作为CCR(4)拮抗剂的取代的苯并咪唑类和苯并吡唑类转让专利
申请号 : CN201280058945.8
文献号 : CN103974950B
文献日 : 2016-12-21
发明人 : M·R·勒莱蒂 , 李延东 , V·R·马利 , J·鲍尔斯 , 杨菊
申请人 : 凯莫森特里克斯股份有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.式(I)所示化合物:
及其药学上可接受的盐,式中:
R1选自:H、和卤素;
R2选自:C3-8环烷基、C1-8卤代烷基、卤素、和CN;
R3选自:H、C1-4低级烷基和C1-4卤代烷基;
R4选自:H、C1-8烷基、C1-8羟基烷基和=O;
下标n各自独立选自:0、1、2和3;
下标m是1;
各A独立为C或N,并且至少一个A是N;
B选自:键、C(O)、和NRa;
Q选自:C、CH、N、和O;
W、X、Y、和Z独立为C、CH、或N,例外之处是同一分子中Q和W可以不是N;
R5和R6各自独立选自:H、OH、卤素、C1-8羟基烷基、-C(O)NRaRb、和-NRaRb;
7
R不存在;
R8不存在或选自:H、NH2、NHRa和C1-4烷基;
R9不存在或选自:H、C1-4烷基、C1-8卤代烷基、CN、和-CO2Ra;
R10不存在或为H;和
其中
Ra和Rb选自:H、和C1-8烷基。
2.如权利要求1所述的化合物,其特征在于,Y是N,X选自:C和CH。
3.如权利要求2所述的化合物,其特征在于,X是C,B是C(O)。
4.如权利要求2所述的化合物,其特征在于,X是C,B是C(O),具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基。
5.如权利要求2所述的化合物,其特征在于,X是C,B是C(O),具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;并且R5和R6中至少一个不是氢。
6.如权利要求2、3、4、或5所述的化合物,其特征在于,各R2选自:氟、氯、和三氟甲基,和R3是甲基。
7.如权利要求1所述的化合物,其特征在于,Y是CH,X是N。
8.如权利要求7所述的化合物,其特征在于,B是C(O)。
9.如权利要求7或8所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基。
10.如权利要求7或8所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-
1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R2选自:氟、氯、和三氟甲基,和R3是甲基。
11.如权利要求7或8所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-
1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5和R6中至少一个不是氢;
各R2选自:氟、氯、和三氟甲基,和R3是甲基。
12.如权利要求1所述的化合物,其特征在于,Y是N,X是N。
13.如权利要求12所述的化合物,其特征在于,B是C(O)。
14.如权利要求13所述的化合物,其特征在于,B是C(O),具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基。
15.如权利要求13所述的化合物,其特征在于,B是C(O),和具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;并且R5和R6中至少一个不是氢。
16.如权利要求12、13、14或15所述的化合物,其特征在于,各R2选自:氟、氯、和三氟甲基,和R3是甲基。
17.如权利要求1所述的化合物,其特征在于,如式(Ib)所示:
18.如权利要求17所述的化合物,其特征在于,X是C。
19.如权利要求17所述的化合物,其特征在于,X是C,和Y是N。
20.如权利要求17所述的化合物,其特征在于,X是C,Y是N,和B是C(O)。
21.如权利要求17所述的化合物,其特征在于,X是N,Y是N,和B是C(O)。
22.如权利要求17、18、19、20或21所述的化合物,其特征在于,各R2选自:氟、氯、和三氟甲基,和R3是甲基。
23.如权利要求17、18、19、20或21所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R2选自:氟、氯、和三氟甲基;和R3是甲基。
24.如权利要求17、18、19、20或21所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5和R6中至少一个不是氢;各R2选自:氟、氯、和三氟甲基;和R3是甲基。
25.如权利要求1所述的化合物,其特征在于,如式(Ic)所示:
26.如权利要求25所述的化合物,其特征在于,X是C。
27.如权利要求25所述的化合物,其特征在于,X是C,和Y是N。
28.如权利要求25所述的化合物,其特征在于,X是C,Y是N,和B是C(O)。
29.如权利要求25所述的化合物,其特征在于,R1是H和R9选自:H、CN和-CO2Ra。
30.如权利要求25、26、27、28、或29所述的化合物,其特征在于,各R2选自:氟、氯、和三氟甲基,和R3是甲基。
31.如权利要求25、26、27、28、或29所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环2
选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R选自:氟、氯、和三氟甲基;和R3是甲基。
32.如权利要求25、26、27、28、或29所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5和R6中至
2 3
少一个不是氢;各R选自:氟、氯、和三氟甲基;和R是甲基。
33.如权利要求1所述的化合物,其特征在于,如式(Id)所示:
34.如权利要求33所述的化合物,其特征在于,X是C。
35.如权利要求33所述的化合物,其特征在于,X是C,和Y是N。
36.如权利要求33所述的化合物,其特征在于,X是C,Y是N,和B是C(O)。
37.如权利要求33所述的化合物,其特征在于,R1是H;一个R4是H和一个R4选自:H、C1-4烷基、和C1-4羟基烷基。
38.如权利要求33、34、35、36、或37所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R2选自:氟、氯、和三氟甲基;和R3是甲基。
39.如权利要求33、34、35、36、或37所述的化合物,其特征在于,各R2选自:氟、氯、和三氟甲基,和R3是甲基。
40.如权利要求33、34、35、36、或37所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5和R6中至少一个不是氢;各R2选自:氟、氯、和三氟甲基;和R3是甲基。
41.如权利要求1所述的化合物,其特征在于,如式(Ie)所示:
42.如权利要求41所述的化合物,其特征在于,X是C。
43.如权利要求41所述的化合物,其特征在于,X是C,和Y是N。
44.如权利要求41所述的化合物,其特征在于,X是C、Y是N,和B是C(O)。
45.如权利要求41所述的化合物,其特征在于,R1选自:氢和卤素;和R10是氢。
46.如权利要求41、42、43、44、或45所述的化合物,其特征在于,各R2选自:氟、氯、和三氟甲基。
47.如权利要求41、42、43、44、或45所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R2选自:氟、氯、和三氟甲基。
48.如权利要求41、42、43、44、或45所述的化合物,其特征在于,具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5和R6中的至少一个不是氢;各R2选自:氟、氯、和三氟甲基。
49.如权利要求1所述的化合物,所述化合物选自下组:或其药学上可接受的盐。
50.一种药物组合物,所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和权利要求1所述的化合物。
51.如权利要求50所述的药物组合物,其特征在于,包含药学上可接受的赋形剂和选自下组的化合物:
52.如权利要求50所述的药物组合物,其特征在于,包含药学上可接受的赋形剂和选自下组的化合物:
53.权利要求1所述化合物在制备治疗CCR(4)信号传导所介导疾病或状况的药物中的用途。
54.如权利要求53所述的用途,其特征在于,所述疾病或状况选自:(1)变应性疾病,(2)炎性肠病,(3)阴道炎,(4)银屑病和炎性皮肤病,(5)脉管炎,(6)脊椎关节病,(7)硬皮病,(8)哮喘和呼吸变应性疾病,(9)自身免疫性疾病,(10)移植物排斥,(11)需要抑制不良炎症的其它疾病,和癌症。
55.如权利要求53所述的用途,其特征在于,所述疾病或状况选自:变应性疾病、银屑病、特应性皮炎和哮喘。
56.如权利要求53所述的用途,其特征在于,所述化合物是权利要求51所述的化合物。
57.如权利要求53所述的用途,其特征在于,所述化合物选自下组:
说明书 :
作为CCR(4)拮抗剂的取代的苯并咪唑类和苯并吡唑类
593-633(1994))。除刺激趋化性外,趋化因子在应答细胞中有选择地诱导其它改变,包括细胞形状的改变、胞内游离钙离子([Ca2+])浓度的瞬时升高、颗粒胞吐、整联蛋白上调、生物活性脂质(例如,白三烯)形成和呼吸爆发,与白细胞激活相关。因此,趋化因子是炎症反应的早期触发剂,引起炎症介质释放、趋化性和外渗至感染或炎症部位。
2)和黑素瘤生长刺激活性蛋白质(MGSA)主要对嗜中性粒细胞是趋化性的,而β趋化因子,例如RANTES、MIP-la、MIP-lb、单核细胞趋化蛋白l(MCPl),MCP-2,MCP-3和嗜酸细胞活化趋化因子对于巨噬细胞、T细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞是趋化性的(Deng等l.,Nature,
381:661-666(1996))。趋化因子结合特定的细胞表面受体,这些受体属于G-蛋白-偶联的七跨膜结构域蛋白质家族,称为“趋化因子受体”(综述于Horuk,Trends Pharm.Sci.,15:159-
165(1994))。
fractalkine趋化因子,其因前两个半胱氨酸之间的一系列三氨基酸而区分。趋化因子受体据认为是炎性和免疫调节性紊乱和疾病,包括哮喘和变应性疾病,以及自身免疫疾病,例如风湿性关节炎和动脉粥样硬化的重要介质。
(NK)细胞的Th2亚组的化学引诱物),和CCL17,也称为TARC(胸腺和激活调节的趋化因子),其还由单核细胞和树突细胞产生。
见,例如Campbell等.(1999)Nature400:776-780,Gonzalo等.(1999)J.Immunol.163:403-
5411,Lloyd等.(2000)J.Exp.Med.191:265-273,Kawasaki等.(2001)J.Immunol.166:2055-
2062),在具有皮肤归巢表型的几乎所有T细胞,CTLA+T细胞上可见。因此,CCR(4)可能是白细胞参与其中的皮肤病的重要参与者。CCR(4)看起来也可能在一些其它细胞类型上表达,
可能是单核细胞/巨噬细胞和树突细胞,等等。鉴于CCR(4)的临床重要性,鉴定调整CCR(4)功能的化合物代表了开发新治疗剂的有吸引力的思路。本文提供了此类化合物及其用法。
此,该标志指代单键或双键。
