一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法

摘要

本发明提供了一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法，它的主要特征在于将药食同源的杜仲叶和人用药乳酶生生物发酵生产技术、玉米生产淀粉和葡萄糖生产技术有机结合在一起，经液体和固态双重发酵，促进其主要活性成分乳酸肠链球菌的生长繁殖，其代谢产物甘露聚糖肽等有效成分成正比例上升，营养物质得到进一步降解，各成分之间协同作用，增强和拓宽了产品的作用和功效。此外，本发明显著缩短了生产环节，降低了60%玉米用量，有效利用60%的可再生植物资源，减少玉米加工成固态葡萄糖生产过程中的能源消耗，具有显著地经济和社会效益。

权利要求

1.一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法，它的制备原料为玉米、杜仲叶、淀粉酶、糖化酶和乳酸肠链球菌，其特征在于：其制备步骤如下：

1）制浆：将玉米和杜仲叶除去杂质后，按玉米和杜仲叶粉质量比为4:1比例混合制得混合料，将上述混合料用净水浸泡24小时，其中混合料和净水的质量比例为1:1，粉碎制成

30%～50%的玉米杜仲叶混合浆料；

2）糊化：将上述浆料加温并控制温度70～80℃，糊化10～30min；

3）液化：调整糊化后的浆料PH为6～7，加入中温淀粉酶，中温淀粉酶用量为每克淀粉

6～12个单位，控制液化温度70～80℃，液化至稀碘液检测由蓝色转为稀碘液原色；

4）糖化：将上述液化好的浆料调整PH为4～5，控制温度40～60℃，加入糖化酶，糖化酶的用量为每克淀粉100～200个单位，糖化1～6小时；

5）于上述糖化好的浆料中，补充浆料总重1～2%的氮源，补充浆料总重0.3～2%无机盐以及浆料总重50%的杜仲叶粉；其中氮源为蛋白胨1-1.5%、牛肉膏0.3-0.5%，无机盐为其中氯化钠0.3～0.5%，碳酸钙0.5～1.5%；

6）将上述混合料通蒸汽加热115℃灭菌25～30 min后，迅速冷却降温至38～40℃；

7）接种三级乳酸肠链球菌的发酵液，在无菌条件下接种量为灭菌后固体物料质量百分比的3-5%，物料与发酵液充分混合后，在洁净条件下，转入达到净化级别的固体发酵间，控制固体发酵温度38～40℃，培养发酵38-42小时；

8）将发酵好的物料转入沸腾干燥间，控制沸腾干燥温度40～44℃，待物料水分达到

5-10%时，即可取样送检，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装；

所述的三级乳酸肠链球菌的发酵液培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2-4%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化钠0.2-0.5%，葡萄糖1-4%，碳酸钙0.5-2.5%，以上原料均为质量百分比，培养液调PH6.8-7.5，接种量按照体积百分比1-5%进行接种，36～40℃培养；培养时间为一级、二级培养20~22小时，三级培养16~18小时。

2.根据权利要求1所述的一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法，其特征在于：所述的三级乳酸肠链球菌的发酵液的制备方法如下：

1）培养基的制备：按照上述配方称取相应原料，混合均匀后进行定容，并分别置于

150mm试管、250ml三角瓶、1000ml三角瓶中，培养基的装入量分别为9~10ml、150~170ml、

750~800ml，控制灭菌温度115~121℃，灭菌时间25~30min，灭菌后分别冷却至室温置于冰箱冷藏备用或直接供接、转种使用；

2）液体菌种制备：取生产用肠链球菌斜面菌种1支，按无菌操作要求接种一级试管，经37℃-39℃恒温培养20-22小时，一级试管菌种成熟后转种二级三角瓶，同样经

37℃-39℃恒温培养20-22小时，二级三角瓶菌种成熟后转种三级三角瓶、三级三角瓶菌种经37℃-39℃恒温培养16-18小时成熟后采用火焰接种法转种300-500L不锈钢种子罐；保持培养发酵温度37~40℃，间隔1小时搅拌5-10分钟，培养发酵时间22~44小时，300-500L不锈钢种子罐菌种成熟后接种于前述灭菌后的固体发酵培养基中。

