间或4.5至5之间；

[0009] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红显色剂，混合均匀后使得品红在最终混合液中浓度在0.04g/L至1.4g/L之间，静置3～5min，根据溶液颜色深浅或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。

[0010] 优选地，所述的检测方法，其所述步骤（1）中采集的尿样为早晨中段尿样。

[0011] 优选地，所述的检测方法，其所述步骤（2）中磷酸盐缓冲溶液的浓度为4mol/L至6mol/L。

[0012] 优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）品红显色剂，pH值在1.0至4.0之间，每升包括碱性品红0.5g至15g和亚硫酸盐0.03mol至0.35mol。

[0013] 优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）显色剂，其制备步骤包括：

[0014] （a）每称取0.1g-3g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液；

[0015] （b）向碱性品红溶液中加入亚硫酸盐0.006mol至0.07mol，溶解后用强酸调节pH值在1.0至4.0。

[0016] （c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例0.5%至30%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤。

[0017] 优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）显色剂的制备方法步骤（b）中的强酸为浓硫酸、浓硝酸和/或浓盐酸。

[0018] 优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）当溶液颜色在无色至微黄之间时，确定氧化损伤程度为无损伤，溶液颜色在微黄至浅红之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤，溶液颜色在浅红至红色之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤，溶液颜色在红色至深红之间时，确定氧化损伤程度为重度损伤，溶液颜色在深红至紫色之间时，确定氧化损伤程度为极重损伤。

[0019] 优选地，所述的检测方法，其所述步骤（3）当溶液348nm处吸光值在0-0.2之间时，确定氧化损伤程度为无损伤，当溶液348nm处吸光值在0.2-0.4之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.4-0.6之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.6-0.8之间时，确定氧化损伤程度为重度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.8-1.0之间时，确定氧化损伤程度为极重损伤。

[0020] 按照本发明的另一方面，提供了一种氧化损伤检测试剂盒，其特征在于，包括缓冲剂、显色剂和比色卡；所述缓冲剂为pH值在3.0至5.0之间，浓度在4mol/L至6mol/L的磷酸盐缓冲液；所述显色剂为无色的碱性品红溶液，所述品红溶液包括，0.5g/L至15g/L的碱性品红，0.03mol/L至0.35mol/L的亚硫酸盐，pH值在1.0至4.0之间；所述比色卡包括5种颜色分别对应无损伤、轻度损伤、中度损伤、重度损伤和极重损伤。

[0021] 优选地，所述的试剂盒，其缓冲剂和显色剂的体积比为1:0.1-2。

[0022] 优选地，所述的试剂盒，其比色卡对应无损伤的颜色为无色至微黄，对应轻度损伤的颜色为微黄至浅红，对应中度损伤的颜色为浅红至红色，对应重度损伤的颜色为红色至深红，对应极重损伤的颜色为深红至紫色。

[0023] 总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：

[0024] 一.稳定性更好。

[0025] 1.基于溶液会随二氧化硫的逐渐释放和pH值的升高，有自身显色的特点，我们把pH值调至更低的范围，比现有技术更加稳定、可靠。

[0026] 2.用浓硫酸代替浓磷酸。通过我们的实验数据可得，用浓硫酸配制的显色剂要比用浓磷酸配制的保存时间要长和稳定性要好。

[0027] 3.采用双组份的形式和缓冲能力更强的缓冲溶液。采用双组份可以使显色剂和缓冲溶液分开，有力降低试剂的pH值，使试剂更稳定、保存时间更长。用1-7mol/L的磷酸钠盐缓冲溶液，缓冲能力更强，使尿液因pH值和缓冲能力的不同而导致反应pH值不同，从而导致反应后颜色变化程度不同的问题得以真正解决。

[0028] 二.相关性更好。本显色方法与公认的检测丙二醛试剂盒TBA法对比，检测结果的相关性更高。

[0029] 三.反应底色：本试剂与尿液反应的pH值较低，在此pH值条件下，显色剂自身显色的颜色值很低，而尿液与试剂反应的反应速率较快，能够满足要求。

[0030] 四.储存条件。相对于现有技术中要求的避光、密封和4℃低温保存相比，我们产品可以在避光、密封的条件下室温存放，且保存时间会更长。

[0031] 五.制备过程更快、更方便、更环保。相对于现有技术，在除色过程中我们用活性炭来取代骨灰，因活性炭的高效的吸附能力和可以经过去吸附等处理后重复利用的优点，不仅节省了用材，而且更加方便和环保。