替换为式-(CH2)s-X-(CH2)t-所示取代基,其中s和t独立为0-3的整数,X是-O-、-NR’-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NR’-。-NR’-和-S(O)2NR’-中的取代基R’选自氢或未取代的C1-6烷基。
获得碱加成盐。来源于药学上可接受的无机碱的盐的例子包括铝、铵、钙、铜、铁,亚铁、锂、镁、锰,亚锰、钾、钠、锌等等。来源于药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺,包括取代的胺、环状胺、自然产生的胺等等,例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆硷、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等等。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时,可通过将中性形式的此类化合物与充足量的所需酸(纯净的或在合适的惰性溶剂中)接触来获得酸加成盐。
药学上可接受的酸加成盐的例子包括源自无机酸的那些,例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸(monohydrogencarbonic)、磷酸、单氢磷酸(monohydrogenphosphoric)、二氢磷酸
(dihydrogenphosphoric)、硫酸、单氢硫酸(monohydrogensulfuric)、氢碘酸、或亚磷酸等等;源自相对无毒的有机酸的盐,例如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、扁桃酸、苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸,酒石酸、甲磺酸等等。还包括氨基酸的盐,例如精氨酸盐等等,和有机酸,例如葡萄糖醛酸(glucuronic acid)或半乳糖醛酸(galactunoric acid)等的盐(参见,例如Berge,S.M.等“, 药物盐(Pharmaceutical
Salts)”,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本发明的某些具体化合
物同时含有碱性和酸性官能团,从而能将化合物转换成碱加成盐或酸加成盐。
但除此之外,就本发明的目的而言,那些盐与母体形式化合物是等价的。
境中通过化学或生物化学方法转变为本发明化合物。例如,当置于含合适的酶或化学试剂
的经皮贴片贮器中时,前药可缓慢改变为本发明的化合物。
多晶型或无定形形式。就本发明所考虑的应用而言,所有物理形式通常是等价的,应包括在本发明范围内。
原子的量。例如,化合物可以掺入放射性同位素,例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C),或非放射性同位素,例如氘(2H)或碳-13(13C)。除了本申请它处所述的那些用途,此类同位素变体可提供额外的用途。例如,本发明化合物的同位素变体可以有额外的用途,包括但不限于作为诊断的和/或成像试剂,或作为细胞毒性/放射毒性治疗剂。另外,本发明化合物的同位素变体可具有改变的药代动力学和药效学特征,从而有助于增加治疗期间的安全性、耐
受性或效力。无论是否有放射性,本发明化合物的所有同位素变体均应包括在本发明范围
内。
常情况下不分泌TARC和/或MDC的细胞分泌TARC和/或MDC,TARC和/或MDC表达增加(导致,例如炎性和免疫调节性紊乱和疾病)或TRAC和/或MDC表达降低所致。不适当的CCR(4)功能活
性可以完全或部分介导CCR(4)介导的状况或疾病。然而,CCR(4)介导的状况或疾病是调节
CCR(4)对潜在的状况或疾病产生某些效应的状况或疾病(例如,CCR(4)拮抗剂导致至少一
些患者的患者舒适程度有某些改进)。
1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;并且R5、R6和R7中至少一个不是氢。
基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;(2)其中具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R2选自氟、氯、甲基和三氟甲基,和R3是甲基;(3)其中具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡
5 6 7 2
咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R、R和R中至少一个不是氢;各R选自:氟、氯、甲基和三氟甲基,R3是甲基的那些。
2
自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R选自:氟、氯、甲基和三氟甲基;和R3是甲基;或(c)具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-
2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5、R6和R7中至少一个不是氢;各R2选自:
氟、氯、甲基和三氟甲基;和R3是甲基的那些。
2-基、哌啶-3-基和环己基;各R2选自:氟、氯、甲基和三氟甲基;和R3是甲基;或(c)具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;
R5、R6和R7中至少一个不是氢;各R2选自:氟、氯、甲基和三氟甲基;和R3是甲基的那些。
C(O);(iv)X是N,Y是N,和B是C(O);或(v)R是H和R选自:H、CN和-CO2R 。在任何式(Ic)所示化合物或选择的实施方式(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)中,进一步的实施方式组是其中(a)各R2选自:氟、氯、甲基和三氟甲基,和R3是甲基;(b)具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;各R2选自:氟、氯、甲基和三
3
氟甲基;和R是甲基;或(c)具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-
1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5、R6和R7中至少一个不是氢;各R2选自:氟、氯、甲基和三氟甲基;和R3是甲基的那些。
一步的实施方式组是其中(a)各R选自:氟、氯、甲基和三氟甲基,和R是甲基;(b)具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;
各R2选自:氟、氯、甲基和三氟甲基;和R3是甲基;或(c)具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-
1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;R5、R6和R7中至少一个不是氢;各R2选自:氟、氯、甲基和三氟甲基;和R3是甲基的那些。
基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己基;和各R 选自:氟、氯、甲基和三氟甲基;或(c)具有Z作为环顶点的环选自:吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-
3-基和环己基;R5、R6和R7中的至少一个不是氢;和各R2选自:氟、氯、甲基和三氟甲基的那些。
必须与制剂的其它成分相容并且对其接受者无害。
分的载体结合的步骤。药物组合物的制备一般是通过将活性成分与液体载体或精细分级的
固体载体或二者均匀和紧密地结合,然后,如果需要,将产品形成所需制剂。在药物组合物中,活性目标化合物的含量足以对疾病的过程或状况产生所需效果。
的活性成分,这些赋形剂适用于制备片剂。这些赋形剂可以是,例如惰性稀释剂,如纤维素、二氧化硅、氧化铝、碳酸钙、碳酸钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、磷酸钙或磷酸钠;造粒剂和崩解剂,例如玉米淀粉或藻酸;粘合剂,如PVP、纤维素、PEG、淀粉、明胶或阿拉伯胶,和润滑剂,例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。那些片剂可以是无包衣的或它们可通过已知技术经肠溶性或其它包衣以延迟在胃肠道的崩解和吸收,藉此在较长的时期提供持续作用。例如,可利用延时材料,例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。还可通过美国专利号4,256,
108;4,166,452和4,265,874所述的技术对它们包衣,以便形成渗透性治疗片剂来控制释
放。
己糖醇的偏酯如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯的缩合产物,或环氧乙烷与源自脂肪酸与己糖醇
酸酐的偏酯如聚乙烯脱水山梨醇单油酸酯的缩合产物。水性悬浮液也可包含一种或多种防
腐剂,如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯,一种或多种着色剂,一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂,如蔗糖或糖精。
实例为上文提及的那些。其它赋形剂,如甜味剂、调味剂和着色剂也可存在。
外可接受的稀释剂或溶剂配制的无菌可注射溶液或悬浮液,例如1,3-丁二醇溶液。在可接受的运载体和溶剂中,可采用水,林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外,无菌的不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的,可利用任何温和的不挥发性油,包括合成单或二甘油酸酯。此外,脂肪酸,如油酸可用于制备可注射剂。
酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟基吡喃、聚腈基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。可以将聚合物和半渗透
聚合物基质形成成型制品,例如阀、支架、管道、假肢等。
化合物是本文作为优选实施方式的那些化合物,以及在下文实施例和附图中专门列出的化
合物;和本文提供的特定结构的化合物。
疮、I型糖尿病、肾小球肾炎等,(10)移植物排斥(包括同种异体移植物排斥和移植物抗宿主病),(11)白血病、淋巴瘤和其它血源性癌症,包括皮肤T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、急性淋巴细胞性白血病等,和(12)需要抑制不良炎症的其它疾病,例如动脉粥样硬化、肌炎、神经变性疾病(例如,阿耳茨海默病)、脑炎、脑膜炎、肝炎、肾炎、脓毒病、结节病、变态反应性结膜炎、耳炎、慢性阻塞性肺病、鼻窦炎、贝赫切特综合征和痛风。
(例如,肾、肝、肺、心脏、胰脏或其组合)移植状况。
长效制剂给予本发明化合物。
对象的血流中)。另外,本发明的组合物可以在第二治疗方案之前或之后给予,例如在某剂量的化疗或放疗之前或之后。
0.01到25mg/kg,每天约0.05到10mg/kg,或每天约0.1到5mg/kg。在该范围内,剂量可以是每天0.005到0.05、0.05到0.5或0.5到5.0mg/kg。对于口服给药,优选以片剂的形式给予组合物,所述片剂含有1.0到1000毫克活性成分,特别是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、