说明书

一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及到乳酶生，具体来说是一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法。

背景技术

[0002] 人用药品乳酶生是一种乳酸肠链球菌的活菌制剂,其主要临床药理作用为肠链球菌发酵糖产生乳酸抑制肠道腐败菌生长，调整肠道菌群平衡实现预防和治疗肠道疾病的目的。卫生部部标准规定：乳酶生含活性肠链球菌数每克不少于1000万个，粉剂有效期两年，片剂有效期一年半。乳酶生为助消化药，用于小儿绿便和肠道异常发酵引起的肠胀气、腹泻。该品种在我国的生产历史长达40余年，至今仍然畅销不衰。

[0003] 据生产企业介绍，乳酶生产量的80%都被大量用于畜禽当作饲料添加剂使用，且应用效果良好，预防和治疗畜禽肠道疾病以及促进畜禽生长发育效果十分显著。

[0004] 如图1所示为现行的乳酶生的生产工艺，该种工艺在近几十年的应用中均未有较大的改进。本发明在现有生产工艺的基础上，结合“玉米生产淀粉工艺”和“双酶法生产葡萄糖工艺”，利用杜仲叶较高的药用价值和丰富的营养成分，与乳酸肠链球菌发酵生产有机结合，提供了一种利用酶解玉米粉和杜仲叶粉产物作为乳酸肠链球菌发酵培养基，经液态和固态双重发酵，生产畜禽饲料添加剂及其制备方法。

发明内容

[0005] 本发明提供了一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法，它是一种无毒无害、绿色纯天然的畜禽饲料添加剂，可部分替代抗生素在饲料中的应用，消除抗生素大量应用所带来的不良影响。

[0006] 本发明实现上述效果采用以下技术方案：

[0007] 一种玉米和杜仲叶制畜禽用乳酶生的制备方法，其制备步骤如下：

[0008] 1）制浆：将玉米和杜仲叶除去杂质后，按玉米和杜仲叶粉质量比为4:1比例混合制得混合料，将上述混合料用净水浸泡24小时，其中混合料和净水的质量比例为1:1，粉碎制成30%～50%的玉米杜仲叶混合浆料；

[0009] 2）糊化：将上述浆料加温并控制温度70～80℃，糊化10～30min；

[0010] 3）液化：调整糊化后的浆料PH为6～7，加入中温淀粉酶，中温淀粉酶用量为每克淀粉6～12个单位，控制液化温度70～80℃，液化至稀碘液检测由蓝色转为稀碘液原色；

[0011] 4）糖化：将上述液化好的浆料调整PH为4～5，控制温度40～60℃，加入糖化酶，糖化酶的用量为每克淀粉100～200个单位，糖化1～6小时；

[0012] 5）于上述糖化好的浆料中，补充浆料总重1～2%的氮源，补充浆料总重0.3～2%无机盐以及浆料总重50%的杜仲叶粉；其中氮源为蛋白胨1-1.5%、牛肉膏0.3-0.5%，无机盐为其中氯化钠0.3～0.5%，碳酸钙0.5～1.5%；

[0013] 6）将上述混合料通蒸汽加热115℃灭菌25～30 min后，迅速冷却降温至38～40℃；

[0014] 7）接种三级乳酸肠链球菌的发酵液，在无菌条件下接种量为灭菌后固体物料的3-5%，物料与发酵液充分混合后，在洁净条件下，转入达到净化级别的固体发酵间，控制固体发酵温度38～40℃，培养发酵38-42小时；

[0015] 8）将发酵好的物料转入沸腾干燥间，控制沸腾干燥温度40～44℃，待物料水分达到5-10%时，即可取样送检，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装。

[0016] 所述的三级乳酸肠链球菌的发酵液培养基配方和发酵工艺参数为：

[0017] 蛋白胨2-4%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化钠0.2-0.5%，葡萄糖1-4%，碳酸钙0.5-2.5%，培养液调PH6.8-7.5，接种量1-5%，36 ～ 40℃培养；培养时间为一级、二级培养20-22 小时，三级培养16-18 小时。