附图说明

[0032] 图1是本发明提供的氧化损伤体外检测方法的流程图；

[0033] 图2是spss软件分析TBA法测量得到的吸光值与总醛量相关性结果图；

[0034] 图3是溶液颜色和反应时间的关系图；

[0035] 图4是品红显色剂底色吸光值随反应体系pH值得变化关系图。

[0036] 在所有附图中，相同的附图标记用来表示相同的元件或结构，其中：

具体实施方式

[0037] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

[0038] 本发明提供的氧化损伤检测方法，包括以下步骤：

[0039] （1）采集尿样作为检验样品。优选地，采集早晨中段尿样作为检验样品。

[0040] （2）向检验样品中加入pH值在3至5之间的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH至在3.7至3.9之间或4.5至5之间，优选pH值范围为3.7至3.9，更有选pH值为3.8。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度优选为4mol/L至6mol/L，更优选为5mol/L。在此浓度下，磷酸盐缓冲能力强，使用体积小。

[0041] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红浓显色剂使得品红浓度在0.04g/L至1.4g/L之间，混合均匀后，静置直至溶液颜色不再变深，根据溶液颜色损伤程度约高或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。优选地，静置4分钟后，溶液颜色较稳定，适合观察或吸光度测定。所述品红显色剂，pH值在1.0至4.0之间，每升包括碱性品红0.5g至15g和亚硫酸盐0.03mol至0.35mol，优选地，包括碱性品红2.5g。所述显色剂，其制备步骤包括（：a）每称取0.1g-3g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液，优选地，称取碱性品红0.5g（；b）向碱性品红溶液中加入0.006mol至0.07mol亚硫酸盐，溶解后用强酸调节pH值在1.0至4.0；所述强酸可为浓盐酸、浓硫酸和/或浓硝酸，优选地，采用浓硫酸调节pH值，由于采用浓硫酸较之浓磷酸能获得更长的保存时间和更好的试剂稳定性；所述浓盐酸为质量分数超过34%的盐酸溶液，常用为质量分数37%的盐酸，所述浓硫酸为质量分数超过70%的硫酸溶液，常用为质量分数为98%的硫酸，所述浓硝酸为质量分数超过60%的硝酸溶液，常用为质量分数65%的硝酸；（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例0.5%至30%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤；所述纯净活化的活性炭优选为盐酸处理的活性炭，所述盐酸浓度为1%至8%（质量比）。

[0042] 当溶液颜色在无色至微黄之间时，确定氧化损伤程度为无损伤，溶液颜色在微黄至浅红之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤，溶液颜色在浅红至红色之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤，溶液颜色在红色至深红之间时，确定氧化损伤程度为重度损伤，溶液颜色在深红至紫色之间时，确定氧化损伤程度为极重损伤。所述颜色，按照三基色编码分别为：微黄：Y10M0C0；浅红：Y10M10C0；红色：Y10M40C0；深红：Y10M80C0；紫色：Y10M80C60。其中，Y、M、C分别表示三基色中的黄、品红和蓝色。相应的，可采用溶液348nm处吸光值作为更精确的判断标准：当溶液348nm处吸光值在0-0.2之间时，确定氧化损伤程度为无损伤，当溶液348nm处吸光值在0.2-0.4之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.4-0.6之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.6-0.8之间时，确定氧化损伤程度为重度损伤，当溶液348nm处吸光值在0.8-1.0之间时，确定氧化损伤程度为极重损伤。

[0043] 本发明提供的氧化损伤检测试剂盒，包括缓冲剂、显色剂和比色卡；所述缓冲剂为pH值在3.0至5.0之间，浓度在4mol/L至6mol/L的磷酸盐缓冲液；所述显色剂为无色的碱性品红溶液，所述品红溶液包括，0.5g/L至15g/L的碱性品红，0.03mol/L至0.35mol/L的亚硫酸盐，pH值在1.0至4.0之间；所述比色卡包括5种颜色分别对应无损伤、轻度损伤、中度损伤、重度损伤和极重损伤。所述缓冲剂和显色剂的体积比为1:0.1-2。所述比色卡对应无损伤的颜色为无色至微黄，对应轻度损伤的颜色为微黄至浅红，对应中度损伤的颜色为浅红至红色，对应重度损伤的颜色为红色至深红，对应极重损伤的颜色为深红至紫色。所述颜色，按照三基色编码分别为：微黄：Y10M0C0；浅红：Y10M10C0；红色：Y10M40C0；深红：Y10M80C0；紫色：Y10M80C60。其中，Y、M、C分别表示三基色中的黄、品红和蓝色。