75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和
1000.0毫克活性成分,用于对待治疗患者的症状调节剂量。所述组合物可以每天1-4次的方案给予,优选每天1次或2次。
其常用的途径和用量,与本发明的化合物或组合物同时或顺序地给予。当本发明的化合物
或组合物与一种或多种其他药物同时使用时,除本发明化合物或组合物之外,含有此类其
他药物的药物组合物是优选的。相应地,本发明的药物组合物包括除本发明化合物或组合
物之外,还含有一种或多种其他活性成分或治疗剂的那些。可与本发明化合物或组合物联
用、分别或在同一药物组合物中给予的其他治疗剂的例子包括但不限于:顺铂、紫杉酚、甲氨蝶呤、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丁酸氮芥、亚硝脲氮芥、卡铂、长春新碱、长春花碱、噻替派、环己亚硝脲、甲基环己亚硝脲、5-氟尿嘧啶、皮质类固醇、钙依赖性磷酸酶抑制剂、
NSAID、5-脂氧合酶抑制剂和阿糖胞苷。本发明的化合物与第二活性成分的重量比可以变
化,取决于各成分的有效剂量。通常采用各自的有效剂量。因此,例如,当本发明的化合物与第二抗癌剂联用时,本发明化合物与第二剂的重量比通常为约1000:1–约1:1000,优选约
200:1–约1:200。本发明化合物和其他活性成分的组合通常也在上述范围内,但在各情况
下,应采用各活性成分的有效剂量。
治疗。因此,联用方法和组合物也是本发明的一部分,以预防好治疗感兴趣的状况或疾病,例如炎性或自身免疫失调、状况和疾病,包括银屑病、皮肌炎、炎性肠病、风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病性关节炎、多发性关节炎、多发性硬化症、变应性疾病、特应性皮炎和哮喘,和上述那些病变。
其他药物同时使用时,除本发明化合物或组合物之外,含有此类其他药物的药物组合物是
优选的。所以,本发明的药物组合物包括除本发明的化合物或组合物之外,还含有一种或多种其他活性成分或治疗剂的那些。可与本发明化合物或组合物联用,分别给予或在同一药
物组合物中给予的其它治疗剂的例子包括但不限于:(a),VLA4拮抗剂,(b)皮质类固醇,例如氯地米松、甲基氢化泼尼松、倍他米松、脱氢可的松、泼尼松龙、氟美松、氟替卡松、氢化可的松、布地缩松、氟羟脱氢皮质醇、沙美特罗、沙美特罗、舒喘宁、福莫特罗;(c)免疫抑制剂,例如环孢菌素(环胞菌素A、 )、他克莫司(FK-506, )、雷帕
霉素(西罗莫司, )和其他FK-506型免疫抑制剂,和麦考酚酸酯,例如,麦考酚酸
乙酯 (d)抗组胺药(H1组织受拮抗剂),例如溴苯那敏、氯芬胺、右氯苯那敏、曲
普立啶、氯马斯汀、苯海拉明、二苯拉林、特赖皮伦胺、羟嗪、甲吡咯嗪、异丙嗪、三甲泼拉嗪、哌吡庚啶、赛庚啶、安他心、非尼拉敏吡拉明、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、脱碳乙氧基氯雷他定等;(e)非甾体抗哮喘剂(例如,特布他林、二羟苯基异丙氨基乙醇、非诺特罗、异他林、舒喘灵、比托特罗和吡布特罗)、茶碱、色甘酸钠、阿托品、异丙托溴铵、白三烯拮抗药(例如,扎氟普汀、孟鲁司特、普仑司特、伊拉司特、泊比司特和SKB106,
203)、白三烯生物合成抑制剂(zileuton,BAY-1005);(f)非甾体抗炎药(NSAID),例如丙酸衍生物(例如,阿明洛芬、苯恶洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟联苯丙酸、异丁苯丙酸、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普秦、吡咯洛、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫恶洛芬)、乙酸衍生物(例如,吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁芬酸、伊索克酸、奥平酸(oxpinac)、舒林酸、硫平酸、托美丁、齐多美辛及佐美酸)、芬那酸衍生物(例如,氟芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸及托芬那酸),联苯羧酸衍生物(例如,二氟尼柳及氟苯柳)、昔康类(例如,伊索昔康、吡罗昔康、舒多昔康及替诺昔康)、水杨酸酯(例如,乙酰水杨酸及柳氮磺胺吡啶)及吡唑啉酮(例如,阿扎丙宗、贝吡龙(bezpiperylon)、非普拉宗、莫非布宗、羟布宗及保泰松);
(g)环氧合酶-2(COX-2)抑制剂,例如,塞来考昔 和及罗非考昔 (h)IV
型磷酸二酯酶(PDE IV)的抑制剂;(i)金化合物,例如,金诺芬及金硫葡糖;(j)TNFα调节剂,例如依那西普 (k)抗体治疗剂,例如,奥素克隆(OKT3)、达珠单抗 巴
利昔单抗 B细胞调节剂,例如利妥昔 及英夫利昔单抗
(l)趋化因子受体,特别CCR1、CCR5、CXCR2、CXCR3、CCR2、CCR3、CCR(4)、CCR7、
CCR9、CX3CR1和CXCR6的其他拮抗剂;(m)润滑剂或软化剂,例如矿脂和羊毛脂;(n)角质层分离剂(例如,他佐罗汀);(o)维生素D3衍生物,例如,卡泊三烯或卡泊三醇 (p)
PUVA;(q)地蒽酚 (r)依曲替酯 和异维A酸;和(s)多发性硬化
症治疗剂,例如干扰素β-1β 干扰素(β-1α 咪唑硫嘌呤
格拉默醋酸盐 糖皮质激素(例如,泼尼松龙)和环磷
酰胺;(t)DMARDS,例如甲氨蝶呤;(u)T细胞共刺激调节剂,例如阿巴昔普 (v)其
他化合物,例如5-氨基水杨酸和其前药;羟化氯喹;D-青霉胺;抗代谢物,例如咪唑硫嘌呤、
6-巯嘌呤和甲氨蝶呤;DNA合成抑制剂,例如羟基脲和微管破坏剂,例如秋水仙碱。可改变本发明化合物与第二活性成份的重量比,取决于各成份的有效剂量。一般而言,使用各成份的有效剂量。因此,例如,当本发明化合物与NSAID组合时,本发明化合物与NSAID的重量比通常为约1000∶1至约1∶1000,优选约200∶1至约1∶200。本发明化合物与其它活性成份的组合通常也处于上述范围内,但在各情况下,应使用各活性成份的有效剂量。
仪,利用HP1100HPLC以供样品递送。通常,将分析物以0.1毫克/毫升溶于甲醇并利用递送溶剂将1微升注入质谱仪,质谱仪自100至1500道尔顿扫描。所有化合物皆可以正ESI模式使用含有1%甲酸的乙腈/水作为递送溶剂来分析。下文所提供的化合物亦可以负ESI模式,使用乙腈/水配制的2mM NH4OAc作为递送系统来分析。
方法不是穷尽的,但为感兴趣的化合物确实提供了广泛适用的和实际的途径。
(50g,264.5mmol)加入该热溶液,然后在2小时期间冷却至30℃,在该温度下搅拌24小时。过滤收集无色晶体,用丙酮(70mL)洗涤。室温下,将所得盐(37.3g,~90%ee,Mosher方法测
定,J.Am.Chem.Soc.,1973,95,512.)重悬在3:2iPrOH/EtOH(400mL)中,混合物在60℃下加
热得到澄清溶液。然后将该溶液冷却至室温并搅拌24小时。滤出无色晶体,用丙酮(40mL)洗涤从而得到所需盐(32.0g,>96%ee,Mosher方法测定)。向二氯甲烷(CH2Cl2,100mL)配制的
一部分该盐(12.0g)中加入4M氢氧化钠水溶液(30mL)。室温下搅拌反应混合物1小时,二氯
甲烷(2×100mL)萃取、无水硫酸钠(Na2SO4)干燥、过滤并在真空下浓缩得到无色液体状
(1R)-1-(2,4-二氯苯基)乙胺(7.5g,39.5mmol,40%)。
(IV)(Ti(OEt)4,24.8g,109.0mmol)。室温下搅拌反应混合物18小时。将混合物倒入盐水溶
液,室温下搅拌该混合物1小时。过滤溶液,分离诸相。用盐水进一步洗涤有机层。然后用无水硫酸钠(Na2SO4)干燥有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用
(7.9g,28.7mmol,66%)。
Selectride,1.0M THF配制,62mL,61.8mmol)。将该反应体系缓慢升温至室温,在室温下搅
拌18小时。真空下浓缩反应混合物,快速层析(SiO2,25–70%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗物质得到粘稠油状的所需产物(5.4g,19.5mmol,79%)。
制,19.4mL,77.6mmol)。将该反应体系缓慢升温至室温,在室温下搅拌18小时。真空下除去溶剂,将粗物质溶解于饱和的水性碳酸氢钠和二氯甲烷中。将该混合物搅拌45分钟得到澄
清的溶液。分离诸相,水层用二氯甲烷(2×100mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(3.1g,92%,>96%ee,Mosher方法测定)。
搅拌反应混合物48小时。将反应混合物倒入盐水溶液,室温下搅拌10分钟。经硅藻土垫过滤溶液,用二氯甲烷(3×300mL)清洗。分离诸相。用盐水进一步洗涤有机层。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(27.8g,89.3mmol,95%)。
制,63.0mL,189.0mmol)。该反应体系在-40℃搅拌18小时,将该反应体系缓慢升温至0℃,用
50%饱和的水性氯化铵溶液(100mL)淬灭。分离诸相,用去离子水(50mL)洗涤有机层。用乙酸乙酯(2×50mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗物质经快速层析(SiO2,50%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到所需产物(14.6g,44.5mmol,
52%)。
22.3mL,89.1mmol),该反应在室温下搅拌30分钟。然后加入乙醚(400mL),将浆液搅拌10分钟。过滤收集固体,用乙醚(2×200mL)洗涤。然后将固体溶解于5M氢氧化钠水溶液,用二氯甲烷(2×100mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(7.8g,34.9mmol,79%,>96%ee,Mosher方法测定)。
53.1mmol)。反应混合物在120℃加热1小时。冷却至室温后,用去离子水(750mL)稀释该混合物,用iPrOH(25mL)清洗烧瓶。混合物搅拌30分钟,获得亮黄色固体。过滤收集固体,真空下干燥得到所需产物(9.7g,25.0mmol,94%)。MS:(ES)m/z C14H12BrCl2N2O2的计算值[M+H]+
388.9,实测值390。
异质混合物2小时。冷却至室温后,经硅藻土过滤该混合物并用乙醇洗涤。真空下浓缩滤液。
将粗物质溶解于乙酸乙酯,用饱和的水性碳酸氢钠中和。将该混合物搅拌30分钟,分离诸
层。用乙酸乙酯萃取水层。干燥(MgSO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,20-
100%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗物质,得到所需产物(6.0g,16.8mmol,67%).MS:
(ES)m/z C15H12BrCl2N2的计算值[M+H]+368.9,实测值370。
(0)(Pd(PPh3)4、0.20g,0.18mmol)和2M水性碳酸钾(5.3mL,10.5mmol)在甲苯(10mL)和乙醇