[0018] 所述的三级乳酸肠链球菌的发酵液的制备方法如下：

[0019] 1）培养基的制备：按照上述配方称取相应原料，混合均匀后进行定容，并分别置于150mm试管、250ml三角瓶、1000ml三角瓶中，培养基的装入量分别为9—10ml、150—170ml、
750—800ml，控制灭菌温度115~121℃，灭菌时间25~30min，灭菌后分别冷却至室温置于冰箱冷藏备用或直接供接、转种使用；

[0020] 2）液体菌种制备：取生产用肠链球菌斜面菌种1支，按无菌操作要求接种一级试管，一级试管菌种成熟后转种二级三角瓶、二级三角瓶菌种成熟后转种三级三角瓶、三级三角瓶菌种成熟后转种300-500L不锈钢种子罐；培养发酵温度37~40℃，培养发酵时间22~44小时，300-500L不锈钢种子罐菌种成熟后接种于前述灭菌后的固体发酵培养基中。

[0021] 本发明的主要特征在于将药食同源的杜仲叶和人用药乳酶生生物发酵生产技术、玉米生产淀粉和葡萄糖生产技术有机结合在一起，经液体和固态双重发酵，促进其主要活性成分乳酸肠链球菌的生长繁殖，其代谢产物甘露聚糖肽等有效成分成正比例上升，营养物质得到进一步降解，各成分之间协同作用，增强和拓宽了产品的作用和功效。此外，本发明显著缩短了生产环节，降低了60%玉米用量，有效利用60%的可再生植物资源，减少玉米加工成固态葡萄糖生产过程中的能源消耗，具有显著地经济和社会效益。

附图说明

[0022] 图１为现行的人用药品乳酶生的生产工艺。

[0023] 图２为本发明的工艺流程。

具体实施方式

[0024] 为了能清楚的了解本发明的技术手段，以下特举较佳实例详细说明：

[0025] 实施例1：

[0026] 首先是1000ml三级乳酸肠链球菌发酵液的制备

[0027] １）培养基制备：

[0028] ①称取蛋白胨30g，牛肉膏3g，氯化钠3.5g，乳糖或葡萄糖30g，碳酸钙18g；

[0029] ②现将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于500ml的纯净水中，加热溶解，调节PH6.8后，用纯净水补充到1500ml；

[0030] ③将上述制备好的培养基分装于Φ15×150mm试管中（每支9ml），250ml三角瓶中（每瓶150ml）、1000ml三角瓶中（每瓶750ml），同时加入称量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于灭菌锅中，119℃灭菌28 min后，冷却备用。

[0031] ２）发酵液的制备：

[0032] 取生产用斜面一支，按斜面转试管操作要求转接乳酸肠链球菌于一级试管中38℃培养22小时，然后取发酵好的一级发酵液按4%接种量接种到含有150ml二级培养液的三角瓶中40℃培养22小时，然后取发酵好的二级发酵液按4%接种量接种到含有750ml三级培养液的三角瓶中40℃培养18小时。

[0033] 乳酶生的制备方法如下：

[0034] 1）原料的预处理：将玉米和杜仲叶除杂粉碎，分别粉碎到30目备用；将标准乳酸肠链球菌菌种，按规定进行鉴定强化后，转入生产用斜面，制得斜面菌种，供一级培养发酵用。

[0035] 2）制浆糊化：分别取上述处理的玉米粉4kg，杜仲叶粉1kg，置入30L不锈钢发酵罐，加入10kg水，制成浆料，加温到80℃，糊化25min，调整糊化后的浆料PH为6.8，加入中温淀粉酶7.2g，控制液化温度76℃，以稀碘液检验，液化液由蓝色变为稀碘液原色即为液化终点。

[0036] 3）糖化：启动搅拌，将液化好的浆料调PH为5.0，控制温度50℃，缓缓加入糖化酶6.9克，保温糖化5小时，糖化结束后，补充0.8kg碳酸钙和6kg杜仲叶粉，调整物料含水量为45%，调整PH为7.2，加热灭菌，119℃灭菌28 min后，迅速冷却降温至40℃。火焰法接种预先准备好的三级乳酸肠链球菌发酵液1000ml，关闭接种阀门，充分搅拌均匀后转无菌发酵间。