[0044] 一般认为尿液中丙二醛量可用于测定氧化损伤，本发明提供的方法能快速测定尿液中的总醛量，通过定量实验得到不同pH值下总醛量和丙二醛在尿液中的浓度如表1所示，其中吸光度值按照本发明提供的方法测定，与总醛量成正比，MDA含量即硫代巴比妥酸检测法（TBA法）测定的丙二醛含量。TBA法测量得到的吸光值与总醛量（MDA含量）的关系用统计软件spss18.0进行相关性分析，结果见图2。由图2可知，TBA法测量得到的吸光值与总醛量的相关性的P值为0.025，小于0.05，因此TBA法测量得到的吸光值与总醛量相关，也即丙二醛量与本发明提供的测量方法测量得到的吸光值相关。由于尿样中丙二醛量可体现氧化损伤程度，因此本方法检测得到的尿样中总醛量也可作为氧化损伤程度的指标。

[0045] 表1.显色法和TBA法实测尿样的结果

[0046]

[0047] 用浓度为20ppm（百万分比）的甲醛溶液，按照本发明提供的氧化损伤检测方法，执行步骤（3）加入品红显色剂的操作后，用722S可见分光光度计在348nm处测定吸光度值（OD值）随时间的变化关系如表2：

[0048] 表2.不同时间点的吸光度值

[0049]

[0050] 按照表2的结果，绘制吸光值与反应时间的关系图，如图3所示，表2和图3能清楚的显示，在反应3.5分钟后，溶液颜色、吸光值趋于稳定。因此本发明优选在反应开始后，静置4分钟观察溶液颜色和吸光值，结果较为准确，具有可比性。

[0051] 本发明使用的品红显色剂，其底色随反应体系的pH值变化而有所不同。取10ml品红显色剂加入到不同pH值的相同体积的对照液中，对照液不含醛类，使品红实际在不同的pH值下自身显色，反应完成后，溶液颜色不在变深，用722S可见分光光度计348nm出测定吸光度(OD值)，其结果见表3。

[0052] 表3.不同pH值下的吸光度值

[0053]

[0054] 按照表3的结果，绘制品红显色剂底色吸光值随反应体系pH值的变化关系图，如图4所示。由图4可看出，反应体系pH值在3.7至3.9之间或者pH值在4.5至5之间时，吸光度值都相对稳定，可进行检测；而反应体系pH值在4.5至5之间时，品红显色剂底色较深，会掩盖尿液与实际反映的颜色，检测不灵敏；反应体系pH至在3.7至3.9时，品红显色剂底色吸光值较小，且变化不大，检测灵敏准确。因此优选地，步骤（2）所述溶液pH值在3.7至3.9之间；更优选地，使得pH至为3.8。

[0055] 以下为实施例：

[0056] 实施例1

[0057] 一种氧化损伤检测方法，包括以下步骤：

[0058] （1）采集待测人员早晨中段尿样作为检验样品。

[0059] （2）向检验样品中加入pH值为3.5的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH至为3.7。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为6mol/L。

[0060] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红浓显色剂使得品红浓度为0.04g/L，混合均匀后，静置4分钟，根据溶液颜色损伤程度约高或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。所述品红显色剂，pH值为1.0，每升包括碱性品红0.5g和亚硫酸盐0.03mol。所述显色剂，其制备步骤包括：（a）每称取0.1g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液（；b）向碱性品红溶液中加入0.006mol亚硫酸盐，溶解后用浓硫酸调节pH值为1.0；（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例0.5%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤；所述纯净活化的活性炭优选为盐酸处理的活性炭，所述盐酸浓度为1%（质量比）。

[0061] 溶液颜色在微黄至浅红之间，溶液348nm处吸光值为0.46，在0.4-0.6之间时，确定氧化损伤程度为轻度损伤。

[0062] 实施例2

[0063] 一种氧化损伤检测方法，包括以下步骤：

[0064] （1）采集待测人员早晨中段尿样作为检验样品。

[0065] （2）向检验样品中加入pH值为3.2的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH至为3.8。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为5mol/L。