(5mL)中的混合物。用氮气吹扫混合物5分钟,然后在100℃下加热2小时。冷却至室温后,用乙酸乙酯(20mL)萃取该混合物。用盐水洗涤有机层,干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-100%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗物质,得到90%纯度的所需产物
(1.6g,3.4mmol,97%)。MS:(ES)m/z C25H28Cl2N3O的计算值[M+H]+472.2,实测值472。
气气氛下搅拌1小时。真空除去过量的溶剂,用二氯甲烷(50mL)稀释残留物。用1M氢氧化钠水溶液中和有机层,用二氯甲烷(2×50mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(1.2g,3.2mmol,95%)。MS:(ES)m/z
C20H20Cl2N3的计算值[M+H]+372.1,实测值372。
3.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF,10mL)溶液中加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并
三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(HATU,1.4g,3.7mmol)和二异丙基乙基胺(iPr2NEt,0.80g,
6.2mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时,用乙酸乙酯稀释。用饱和的水性碳酸氢钠和盐水洗涤混合物。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,10-100%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需产物(1.5g,2.6mmol,85%)。
2.6mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液。室温下搅拌反应混合物1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(30mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×30mL)进一步
萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,3-10%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(1.1g,2.3mmol,83%)。1H NMR
(400MHz,CDCl3)δ8.11(s,1H),7.74(d,J=8.4Hz,1H),7.47(d,J=1.9Hz,1H),7.25–7.21
(m,1H),7.16–7.13(m,1H),7.04(s,1H),6.86(d,J=8.4Hz,1H),6.00–5.93(m,2H),4.29–
4.07(m,2H),3.86–3.66(m,2H),3.30–3.26(m,1H),2.82–2.50(m,3H),1.99(d,J=7.0Hz,
+
3H),1.97–1.52(m,8H);MS:(ES)m/zC26H29Cl2N4O的计算值[M+H]483.2,实测值483。
得到白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J=8.8Hz,1H),7.42(s,1H),7.40–7.37(m,
1H),7.20–7.12(m,2H),7.18–7.14(m,2H),6.35(q,J=6.9Hz,1H),6.11(d,J=7.6Hz,1H),
4.33–4.11(m,2H),3.87–3.68(m,3H),3.27–3.24(m,1H),2.79–2.65(m,2H),2.53–2.35(m,
4H),2.17(d,J=6.9Hz,3H),1.97–1.47(m,4H),1.30–1.24(m,1H),0.90–0.86(m,1H);MS:
(ES)m/z C27H31Cl2N4O的计算值[M+H]+497.2,实测值497。
二氯甲烷(1mL)溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)3,0.11g,0.52mmol)和乙酸(3
滴)。室温下搅拌反应混合物18小时,用饱和的水性碳酸氢钠淬灭。用二氯甲烷(2×15mL)萃取混合物。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。通过反相HPLC(C18柱,乙腈-H2O含0.1%TFA作为洗脱液)纯化所得粗物质得到白色固体(0.015g,0.032mmol,25%)。1H
NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),7.69(d,J=8.4Hz,1H),7.44(d,J=2.4Hz,1H),7.32(dd,
J=1.2,8.4Hz,1H),7.12(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),7.06(s,1H),6.82(d,J=8.4Hz,1H),
5.99–5.94(m,2H),3.30(d,J=2.8Hz,2H),2.81–2.78(m,2H),2.58–2.48(m,2H),2.38–2.36(m,1H),1.97(d,J=6.8Hz,3H),1.94–1.82(m,4H),1.67–1.64(m,1H),1.31–1.26(m,4H),
1.15–1.11(m,1H);MS:(ES)m/z C26H30Cl2N3的计算值[M+H]+454.2,实测值453。
物在120℃加热1小时。冷却至室温后,用去离子水(750mL)稀释该混合物,并搅拌30分钟形成亮黄色固体。过滤收集固体,真空下干燥得到所需产物(4.8g,12.7mmol,75%)。
真空下浓缩滤液。将粗物质溶解于二氯甲烷,用饱和的水性碳酸氢钠中和。将该混合物搅拌
30分钟,分离诸层。用二氯甲烷萃取水层。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。粗物质不作进一步纯化直接使用(1.8g,5.0mmol,62%)。
(0.032g,0.028mmol)和2M水性碳酸钾(3.2mL,6.4mmol)在甲苯(12mL)和乙醇(6mL)中的混
合物。用氮气吹扫混合物5分钟,然后在100℃下加热2小时。冷却至室温后,用乙酸乙酯
(5mL)萃取该混合物。用盐水洗涤有机层,干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,
25-70%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗物质,得到所需产物(0.71g,1.6mmol,73%)。
拌1小时。真空除去过量的溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用1M氢氧化钠水溶液中和有机层,用二氯甲烷(2×50mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(0.62g,1.4mmol,89%)。
0.26mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HATU(0.011g,0.29mmol)和iPr2NEt(0.062g,
0.48mmol)。室温下搅拌反应混合物2小时,用乙醚稀释。用饱和的水性碳酸氢钠和盐水洗涤混合物。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用
(0.092g,0.17mmol,69%)。
0.17mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液并在室温下搅拌1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(15mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取
水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,5-20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.024g,0.053mmol,32%)。1H NMR
(400MHz,DMSO-d6)δ9.78–9.70(m,1H),9.32–9.22(m,1H),8.44–8.38(m,1H),7.68(d,J=
8.4Hz,1H),7.58(s,1H),7.51–7.41(m,3H),7.27(d,J=8.4Hz,1H),6.17–6.13(m,2H),
4.61–4.54(m,1H),4.19–4.05(m,3H),3.89–3.85(m,1H),3.69–3.50(m,3H),2.52–2.34(m,
1H),1.95(d,J=6.8Hz,3H),1.90–1.70(m,3H);MS:(ES)m/z C25H27ClFN4O的计算值[M+H]+
453.2,实测值453.1。
8.95(m,1H),8.45(s,1H),7.62(s,1H),7.41–7.38(m,2H),7.15–7.13(m,2H),6.16–6.08(m,
2H),4.35–4.23(m,3H),3.74–3.62(m,2H),3.26–3.22(m,2H),2.95–2.89(m,1H),2.04–1.95(m,1H),1.96(d,J=7.2Hz,3H),1.78–1.53(m,7H);MS:(ES)m/z C26H28Cl2FN4O的计算值[M+H]+501.2,实测值510.4。
(s,1H,),7.41–7.38(m,2H),7.15–7.13(m,2H),6.18–6.04(m,2H),4.34–4.22(m,2H),3.66–
3.44(m,2H),3.30–3.26(m,2H),2.98–2.90(m,1H),1.97(d,J=6.9Hz,3H),1.97–1.52(m,
+
8H);MS:(ES)m/z C26H28Cl2FN4O的计算值[M+H]501.2,实测值510。
(0.025g,0.027mmol)、BINAP(0.05g,0.081mmol)和Cs2CO3(0.24g,0.74mmol)在甲苯(2mL)中的混合物5分钟,然后在100℃下加热18小时。冷却至室温后,过滤混合物,用EtOAc(10mL)洗涤。真空浓缩滤液。用乙酸乙酯(20mL)稀释得到的粗制混合物,用去离子水洗涤,干燥
(Na2SO4)并作真空浓缩。快速层析(SiO2,15%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗物质得到偶联的产物(0.14g,0.29mmol,55%)。
时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机
层,用二氯甲烷(2×10mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用。
氯甲烷(2mL)溶液中加入HATU(0.12g,0.32mmol)和三乙胺(Et3N,0.2mL,1.4mmol)。室温下
搅拌反应混合物2小时,用乙酸乙酯稀释。用饱和的水性碳酸氢钠和盐水洗涤混合物。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,10%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到所需产物(0.11g,0.19mmol,71%2步)。