[0037] 4）固体发酵培养：将混合乳酸肠链球菌发酵液的固体物料均匀分摊在带有不锈钢丝网容器的不锈钢丝网上，控制料层厚度在8.5cm，控制料温度在40℃，发酵42小时，经检PH下降到4.8时，即可转入44℃的电热恒温干燥箱中烘干，待物料水分达到8%时，即可取样送检，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装。

[0038] 实施例2

[0039] 100L三级乳酸肠链球菌发酵液的制备：

[0040] １）一二三级培养基制备：

[0041] ①称取蛋白胨30g，牛肉膏4g，氯化钠4g，乳糖或葡萄糖32g，碳酸钙20g；

[0042] ②现将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于500ml的纯净水中，加热溶解，调节PH7.0后，用纯净水补充到1500ml；

[0043] ③将上述制备好的培养基分装于Φ15×150mm试管中（每支9ml），250ml三角瓶中（每瓶150ml）、1000ml三角瓶中（每瓶750ml），同时加入称量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于灭菌锅中，120℃灭菌25 min后，冷却备用。

[0044] ２）100L发酵液制备：

[0045] ①取生产用斜面一支，按斜面转试管操作要求转接乳酸肠链球菌于一级试管中39℃培养22小时，然后取发酵好的一级发酵液按4%接种量接种到含有150ml二级培养液的三角瓶中40℃培养22小时，然后取发酵好的二级发酵液按4%接种量接种到含有750ml三级培养液的三角瓶中40℃培养18小时。

[0046] ②称取蛋白胨3kg，牛肉膏0.4kg，氯化钠0.4kg，乳糖或葡萄糖3kg，碳酸钙2.0kg。先将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于20L的纯净水中，加热溶解，调节PH为7.0后，全部转移到300L不锈钢发酵罐中，用水补充到80L，关闭发酵罐投料口，先用夹套升温到80℃后，两路或三路进蒸汽升温到120℃，保温120℃灭菌25min后迅速冷却到38℃后，火焰接种法转接三级发酵液8L，38℃培养18小时即可。

[0047] 乳酶生的制备方法如下：

[0048] 1）原料的预处理：将玉米和杜仲叶除杂粉碎，分别粉碎到30目备用。将标准乳酸肠链球菌菌种，按规定进行鉴定强化后，转入生产用斜面，制得斜面菌种，供一级培养发酵用。

[0049] 2）制浆糊化：分别取上述处理的玉米粉400kg，杜仲叶粉100kg，置入5m3灭菌器中，加入800kg水，制成浆料，加温到75℃，糊化25min。调整糊化后的浆料PH为6.5，加入中温淀粉酶700g，控制液化温度75℃，以稀碘液检验，液化液由蓝色变为稀碘液原色即为液化终点。

[0050] 3）糖化：启动搅拌，将液化好的浆料调PH5.2，控制温度50℃，缓缓加入糖化酶700克，保温糖化4.5小时。糖化结束后，补充20kg碳酸钙和700kg杜仲叶粉，调整PH为7.0，加热灭菌，120℃灭菌25min后，迅速冷却降温至40℃。接种预先准备好的三级乳酸肠链球菌发酵液100L，关闭接种阀门，充分搅拌均匀后转无菌发酵间。

[0051] 4）固体发酵培养：将混合乳酸肠链球菌发酵液的固体物料均匀分摊在带有不锈钢丝网容器的不锈钢丝网上，控制料层厚度在7.5cm，控制料温度在40℃，发酵42小时，经检PH下降到4.5时停止发酵，收集无菌固体发酵间发酵好的固体物料，进行沸腾干燥，控制沸腾干燥温度42℃，控制干燥后水分8%，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装。

[0052] 实施例3

[0053] 150L三级乳酸肠链球菌发酵液的制备：

[0054] １）一二三级培养基制备：

[0055] ①称取蛋白胨30g，牛肉膏4g，氯化钠3.5g，乳糖或葡萄糖35g，碳酸钙10g；

[0056] ②将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于500ml的纯净水中，加热溶解，调节PH6.5后，用纯净水补充到1500ml；

[0057] ③将上述制备好的培养基分装于Φ15×150mm试管中（每支9ml），250ml三角瓶中（每瓶150ml）、1000ml三角瓶中（每瓶750ml），同时加入称量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于灭菌锅中，115℃灭菌30 min后，冷却备用。