[0066] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红浓显色剂使得品红浓度为0.5g/L，混合均匀后，静置3分钟，根据溶液颜色损伤程度约高或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。所述品红显色剂，pH值为2.0，每升包括碱性品红2.5g和亚硫酸盐0.1mol。所述显色剂，其制备步骤包括：（a）每称取0.5g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液；（b）向碱性品红溶液中加入0.03mol亚硫酸盐，溶解后用浓盐酸调节pH值为2.0；（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例10%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤；所述纯净活化的活性炭优选为盐酸处理的活性炭，所述盐酸浓度为4%（质量比）。

[0067] 溶液颜色在浅红至红色之间时，溶液348nm处吸光值在0.4-0.6之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤。

[0068] 实施例3

[0069] 一种氧化损伤检测方法，包括以下步骤：

[0070] （1）采集待测人员早晨中段尿样作为检验样品。

[0071] （2）向检验样品中加入pH值为3的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH至为3.9。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为6mol/L。

[0072] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红浓显色剂使得品红浓度为1.4g/L，混合均匀后，静置5分钟，根据溶液颜色损伤程度约高或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。所述品红显色剂，pH值为4.0，每升包括碱性品红15g和亚硫酸盐0.35mol。所述显色剂，其制备步骤包括：（a）每称取3g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液；（b）向碱性品红溶液中加入0.07mol亚硫酸盐，溶解后用浓硝酸调节pH值为4.0；（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例30%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤；所述纯净活化的活性炭优选为盐酸处理的活性炭，所述盐酸浓度为8%（质量比）。

[0073] 溶液颜色在红色至深红之间，溶液348nm处吸光值为0.77，在0.6-0.8之间，确定氧化损伤程度为重度损伤。

[0074] 实施例4

[0075] 一种氧化损伤检测方法，包括以下步骤：

[0076] （1）采集待测人员早晨中段尿样作为检验样品。

[0077] （2）向检验样品中加入pH值为4的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH至为4.5。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为4mol/L。

[0078] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红浓显色剂使得品红浓度为0.08，混合均匀后，静置6分钟，根据溶液颜色损伤程度约高或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。所述品红显色剂，pH值为2.0，每升包括碱性品红0.5g和亚硫酸盐0.03mol。所述显色剂，其制备步骤包括：（a）每称取0.1g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液（；b）向碱性品红溶液中加入0.006mol亚硫酸盐，溶解后用混合酸调节pH值为2.0；（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例10%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤；所述纯净活化的活性炭优选为盐酸处理的活性炭，所述盐酸浓度为1%、4%（质量比）。

[0079] 溶液颜色在深红至紫色之间，溶液348nm处吸光值为0.82，在0.8-1.0之间，确定氧化损伤程度为极重损伤。

[0080] 实施例5

[0081] 一种氧化损伤检测方法，包括以下步骤：

[0082] （1）采集待测人员早晨中段尿样作为检验样品。

[0083] （2）向检验样品中加入pH值为3.5的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH至为4.8。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为4.5mol/L。

[0084] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红浓显色剂使得品红浓度为1.0g/L，混合均匀后，静置4分钟，根据溶液颜色损伤程度约高或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。所述品红显色剂，pH值为1.2，每升包括碱性品红2.5g和亚硫酸盐0.1mol。所述显色剂，其制备步骤包括：（a）每称取0.5g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液；（b）向碱性品红溶液中加入0.02mol亚硫酸盐，溶解后用浓盐酸和浓硫酸的混合酸调节pH值为1.2；（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例10%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤；所述纯净活化的活性炭优选为盐酸处理的活性炭，所述盐酸浓度为4%（质量比）。

[0085] 溶液颜色在无色至微黄之间，溶液348nm处吸光值为0.10，在0-0.2之间、在0.2-0.4之间，确定氧化损伤程度为无损伤。

[0086] 实施例6

[0087] 一种氧化损伤检测方法，包括以下步骤：

[0088] （1）采集待测人员早晨中段尿样作为检验样品。

[0089] （2）向检验样品中加入pH值为5的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，使得溶液pH至为5。所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为6mol/L。