溶液,室温下搅拌反应混合物1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合
并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,15%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到所需化合物(0.011g,0.024mmol,38%)。将该物质溶解于乙腈,并用1N水性盐酸溶液处理(0.048mL,0.048mmol)。将该溶液冻干得到白色固体状标题化合物的二盐酸盐。1H NMR
(400MHz,DMSO-d6)δ10.02–9.92(m,1H),9.53(s,1H),8.49–8.42(m,1H),7.74(d,J=2.0,
1H),7.69(d,J=8.8Hz,1H),7.57(d,J=8.8Hz,1H),7.51(dd,J=1.6,8.4Hz,1H),7.35(d,J
=9.2Hz,1H),6.98(s,1H),6.24(q,J=6.8Hz,1H),4.65–4.62(m,1H),3.67–3.63(m,5H),
3.22–3.16(m,4H),2.39–2.34(m,2H),1.97(d,J=6.8Hz,3H),1.93–1.78(m,3H);MS:(ES)m/zC24H28Cl2N5O的计算值[M+H]+472.2,实测值472.1。
0.040mmol)、BINAP(0.076g,0.12mmol)和Cs2CO3(0.79g,2.4mmol)在甲苯(6mL)中的混合物5分钟,然后在100℃下加热16小时。冷却至室温后,过滤混合物,用EtOAc(20mL)洗涤。真空浓缩滤液。用乙酸乙酯(20mL)稀释得到的粗制混合物,用去离子水和盐水洗涤,干燥(Na2SO4)并作真空浓缩。快速层析(SiO2,0-20%甲醇配制的二氯甲烷)纯化得到的粗物质得到偶联
的产物(0.11g,0.28mmol,35%)。
0.21mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HATU(0.090g,0.23mmol)和iPr2NEt(0.069g,
0.48mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时,用乙醚稀释。用去离子水洗涤混合物,用乙醚(2×50mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,5-
20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到所需产物(0.057g,0.097mmol,51%)。
氯甲烷(1.5mL)溶液,室温下搅拌得到的溶液1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。
干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。用反相HPLC(C18柱,乙腈-H2O含0.1%
TFA作为洗脱液)纯化粗产物得到白色固体状产物(0.007g,0.014mmol,12%)。1H NMR
(400MHz,CDCl3)δ8.02(s,1H),7.66(d,J=8.8Hz,1H),7.45(d,J=1.6Hz,1H),7.14(dd,J=
1.6,8.4Hz,1H),6.93(d,J=8.4Hz,1H),6.85(d,J=8.4Hz,1H),6.50(d,J=2.0Hz,1H),
5.89(q,J=6.8Hz,1H),4.86–4.80(m,1H),4.56–4.85(m,1H),4.28–4.25(m,1H),3.99–3.94(m,1H),3.86–3.82(m,1H),3.73–3.70(m,1H),3.56–3.50(m,1H),3.44–3.31(m,2H),3.20–
3.17(m,1H),2.86–2.81(m,2H),2.71–2.66(m,1H),2.16–2.06(m,1H),1.96(d,J=6.8Hz,
3H),1.48–1.25(m,3H);MS:(ES)m/z C25H30Cl2N5O的计算值[M+H]+486.2,实测值486.4。
0.029mmol)、BINAP(0.26g,0.43mmol)和Cs2CO3(1.4g,4.3mmol)在甲苯(3mL)中的混合物5分钟,然后在100℃下加热18小时。冷却至室温后,过滤混合物,用EtOAc(10mL)洗涤。真空浓缩滤液。用乙酸乙酯(20mL)稀释得到的粗制混合物,用去离子水和盐水洗涤,干燥(Na2SO4)并作真空浓缩。快速层析(SiO2,0-20%甲醇配制的二氯甲烷)纯化得到的粗物质得到偶联的
产物(0.12g,0.34mmol,24%)。
0.22mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入HATU(0.084g,0.22mmol)和Et3N(0.10mL,
0.72mmol)。室温下搅拌反应混合物2小时,用乙酸乙酯稀释。用去离子水洗涤混合物,用乙酸乙酯(2×10mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析
(SiO2,50%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需产物(0.018g,0.031mmol,28%)。
的二氯甲烷(2mL)溶液,室温下搅拌得到的溶液1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷
(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取
水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0–25%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.008g,0.017mmol,44%)。1H NMR
(400MHz,CDCl3)δ8.03(s,1H),7.67(dd,J=4.0,8.8Hz,1H),7.13(d,J=10.0Hz,1H),7.06
(d,J=8.4Hz,1H),6.94–6.87(m,2H),6.58(d,J=6.8Hz,1H),5.77(q,J=6.8Hz,1H),4.71–
4.78(m,1H),4.51–4.12(m,1H),3.64–3.62(m,1H),3.50–3.31(m,5H),3.26–3.20(m,1H),
2.96–2.84(m,1H),2.74–2.70(m,1H),2.54–2.46(m,1H),2.15–2.02(m,2H),1.99(d,J=
6.8Hz,3H),1.52和1.38(d,J=6.4和6.8Hz,3H);MS:(ES)m/z C25H30ClFN5O的计算值[M+H]+
470.2,实测值470.3。
120℃加热1小时。冷却至室温后,用去离子水(100mL)稀释该混合物,用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(0.65g,2.0mmol,16%)。
(0.55g,3.9mmol)。反应混合物在120℃加热18小时。冷却至室温后,用去离子水(100mL)稀释该混合物,用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0–50%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需化合物(0.43g,
0.85mmol,43%)。
6mmol)的甲酸(5mL)溶液中。90℃下搅拌该异质混合物2小时。冷却至室温后,经硅藻土过滤该混合物并用乙醇洗涤。真空下浓缩滤液。将粗物质溶解于乙酸乙酯,用饱和的水性碳酸氢钠中和。将该混合物搅拌30分钟,分离诸层。用乙酸乙酯萃取水层。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,二氯甲烷配制的含10%氨的甲醇)纯化粗物质得到所
需产物(0.083g,0.21mmol,25%)。
0.11mmol)的DMF(1mL)溶液中加入HATU(0.050g,0.11mmol)和iPr2NEt(0.06mL,0.33mmol)。
室温下搅拌反应混合物1小时,用乙酸乙酯稀释。用饱和的水性碳酸氢钠洗涤混合物,乙酸乙酯(2×15mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用。
(2.0mL)溶液,室温下搅拌得到的溶液1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(5mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×10mL)进一步萃取水层。干燥
(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,二氯甲烷配制的20%7N氨/甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.011g,0.023mmol,21%,2个步骤)。1H NMR
(400MHz,CDCl3)δ8.07(d,J=2.8Hz,1H),7.69(dd,J=4.0,8.8Hz,1H),7.45(dd,J=2.0,
2.0Hz,1H),7.14(dd,J=2.0,8.4Hz,1H),6.99–6.95(m,1H),6.83(dd,J=4.8,8.4Hz,1H),
6.59(dd,J=2.0,18.4Hz,1H),5.90(q,J=6.8Hz,1H),4.45–4.35(m,1H),3.82–3.43(m,
4H),3.32–3.17(m,2H),3.11–2.94(m,2H),2.39–2.28(m,2H),1.98(dd,J=2.4,6.8Hz,3H),
1.94–1.80(m,3H),0.90和0.81(d,J=6.4和6.0Hz,3H);MS:(ES)m/z C25H30Cl2N5O的计算值[M+H]+486.2,实测值485。
混合物在120℃加热1小时。冷却至室温后,用去离子水(100mL)稀释该混合物,搅拌30分钟得到亮黄色固体。过滤收集固体,真空干燥得到所需产物(1.8g,4.3mmol,85%)。
时。冷却至室温后,经硅藻土过滤该混合物并用乙醇洗涤。真空下浓缩滤液。将得到的粗物质溶解于乙酸乙酯,用饱和的水性碳酸氢钠中和。将该混合物搅拌30分钟,分离诸层。用二氯甲烷(2×100mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,
0–15%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到所需产物(1.5g,3.7mmol,90%)。
0.031mmol)、BINAP(0.057g,0.093mmol)和Cs2CO3(0.60g,1.9mmol)在甲苯(10mL)中的混合
物5分钟,然后在100℃下加热16小时。冷却至室温后,过滤混合物,用EtOAc(10mL)洗涤。真空浓缩滤液。用乙酸乙酯(20mL)稀释得到的粗制混合物,用去离子水和盐水洗涤,干燥
(Na2SO4)并作真空浓缩。快速层析(SiO2,0-20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化得到的粗物质得到偶联的产物(0.13g,0.24mmol,39%)。
(0.029g,0.14mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HATU(0.059g,0.15mmol)和iPr2NEt(0.054g,