[0058] ２）150L发酵液制备：

[0059] ①取生产用斜面一支，按斜面转试管操作要求转接乳酸肠链球菌于一级试管中37℃培养20小时，然后取发酵好的一级发酵液按4%接种量接种到含有150ml二级培养液的三角瓶中37℃培养20小时，然后取发酵好的二级发酵液按4%接种量接种到含有750ml三级培养液的三角瓶中37℃培养16小时；

[0060] ②称取蛋白胨6kg，牛肉膏0.8kg，氯化钠0.7kg，乳糖或葡萄糖4-8kg，碳酸钙1.5kg。先将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于50L的纯净水中，加热溶解，调节PH6.5后，全部转移到500L不锈钢发酵罐中，用水补充到100L，关闭发酵罐投料口，先用夹套升温到80℃后，两路或三路进蒸汽升温到115℃，保温115℃灭菌25-30min后迅速冷却到
38-40℃后，火焰接种法转接三级发酵液7L，37℃培养16小时即可。

[0061] 乳酶生的制备方法如下：

[0062] 1）原料的预处理：将玉米和杜仲叶除杂粉碎，分别粉碎到30目备用，将标准乳酸肠链球菌菌种，按规定进行鉴定强化后，转入生产用斜面，制得斜面菌种，供一级培养发酵用。

[0063] 2）制浆糊化：分别取上述处理的玉米粉800kg，杜仲叶粉200kg，置入5m3灭菌器中，加入1000kg水，制成浆料，加温到70℃，糊化25min。调整糊化后的浆料PH为6.5，加入中温淀粉酶1.4kg，控制液化温度70℃，以稀碘液检验，液化液由蓝色变为稀碘液原色即为液化终点。

[0064] 3）糖化：启动搅拌，将液化好的浆料调PH1.5，控制温度45℃，缓缓加入糖化酶1.4kg，保温糖化3小时。糖化结束后，补充30kg碳酸钙和1200kg杜仲叶粉，调整物料含水量为45%，调整PH为7.0，加热灭菌，115℃灭菌25 min后，迅速冷却降温至38℃。接种预先准备好的三级乳酸肠链球菌发酵液150L，关闭接种阀门，充分搅拌均匀后转无菌发酵间。

[0065] 4）固体发酵培养：将混合乳酸肠链球菌发酵液的固体物料均匀分摊在带有不锈钢丝网容器的不锈钢丝网上，控制料层厚度在7.5cm，控制料温度在37℃，发酵38小时，经检PH下降到4.5时停止发酵，收集无菌固体发酵间发酵好的固体物料，进行沸腾干燥，控制沸腾干燥温度40℃，控制干燥后水分8%，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装。

[0066] 实施例4

[0067] 1000ml三级乳酸肠链球菌发酵液的制备:

[0068] １）培养基制备：

[0069] ①称取蛋白胨30g，牛肉膏4g，氯化钠3.5g，乳糖或葡萄糖30g，碳酸钙20g；

[0070] ②现将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于500ml的纯净水中，加热溶解，调节PH6.9后，用纯净水补充到1500ml；

[0071] ③将上述制备好的培养基分装于Φ15×150mm试管中（每支9ml），250ml三角瓶中（每瓶150ml）、1000ml三角瓶中（每瓶750ml），同时加入称量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于灭菌锅中，120℃灭菌30 min后，冷却备用。

[0072] ２）发酵液的制备：

[0073] 取生产用斜面一支，按斜面转试管操作要求转接乳酸肠链球菌于一级试管中39℃培养21小时，然后取发酵好的一级发酵液按4.5%接种量接种到含有150ml二级培养液的三角瓶中39℃培养21小时，然后取发酵好的二级发酵液按4.5%接种量接种到含有750ml三级培养液的三角瓶中39℃培养17小时。

[0074] 乳酶生的制备方法如下：

[0075] 1）原料的预处理：将玉米和杜仲叶除杂粉碎，分别粉碎到30目备用。将标准乳酸肠链球菌菌种，按规定进行鉴定强化后，转入生产用斜面，制得斜面菌种，供一级培养发酵用。