[0090] （3）向步骤（2）中的混合液，加入品红浓显色剂使得品红浓度为1.4g/L，混合均匀后，静置5分钟，根据溶液颜色损伤程度约高或348nm吸光值，按照溶液颜色越深或吸光值越大氧化损伤程度越高的原则，确定其氧化损伤程度。所述品红显色剂，pH值为1.0，每升包括碱性品红15g和亚硫酸盐0.35mol。所述显色剂，其制备步骤包括：（a）每称取3g碱性品红试剂溶于200ml水，形成碱性品红溶液；（b）向碱性品红溶液中加入0.07mol亚硫酸盐，溶解后用浓硫酸和浓硝酸的混合酸调节pH值为1.0；（c）向步骤（b）得到的溶液中，按照质量比例10%逐渐加纯净活化的活性炭，同时间断震荡至溶液无色，过滤；所述纯净活化的活性炭优选为盐酸处理的活性炭，所述盐酸浓度为8%（质量比）。

[0091] 溶液颜色在浅红至红色之间时，溶液348nm处吸光值为0.53，在0.4-0.6之间时，确定氧化损伤程度为中度损伤。

[0092] 实施例7

[0093] 一种氧化损伤检测试剂盒，包括缓冲剂、显色剂和比色卡；所述缓冲剂为pH值为3.0，浓度为4mol/L的磷酸盐缓冲液；所述显色剂为无色的碱性品红溶液，所述品红溶液包括，0.5g/L的碱性品红，0.03mol/L的亚硫酸盐，pH值为1.0；所述比色卡包括5种颜色分别对应无损伤、轻度损伤、中度损伤、重度损伤和极重损伤。所述缓冲剂和显色剂的体积比为1:
0.1。所述比色卡对应无损伤的颜色为无色至微黄，对应轻度损伤的颜色为微黄至浅红，对应中度损伤的颜色为浅红至红色，对应重度损伤的颜色为红色至深红，对应极重损伤的颜色为深红至紫色。所述颜色，按照三基色编码分别为：微黄：Y10M0C0；浅红：Y10M10C0；红色：
Y10M40C0；深红：Y10M80C0；紫色：Y10M80C60。其中，Y、M、C分别表示三基色中的黄、品红和蓝色。

[0094] 实施例8

[0095] 一种氧化损伤检测试剂盒，包括缓冲剂、显色剂和比色卡；所述缓冲剂为pH值为4.0，浓度为5mol/L的磷酸盐缓冲液；所述显色剂为无色的碱性品红溶液，所述品红溶液包括，2.5g/L的碱性品红，0.1mol/L的亚硫酸盐，pH值为2.0；所述比色卡包括5种颜色分别对应无损伤、轻度损伤、中度损伤、重度损伤和极重损伤。所述缓冲剂和显色剂的体积比为1:
1。所述比色卡对应无损伤的颜色为无色至微黄，对应轻度损伤的颜色为微黄至浅红，对应中度损伤的颜色为浅红至红色，对应重度损伤的颜色为红色至深红，对应极重损伤的颜色为深红至紫色。所述颜色，按照三基色编码分别为：微黄：Y10M0C0；浅红：Y10M10C0；红色：
Y10M40C0；深红：Y10M80C0；紫色：Y10M80C60。其中，Y、M、C分别表示三基色中的黄、品红和蓝色。

[0096] 实施例9

[0097] 一种氧化损伤检测试剂盒，包括缓冲剂、显色剂和比色卡；所述缓冲剂为pH值为5.0，浓度为6mol/L的磷酸盐缓冲液；所述显色剂为无色的碱性品红溶液，所述品红溶液包括，15g/L的碱性品红，0.35mol/L的亚硫酸盐，pH值为4.0；所述比色卡包括5种颜色分别对应无损伤、轻度损伤、中度损伤、重度损伤和极重损伤。所述缓冲剂和显色剂的体积比为1:
2。所述比色卡对应无损伤的颜色为无色至微黄，对应轻度损伤的颜色为微黄至浅红，对应中度损伤的颜色为浅红至红色，对应重度损伤的颜色为红色至深红，对应极重损伤的颜色为深红至紫色。所述颜色，按照三基色编码分别为：微黄：Y10M0C0；浅红：Y10M10C0；红色：
Y10M40C0；深红：Y10M80C0；紫色：Y10M80C60。其中，Y、M、C分别表示三基色中的黄、品红和蓝色。

[0098] 本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。