0.39mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时,然后用乙醚稀释。用饱和的碳酸氢钠洗涤混合
物,用乙醚(2×50mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(0.062g,0.1mmol,77%)。
温下搅拌得到的溶液1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有
机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.027g,0.052mmol,52%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),
7.71(d,J=2.8Hz,1H),7.65(d,J=9.2Hz,1H),7.37(d,J=8.8Hz,1H),6.95–6.90(m,2H),
6.49(d,J=2.0Hz,1H),5.84(q,J=6.8Hz,1H),4.78–4.84(m,1H),4.53–4.50(m,1H),4.25–
4.20(m,1H),3.99–3.84(m,1H),3.88–3.82(m,1H),3.71–3.68(m,1H),3.54–3.51(m,1H),
3.35–3.11(m,3H),2.87–2.75(m,2H),2.64–2.58(m,2H),1.99(d,J=7.2Hz,3H),1.44–1.31+
(m,3H);MS:(ES)m/z C26H30ClFN5O的计算值[M+H]520.2,实测值520.4。
(10mL)溶液中加入K2CO3(1.88g,14.6mmol)。反应混合物在125℃加热并搅拌2小时。冷却至室温后,用去离子水(10mL)稀释该混合物,搅拌30分钟。二氯甲烷萃取水层。干燥(MgSO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。真空干燥粗制的油状物得到所需化合物(1.9g,3.5mmol,
73%)。
滴)的甲酸(15mL)溶液中。100℃下加热该异质混合物1小时。冷却至室温后,真空下浓缩该混合物。将得到的粗物质溶解于二氯甲烷,经硅藻土过滤。用饱和的水性碳酸氢钠中和滤
液,分离诸层。用二氯甲烷萃取水层。干燥(MgSO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(0.38g,0.86mmol,53%)。
(0.035g,0.16mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HATU(0.074g,0.19mmol)和iPr2NEt
(0.052mg,0.40mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时,用乙醚稀释。用饱和的碳酸氢钠洗涤混合物,用乙醚(2×50mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(0.075g,0.12mmol,78%)。
0.12mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液,室温下搅拌得到的溶液1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×10mL)进一
步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.024g,0.048mmol,40%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(s,1H),7.67(d,J=8.8Hz,1H),7.45(d,J=2.0Hz,1H),7.14(dd,
J=2.4,8.4Hz,1H),6.94(dd,J=2.4,8.8Hz,1H),6.85(d,J=8.4Hz,1H),6.55(d,J=
2.0Hz,1H),5.89(q,J=6.8Hz,1H),4.76–4.72(m,1H),3.97–3.87(m,3H),3.80–3.77(m,
1H),3.65–3.60(m,2H),3.44–3.41(m,1H),3.21–3.15(m,2H),2.89–2.82(m,2H),2.77–1.65(m,2H),1.96(d,J=7.5Hz,3H),1.89–1.71(m,3H);MS:(ES)m/z C25H30Cl2N5O2的计算值[M+H]+502.2,实测值502.4。
Ipc2BCl,27.2,85.0mmol)的THF(15mL)溶液。加入完成后,将反应混合物缓慢升温至-25℃,在此温度搅拌2小时。然后用二乙醇胺(17.9g,170mmol)淬灭反应混合物,并搅拌10分钟。在此期间,固体形成,将其滤出。干燥(Na2SO4)滤液,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0–
20%己烷配制的乙酸乙酯)纯化残留物得到(R)-1-(2,4-二氯苯基)乙醇(12.0g,63.3mmol,
82%)。
热反应混合物10分钟,冷却至室温。用乙酸乙酯(20mL)稀释该混合物,用去离子水和盐水洗涤,干燥(Na2SO4)并作真空浓缩。快速层析(SiO2,5%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗物质得到(R)-6-溴-1-(1-(2,4-二氯苯基)乙基)-1H-吲唑(2.2g,6.0mmol,39%)。
0.028mmol)和2M水性碳酸钾(0.5mL,1mmol)在甲苯(1.5mL)中的混合物。用氮气吹扫混合物
5分钟,然后在100℃下加热18小时。冷却至室温后,用乙酸乙酯(15mL)萃取该混合物。用盐水洗涤有机层,干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-15%己烷配制的乙酸乙
酯)纯化得到的粗物质,得到所需产物(0.95g,0.20mmol,72%)。
得到的溶液30分钟。真空除去过量的溶剂,用二氯甲烷(5mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×10mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作纯化直接使用(0.065g,0.16mmol,80%)。
的二氯甲烷(1mL)溶液中加入HATU(0.078g,0.20mmol)和Et3N(0.10mL g,0.72mmol)。室温
下搅拌反应混合物30分钟,然后用二氯甲烷稀释。用去离子水洗涤混合物,用二氯甲烷(2×
10mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,50%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需产物(0.037g,0.065mmol,65%)。
甲烷(1mL)溶液并在室温下搅拌得到的溶液30分钟。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。
干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,15%二氯甲烷配制的甲
1
醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.012g,0.025mmol,38%)。H NMR(400MHz,
CDCl3)δ8.01(s,1H),7.66(d,J=8.0Hz,1H),7.39(s,1H),7.19–7.12(m,4H),6.20(d,J=
6.8Hz,1H),6.11–6.08(m,1H),4.82–4.74(m,1H),4.29–4.09(m,2H),3.98–3.70(m,2H),
3.46–3.34(m,3H),2.70–2.48(m,3H),2.16–1.98(m,3H),2.00(d,J=7.2Hz,3H);MS:(ES)m/+
z C25H27Cl2N4O的计算值[M+H]469.2,实测值469.4。
和Cs2CO3(0.65g,2.0mmol)在甲苯(1.5mL)中的混合物5分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.091g,
0.10mmol),用氮气吹扫混合物1分钟。然后在100℃下加热反应18小时。冷却至室温后,过滤混合物,用EtOAc(50mL)洗涤。真空浓缩滤液。快速层析(SiO2,5-30%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗混合物得到粘稠油状的偶联产物(0.11,0.24mmol,24%)。
时。真空除去过量的溶剂,用二氯甲烷(20mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×20mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,15%二氯甲烷配制的甲醇)纯化得到的粗产物得到所需化合物
(0.051g,0.14mmol,57%)。
烷(1mL)溶液中加入HATU(0.11g,0.28mmol)和iPr2NEt(0.10mL,0.57mmol)。室温下搅拌反
应混合物30分钟,然后加入二氯甲烷。用去离子水洗涤混合物,用二氯甲烷(2×50mL)萃取
水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,10%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到(R)-2-(4-(1-((R)-1-(2,4-二氯苯基)乙基)-1H-吲唑-6-基)哌
嗪-1-羰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.052g,0.088mmol,63%)。
并在室温下搅拌得到的溶液30分钟。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合
并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,30%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.025g,0.052mmol,57%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(s,
1H),7.58(d,J=9.2Hz,1H),7.38(d,J=2.0Hz,1H),7.16–7.09(m,2H),6.86(dd,J=2.0,
8.0Hz,1H),6.64(s,1H),6.10(q,J=6.8Hz,1H),4.35(dd,J=6.4,8.4Hz,1H),3.91–3.85
(m,1H),3.80–3.60(m,3H),3.31–3.11(m,6H),2.36–2.28(m,1H),1.99(d,J=6.8Hz,3H),
+
1.87–1.80(m,3H);MS:(ES)m/zC24H28Cl2N5O的计算值[M+H]472.2,实测值472.4。
0.15mmol)和Cs2CO3(0.65g,2.0mmol)在甲苯(3mL)中的混合物5分钟。加入固体Pd2(dba)3