[0076] 2）制浆糊化：分别取上述处理的玉米粉4kg，杜仲叶粉1kg，置入30L不锈钢发酵罐，加入8kg水，制成浆料，加温到75℃，糊化20min。调整糊化后的浆料PH为6.5，加入中温淀粉酶7g，控制液化温度75℃，以稀碘液检验，液化液由蓝色变为稀碘液原色即为液化终点。

[0077] 3）糖化：启动搅拌，将液化好的浆料调PH5.0，控制温度50℃，缓缓加入糖化酶7克，保温糖化4.5小时。糖化结束后，补充碳酸钙0.8kg、杜仲叶粉7kg，蛋白胨13g、牛肉膏4g、氯化钠4g，调整物料含水量为50%，调整PH为7.2，加热灭菌，120℃灭菌30 min后，迅速冷却降温至39℃。火焰法接种预先准备好的三级乳酸肠链球菌发酵液1000ml，关闭接种阀门，充分搅拌均匀后转无菌发酵间。

[0078] 4）固体发酵培养：将混合乳酸肠链球菌发酵液的固体物料均匀分摊在带有不锈钢丝网容器的不锈钢丝网上，控制料层厚度在7.5cm，控制料温度在39℃，发酵40小时，经检PH下降到4.7时，即可转入42℃的电热恒温干燥箱中烘干，待物料水分达到8%时，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装。

[0079] 实施例5

[0080] 100L三级乳酸肠链球菌发酵液的制备：

[0081] １）一二三级培养基制备：

[0082] ①称取蛋白胨30g，牛肉膏4g，氯化钠4.5g，乳糖或葡萄糖35g，碳酸钙20g；

[0083] ②现将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于500ml的纯净水中，加热溶解，调节PH7.2后，用纯净水补充到1500ml；

[0084] ③将上述制备好的培养基分装于Φ15×150mm试管中（每支9ml），250ml三角瓶中（每瓶150ml）、1000ml三角瓶中（每瓶750ml），同时加入称量好的乳糖或葡萄糖。包扎好置于灭菌锅中，120℃灭菌30 min后，冷却备用。

[0085] ２）100L发酵液制备：

[0086] ①取生产用斜面一支，按斜面转试管操作要求转接乳酸肠链球菌于一级试管中40℃培养22小时，然后取发酵好的一级发酵液按5%接种量接种到含有150ml二级培养液的三角瓶中40℃培养22小时，然后取发酵好的二级发酵液按5%接种量接种到含有750ml三级培养液的三角瓶中40℃培养18小时。

[0087] ②称取蛋白胨3kg，牛肉膏0.4kg，氯化钠0.45kg，乳糖或葡萄糖3.5kg，碳酸钙2.0kg。先将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于20L的纯净水中，加热溶解，调节PH7.2后，全部转移到300L不锈钢发酵罐中，用水补充到80L,关闭发酵罐投料口，先用夹套升温到80℃后，两路或三路进蒸汽升温到120℃，保温120℃灭菌30min后迅速冷却到40℃后，火焰接种法转接三级发酵液10L，40℃培养18小时即可。

[0088] 乳酶生的制备方法如下：

[0089] 1）原料的预处理：将玉米和杜仲叶除杂粉碎，分别粉碎到40目备用。将标准乳酸肠链球菌菌种，按规定进行鉴定强化后，转入生产用斜面，制得斜面菌种，供一级培养发酵用。

[0090] 2）制浆糊化：分别取上述处理的玉米粉400kg，杜仲叶粉100kg，置入5m3灭菌器中，加入1000kg水，制成浆料，加温到80℃，糊化10min。调整糊化后的浆料PH为6.8，加入中温淀粉酶700g，控制液化温度78℃，以稀碘液检验，液化液由蓝色变为稀碘液原色即为液化终点。

[0091] 3）糖化：启动搅拌，将液化好的浆料调PH5.0，控制温度60℃，缓缓加入糖化酶700克，保温糖化5小时。糖化结束后，补充碳酸钙21.5kg、杜仲叶600kg、蛋白胨1.2kg、牛肉膏420g、氯化钠385g，调整物料含水量47%，调整PH为7.2，加热灭菌，120℃灭菌25min后，迅速冷却降温至40℃。接种预先准备好的三级乳酸肠链球菌发酵液100L，关闭接种阀门，充分搅拌均匀后转无菌发酵间。