(0.091g,0.10mmol),用氮气吹扫混合物1分钟。然后在100℃下加热反应18小时。冷却至室温后,过滤混合物,用EtOAc(50mL)洗涤。真空浓缩滤液。快速层析(SiO2,15-30%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗混合物得到粘稠油状的偶联产物(0.27,0.55mmol,55%)。
的二氯甲烷(1mL)溶液中加入HATU(0.15g,0.40mmol)和Et3N(0.10mL,0.72mmol)。室温下搅
拌反应混合物30分钟,然后加入二氯甲烷。用去离子水洗涤混合物,用二氯甲烷(2×15mL)
萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,30%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需产物(0.034g,0.058mmol,11%,2个步骤)。
(2mL)溶液并在室温下搅拌30分钟。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合
并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-10%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.023g,0.047mmol,93%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.84(s,
1H),7.56(dd,J=4.0,8.4Hz,1H),7.38(d,J=2.4Hz,1H),7.17–7.10(m,2H),6.84–6.81(m,
1H),6.61(d,J=9.6Hz,1H),6.08(q,J=7.2Hz,1H),4.87–4.68(m,2H),4.52–4.14(m,1H),
3.67–3.53(m,3H),3.50–3.21(m,3H),3.04–2.91(m,1H),2.82–2.76(m,1H),2.62–2.55(m,
1H),2.28–2.20(m,1H),2.13–2.02(m,1H),1.99(d,J=6.8Hz,3H),1.53和1.40(d,J=6.4和+
6.8Hz,3H);MS:(ES)m/z C25H30Cl2N5O的计算值[M+H]486.2,实测值486.4。
(0.093g,0.15mmol)和Cs2CO3(0.65g,2.0mmol)在甲苯(1mL)中的混合物5分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.092g,0.10mmol),用氮气吹扫混合物1分钟。然后在100℃下加热反应18小时。冷却至室温后,过滤混合物,用EtOAc(50mL)洗涤。真空浓缩滤液。快速层析(SiO2,40%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗混合物得到粘稠油状的偶联产物(0.20,0.40mmol,40%)。
拌2小时。真空除去过量的溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×20mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用。
的二氯甲烷(2.0mL)溶液中加入HATU(0.14g,0.36mmol)和iPr2NEt(0.10mL,0.57mmol)。室
温下搅拌反应混合物30分钟,然后用二氯甲烷稀释。用去离子水洗涤混合物,用二氯甲烷(2×15mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,30-
100%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需产物(0.072g,0.12mmol,30%,2步)。
甲烷(2mL)溶液并在室温下搅拌该混合物30分钟。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(15mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。干
燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-30%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.012,0.024mol,20%)。1H NMR(400MHz,
CDCl3)δ7.92(s,1H),7.56(d,J=8.4Hz,1H),7.37(d,J=2.0Hz,1H),7.18–7.09(m,2H),
6.80(d,J=7.6Hz,1H),6.60(s,1H),6.09(q,J=6.8Hz,1H),4.82–4.78(m,2H),4.64–4.60
(m,1H),4.12–4.07(m,2H),3.76–3.58(m,4H),3.43–3.38(m,2H),2.90–2.76(m,2H),2.48–
2.36(m,1H),2.13–2.20(m,3H),1.98(d,J=6.8Hz,3H);MS:(ES)m/z C25H30Cl2N5O2的计算值[M+H]+502.2,实测值502.4。
加入K2CO3(1.7g,12.2mmol)。反应混合物在125℃加热3小时。冷却至室温后,用去离子水
(10mL)稀释该混合物,搅拌30分钟。此期间有固体形成,过滤收集该固体。真空干燥黄色固体得到所需化合物(2.4g,4.6mmol,95%)。
4:1乙醇/去离子水(40mL)溶液中。90℃下加热并搅拌该异质混合物1小时。冷却至室温后,硅藻土过滤混合物并用乙醇洗涤。真空浓缩滤液。将得到的粗物质溶解于乙酸乙酯,并用饱和的水性碳酸氢钠中和。用乙酸乙酯萃取水层。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(1.2g,3.1mmol,92%)。
拌混合物18小时。加入饱和的水性碳酸氢钠淬灭反应。然后用乙酸乙酯萃取水层。干燥
(MgSO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-5%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到所需化合物(0.22,0.56mol,28%)。
(0.048g,0.22mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HATU(0.090g,0.23mmol)和iPr2NEt
(0.064mg,0.48mmol)。室温下搅拌反应混合物30分钟,用乙醚稀释。用去离子水洗涤混合
物,用乙醚(2×20mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,5-20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到所需产物(0.075g,0.13mmol,
67%)。
0.13mol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液,室温下搅拌该混合物1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(15mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步
萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-30%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.022,0.037mol,30%)。1H NMR
(400MHz,CDCl3)δ7.87(d,J=8.8Hz,1H),7.41(dd,J=0.8,0.8Hz,1H),7.15–7.14(m,2H),
7.02(dd,J=2.4,9.2Hz,1H),6.53(s,1H),6.23(q,J=7.2Hz,1H),4.90–4.84(m,1H),4.58–
4.54(m,1H),4.32–4.28(m,1H),3.97–3.74(m,3H),3.56–3.44(m,3H),3.20–3.16(m,1H),
2.97–2.94(m,1H),2.85–2.80(m,1H),2.14(d,J=6.8Hz,3H),1.82–1.71(m,3H),1.47–1.25(m,2H);MS:(ES)m/zC24H29Cl2N6O的计算值[M+H]+487.2实测值487.3。
(0.3mL)溶液中。90℃下加热该异质混合物45分钟。冷却至室温后,硅藻土过滤混合物并用乙醇洗涤。真空浓缩滤液。将得到的粗物质溶解于乙酸乙酯,并用饱和的水性碳酸氢钠中
和。用乙酸乙酯萃取水层。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(1.0g,2.5mmol,83%)。
入饱和的水性碳酸氢钠淬灭反应。用乙酸乙酯萃取水层。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-100%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需化合物
(0.32g,0.79mmol,63%)。
(0.27g,0.8mmol)、Pd(PPh3)4(0.046g,0.039mmol)和2M水性碳酸钾(1.2mL,2.4mmol)在2:1
甲苯/乙醇(3.6mL)中的混合物5分钟,然后在100℃加热2小时。冷却至室温后,用乙酸乙酯(15mL)萃取混合物。用盐水洗涤有机层,干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-
100%己烷配制的乙酸乙酯)纯化得到的粗物质得到所需产物(0.33g,0.65mmol,83%)。
(5mL)溶液,室温下搅拌该混合物1小时。真空除去过量的溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×20mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(0.85g,0.2mmol,
100%)。
2-羧酸(0.054g,0.23mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HATU(0.11g,0.28mmol)和iPr2NEt
(0.89mg,0.69mmol)。室温下搅拌反应混合物2小时,用乙醚稀释。用饱和的水性碳酸氢钠和盐水洗涤混合物。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。粗物质不作进一步纯化直接使用。
烷(1.5mL)溶液,室温下搅拌该混合物1小时。真空除去过量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×10mL)进一步萃取水层。干燥
(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-20%二氯甲烷配制的甲
醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.040g,0.077mmol,33%,2步)。1H NMR
(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J=8.8Hz,1H),7.69(s,1H),7.42–7.36(m,3H),7.24(s,1H),6.23(q,J=6.8Hz,1H),6.13–6.07(m,1H),4.32–4.10(m,2H),3.85–3.70(m,3H),3.27–3.24(m,
1H),2.80–2.51(m,3H),2.22(d,J=6.8Hz,3H),1.98–1.88(m,4H),1.81–1.51(m,2H);MS:
(ES)m/z C25H28ClFN5O的计算值[M+H]+518.2,实测值517。
(10mL)溶液中加入iPr2NEt(1.9g,14.6mmol)。反应混合物在125℃加热2小时。冷却至室温
后,用去离子水稀释该混合物。用乙醚萃取水层。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,30-50%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需化合物(1.9g,
3.5mmol,73%)。
1.9mmol)的4:1乙醇/去离子水(50mL)溶液中。90℃下加热该异质混合物1小时。冷却至室温后,硅藻土过滤混合物并用乙醇洗涤。真空浓缩滤液。将得到的粗物质溶解于乙酸乙酯,并用饱和的水性碳酸氢钠中和。用二氯甲烷萃取水层。干燥(MgSO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。粗产物不作进一步纯化直接使用(0.84g,1.7mmol,91%)。
(0.15g,1.2mmol),室温下搅拌混合物18小时。用1N水性盐酸淬灭反应,用乙酸乙酯萃取。干燥(Na2SO4)有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,40-85%己烷配制的乙酸乙酯)纯化粗产物得到所需化合物(0.16,0.32mol,31%)。
(1.5mL)溶液,室温下搅拌该混合物1小时。真空除去过量的溶剂,用二氯甲烷(15mL)稀释残留物。用饱和的碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×15mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析(SiO2,0-20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到所需化合物(0.14,0.35mol,91%)。
(0.037g,0.17mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HATU(0.076g,0.20mmol)and iPr2NEt
(0.056mg,0.43mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时,用乙醚稀释。用去离子水洗涤混合物,用乙醚(2×20mL)萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。粗物质不作进一步纯化直接使用(0.070g,0.11mmol,67%)。
(0.065g,0.11mol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液,室温下搅拌得到的混合物1小时。真空除去过
量溶剂,用二氯甲烷(10mL)稀释残留物。用饱和的水性碳酸氢钠中和有机层,用二氯甲烷(2×20mL)进一步萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。快速层析
(SiO2,5-20%二氯甲烷配制的甲醇)纯化粗产物得到白色固体状标题化合物(0.032,
0.064mol,59%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(d,J=9.2Hz,1H),7.41(s,1H),7.16–7.15(m,2H),7.03(dd,J=2.0,8.8Hz,1H),6.57(s,1H),6.24(q,J=6.8Hz,1H),4.78–4.74(m,
1H),4.02–3.76(m,4H),3.62–3.54(m,2H),3.22–3.16(m,1H),2.98–2.87(m,3H),2.14(d,J=6.8Hz,3H),1.96–1.73(m,6H);MS:(ES)m/zC24H29Cl2N6O2的计算值[M+H]+503.2,实测值
503.4。
试验缓冲液中(20mM HEPES pH7.1,140mM NaCl,1mM CaCl2,5mM MgCl2,0.1%叠氮钠,含
0.1%牛血清白蛋白)至5x105个细胞/mL的浓度。结合试验如下所示设置。首先,将0.1mL细
4
胞(5x10个细胞/孔)加入含有化合物的试验平板,从而获得各化合物约2-10uM的终浓度以
供筛选(或剂量反应的一部分以便测定化合物IC50)。然后加入0.1mL试验用缓冲液稀释至
约50pM终浓度的125I标记TARC(获自美国沃尔瑟姆珀金埃尔默股份有限公司-
PerkinElmer;Waltham,MA),从而获得每孔约30,000cpm,密封平板,25℃下用振动台温育约
3小时。利用真空细胞收集器(康涅狄格州梅里登帕卡德仪器公司-Packard Instruments;
Meriden,CT),将反应液吸到在0.3%聚乙烯亚胺(PEI)溶液中预浸渍的GF/B玻璃滤器上。将闪烁液(50uL;Microscint20,帕卡德仪器公司)加入各孔,密封平板,用Top Count闪烁计数仪(帕卡德仪器公司)检测放射性。仅含有稀释剂(用于总计数)或20uM化合物的对照孔用于
计算化合物的总抑制百分比。采用加利福尼亚州圣迭戈GP公司(GraphPad,Inc.,San
Diego,Ca)的计算机程序Prism计算IC50值。IC50值是将标记的TRAC与受体的结合降低50%
所需的那些浓度。图26中,在结合试验中IC50值小于100nM的化合物标记为(+++);100-
500nM标记为(++);500nM以上标记为(+)。
试验,室温下以400x g离心来收集表达趋化因子受体的细胞(例如用于CCR(4)试验的CEM细
胞),然后以5000万/ml悬浮在人血清中。然后将所测试化合物或相等体积的其溶剂(DMSO)
以最终DMSO浓度为0.25%(v/v)加入细胞/血清混合物。另用趋化缓冲液(HBSS+0.1%BSA)
稀释重组人CCL22(MDC),通常从0.01nM至500nM,然后将29μl稀释的趋化因子置于
平板下部的孔中。将5-μm(孔径)聚碳酸酯膜置于平板上,将20μL细胞/化合物混
合物转移到该膜的各孔上。平板在37℃下温育90分钟,然后除去聚碳酸酯膜,将5μl DNA-嵌入剂CyQUANT(英杰公司,卡尔斯巴德,加利福尼亚州)加入下部的孔。采用Spectrafluor
Plus平板读数计(替康公司-TECAN,圣何塞,加利福尼亚州)检测对应于迁移细胞数的荧光
量。
致敏。在致敏后第6天,用0.5%的噁唑酮乙醇溶液在右耳作局部攻击,恰在该攻击之前或在其后4小时口服给予小鼠运载体或剂量渐增的本发明化合物1.005。随后一天(第7天),采用卡尺测量检测耳朵厚度。与运载体处理的对照相比,用化合物处理的动物耳朵肿胀显著降
低,表明化合物介导噁唑酮诱导的皮肤超敏反应降低。
型。在第0天和第21天,对三系列的啮齿类动物组皮下或真皮下注射完全弗氏佐剂乳化的II型胶原,每组由15只遗传敏感的小鼠或大鼠构成。一系列的啮齿类动物在最初致敏时以及
随后不同的给药时间点(dosing schedule),额外腹膜内接受PBS和吐温0.5%。第二系列由多组啮齿类动物构成,所述啮齿类动物在最初致敏时和随后不同的给药时间点,通过腹膜
内、静脉内、皮下、肌肉内、口服或通过任何其它给药方式接受不同剂量的CCR(4)拮抗剂。第三系列啮齿类动物用作阳性对照,由在初始致敏时和随后的不同给药时间点用小鼠IL-10
(腹膜内)或抗-TNF抗体(腹膜内)处理的多组构成。从第3周到第8周监测动物的肿胀关节或
爪的产生情况,依据标准疾病严重程度表分级。通过关节的组织学分析证实疾病严重程度。
体、肾小球肾炎和最终的死亡。如下所示,测试三系列的NZB/W FI小鼠组的CCR(4)拮抗剂效力,每组含20只小鼠:一系列的小鼠在断奶后不久和随后的不同给药时间点额外接受磷酸
缓冲盐水(PBS)和吐温0.5%(腹膜内)。第二系列由断奶后不久和随后不同的给药时间点,
通过腹膜内、静脉内、皮下、肌肉内、口服或通过任何其它给药方式接受不同剂量的CCR(4)拮抗剂的小鼠组构成。第三系列小鼠用作阳性对照,由在断奶后不久和随后不同的给药时
间点用抗IL-10抗体处理的多组构成。依据最终的死亡率、肾脏组织学特性、血清自身抗体水平和蛋白尿来监测疾病的进展。
小鼠组的CCR(4)拮抗剂效力:一系列小鼠在肿瘤移植后不久以及随后不同的给药时间点,
额外腹膜内接受PBS和吐温0.5%。第二系列由肿瘤移植后不久和随后不同的给药时间点,
通过腹膜内、静脉内、皮下、肌肉内、口服或通过任何其它给药方式接受不同剂量的CCR(4)拮抗剂的小鼠组构成。第三系列小鼠用作阳性对照,由在肿瘤移植后不久和随后不同的给
药时间点用抗-IL4抗体、抗-IFNg抗体、IL4或TNF(腹膜内)处理的多组构成。通过肿瘤生长与消退来监测效力。就OVA-转染的EL4胸腺瘤模型而言,可通过用OVA体外刺激引流淋巴结
细胞和在72小时检测抗原特异性细胞毒性来检测细胞溶解性OVA-特异性反应。
CB.17scid/scid小鼠来获得银屑病啮齿类动物模型。转移后8周,小鼠在它们的耳朵、腿部和尾部产生类似于人银屑病的发红、肿胀和皮肤病损的迹象。给3系列小鼠组注射纯化的
CD45Rbhi T细胞,每组包含10-15只CB.17scid/scid小鼠。一系列小鼠在初始细胞转移时以及随后不同的给药时间点,额外腹膜内接受磷酸缓冲盐水(PBS)和吐温0.5%。第二系列由
在初始细胞转移时和随后不同的给药时间点,通过腹膜内、静脉内、皮下、肌肉内、口服或通过任何其它给药方式接受不同剂量的CCR(4)拮抗剂的小鼠组构成。第三系列小鼠用作阳性
对照,由在初始细胞转移时和随后不同的给药时间点用IL-12、IL-4、IFNg或TNF的抗体,或细胞因子IL-10处理的多组构成。细胞转移后,监测动物中银屑病样病损的产生,共计3个
月。
消除了某些细胞因子基因(例如,IL-10或IL-2)的转基因小鼠中产生的自发模型。将携带特定表面标志物表型(即,CD45RB hi)的高度纯化CD4+T淋巴细胞群转移入SCID小鼠来获得另
一种IBD小鼠模型。如下所示,来自任何这些模型的3系列小鼠组可用于评估CCR(4)拮抗剂
效力。一组小鼠在断奶后不久(转基因小鼠中的自发模型),或在细胞转移入SCID小鼠之时
和随后的不同给药时间点(细胞转移模型)额外接受PBS和吐温0.5%(腹膜内)。第二系列由
断奶后不久(转基因小鼠中的自发模型),或在细胞转移入SCID小鼠之时和随后的不同给药
时间点(细胞转移模型),通过腹膜内、静脉内、皮下、肌肉内、口服或通过任何其它给药方式接受不同剂量的CCR(4)拮抗剂的小鼠组构成。第三系列小鼠用作阳性对照,由在断奶后不
久(转基因小鼠中的自发模型),或在细胞转移入SCID小鼠之时和随后的不同给药时间点
(细胞转移模型)用IFNg或TNF的抗体,或细胞因子IL-10处理的多组构成。持续6-8周评估小鼠的疾病产生,最初通过体重丧失和/或下垂的直肠监测,最终通过组织病理学评估动物结肠和肠道,共计6-8周。
5e5RENCA细胞(小鼠肾癌腺癌;ATCC目录号CRL-2947),观察肾脏肿瘤生长22天,在最早第15天时观察到肺转移。从肿瘤移植之时起给予动物运载体或本发明化合物,例如每日皮下,以便监测对原发性生长(primary growth)的作用,或在随后时间(例如,第7天)监测化合物对转移的作用。利用机械卡尺每周检测原发性肿瘤区域两次。通过公式v=pab2/6计算肿瘤体积,其中a是最长直径,b是与a垂直的第二长直径。肿瘤体积或转移发生率的降低表明本发明化合物的效力。
权利要求的范围内。