[0092] 4）固体发酵培养：将混合乳酸肠链球菌发酵液的固体物料均匀分摊在带有不锈钢丝网容器的不锈钢丝网上，控制料层厚度在6cm，控制料温度在40℃，发酵42小时，经检PH下降到4.8时停止发酵，收集无菌固体发酵间发酵好的固体物料，进行沸腾干燥，控制沸腾干燥温度44℃，控制干燥后水分7%，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装。

[0093] 实施例6

[0094] 150L三级乳酸肠链球菌发酵液的制备：

[0095] 1）一二三级培养基制备：

[0096] ①称取蛋白胨25g，牛肉膏4g，氯化钠3.5g，乳糖或葡萄糖25g，碳酸钙15g；

[0097] ②现将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于500ml的纯净水中，加热溶解，调节PH7.0后，用纯净水补充到1500ml；

[0098] ③将上述制备好的培养基分装于Φ15×150mm试管中（每支9ml），250ml三角瓶中（每瓶150ml）、1000ml三角瓶中（每瓶750ml），同时加入称量好的乳糖或葡萄糖。包扎好置于灭菌锅中，115℃灭菌30 min后，冷却备用。

[0099] 2）150L发酵液制备：

[0100] ①取生产用斜面一支，按斜面转试管操作要求转接乳酸肠链球菌于一级试管中38℃培养21小时，然后取发酵好的一级发酵液按3%接种量接种到含有150ml二级培养液的三角瓶中37℃培养21小时，然后取发酵好的二级发酵液按3%接种量接种到含有750ml三级培养液的三角瓶中37℃培养16小时.。

[0101] ②称取蛋白胨7kg，牛肉膏0.8kg，氯化钠0.8kg，乳糖或葡萄糖7kg，碳酸钙2.5kg。先将称量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化钠置于50L的纯净水中，加热溶解，调节PH7.1后，全部转移到500L不锈钢发酵罐中，用水补充到100L，关闭发酵罐投料口，先用夹套升温到80℃后，两路或三路进蒸汽升温到115℃，保温115℃灭菌30min后迅速冷却到38℃后，火焰接种法转接三级发酵液20L，37℃培养18小时即可。

[0102] 乳酶生的制备方法如下：

[0103] １）原料的预处理：将玉米和杜仲叶除杂粉碎，分别粉碎到20目备用。将标准乳酸肠链球菌菌种，按规定进行鉴定强化后，转入生产用斜面，制得斜面菌种，供一级培养发酵用。

[0104] ２）制浆糊化：分别取上述处理的玉米粉800kg，杜仲叶粉200kg，置入5m3灭菌器中，加入1500kg水，制成浆料，加温到70℃，糊化15min。调整糊化后的浆料PH为7，加入中温淀粉酶1.5kg，控制液化温度80℃，以稀碘液检验，液化液由蓝色变为稀碘液原色即为液化终点。

[0105] ３）糖化：启动搅拌，将液化好的浆料调PH5.5，控制温度60℃，缓缓加入糖化酶1.5kg，保温糖化5小时。糖化结束后，补充碳酸钙45kg、杜仲叶1500kg、蛋白胨2.5kg、牛肉膏800g、氯化钠850g，调整物料含水量为45%，调整PH为7.2，加热灭菌，115℃灭菌25min后，迅速冷却降温至38℃。接种预先准备好的三级乳酸肠链球菌发酵液150L，关闭接种阀门，充分搅拌均匀后转无菌发酵间。

[0106] ４）固体发酵培养：将混合乳酸肠链球菌发酵液的固体物料均匀分摊在带有不锈钢丝网容器的不锈钢丝网上，控制料层厚度在9cm，控制料温度在37℃，发酵42小时，发酵物料PH下降到4.7时，收集无菌固体发酵间发酵好的固体物料，进行沸腾干燥，控制沸腾干燥温度42℃，控制干燥后水分6.5%，标准化处理，检验合格后，按规定要求分装和包装。